生物毒性检测方法

① 河鲀毒素的检测方法

河纯毒素在发现之初人们就在不断寻找其更好的检测方法。河鲀毒素检测常用的方法有小鼠检测法、酶联免疫法、薄层色谱法、柱后衍生高效液相色谱检测法、气质联用法和液质联用等。国外较多地采用气质联用、液质联用的方法检测河鲀毒素。
小鼠生物法（以30分钟内将一体重20克小鼠致死所用河纯毒素的量为一鼠单位）是最常用、最直观的检测方法，通过小鼠死亡前所呈现出的典型的河鲀毒素中毒症状，可迅速地将河鲀毒素与其它致死性物质区分开。最早对河毒素进行定量分析研究是在1941年，当时斯坦福大学在研究蝾螈毒素时引进了鼠单位（Mouse unit，MU）概念。其原理是，一定体重的小鼠经腹腔注射TTX后，其死亡时间的倒数与注射TTX剂量之间存在着线性关系，因此可根据小鼠死亡时间推断TTX的含量。此法测得的毒力用小鼠单位（mouse unit，MU）表示。黄登福等采用同样的方法，使用ICR品系小鼠建立了测试TTX毒素的方法，1MU=0.178μgTTX。但实际使用时因个体差异大、重现性不好，而且需有一定规模才能客观反映实验结果，因此该法的应用受到限制。
免疫酶技术是20世纪60年代发展起来的新的免疫测定法，它是抗原抗体的免疫反应与酶的高效催化作用原理的有机结合。Watabe等首先于1989年建立了用牛血清白蛋白（BSA）连接河鲀酸（TDA）作为抗原的酶联免疫吸附检测（ELISA）法，检出限为0.3-1000.0mg/L。 李世平等应用小鼠生物试验和间接竞争抑制酶联免疫吸附试验（ELISA）同步检测17份河鲀肝组织和20份河鲀肌肉组织中的河鲀毒素含量，并对2种方法的检测结果进行比较。结果表明，ELISA法与小鼠生物试验法测得的结果相符合。由于ELISA法测定程序简便易行，速度快，灵敏度高，因而在河鲀毒素的定量检测以及预防河鲀中毒方面具有广泛的应用前景。
高效液相色谱是分析、制备领域应用最为广泛也最为成熟的技术之一，它具有分离效率高、分辨率好及速度快等特点。张虹等采用醋酸与TTX结合形成离子对在ODS柱上采用紫外检测器直接测定TTX含量，该方法操作简单、快速、准确，最低检测限50ng。 王小逸等还利用蒸发光散射检测器进行TTX测定，该法可用于微克水平河鲀毒素含量的测定。刘海新等采用柱后衍生高效液相色谱法检测水产品中的河鲀毒素含量，样品先由0.1%乙酸提取，再经过C18固相萃取柱净化。以庚烷磺酸钠为离子对试剂，应用反相离子对液相色谱分离河鲀毒素，采用在线柱后衍生系统，荧光检测器定量检测。河鲀毒素在5-1600ng的范围内呈良好的线性相关，相关系数r=0.9997；1、2、8μg/g，3个浓度水平添加样，日内和日间的回收率为80.9-91.2%，相对标准偏差为1.93% -5.57%；方法定量限为1μg/g。高效液相色谱荧光检测器要比紫外检测器具有更低的检测限，而TTX没有荧光吸收，所以必须先要衍生化成具有荧光吸收的物质，操作比较繁琐。
HPLC谱图册参考资料。
随着质谱技术的发展，质谱所具有的超强定性能力使色谱质谱联用成为分析行业最有效最准确的分析方法之一。1993年SaitoT利用气-质联用从刀鱼中检测到TTX及其同分异构体的存在。Nagashima等利用气-质联用从暗纹东方鲀肝脏含有的高分子物质中检测到河鲀毒素的存在。吴平谷等用2%乙酸/甲醇提取出河鲀毒素，用正己烷脱脂，然后用碱将河鲀毒素水解成2-氨基-8-羟基-6-羟甲基-喹唑啉（C9碱），水解液经过C18、SLH固相萃取柱净化，BSTFA衍生，采用气相色谱—质谱法全扫描方式测定。液相色谱质谱法比气相色谱质谱法具有更广的应用范围，不需要衍生化，大大简化了分析手段。 Tsai等采用了液相/质谱联用法来测定河鲀中的TTX。 李爱峰等应用C18反相色谱柱和HILIC亲水作用色谱柱，建立了河鲀毒素（TTX）的液相色谱—电喷雾离子阱质谱联用分析方法。 郑雍怡等建立了在大鼠腹腔注射给药后，测定其血浆中河鲀毒素的高效液相色谱—质谱联用（LC/MS）定量检测方法。 王洪允等建立了LC-MS-MS测定血浆中河鲀毒素的检测方法，其检测限浓度为1ng/mL。
河鲀毒素质谱图册参考资料。
荧光法是最早建立的定量检测TTX的仪器分析方法。1976年，Saito等首先提出了荧光法，原理是加碱水解后生成2-氨基6-羟甲基8-羟基喹唑啉（简称C9碱），该物质发荧光，建立了最早的荧光分析法；其后，又有研究对荧光检测法进行了改进，建立了连续自动荧光分析方法。 但由于荧光分光光度计在中国应用不如紫外分光光度计普遍，因此根据TTX碱水解生成C9碱的同时定量地生成草酸钠，此结构在紫外区有明显吸收峰的特点，陈玉仁等建立了紫外分光光度法。该法与荧光法相比，二者最低检出限接近，但后者仪器设备较便宜。
Nagashima等建立了薄层色谱快原子轰击质谱的测定方法。先在LHP-K板上进行TLC，纯化TTX及其衍生物，然后用质谱定量，最低检出限为0.1g。此法可以区分在其它TLC方法中难以区分的TTX和脱水TTX，其优点还在于不需TMS硅烷化，甚至当被测物的TLC行为不清时也可以测定。 1988年，王健伟研究建立了不需水解的薄层色谱（TLC）分析方法用于TTX的定量检测。采用火焰离子检测器，不需将TTX降解为C9碱，避免了衍生反应过程中可能存在的干扰。
河鲀毒素色谱图图册参考资料。

② 生物毒性是什么意思，基本应用是什么样的

生物毒性指样品对生物橡明陵（此处生物作为传感器）的毒性强弱，分急性毒性和慢性毒性，通常以半致死浓度表示。
应用嘛，环保，医学临床，自来水，海关及公安。
由于生物传感器是一种生物，必然受到越复杂、越高级的生物，其形态表现越复杂的规则制约，比如一个人哭，并不一定槐李就代表哀伤。
目前常见的生物传感器分为鱼类、贝类、藻类、跳骚类和发光菌等。
目前我国常用的是发光菌和鱼类，其中费歇尔弧菌（咸水培养，进口）、青海弧菌（淡水类，国产）和斑马鱼是常见的传感器，并有不少厂家生产出来相应的仪器，以检测生梁戚物毒性。
希望对你有帮助。

③ 细胞活性和细胞毒性检测的实验方法

细胞数量确定

1.将细胞悬浮液（100μL/孔）接种在96洞孔板中。将板在潮湿的培养箱中预孵育（例如，在37℃，5％CO2下）。

2.向板的每个孔中加入10μLCCK8溶液。注意不要在孔洞中引入气泡，因为它们会干扰O.D.读数。

3.将培养板在培养箱中孵育1-4小时。

4.使用酶标仪测量450 nm处的吸光度。

细胞增殖和细胞毒性测定

1.将种子细胞以103-104个细胞/孔的密度在96孔板中在100μL培养基中培养。将细胞在CO2培养箱中于37℃培养24小时。

2.将不同浓度的待测物质加入板中。

3.将培养板在培养箱中孵育适当的时间（例如，6,12,24或48小时）。

4.使用重复移液器向板的每个孔中加入10μLCCK8溶液。注意不要在孔洞中引入气泡，因为它们会干扰O.D.读数。

5.将培养板在培养箱中孵育1-4小时。

6.在读取孔板之前，重要的是在轨道振动器上轻轻混合1分钟，以确保颜色均匀分布。

7.使用酶标仪测量450 nm处的吸光度。

数据分析

统计分析有几种方法，您可以选择使用O.D.值或细胞数量，我们提供其中一种方法。

细胞存活率（％）= [（As-Ab）/（Ac-Ab）]×100

抑制率（％）= [（Ac-As）/（Ac-Ab）]×100

As =实验孔吸光度（含有细胞，培养基，CCK-8和待测化合物的孔的吸光度）。

Ab =空白孔吸光度（含有培养基和CCK-8的孔的吸光度）。

Ac =对照孔吸光度（含有细胞，培养基和CCK-8的孔的吸光度）。

制作标准曲线

1. 细胞计数板计数细胞悬液中的细胞数。

2. 使用培养基，等比稀释细胞悬液为一个浓度梯度，通常需要5-7个浓度梯度，每组几个复孔。然后接种细胞。（注意每孔的细胞数量。如果您将细胞悬液稀释在管中，在加入培养板的孔之前，请小心再次混匀细胞。每孔中细胞悬液的体积应该是一致的。）

3. 培养直至细胞贴壁（通常2-4小时），然后每100 μl培养基加入10 μl CCK-8。继续孵育1-4小时，用酶标仪测量450nm处的吸光度。制作出一条以细胞数为X轴坐标，O.D.值为Y轴坐标的标准曲线。

可以基于该曲线确定待测样品的细胞数。使用此标准曲线的先决条件是培养检测条件相同。

注意事项

1. 确保药物和CCK8均匀分布在培养基中。

2. 细胞增殖越多, 颜色越深; 细胞毒性越强，颜色越浅。

3. 对于贴壁细胞，每孔至少需要1000个细胞（100 μl培养基）。对于白细胞，由于灵敏度较低，每孔至少需要2500个细胞（100 μl培养基）。推荐的96孔板每孔最大细胞数为25000。如果使用24孔或6孔板进行该检测，请计算相应的每孔的细胞数，并调整CCK-8的体积，使其为每孔总液体体积的10％。

4. 因为CCK8测定是基于活细胞中的脱氢酶活性，影响脱氢酶活性的条件或化学物质可能导致实际活细胞数与使用CCK-8测定活细胞数之间有差异。

5. WST-8可能与还原剂反应生成WST-8 formazan。如果使用还原剂 (例如一些抗氧化剂)会干扰检测。如果待检测体系中存在较多的还原剂，需设法去除。

6. 孵育2小时后，背景O.D.值一般为0.1-0.2单位。

7. 注意不要在孔中引入气泡，因为它们会干扰O.D.值。

8. 如果您想对CCK8溶液进行灭菌，请使用0.2 μm的膜过滤溶液。

9. 孵育时间因孔中细胞的类型和数量而异。通常，白细胞着色较弱，因此可能需要较长的孵育时间（长达4小时）或大量细胞（~105细胞/孔）。

10. 如果细胞悬液中存在高浊度, 测量并减去样品在600nm或更高波长的O.D值。

11. CCK8不能用于细胞染色。

12. 培养基中的酚红不会影响实验结果，酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。

13. CCK8的毒性非常低，在CCK8测定完成后，相同的细胞可用于其他细胞增殖测定，例如结晶紫测定，中性红测定或DNA荧光测定。（除非细胞极为稀少，不推荐。）

14. 该试剂盒可用于大肠杆菌，但不能用于酵母细胞。

15. 在读取平板之前，您可以在摇床上轻柔混匀。

16. 我们建议将细胞接种在靠近培养板中央的孔中，最外围一圈孔中的培养基容易蒸发，可以用PBS，水或培养基填充这些孔。

17. 如果您没有450nm滤光片。您也可以使用吸光度在430和490nm之间的滤光片, 450nm滤光片具有最佳灵敏度。

18. 测量450nm处的吸光度，如果您需要进行双波长测定，作为参考波长可以测定650nm处的吸光度。

19. 药物中金属离子的存在可能会影响CCK8的灵敏度。终浓度为1mM的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会抑制 5%、15%、 90% 的显色反应，使灵敏度降低。如果终浓度是10mM的话，将会100%抑制。

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推荐测试剂 Cell Counting Kit-8 (CCK-8)

④ 发光细菌法测生物毒性

四川省的各级环境监测站都配备了发光细菌法生物毒性检测陪颂族设备，四川省环科院就有北京滨松公司生产的水质毒性快速检测仪。
你的样品如果是有颜色的，建议进行稀释后检测；如果样品芦弊不溶于水的话，那就需要选择适宜的助溶剂，再扣除助溶剂的毒性。

如再有关于发光细菌的樱橡相关问题可随时发邮件：[email protected]

⑤ 毒理学试验方法有哪些

现代毒理学的研究方法，由于其本身包括众多的分支学科，分别在相应的学科领域里建立了自己的研究方法，现归纳为两大类。(一)实验研究(微观研究)动物实验的方法仍是现代毒理学实验的重要方法之一，传统的毒理学通过整体动物实验已为人类提供了大量的以剂量-效应(反应)为主的数据库，结合人群接触水平对许多化学物质进行了安全性(危险度)评价。
由于外源物的数量巨大，整体动物实验需要消耗大量的时间和经费，也不能满足数以万计的外源化学物质的毒性评价要求，另一方面为了保护动物，尽量减少动物的使用，所以由过去以整体动物试验占主导地位的观念，转向以体外试验为主导地位的趋势。但也需指出，体外试验的发展并不排斥整体实验的重要性，两者相互补充，互为验证才能为科学研究提供可靠数据，随着生命科学的发展，分子生物学的理论及技术被引入现代毒理学，近年来在分子水平上建立了许多新方法。

1．体内试验
哺乳动物体内试验，也称整体动物实验，一般包括：急性毒性试验、亚急性毒性试验、亚慢性毒性试验及慢性毒性试验。还有特殊毒性实验，如哺乳动物致突变试验、致畸试验、致癌试验。以上试验在毒理学中统称“三性”和“三致”试验。

常用的试验动物：大鼠、小鼠、豚鼠、地鼠、家兔、狗、猴等。检测环境污染物的毒性试验，常选用鱼、蚤类或其他水生生物。还可用鸟类、昆虫进行试验。
近年来为了从分子水平探讨致突、致癌机制，转基因动物已开始在毒理学试验中应用。
转基因动物是一种集整体水平、细胞水平和分子水平于一体的实验动物，更能体现生命整体研究的效果，它是把经典的与现代的毒理学研究方法相结合，无疑会推动现代毒理学实验研究的发展。
2．体外试验
利用游离器官、培养的细胞、细胞器以及利用微生物等进行毒性研究的方法为体外试验，此方法多用于观察外源物对生物体特殊毒性的初步筛检及作用机制和代谢转化过程的深入研究。

体内与体外试验各有优点和局限性，应根据试验目的和要求，选择一组试验，才能互相弥补优缺点。(二)人群调查(宏观研究)人群调查也称为人群毒理学，是在人群中研究外源物对人体产生毒作用的规律，为人群检测和制订预防措施提供比动物试验更直接更可靠的毒理学资料，主要包括以下3个方面：
1．中毒临床观察
常见于偶然发生的事故，如误服、自杀、毒性灾害等，通过急性中毒事故的处理和治疗，可直接观察到中毒的症状并分析可能的毒效应的靶器官。

2．志愿者试验
在不损害人体健康的原则下，有时可设计一些不损害人体健康的受控试验，仅限于低剂量、短时期的接触毒性作用可逆的化学品，目前国际上提倡健康志愿者的毒性试验，减少由动物试验结果外推于入的不确定性，特别是一些神经毒物出现的毒性效应，如头晕、目眩、复视等需要表达的中毒症状，只有人才能真实地反映出来，所以国外健康志愿者的毒理学研究资料倍受重视。

3．流行病学调查
将动物试验的结果，进一步在人群调查中验证，可以从人群的直接观察中，取得动物试验所不能获得的资料，优点是接触条件真实，观察对象是一个大的群体，为人群检测和防治措施提供比动物试验更直接、更可靠的科学资料，但是也存在许多难点：①人群中观察外源物的毒性效应大多数为慢性毒性效应，特别是人类致癌物质其致癌效应所需时间过长；②接触人群中所用的观察指标是非特异性的，与对照人群比较需要足够例数：③外环境因素混杂，外源物的种类繁多而且多种化学物质可出现联合作用，难以确定某种特定的化学物质毒性效应和其因果关系。
近年来由于分子生物学的发展和渗透，在传统流行病学调查方法中引进了细胞、分子水平的人群检测方法，如生物标志物作为癌症早期判断的信息，把分子生物学与流行病学结合为一体发展为分子流行病学。这门新兴学科利用分子生物学、分子遗传学、生物化学、免疫学等手段研究，评价不同人群或个体致癌危险度及其机制，从而使现代毒理学由实验动物研究发展到人群和个体易感性研究的新阶段。
它可以解答人体从接触化学物质到发生疾病的过程中所发生的一系列连续性的变化，从中提取更多的癌前病变的信息，为癌症的早期判断、早期防治提供科学依据。可以预测，分子流行病学在21世纪将会得到更大的发展。
综上所述，正确的方法是将宏观研究与微观研究有机地结合起来，宏观研究为微观研究提供线索，微观研究为宏观研究提供依据，两者结合起来才能对外源化学物质作出准确的危险度评价。

⑥ 生物测试的测试方法

(1)短棚配期生物测试
测试时间一般为4—7天，最长不超过14天。
(2)中期生物测试
测试时间在15—90天。
(3)长期生物测试
部分生命周期扮谈或全生命周期的生物测试。测试时间超过90天的为长期生物测试。当前长期低浓度毒物的排放越来越多，因此生物长期接触低浓度的潜在危害越来越引起人们的注意。过去确定毒物的安全浓度都是根据急性毒物测试的结果推算，但是这有很大的局限性。一是致死50%的毒物浓度不是安全浓度; 二是测试过程中忽视了除死亡以外的其他一切危害。
长期生物测试的目的是测定毒物对生物的慢性毒性影响，包括测试生物是长期接触低浓度毒物的慢性(或迟发性)毒链缺指性和研究毒物对生物影响的实质。

⑦ LD50的测定

1LD50的测定方法很多，如：目测机率单位法、加权机率单位法（Bliss氏法）、寇氏法（Karber氏法）及序贯法等，其中Bliss法是比较推荐使用的方法。此法对剂量分组无严格要求，不需要剂量组有0%和100%死亡率，是目前公认最准确的测定方法。但本法计算繁琐，故现多采用计算机程序计算。

2我国卫生部规定，Bliss法是作为新药LD50测定评定必须采用的方法。

3LD50【半数致死量】历败搏是评价化学物质急性毒性大小最重要的参数，也是对不同化学物质进行急性毒性分级的基础标准。化学物质的急性毒性越大，其LD50的数值越小。

4常与ED50【半最大效应浓度】配合计算治疗指数LD50/ED50，用以评价药物的安全性，治疗指数大的药物相对安全。

5LD50越大越好，就是说浓度要很高很高才会导致半数死亡

6ED50就越小越好，意思是很少的剂量就能发挥作用

7单就以上某一项来说是没有意义的，LD50大ED50也大，同样是危险性大

8所以用其比值描述药物的安全性，而单独的LD50就只能描述药物的毒性了。

(7)生物毒性检测方法扩展阅读：

LD50的表达方式通常为有毒物质的质量和试验生物体重之比，例如"毫克/千克体重"。虽然毒性不一定和体重成正比，但这种表达方式仍有助比较不同物质的相对毒性，以及估计同一物质在不同大小动物之间的毒性剂量。

应用半数致死这量度方法有助减少量度极端肢祥情况所带来的问题，以及减少所需试验次数；然而这亦代表LD50并对所有试验生物的致死量：有些可能死于远低于LD50的剂量，有些却能在远高于LD50的剂量下生存。在特殊需要下，研究人员亦可能会量度LD1或LD99等指标（即杀死1%或99%试验总体之剂量）。

物质的毒性往往受给予方式影响。一般而言，口服毒性会低于静脉注射的毒性。故此在表达LD50时经常会附带给予方式，例如“LD50i.v.”表示静脉注射下的LD50。

和LD50相关的两种指标，LD50/30和LD50/60，是分别指在没有治疗的情况下，导致受试总体在30天或60天后半数死亡的剂枯铅量。这些指标通常用于描述辐射毒性。

⑧ 微囊藻素的毒素检测

用于检测微囊藻毒素的方法有很多，例如生物分析法、细胞毒性检测法、酶联免疫吸附法（ELISA）、高效液相色谱法（HPLC）、毛细管电泳法（CE）、蛋白磷酸酶抑制法等，这些方法都有各自的优点，但又有不同程度的缺陷性.生物检测法不能区分微囊藻毒素的异构体，工作量很大；细胞毒素检测法的灵敏度较低；高效液相色谱法的预处理过程繁琐，设备昂贵；CE法的重现性差；蛋白磷酸酶抑制法不能区分特异的毒素同系物，且后处理困难。 动物试验法是最早采用的常规毒性分析法，主要是采取对小鼠进行灌喂或腹腔注射来鉴定藻毒素的毒性。该方法能直观地反映微囊藻毒素的总体毒性。用纯化的MCs或蓝藻中粗提取的藻毒素进行测试，根据半致死剂量（LD50μg/kg）可初步确定其毒性。除个别异构体的LD50为200~250μg/kg，多数MCs的LD50为60~70μg/kg。该法具有操作简单，结果直观、快速等优点，但需要消耗较多的毒素，灵敏度和专一性都不高；无法准确定量，也不能辨别毒素的异构体类型；小鼠的维持费用高、工作量大。因此，动物试验法通常只作为毒性检测的最初筛选方法，并且正日益被其他方法所取代。
细胞毒性检测技术是利用毒素对细胞的毒性作用来检测毒素的一种技术，不仅可以判断毒素是否存在，还可以对毒素进行精确的定量。谷康定等用2步灌流法制备大鼠原代肝细胞，经MC-LR处理后，数小时后细胞形态学即发生改变，其灵敏度可达μg/L级。Fladmark等利用藻毒素诱导沙门氏菌和大鼠的原发性肝细胞死亡的能力为参数检测MC-LR，表明悬浮培养液中的沙门氏菌肝细胞为检测较广范围的肝毒素提供了迅速灵敏的系统。该技术灵敏度虽然较高，但操作繁琐，基本上处于初步研究阶段，较难得到推广应用。 高效液相色谱法（HPLC）是最常用的MC分析方法之一。自然界中MC常以痕量形式存在且干扰物质较多，所以色谱检测前必须先将样品通过萃取、吸附、富集等预处理，净化洗脱，再将洗脱液进行HPLC色谱分析，经检测器检测，将样品色谱图的保留时间和峰面积与标准品比较，从而进行定性和定量。HPLC检测MC主要使用的检测器有紫外（UV或VWD）、荧光（FL）、化学发光（CL）、二极管阵列（PDA 或DAD）等，最常用的是紫外和二极管阵列检测器。MC是一种环状多肽，其共轭双键在237 nm～239 nm下有最大吸收，故可通过紫外检测。紫外检测器成本较低，但MC各种异构体之间的特征吸收很接近，也就是说，紫外检测器在识别MC过程中存在相互干扰的缺陷，影响测定准确度；另外如果有其他物质伴随MC一同洗脱出来，其单波长吸收峰就会受到干扰。二极管阵列检测器比单波长紫外检测器分辨率高（它有一个特定的光谱吸收范围，通常是190 nm～280nm），噪音低，线性范围宽，其缺点是流动相的选择有一定限制，流动相的截止波长必须小于检测波长。
HPLC可以对MC进行定性和定量，是了解MC化学性质甚至结构的重要手段，但是它对高纯度标准品高度依赖，而由于技术的限制，商业用标准品又非常有限，这就限制了HPLC测定MC的发展。
液质联用法（LC-MS）以液相色谱为分离系统，质谱为检测系统。MC样品在质谱部分和流动相分离，被离子化后，经质谱的质量分析器将离子碎片按质量数分开，经检测器得到质谱图。所以只要知道相对分子质量，就可以对样品进行精确的定量检测。1990年，LC/MS 技术首次被应用于蓝藻毒素的检测。
HPLC-电喷雾电离质谱法（HPLC-ESI-MS）是带有电喷雾离子化系统的质谱分析法。其大致原理是MC样品溶液在强电场的作用下破碎成许多细小的带有电荷的液滴，解吸出离子，离子碰撞活化裂解成碎片，从而获得分子的结构信息，样品的分子离子和裂片离子经一系列分离器和静电透镜进入质量分析器进行质谱分析。1993年开始使用此方法检测MC。
四极杆质谱由四根带有直流电压（DC）和叠加的射频电压（RF）的准确平行杆构成，相对的一对电极是等电位的，两对电极之间电位相反。当一组质荷比不同的离子进入由DC和RF组成的电场时，只有满足特定条件的离子稳定振荡通过四极杆，到达监测器而被检测。通过扫RF场可以获得质谱图。四极杆成本低，价格便宜，虽然日常分析的质荷比的范围只能达到3000，但由于分析器内部可容许较高压力，很适合在大气压条件下产生离子的ESI离子化方式，并且，ESI电离最突出特点是产生多电荷，MC电喷雾电离所产生的电荷分布在3000以下，所以四极杆广泛地与ESI联用，另外，三重四极杆由于可以做多级质谱，检出定量限（LOQ）为10pg，满足了低含量MC样品的检测要求。
离子肼质谱是利用离子肼作为分析器的质谱方法。离子肼（Ion trap）由一对环形电极和两个呈双曲面形的端盖电极组成。在环形电极上加射频电压或再加直流电压，上下两个端盖电极接地。逐渐增大射频电压的最高值，离子进入不稳定区，由端盖极上的小孔排出。因此，当射频电压的最高值逐渐增高时，质荷比从小到大的离子逐次排除并被记录而获得质谱图。离子肼质谱可以很方便的进行多级质谱分析，对于物质结构的鉴定非常有用。Zweigenbaum JA等人采用离子肼质谱对MC-LR、RR等进行质谱碎裂机理的研究，采用LC 柱富集技术，经切换阀将MC通入质谱，最后采用多级离子肼质谱对其母离子和碎片离子进行碎片断裂分析。
微囊藻素质谱图册参考资料。
飞行时间质谱根据相同能量的离子质量不同时速度不同的原理，使用电子电离源，施加脉冲拉出电压，再经加速极加快离子速度后进入无场区漂移管。不同质量的离子则以不同的时间通过相同的漂移距离到达接收器。飞行时间质谱扫描速度快，灵敏度高，此设备结构简单，不受质量范围限制。Pasquale Ferranti等首次运用高效液相/电喷雾-四极杆飞行时间串联质谱法（HPLC/ESI-Q-TOF-MS/MS）测定淡水中的MC-RR、-LR、-YR、-LW和-LF，其检出定量限（LOQ）均达到0.1μg/L。使用基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱法（MALDI-TOF-MS/MS）和离子肼串联质谱法（Ion trap-MS/MS）同时检测从而比较检测结果，结果证明HPLC/ESI-Q-TOF-MS/MS检测淡水中MC具有更高的灵敏度、选择性和重复性。
超高效液相色谱是分离科学中的一个全新类别，UPLC借助于HPLC的理论及原理，涵盖了小颗粒填料、非常低系统体积及快速检测手段等全新技术，增加了分析的通量、灵敏度及色谱峰容量。与传统的HPLC相比，UPLC的速度、灵敏度及分离度分别是HPLC的9倍、3倍及1.7倍。Jing Wang等运用超高效液相色谱串联质谱法（UPLC-MS/MS）检测浙江省地表水中的MC-LR、-RR、-LW和-LF，回收率为91.7%～111%，RSD7.9% ～12%，检出定量限（LOQ）为2.5ng/L，6.0 ng/L，2.5ng/L和1.3ng/L。传统的液相色谱分离这四种MC需要30min，而UPLC只需要3min；Stuart A.Oehrle等运用UPLC-MS/MS检测淡水中的7种MC也只用了8 min，其HPLC检测需要35 min。 利用微囊藻毒素诱发免疫反应产生抗体，利用抗体对抗原的特异性识别来对各种毒素进行检测。以免疫技术为基础，微囊藻毒素的免疫化学法包括酶联免疫吸附法、放射免疫分析法、免疫亲和色谱法、胶体金法及免疫传感器法等。这类方法灵敏度较高、样品处理简单，便于操作，其检测限低于WHO水平，被认为是较有发展前景的方法。
自20世纪80年代末Kifir、Brooks等分别报道了对藻类毒素的单克隆抗体和多克隆抗体以后，酶联免疫吸附技术（ELISA）开始用于MCs的分析。该技术具有较高的灵敏度、快捷的分析速度等优点。直接竞争ELISA方法其原理是将抗藻毒素抗体包被在多孔板上，被检样品、MC-LR标准品与标记有过氧化物酶的MC-LR竞争性结合多孔板上的抗体，过氧化物酶催化底物产生的颜色与MC-LR的浓度成反比，即深色表明MC-LR浓度低，浅色表示MC-LR浓度高。也有将MC-LR牛血清白蛋白包被在多孔板上，利用第一抗体和带标记的抗体而建立的间接竞争ELISA方法。间接竞争ELISA比直接竞争ELISA方法灵敏度略高。
蛋白磷酸酶法可以反映各种毒素的总量，具有检测灵敏度高、测定时间较短等优点。Serres等让未标记的被测毒素和经放射性标记的MC-YR一起与蛋白磷酸脂酶2A（PP2A）进行竞争结合，达到平衡后进行凝胶过滤，使与PP2A结合的毒素和未与PP2A结合的毒素分离，然后检测收集到的待测125I-MC-YR-PP2A的放射性。根据用B/（Bo-B）（Bo为无毒素时125I-MC-YR的放射性，B为有标准毒素或待测毒素时125I-MC-YR的放射性）和标准毒素的浓度得到的标准曲线即可求出待测毒素的量。Wong等探索了利用比色法筛选水体中的MCs，试验中以P-硝基苯酚为底物，监测黄色产物P-硝基酚的生成速率以表示蛋白磷酸酶2A的活性。结果表明，比色法蛋白磷酸酶抑制分析是一种简便、便宜的筛选水体中具有肿瘤促进特性的MCs的工具。

⑨ 生物毒性检测标准

法律分析：发光细菌法已经成为了成为一种简单、快速的生物毒性检测手段，广泛应用于质检、环境监测、水产养殖等领域，并被列入了国际标准ISO11348，我国国家标准GB/T15441-1995，德国国家标准DIN38412。

法律依据：《中华人民共和国疫苗管理法》 第二十六条 国家实行疫苗批签发制度。

每批疫苗销售前或者进口时，应当经国务院药品监督管理部门指定的批签发机构按照相关技术要求进行审核、检验。符合要求的，发给批签发证明；不符合要求的，发给不予批签发通知书。

不予批签发的疫苗不得销售，并应当由省、自治区、直辖市人民政府药品监督管理部门监督销毁；不予批签发的进口疫苗应当由口岸所在地药品监督管理部门监督销毁或者依法进行其他处理。

国务院药品监督管理部门、批签发机构应当及时公布上市疫苗批签发结果，供公众查询。

⑩ 细菌内毒素检测

热原系指由微生物产生的能引起恒温动物体温异常升高的致热物质。它包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热原及化学热原等。所以热原有外生致热原和内生致热原之分。
细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁上的一种脂多糖（Lipoply Saccharide）和微量蛋白（Protein）的复合物，它的特殊性不是细菌或细菌的代谢产物，而是细菌死亡或解体后才释放出来的一种具有内毒素生物活性的物质。
一般来说内毒素是热原,但热原不全是内毒素。欧洲药典委员会副主席J.Van Noordwijk提出：“严格地讲，不是每一种热原都具有脂多糖的结构，但所有已知的细菌内毒素脂多糖都有热原活性”。在药品生产质量管理规范（GMP）条件下，药品生产的质量控制一般可以接受的观点是：不存在细菌内毒素意味着不存在热原。
热原检查法系将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定的一种方法。
细菌内毒素检查法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
细菌内毒素检查法，现已在《中国药典》2010年版二部、三部内广泛应用，但在《中国药典》2010年版一部内一个药品都未运用，这主要是由细菌内毒素检查法的持点所决定的：细菌内毒素检查法具有较家兔热原检查法灵敏、快速、简便易行、重现性好、结果准确等优点，目前细菌内毒素检查法已广泛应用于西药、生物制品。但同时也应该指出，细菌内毒素检查是一复杂的酶促反应过程，生产工艺的细微变化都可能引起其干扰的增加，然而根据中药制剂，成分复杂，影响因素多的特点，因此，中药注射剂一般还是采用传统的家兔热原检查法。但是对一些具有解毒降温作用的药物，因会干扰家兔的生理活性，引起体温下降，用家兔法检测不准，还是应考虑用细菌内毒素检查法。
由此可见，热原与细菌内毒素两者之间既有许多相同之处，但还是有区别的。同时，还要请各位同仁注意，不要将“热原”误写成“热源”。