ALK基因检测方法

⑴ ALK基因重组检测试剂盒怎么用，注意事项

对于晚期非小细胞肺癌，推荐所有腺癌或含腺癌成分的非小细胞肺癌患者，在诊断时常规进行ALK融合基因或ALK融合蛋白检测。对于睁毕斗小活检标本或者不吸烟悉磨的鳞状细胞癌患者也建议进行ALK检测。ALK融合基因在不吸烟或少吸烟的肺腺癌患者中发生比率较高，且通常数手与EGFR基因突变不同时存在于同一患者。

⑵ 哪些肺癌需要接受ALK融合基因检测

各种条件允许的话，建议是所有肺鳞癌、肺腺癌的患者都做基因检测。首先最应该检测的是EGFR基因，其突变阳性的概率在我国非小细胞肺癌人中约占30%以上，等于1/3的病人一线就适合吃TKI药物。患者等待基因检测可能需要较长的时间（一周至两周），并且部分医院该部分是医保的，尤其需要强调的是这个等待是值得的，因为这个结果对下一步治疗至关重要。此外，还应该检测EML4-ALK融合基因，如果这个细胞发生融合基因表达阳性的话，另有靶向药物治疗，就是大众尚不熟悉的克唑替尼，但是发生率在我国加起来不过10%，我们优先做EGFR基因检测，再做EML4-ALK检测。
而不同基因检测的方法，所需要的时间也不尽相同。以检测ALK基因为例，采用Ventana IHC这种免疫组化方法大约1—2天就可以出结果；采用FISH（荧光原位杂交）时大概需要3—4天出结果；采用PCR（聚合酶链反应）这种比较复杂的分子生物学检测方法，则大约需要5—7个工作日出结果（国际上要求两周之内出基因检测结果）。

⑶ 肿瘤个体化治疗的ALK基因靶点检测方法

近年来,肿瘤靶向治疗的进展随着分子生物学技术的发展和对发病机制从细胞、分子水平的进一步认识已经进入了一个全新的时代。这些领域的进展很快，在临床取得了很好的效果。根据药物的作用靶点和性质，可将主要分子靶向治疗的药物分为以下几类：
1. 具有靶向性的表皮生长因子受体(EGFR)阻断剂，如吉非替尼(Gefitinib，Iressa)；埃罗替尼（Erlotinib, Tarceva）;
2. 酪氨酸激酶受体抑制剂，如克唑替尼™（Crizotinib,Xalkori®）靶向分子包括ALK、肝细胞生长因子受体（HGFR，c-Met）和RON。易位可促使ALK基因引起致癌融合蛋白的表达。ALK融合蛋白形成可引起基因表达和信号的激活和失调，进而促使表达这些蛋白的肿瘤细胞增殖和存活。克唑替尼™在肿瘤细胞株中对ALK和c-Met在细胞水平检测的磷酸化具有浓度依赖性抑制作用，对表达EML4-ALK或NPM-ALK融合蛋白或c-Met的异种移植荷瘤小鼠具有抗肿瘤活性。
3. 针对某些特定细胞标志物的单克隆抗体，如西妥昔单抗（Cetuximab,Erbitux）;抗HER-2的单抗，如赫赛汀（Trastuzumab, Herceptin）；
4．Bcr-Abl酪氨酸激酶抑制剂，如伊马替尼（Imatinib）和达沙替尼（Dasatinib）；
5．血管内皮生长因子受体抑制剂，如Bevacizumab(Avastin)；
6．抗CD20的单抗，如利妥昔单抗（Rituximab）；
7．IGFR－1激酶抑制剂，如NVP－AEW541；
8．mTOR激酶抑制剂，如CCI－779；
9．泛素－蛋白酶体抑制剂，如Bortezomib；
10．其他，如Aurora激酶抑制剂，组蛋白去乙酰化酶（HDACs）抑制剂等。
临床研究
研究1001（克唑替尼™客观反应率为61%）
研究A8081001中截至2010年9月锁定数据分析时，对119名ALK阳性局部晚期或带困转移的非小细蠢薯念胞肺癌患者进行了评估。他们的平均治疗周期为32周。据研究者评估，有2例患者完全缓解，69例患者部分缓解，客观缓解率为61%（95% CI: 52%, 70%）。在最初8周治疗期间，肿瘤客观缓解率为55%。中位缓解持续时间为48.1周。
研究1005（克唑替尼™客观反应率为50%）
研究A8081005中截至2010年9月锁定数据分析时，对136名ALK阳性局部晚期或转移的非小细胞肺癌患者进行了评估。他们的平均治疗周期为22周。据研究者评估，有1例患者完全缓解，67例患者部分缓解，客观缓解率为50%（95% CI: 42%, 59%）。在最初8周治疗期间，肿瘤客观缓解率为79%。中位缓解持续时间为41.9周。
作为PROFILE 1005试验的一部分，ALK荧光原位杂交检测法已在病理标本中得以验证，这也是目前唯一经临床验证的ALK检测方法 。
研究A8081005仍在进行中，预计2013年第3季度完成。
2011年8月26日克唑替尼™在美国获得批准，主要依据是PROFILE1005最先入选的136例ALK基因重排非小细胞肺癌患者缓解率为50%，其次是PROFILE 1001最先入选的119例ALK基因重排非小细胞肺癌患者缓解率为61%。
PROFILE107是一项克唑替尼和标准化疗（培美曲塞或多西他赛）在ALK阳性非小细胞肺癌患者的非安慰剂对照试验。347例受试患者均已接受过一线化疗。PROFILE 1007试验数据已在2012欧洲肿瘤内科学会（ESMO）上公布。结果表明：克唑替尼组的中位无进展生存期（PFS）为7.7个月，与接受化疗的患者中位3.0个月的PFS相比（HR 0.49，95%CI 0.37-0.64，P <0.0001），克唑替尼的总有效率也显着较高（65%对20%，P <0.0001）。
其他相关研究
研究A8081014是一项随机、对照、开放的III期研究，比较了以250 mg BID起始剂量口服克唑替尼™与培美曲塞/顺铂,或培美曲塞/卡铂化疗一线手世治疗晚期ALK阳性非鳞状非小细胞肺癌的安全有效性。计划入组334例患者以1：1比例随机分配至A组（克唑替尼™）或B组（化疗：培美曲塞/顺铂或培美曲塞/卡铂）中。截至2012年11月，共随机入组261例。预计2015年第4季度完成。
研究A8081029是一项正在进行的多中心、随机、对照、开放的III期研究，在既往未经治疗的东亚ALK阳性晚期非鳞状非小细胞肺癌患者中比较了克唑替尼™与化疗（即培美曲塞/顺铂或培美曲塞/卡铂）的安全有效性。入组患者来自中国、台湾、香港、泰国和马来西亚。计划入组200例患者按1：1比例随机分配至A组（克唑替尼™）或B组（化疗：培美曲塞/顺铂或培美曲塞/卡铂）中。其中，150例患者来自中国，而其余50例患者来自其他亚洲国家。预计2015年第4季度完成。

⑷ ALK阳性非小细胞肺癌基因检测

根据肺癌组织的癌细胞病理特征分:非小细胞肺癌（NSCLC）约占85%,小细胞肺癌（SCLC）：约占15%。对于晚期非小细胞肺癌，推荐所有腺癌或含腺癌成分的非小细胞肺癌患者，在诊断时常规进行春谨ALK融合基因或ALK融合蛋白检测。
对于小活检标本或者不吸烟的鳞状细胞癌患者也建议进行ALK基因检测。2009年Shaw等将ALK基因重排阳性的肺癌列为非小细胞肺癌的一个特定分子亚型。
ALK融合型非小细胞肺裂睁癌不仅是基因序列层面的改变，ALK融合蛋白也是该类疾病中重要变异，因此将此类疾病统称为“ALK阳性非小细胞肺癌”
。ALK阳性非小细胞肺癌，是一类驱动基因明确的肺癌类型。这一类型的非小细胞肺癌，对于新型靶向药物--ALK抑制剂扒源基高度敏感。
中国非小细胞肺癌中ALK阳性率为3-11%,每年新发病例数约35000例。对于基因突变阳性的ALK阳性非小细胞肺癌，靶向治疗无疑成为他们更好的治疗选择。

⑸ 肺癌的突变基因有哪些

胁人类的三大癌症肺癌，胃癌，肝癌。肺癌的发病率相对较高，肺癌是由于肺功能紊乱，已经完全不能按照人体所需来工作，肺癌早期的话可以通过手术进行治疗，有康复的几率，如果发展到晚期希望就非常渺茫了，只能说是延长他的生命周期，具体还是需要咨询主治医师的。

⑹ alk是什么意思

根据肺癌组织的癌细胞病理特征分:非小细胞肺癌（NSCLC）约占85%,小细胞肺癌（SCLC）：约占15%。

对于晚期非小细胞肺癌，推荐所有腺癌或含腺癌成分的非小细胞肺癌患者，在诊断时常规进行ALK融合基因或ALK融合蛋白检测。 对于小活检标本或者不吸烟的鳞状细胞癌患者也建议进行ALK基因检测。

ALK融合基因的产物是分子量为80 kD的融合肿瘤蛋白，其转化细胞的能力已得到公认。P80NPM-ALK通过使大鼠纤维母细胞发生锚非依赖性（anchorage independent）生长，增殖率明显增高。

它还可使Ba/F3细胞转变为IL3非依赖性。通过逆转录病毒将NPM-ALK转染小鼠骨髓细胞，这些小鼠随之发生了T细胞和B细胞性大细胞淋巴瘤。

非小细胞肺癌中唯一驱动突变：

其中一组研究人员开发了逆转录病毒cDNA表达库用于筛选新癌基因。他们转染了提取自一位预先筛选显示KRAS和EGFR突变阴性的62岁日本男性吸烟者肺腺癌的cDNA文库，并设计生成了转基因小鼠，在肺泡细胞中特异性表达EML4-ALK，由此生成了许多肺腺癌结节。

使用ALK抑制剂治疗这些转基因小鼠导致肿瘤负荷相比于未治疗的小鼠减小。大部分小鼠很快在1个月内死亡。使用相同ALK抑制剂治疗导致肺脏无EML4-ALK/3T3细胞浸润且生存期延长。此研究有力证实了EML4-ALK是非小细胞肺癌中唯一的驱动突变。

以上内容参考：网络-alk

⑺ ALK基因检测是什么

ALK基因变异是非小细胞肺癌的一种分子亚型，该段运亚型的人群特征多发于年瞎燃皮轻，肺腺癌，非吸烟人群。ALK基因检测是一种对ALK基因是否正常的一种诊断方磨差法。

⑻ ALK为什么这么“火”(二) | ALK融合基因检测

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ALK融合基因

间变性淋巴瘤激酶（ALK）突变的形式有过量表达、与其他基因形成融合基因，发生点突变等等。

 ALK是非小细胞肺癌（NSCLC）常见的一种驱动基因，中国NSCLC突变阳性率5.3%。

ALK融合基因突变主要在肺腺癌里常见，一般肺鳞癌患者ALK融合基因突变概率很低。

有研究说亚裔的EGFR、KRAS野生型的腺癌患者，ALK阳性比例高达30%-42%，因此如果发现EGFR和KRAS是野生型，是更有必要测下ALK基因的。

下图为非小细胞肺癌中ALK的重排形式

01

免疫组化（IHC）

原理：通过抗原和抗体的结合反应，配合信号级联放大来检测。罗氏公司的Ventana IHC 试剂盒可以达到与FISH检测结果94%~100%的一致率。

判读标准是肿瘤细胞胞浆出现簇状黄棕色染色颗粒，胞膜着色则为阴性。欧盟和中国都已经批准Ventana IHC用于检测ALK重排。

缺点：由于肿瘤异质性，靶蛋白的表达强度不均一。由于存在蛋白或RNA降解的可能，FFPE切片存储大于3个月的不建议Ventana IHC检测。

02

荧光原位杂交(FISH)

原理：分离探针的FISH方法，设计红与绿两个探针，分别标记ALK基因的两端，一旦ALK基因发生断裂重排或倒转，红绿信号便出现分离，而没有发生断裂的则呈现为黄色荧光信号。

判读标准为单个视野中计数50个肿瘤细胞，>50%的细胞出现分离信号则判读为阳性，如<10%细胞出现分离信号则判读为阴性。如果10%~50%的细胞出现分离信号，则再次挑选50个肿瘤细胞，看计数100个细胞，是否有>15%的细胞出现分离信号（仅限用于雅培的分离探针试剂盒）。

缺点：无法判断ALK的融合型，必须由经验丰富的病理科医师来完成。15%的临界值存在一定争议，由于肿瘤异质性、取样偏差等问题，存在假阴性的可能。即漏检ALK突变阳性患者。

03

反转录PCR（RT-PCR）

原理：通过预先设计好的引物对样本的RNA进行逆转录来检测融合突变，简便可行，并可以确定ALK的融合型。

缺点：需要高质量的ALK RNA样本，临床大部分是石蜡样本，RNA降解严重，影响检出率，导致假阴性的结果，大于2年的标本不建议使用RT-PCR检测，推荐新鲜肿瘤组织样本。通过PCR引物只能检测已知的融合基因型，无法囊括所有的融合型。

03

二代测序（NGS）

目前已经证实使用二代测序技术检测基因扩增、基因重排是可行的，而且二代测序有助于发现ALK新的融合突变形式。而且仅需要少量样本即可检测多种基因的突变情况。

缺点：价格较高，判读标准及后续验证等亟待解决。

临床常用的三种方法是FISH、Ventana IHC及RT-PCR，三种方法FISH的灵敏度最低。因此，如果是胸腔积液、细针穿刺取到的细胞学样本做成的蜡块，不建议使用FISH，避免假阴性。另外通过抽血检测循环肿瘤DNA（ctDNA），循环肿瘤细胞（CTC）也正在发展起来。总之在面对ALK检测结果模棱两可的时候，一定要换一个检测方法去验证，也没有哪一种方法灵敏度和特异性都是100%。

参考资料：

DOI: 10.20892/j.issn.2095-3941.2017.0017

，侵删。

⑼ IHC20-1798肿瘤细胞ALk(+)是什么意思

针对肿瘤细胞alk融合突变的检测方法主要有并丛：fish、ihc（免疫组化）、qpcr、二代基因检测等等。这个结果显示肺腺癌细胞存在alk突变阳性，而alk突变是肺腺癌突变中的钻石突变，靶向药选择多，现在针对alk突变的第四代靶向药也已经上市，而且该突变不易对靶向药产绝改樱生耐药，可控时间歼兄长，预后较好。

⑽ 最全梳理ALK基因突变和对应的靶向药物

间变性淋巴瘤激酶（ALK）突变的形式有过量表达、与其他基因形成融合基因，发生点突变等等。ALK基因融合突变是非小细胞肺癌（NSCLC）常见的一种驱动基因，中国非小细胞肺腺癌中ALK融合突变阳性的比例为5.3%，在非小细胞肺腺癌、年轻患者（小于60岁）以及不吸烟的人群中发生率较高，ALK阳性的非小细胞肺癌被认为是一种分子亚型，相对应的靶向药物与EGFR分子亚型完全不同。

ALK融合基因突变主要在肺腺癌里常见，一般肺鳞癌患者ALK融合基因突变概率很低，有报道说1400个肺鳞癌患者里ALK融合基因的发生率为1.3%。考虑到ALK总体突变频率仅有5%，所以对于鳞癌患者也是可以做一下ALK检测的。由于非小细胞肺癌里的驱动基因突变一般是互相排斥的，或者说一山不容二虎，癌细胞也没有必要搞两个驱动突变。有研究说亚裔的EGFR、KRAS野生型的腺癌患者，ALK阳性比例高达30%-42%，因此如果发现EGFR和KRAS是野生型，是更有必要测下ALK基因的。

一、ALK融合突变的检测

图5：L1198F导致的劳拉替尼耐药对克唑替尼重新复敏

这是一个非常有意思的发现，即劳拉替尼这个药物也不是最后的一张牌，这个药物耐药了，也许之前被放弃的药物仍可以有效。所以也有说法ALK是一种钻石突变。但需要谨慎的是不是每一个劳拉替尼耐药的患者都这样。我们从图示看出患者同时存在C1156Y和L1198F突变，才造成了这种逆转。也许其他的突变位点如L1196M等和L1198F就没有这种协同效果。或者还有可能劳拉替尼耐药的原因是其他的旁路激活，如KRAS或EGFR等，具体的还是可以根据基因检测结果来谨慎分析和对待，不过现在的测序技术抽血测ctDNA检测ALK的这些激酶突变总可能会有阴性，ArmsPCR等检测方法也还没有相应的产品，暂时只能尽量地取耐药后的新发组织样本，进行二代测序检测。

编者：翱宇

参考文献：

1、冯勤杨欣林冬梅，ALK阳性非小细胞肺癌的诊断，中国肺癌杂志2 0 1 5年2月第1 8卷第2期。

2、蒋涛周彩存，中国肺癌杂志2015年2月第1 8卷第2期

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7、Ther Adv Med Oncol. 2016Jan;8(1)：32-47

8、Shaw AT et al, N Engl J Med. 2016 Jan7;374(1):54-61