Ⅰ 什么技术检测外源基因是否导入受体细胞的基因组
这个主要有两芦岩扮种方法：
第一,直接看基因是否导入.那就用DNA分子杂交技术.
第枣弊二,间接的看有无该基因翻译表达的产物.这可以用蛋白质提取检测,或者是加入陪灶相应的病毒,看该细胞能不能存活下来.
Ⅱ 哪些方法可以检测转基因植物中的外源基因2
分析、确定了75个品种的转基因构建成分,为开展转基因检测奠定了基础。
2、不同类型的植物提取基因组DNA的方法略有差异,该研究优化了CTAB、SDS快速提取法,并选择了磁珠吸附试剂盒法,成功提取了适合于PCR反应的植物基因组DNA。
3、以植物内源基因18SrRNA为靶标,设计、优化后筛选出特异性引物和探针,建立了以18SrRNA为目标的检测植物基因组DNA提取质量的PCR与荧光PCR鉴定体系。
4、首次以CaMV35S、FMV启动子、NOS终止子、标记基因NPTII、抗除草剂基因EPSPS、PAT、抗虫基因CryIAb为检测目标,设计、筛选出特异性引物,优化实验参数,建立了转基因植物PCR定性检测方法体系,灵敏度达0。
1﹪。
5、克隆了CaMV35S、FMV启动子、NOS终止子、标记基因NPTII、抗除草剂基因EPSPS、PAT、抗虫基因CryIAb的阳性质粒作为转基因植物检测的阳性对照。
6、于反应体系中引入UNG酶,建立了无污染的荧光PCR扩增体系。
7、首次以FAM荧光素标记探针5端作为发光基团,以TARMA标记探针3端为淬灭基团,以CaMV35S、FMV启动子、NOS终止子、标记基因NPTII、抗除草剂基因EPSPS、PAT、抗虫基因CryIAb为检测目标,设计、筛选出特异性引物和探针,优化实验参数,建立了转基因植物通用性荧光PCR定性检测方法体系。
8、以FAM和TET两种荧光素标记外源基因和内源基因,建立了转基因大豆抗除草剂基因EPSPS和转基因玉米抗虫基因CryIAb的荧光PCR定量检测体系,两体系衡腔的灵敏度均达到0。
1﹪以上。
9、首次利用反向PCR技术扩增出华番1号基因组未知DNA序列,并通过DNA测序,利用BLAST软件进行同源性比较,找出载体与基因组整合位点DNA序列悉拍。
10、利用荧光PCR技术,设计出特异性引物与探针,优化实验参数,建立了一种灵敏、精确、定量和鉴定华番1号品种特异性的高效睁拦羡检测体系。
这在国内为首次利用整合位点进行转基因植物检测和品种特异性鉴定的方法……
Ⅲ 基因检测有哪些方法
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基因检测的方法不胜枚举，基本的步骤是样本的获取（包括血液、唾液、组织样本等）——处理（如DNA的提取与纯化、文库构建等）——序列测定——序列分析——结果解读——报告撰写。广泛应用的核酸序列测定方法是直接测序法，目前最先进而且被广泛使用的方法和仪器有第一代的Sanger测序法，第二代的高通量测序法（如美国Illumina公司的Hiseq测序仪和华大基因子公司CompleteGenomics开发的测序方法）等。目前也已出现被称为第三代测序技术的方法，如单分子实时DNA测序法。
第一代：sanger测序
第一代的Sanger测序技术的优点是，测序读长长，能达到800-1K bp，且测序用时短，只需要几十分钟即可完成一次测序，测序准确度高，目前仍是测序的金标准；缺点是通量低、成本高。
第二代：高通量测序（NGS）
第二代测序技术的优点是测序通量和效率高，成本低廉；缺点是测序读长普遍较短，且用时较长。以目前应用最为广泛的测序仪之一的illumina公司Hiseq2000测序仪为例，其一次测序的数据产出量可达500
Gb，但读长为100 bp，且需要耗时14天左右。而Life technology公司的IonProton测序仪是边合成边通过反应体系电位的微小差别来测定碱基序列。
第三代：单分子/纳米孔测序
由于第二代技术存在短读长和耗时长的缺陷，人们希望第三代测序技术能解决这些缺陷，所以第三代测序技术在长读长和短耗时出发，目前尚未完全成熟，市场应用面还不算广，而且各种测序仪之间差异较大，测序原理也是各出奇招。如Pacific Bioscience公司则是通过在PCR合成DNA的过程中，用显微镜检测由荧光基团标记的dNTP反应后释放出的荧光来测序。而一直未投产的牛津大学研发的测序仪，则是通过检测由核酸外切酶剪切DNA时，“掉落”到检测微孔的核苷酸来测序。
Ⅳ 转基因生物检测有哪些方法
转基因作物检测大体分为两种：一是检测是否含有外源蛋白，即外源基因表达产物，主要采用酶联免疫吸附法和试纸条法；二是检测是否含有外源基因(DNA)，主要有Southern杂交技术、基因芯片法和PCR检测法。
Ⅳ 基因检测方法
一般有三种基因检测方法：生化检测、染色体分析和DNA分析。
1.生化检测
生化检测是通过化学手段，检测血液、尿液、羊水或羊膜细胞样本，检查相关蛋白质或物质是否存在，确定是否存在基因缺陷。用于诊断某种基因缺陷，这种缺陷是因某种维持身体正常功能的蛋白质不均衡导致的，通常是检测测试蛋白质含量。还可用于诊断苯丙酮尿症等。
2.染色体分析
染色体分析直接检测染色体数目及结构的异常，而不是检查某条染色体上某个基因的突变或异常。通常用来诊断胎儿的异常。
常见的染色体异常是多一条染色体，检测用的细胞来自血液样本，若是胎儿，则通过羊膜穿刺或绒毛膜绒毛取样获得细胞。将之染色，让染色体凸显出来，然后用高倍显微镜观察是否有异常。
3.DNA分析
DNA分析主要用于识刖单个基因异常引发的遗传性疾病，如亨廷顿病等。DNA分析的细胞来自血液或胎儿细胞。
Ⅵ 外源基因表达的检测是什么
检测外源基因是否转化成功，首先对报告基因进行检测，然后再进行目的外源基因的检测。目的外源基因的表达可分转录和翻译两个水平，转录是以DNA为模板合成mRNA的过程，翻译则是指以mRNA为模板翻译成蛋白质。目的基因表达检测亦可在两个水平上进行，在转录水平上对mRNA进行检测，在翻译水平上对蛋白质进行检测。
1.报告基因的酶法检测
主要的报告基因，例如Gus基因、Cat基因、冠瘿碱合成酶基因、NptⅡ搭庆汪基因和荧光素酶基因皆可根据各自的功能，采用酶法检测。
2.外源基因转录水平上的检测。
Northern杂交（Northernblotting）以RNA为探针，检测外源基因转录产物特异mRNA。Northern杂交也有斑点杂交和印迹杂交。斑点杂交只需将RNA样品点样在固相膜上直接与探针杂交，但只能鉴定外源基因是否转录；而Northern印迹杂交则需将RNA样品进行电泳分离，然后转移到固相膜上，再与探针杂交，可对外源基因的转录状况进行较详细的分析。Dot-Northern杂交是将总RNA提取物经多孔过滤进样器直接转移到杂交膜上，其余步骤与Northern杂交相同。Northern杂交对细胞中低丰度的mRNA检出率较低。
3.外源基因翻译水平上的检测
外源基因翻译水平上的检测通常用Western杂交（Westernblotting）。Western杂交是将蛋白质电泳、印迹、免疫测定融为一体的知仔特异蛋白质检测方法。转化的外源基因正常表达时，转基因植株细胞中含有一定量的目的蛋白。从植物细胞中提取总蛋白或目的蛋白，将蛋白质样品溶解在含去污剂和还原剂的溶液中，经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳使蛋白质分离开来，将分离的各蛋白质条带原位转移到固相膜上，膜在高浓度的蛋白质溶液中温育，以封闭非特异性座位。然后差岩加入特异性抗体（一抗），印迹上的目的蛋白与一抗结合后，再加入能与一抗特异性结合的二抗，二抗事先已经标记，根据二抗上标记化合物的性质检出。由检测结果，可知目的蛋白是否已在被检植物细胞中表达、其浓度以及大致的分子量。