食品刀具烤盘微生物检测方法

1. 食品微生物检测内容有哪些

三个方面的内容：
第一类是致病菌及其毒素，比如沙门氏菌、副溶血性弧菌、单增李斯特菌、金葡菌肠毒素等，它们主要导致胃肠道疾病，严重的会造成肝、脑、肾等脏器的损害，甚至死亡。；

第二类是产毒真菌和真菌毒素，包括黄曲霉毒素、伏马菌素、展青霉素等，它们或造成人的急性中毒事件，或因长期摄入，造成消化道癌症和某些地方病。

第三类是病毒和寄生虫。

2. 食品微生物快速检测技术有哪些

食品微生物快速检测技术有哪些
我国每年发生的食源性疾病暴发事件约数十万起，发病数约千万人次。此类疾病发病率极快，若不能及时确诊、对症治疗，后果将非常严重。此外，一些由自然灾害、环境污染等突发事件引发的食品安全突发事件，也需要及时、快速、准确地给出结果，为应急处理等工作提供科学依据。要保证从农田到餐桌的食品安全，除了对生产产品进行检测之外，从种植基地、到众多流通环节的整个产业链都需要进行质量保障，比如大型农贸批发市场、超市、甚至省级高速入口处等等，在这样的需求下，快速检测也将有很大的应用空间。综合来看，以试剂盒、ELISA、PCR、纳米生物技术、生物传感技术、便携式分析仪器等为代表的快速检测、 移动检测技术在中国食品安全保障体系中必将扮演更加重要的角色。
但值得一提的是，目前快检技术的应用仍存在一些问题，如准确度、检出限、精密度、重复性、再现性、抗干扰性等。由于现在的检测多是微量或痕量检测，对仪器和人员的要求都很高，检测的前处理要求也高，但是快速检测技术作为准确定量检测的前期辅助筛查，可以排除一些不必要的检测，为后期定量检测节省大量的人力和物力，提高检测速度。

3. 检测方法，食品微生物检验方法，微生物指的是什么

食品微生物检测是运用微生物学的理论与方法，检验食品中微生物的种类、数量、性质及其对人的健康的影响，以判别食品是否符合质量标准的检测方法。食品微生物检验方法是食品质量管理必不可少的重要组成部分，它是贯彻"预防为主"的方针，可以有效地防止或者减少食物人畜共患病的发生，保障人民的身体健康。食品微生物检验是衡量食品卫生质量的重要指标之一，也是判定被检食品是否食用的科学依据之一。通过食品微生物检验，可以判断食品加工环境及食品卫生情况，能够对食品被细菌污染的程度作出正确的评价，为各项卫生管理工作提供科学依据。
范围：
①生产环境的检验:车间用水、空气、地面、墙壁等。
②原辅料检验:包括食用动物、谷物、添加剂等一切原辅材料。
③食品加工、储藏、销售诸环节的检验:包括食品从业人员的卫生状况检验、加工工具、运输车辆、包装材料的检验等。
④食品的检验:对出厂食品、可疑食品及食物中毒食品的检验。

4. 食品微生物检验内容与检测技术方法

食品微生物检验内容与检测技术方法

近年来，世界各地出现了诸多严重的食品安全事故，由于食品微生物污染而造成的质量事故严重威胁着人们的身体健康，如何做好食品微生物检验，确保食品质量安全，就需要社会各界共同努力。根据国际和国内卫生组织的相关规定和要求，所有的食品生产厂商都要对食品的质量进行严格的检验，对于生产出来食品的菌落种类、细菌数量、大肠菌群、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等进行检测，必须达到要求的合格标准才能进入市场进行出售。下面是我为大家带来的食品微生物检验内容与检测技术方法的知识，欢迎阅读。

需要注意的问题

一是工作人员及活动规定。必须保证参加检测的人员具有相应的资格，并通过相关的考试后，持证上岗才能开展相关活动。同时要求工作人员不仅需要具有高超的专业技术，还应该有良好的职业道德修养，尽可能降低人为问题的制约。检测过程需要按照相关的活动规范和流程进行，使用无菌设备认真地进行抽样活动，采用先进技术获取相关信息。二是存放装置。若想检测过程顺利进行，除了确保实验室有必要的设施外，还应该重点考虑装置存放的条件和要求。三是装置和药品的配置。在各项装置进行安装时应该对气温进行调节，确保其安稳，对装置气温稳定性合乎规定要用的具体时间详细记录。同时在规定的时间内对各种装置进行消毒处理，并通过感应设备对其运作状态进行监测。对于药品的配置，培养基往往在121℃下采用高压湿热灭菌法灭菌15分钟;较为敏感的'培养基一般采用膜过滤法。四是样本的处理。在样本收集过程中，需要确保抽样活动是在无菌环境下展开的，有效避免了样本被污染。在样本输送时，应该防止样本受到光线的影响而出现污染现象，抽样之后就应该及时将其送至测试场地。一般样本输送时间要控制在3h内，如果无法及时送到，要确保在近乎之前的气温时将其完整的存放。

食品微生物检验内容

一是检验食品污染程度指示菌。细菌总数即菌落总数，是食品和生活饮用水检样处理后，在特定培养条件下，所得1g或者1mc检样中所含有的细菌菌落个数，这就是判断食品和生活饮用水污染程度的关键指标。大肠菌群系是在37℃下培养24h的一群发酵乳糖、产气、产配以及需氧或者厌氧的革兰氏染色阴性无芽胞杆菌。这种菌群主要来源于人和牲畜的粪便，因此，可以用粪便的污染指标菌对食品的卫生质量进行评价。二是检测食品中治病菌。在食品微生物相关检验标准中已经明确规定某些微生物的数量，因此在对食品污染程度指示菌检测的同时，还应该对一些治病菌进行测定，如沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等。

食品微生物检测技术方法

很长时间以来，开展的此项检测活动，是按照琼脂平板的措施来进行的，通常要两到三天的时间才可以完成。最近，许多的专家和组织都不断地对工艺以及措施进行深化分析，获取了非常高的成就，对许多措施进行了改进，切实提升了检测的精准性以及安稳性特征，而且获取了许多全新的工艺，具体有如下的措施：

1.采用电阻抗法。具体的讲，它是指细菌繁衍的时候，将会使培养基中的火分电惰性物质如碳水化合物、蛋白质和脂类等，代谢为具有电活性的小分子物质，其能增加培养基的导电性，进而导致阻抗出现改变，因此，可以通过检测培养基的电阻抗变化情况来判定细菌在培养基中的生长繁殖特性，即可检测出相应的细菌。

2.采用快速酶触反应及代谢产物的检测。细菌在生长繁殖过程中可合成和释放某些特异性的酶，所以根据其特性来选用相对应的底物和指示剂，而且合理的记载信息。

3.采用分子生物学技术。它涵盖两项内容：1)核酸探针技术。结合碱基互补相关的概念，使用独特的措施来对物体进行标注。2)聚合酶链式反应(PCR)技术。其原理为通过加热使双链DNA经裂解成两条单链，成为引物和DNA聚合酶的模板;接下来把气温变低，使寡聚核苷酸引物与DNA分子上的互补序列退火。通常状态中，当退火的气温非常高的话，它的扩增特性就十分的优秀。

4.采用免疫学方法检测细菌抗原和抗体的技术。具体有三项措施：1)荧光抗体检测技术(IFA)，它又有两种，分别是直接的以及间接地。其中第一种是直接在样本上滴加已知特异性荧光标记的抗血清，然后对其清洗，进而获取信息。而后一种措施是在检样上滴加已知细菌特异性抗血清，等到发生反映之后再仔细地清洗，再加入荧光标记的抗体后在荧光显微镜下观察结果。2)免疫酶技术(EIA)，其是将抗原、抗体特异性反应和酶的高效催化作用原理结合，此法非常的独特，而且功效非常好。通过共价结合将酶与抗原或抗体结合，形成酶标抗原或抗体，或通过免疫方法使酶与抗酶抗体结合，形成酶抗体复合物。3)免疫磁珠分离法(IMS)，即应用抗体包被的免疫磁珠，用一个磁场装置收集铁珠。

5.采用仪器法。1)微型全自动荧光酶标分析仪(Mini-VIDAS)，其主要采用具有优异的敏感性和特异性的酶联荧光技术(ELFA)，得到的荧光和抗原的比例是一种顺向的关系。2)全自动微生物分析系统(Vietk-AMS)。它能够一次对非常多的样本开展分析，而且检测的时间不需要非常久，通常在两到三个小时即可，此法的效率非常好，同时也将成为检测行业全行的发展趋势。

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5. 微生物检测手段及注意事项

1. 微生物计量法

1.1 体积测量法

又称测菌丝浓度法，通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。方法是，取一定量的待测培养液(如10 mL)放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间(如5 min)和转速(如5000 rpm)，离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为(10-v)/10。菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。

1.2称 干重法

可用离心或过滤法测定。一般干重为湿重的10~20%。在离心法中，将一定体积待测培养液倒入离心管中，设定一定的离心时间和转速，进行离心，并用清水离心洗涤1~5次，进行干燥。干燥可用烘箱在105 ℃或100 ℃下烘干，或采用红外线烘干，也可在80 ℃或40 ℃下真空干燥，干燥后称重。如用过滤法，丝状真菌可用滤纸过滤，细菌可用醋酸纤维膜等滤膜过滤，过滤后用少量水洗涤，在40 ℃下进行真空干燥。称干重发法较为烦琐，通常获取的微生物产品为菌体时，常采用这种方法，如活性干酵母(Activity Dry Yeast, ADY),一些以微生物菌体为活性物质的饲料和肥料。

1.3 比浊法

微生物的生长引起培养物混浊度的增高。通过紫外分光光度计测定一定波长下的吸光值，判断微生物的生长状况。对某一培养物内的菌体生长作定时跟踪时，可采用一种特制的有侧臂的三角烧瓶。将侧臂插入光电比色计的比色座孔中，即可随时测定其生长情况，而不必取菌液。该法主要用于发酵工业菌体生长监测。如使用UNICO公司的紫外-可见分光光度计，在波长600 nm处用比色管定时测定发酵液的吸光光度值OD600，以此监控E.coli的生长及诱导时间。

1.4 菌丝长度测量法

对于丝状真菌和一些放线菌，可以在培养基上测定一定时间内菌丝生长的长度，或是利用一只一端开口并带有刻度的细玻璃管，到入合适的培养基，卧放，在开口的一端接种微生物，一段时间后记录其菌丝生长长度，借此衡量丝状微生物的生长。

2. 微生物计数法

2.1 血球计数板法

血球计数板是一种有特别结构刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四条沟和两条嵴，中央有一短横沟和两个平台，两嵴的表比两平台的表面高0.1 mm，每个平台上刻有不同规格的格网，中央0.1 mm2面积上刻有400个小方格。通过油镜观察，统计一定大格内微生物的数量，即可算出1 mL菌液中所含的菌体数。这种方法简便，直观，快捷，但只适宜于单细胞状态的微生物或丝状微生物所产生的孢子进行计数，并且所得结果是包括死细胞在内的总菌数。

2.2 染色计数法

为了弥补一些微生物在油镜下不易观察计数，而直接用血球计数板法又无法区分死细胞和活细胞的不足，人们发明了染色计数法。借助不同的染料对菌体进行适当的染色，可以更方便的在显微镜下进行活菌计数。如酵母活细胞计数可用美蓝染色液，染色后在显微镜下观察，活细胞为无色，而死细胞为蓝色。

2.3 比例计数法

将已知颗粒(如霉菌孢子或红细胞)浓度的液体与一待测细胞浓度的菌液按一定比例均匀混合，在显微镜视野中数出各自的数目，即可得未知菌液的细胞浓度。这种计数方法比较粗放。并且需要配制已知颗粒浓度的悬液做标准。

2.4 液体稀释法

对未知菌样做连续十倍系列稀释，根据估计数，从最适宜的三个连续的10倍稀释液中各取5 mL试样，接种1 mL到3组共15只装培养液的试管中，经培养后记录每个稀释度出现生长的试管数，然后查最大或然数表MPN(Most Probable Number)得出菌样的含菌数，根据样品稀释倍数计算出活菌含量。该法常用于食品中微生物的检测，例如饮用水和牛奶的微生物限量检查。

2.5 平板菌落计数法

这是一种最常用的活菌计数法。将待测菌液进行梯度稀释，取一定体积的稀释菌液与合适的固体培养基在凝固前均匀混合，或将菌液涂布于已凝固的固体培养基平板上。保温培养后，用平板上出现的菌落数乘以菌液稀释度，即可算出原菌液的含菌数。一般以直径9 cm的平板上出现50~500个菌落为宜。但方法比较麻烦，操作者需有熟练的技术。平板菌落计数法不仅可以得出菌液中活菌的含菌数，而且同时将菌液中的'细菌进行了一次分离培养，获得了单克隆。

2.6 试剂纸

在平板计数法的基础上，发展了小型商品化产品以供快速计数用。形式有小型厚滤纸片，琼脂片等。在滤纸和琼脂片中吸有合适的培养基，其中加入活性指示剂2, 3, 5-氯化三苯基四氮唑(TTC，无色)待蘸取测试菌液后置密封包装袋中培养。短期培养后在滤纸上出现一定密度的玫瑰色微小菌落与标准纸色板上图谱比较即可估算出样品的含菌量。试剂纸法计数快捷准确，相比而言避免了平板计数法的人为操作误差。

2.7 膜过滤法

用特殊的滤膜过滤一定体积的含菌样品，经丫叮橙染色，在紫外显微镜下观察细胞的荧光，活细胞会发橙色荧光，而死细胞则发绿色荧光。

3. 间接测定法

微生物的生长伴随着一系列生理指标发生变化，例如酸碱度，发酵液中的含氮量，含糖量，产气量等，与生长量相平行的生理指标很多，它们可作为生长测定的相对值。因此可利用生理指标等间接参数来测定生物量。

3.1 测定含氮量

大多数细菌的含氮量为干重的12.5%，酵母为7.5%，霉菌为6.0%。根据含氮量×6.25，即可测定粗蛋白的含量。含氮量的测定方法有很多，如用硫酸，过氯酸，碘酸，磷酸等消化法和Dumas测N2气法。Dumas测N2气法是将样品与CuO混合，在CO2气流中加热后产生氮气，收集在呼吸计中，用KOH吸去CO2后即可测出N2的量。

3.2 测定含碳量

将少量(干重0.2~2.0 mg)生物材料混入1 mL水或无机缓冲液中，用2 mL 2%的K2Cr2O7溶液在100 ℃下加热30分钟后冷却。加水稀释至5 mL，在580 nm的波长下读取吸光光度值，即可推算出生长量。需用试剂做空白对照，用标准样品做标准曲线。

3.3还原糖测定法

还原糖通常是指单糖或寡糖，可以被微生物直接利用，通过还原糖的测定可间接反映微生物的生长状况，常用于大规模工业发酵生产上微生物生长的常规监测。方法是，离心发酵液，取上清液，加入斐林试剂，沸水浴煮沸3分钟，取出加少许盐酸酸化，加入Na2S2O3临近终点时加入淀粉溶液，继续加Na2S2O3至终点，查表读出还原糖的含量。

3.4 氨基氮的测定

离心发酵液，取上清液，加入甲基红和盐酸作指示剂，加入0.02 mol/L的NaOH调色至颜色刚刚褪去，加入底物18%的中性甲醛，反应数刻，加入0.02 mol/L的使之变色，根据NaOH的用量折算出氨基氮的含量。根据培养液中氨基氮的含量，可间接反映微生物的生长状况。

3.5 其他生理物质的测定

P，DNA，RNA，ATP，NAM(乙酰胞壁酸)等含量以及产酸，产气，产CO2(用标记葡萄糖做基质)，耗氧，黏度，产热等指标，都可用于生长量的测定。也可以根据反应前后的基质浓度变化，最终产气量，微生物活性三方面的测定反映微生物的生长。如在BMP-2的发酵生产上，随时监测溶氧量的变化和酸碱度的变化，判断细菌的长势。

4. 商业化快速微生物检测法

微生物的检测，其发展方向是快速，准确，简便，自动化，当前很多生物制品公司利用传统微生物检测原理，结合不同的检测方法，设计了形式各异的微生物检测仪器设备，正逐步广泛应用于医学微生物检测和科学研究领域。例如：

4.1 试剂盒，培养基等手段

抗干扰培养基和微生物数量快速检测技术结合解决了传统微生物检测手段不能解决的难题，为建立一套完整的抗干扰微生物检测系统奠定了坚实的基础。如：抗干扰微生物培养基，新型生化鉴定管，微生物计数卡，环境质量检测试剂盒等，可方便的用于多项检测。

4.2 借助新型先进仪器

BACTOMETER全自动各类总菌数及快速细菌检测系统可以数小时内获得监测结果，样本颜色及光学特征都不影响读数，对酵母和霉菌检测同样高度敏感原理是利用电阻抗法(Impedance Technology)将待测样本与培养基置于反应试剂盒内，底部有一对不锈钢电极，测定因微生物生长而产生阻抗改变。如微生物生长时可将培养基中的大分子营养物经代谢转变为活跃小分子，电阻抗法可测试这种微弱变化，从而比传统平板法更快速监测微生物的存在及数量。测定项目包括总生菌数，酵母菌，大肠杆菌群，霉菌，乳酸菌，嗜热菌，革兰氏阴性菌，金黄色葡萄球菌等。

微生物OD值是反映菌体生长状态的一个指标，OD是Optical Density(光密度)的缩写，表示被检测物吸收掉的光密度。通常400～700 nm 都是微生物测定的范围，需要紫外分光光度计测最大吸收波长。用得最多的是：505 nm测菌丝菌体、560 nm测酵母、600 nm测细菌。用测OD方法画微生物生长曲线时，同一株菌的起始培养浓度可以准备多管(根据检测点的需要，如需检测10个点，就准备10管)，然后每个点取一管出来测OD值就行了。

一般测菌体密度的OD的波长范围是580 nm-660 nm，如枯草芽孢杆菌用600 nm，已经属于可见光区(200 nm～400 nm为紫外光区，400 nm～800 nm为可见光区)。空白如用水做，需要离心洗涤菌体;空白如用不接种的培养基做就不需要洗涤，但是不接种的培养基要和接种的同时培养以求条件一致，最后注意一般OD值在控制在0.1~0.4最好，在这个区内的值就可靠，如果OD大于1.0，一般要稀释后再测，因为OD太大，分光光度计的灵敏度就会显着降低。

一般都测吸光值，而且最好是整个实验过程中，保持发酵液或菌体的稀释倍数一致，吸光值与稀释倍数不一定成正比，可保证整个实验点有可比性。且取值的时候要连续读数，重复3次的数最好。

另，用分光光度计测微生物的OD值为什么要把波长设为600 nm

这个波长其实只是针对浊度，而分光光度计在600 nm处对浊度的反应比较灵敏。测吸收峰的实际意义并不大，比如LB摇瓶培养过夜的大肠杆菌，其实在400多纳米处的吸收最大，但那很可能是培养液的吸收峰。

6. 如何检测出食品中的微生物是否超标

食品中的微生物超标主要影响：

1.会对食用者产生神经中毒的影响，短期包括言语、呼吸困难等。

2.未经消毒的乳产品和海产品中微生物超标则会造成呕吐头晕，同时会对孕妇体内胎儿和体质较差的老年人造成致死的危害。

3.此类食物大多会造成腹痛、腹泻、痉挛。

造成影响的主要原因：

1.常见的微生物指标一般分为致病菌(如沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、单核细胞增生李斯特氏菌等)、大肠菌群和菌落总数。

2.食品添加剂不合格，主要为超范围和超量添加。

3.非食用物质不论使用量多少和对人体健康是有影响的。

检测出食品中的微生物是否超标过程：

1.需要找食药品监管局中有专业鉴定资格的人员来进行鉴定。

注：微生物和食品添加剂都有着严格的使用情况和使用界量。对此，企业生产商应时刻将老百姓的生命安全放置在第一位，同时希望大家也能增加相应知识，从而对突发事件可以良好的应对，避免自己和家人的生命受到伤害。

7. 食品微生物的检测方法有哪些

目前主要有普通培养法（简称国标方法）一般出报告的要用，仪器法、核酸检测法（PCR）、还有目前的快速检测法（主要包括：免疫磁珠、酶联免疫试剂盒、金标检测卡等。这个根据自己的需求来选择吧。

8. 日本食品微生物检测方法

我这里有日本方面微生物检测方法
1. 菌落总数（标准琼胶平板菌数测定法）
在无菌袋（样品均质机用无菌袋）中称量10g被检样品，加入90ML灭菌生理盐水，在样品均质机上均质30秒至1分钟.将之做为试料原液。根据情况将原液稀至100倍，1000倍等。
在各灭菌培养皿中注入各阶段的稀释液1mL。然后将事先准备好的灭菌降温至45-50℃的标准琼胶培养基12-15mL注入灭菌培养皿，立即使稀释液和培养基充分混合均匀。待琼胶培养基完全凝固后，倒置培养皿，放入35±1℃的培养箱中，培养48±3小时后，算出所得菌落数计算出1g食品相当的菌数。
计算公式：1g食品相当的菌数=所得菌落数×10×混合液稀释倍数
2. 耐热性芽孢菌数
在无菌袋（样品均质机用无菌袋）中称量10g被检样品，加入90ML灭菌生理盐水，在样品均质机上均质30秒至1分钟.将之做为试料原液。取一定量（5ml或10ml）稀释液于灭菌带栓的试管，放入沸水中水浴10min后，使之冷却。取1ml稀释液按照上述菌落总数的方法进行操作和计算。
3. 大肠菌群数：
按照菌落总数的方法将调整后的稀释液1mL放入灭菌培养皿，注入加热溶解降温至50℃的Deso琼胶培养基约12-15mL，将其混匀。待培养基琼脂凝固后，再在固体的培养基上浇上一层Deso琼胶培养基（约5ml）;待培养基凝固后将培养皿倒置，放入35±1℃的培养箱内，培养20±2小时。然后按照菌落总数的计算方法进行计算。（红色菌落）
4. 霉菌及酵母菌：
按照细菌总数的方法将调整后的稀释液1mL放入灭菌的培养皿，注入降温至45-50℃薯仔Dextrose培养基12-15ml，将其混匀。倒置放入30℃培养箱中培养72±3小时（或25℃，5天）。然后按菌落总数的计算方法进行计算。