莱克多巴胺高效液相检测方法

① 莱克多巴胺是什么东西

[盐酸莱克多巴胺]

盐酸莱克多巴胺
英文名称：ractopamine
原料名称：翻译成莱克多巴胺也有人翻译成雷托巴胺
化学名称：1-（4-羟基苯基）-2[1-甲基-3-（4-羟基苯基）-丙氨基]-乙醇盐酸盐
理化性质：可溶于水，微溶于丙酮，可溶于乙醇，PH值：6～7，呈中性，熔点：159.8℃
质量标准：最低含量99%（高压液相法）
化学分子式：C18H23NO3Cl 分 子 量：337.83
海关编码：2922.1100
化学分类：苯基乙醇胺类
用途：盐酸莱克多巴胺是一种医药原料，一种可用于治疗冲血性心力衰竭症的强心药。还可以用于治疗肌肉萎缩症，增长肌肉，减少脂肪蓄积，并对胎儿和新生儿生长有益。美国FDA在 2000年批准，可以用于动物营养重新配剂，广泛地用于畜牧业和养殖业。可以同时提高动物的日增重，提高饲料利用率，提高动物的蛋白质含量。
PAYLEAN（莱克多巴胺）对商品猪的影响和利用
商品猪生产者的目的是高效率地生产出瘦肉率高质量好的猪肉以跟其他的动物产品竞争。瘦肉胴体的定价系统导致了对瘦肉生长速度、胴体瘦肉率和饲料报酬的进一步选择。健康、营养和设备管理策略的推行都是为了尽可能地提高瘦肉生长效率。但是盐酸克伦特罗在全世界养猪业中的使用都是违法的，最近美国FDA批准的盐酸莱克多巴胺在猪中使用后，美国养猪户把使用前后是"黑夜与白天的差别"。应承认盐酸莱克多巴胺能否在中国批准生产和使用
需大量试验验证和相当一段时间。以下叙述权当抛砖引玉！
Paylean是一种饲料添加剂，是美国Elanco Lilly公司的注册商标并被美国FDA于今年7月份批准生产仅在养猪生产中使用，它能进一步提高肌肉组织生长速度和效率。它含有莱克多巴胺的盐酸盐，是提高肌肉蛋白生长和饲料效率的小分子。Ractopamine是phenethanolamines成员之一。Paylean不是一种激素、类固醇、抗生素，也不是生物工程产物。它已经被证实在150~240的最后90磅体重期间的饲料中添加4.5~18克/吨，已经被美国食品药物管理局广泛而反复评估了其有效性和安全性。大量的试验证明ractopamine添加量在18克/吨在商品猪上市前90磅的效果。在这些试验中，ractopamine提高无脂瘦肉34%。Ractopamine在提高生长速度的同时降低了采食量。第10肋背膘厚降低13.7%,瘦肉量提高11%，屠宰率能从73.3%提高到 74.4%，产生增加1.5%的效果。
生长性能和胴体性能的提高受paylean添加量的影响。饲喂添加4.5克/吨的猪生长速度与饲喂添加9、18克/吨的一样，而瘦肉率和背膘厚度的改善只有饲喂18克/吨的40~50%。饲喂9克/吨的改善介于4.5与18克/吨之间。
在上市前90磅饲喂paylean，添加20ppm的无脂瘦肉日增量能提高34%，添加 10ppm的无脂瘦肉日增量能提高23.3%。这些结果在上市体重为220~280磅的范围测验均是一致的。Paylean对瘦肉生长率的影响在具有不同瘦肉生长潜力的品种间试验均为一致。包含7个具有完全不同瘦肉率的基因型的研究证实，添加20ppm paylean均对不同基因型猪产生了34%的瘦肉量的提高。所以，它能在高瘦肉率基因型品系产生反应。换句话说，paylean能在高瘦肉率基因型品系猪原来的基础上额外提高34%的瘦肉率生长。
Paylean对不同胴体测量没有相同的效应。它对第10肋的背膘厚有巨大的影响。对胴体的组成方面，偏离背中线的第10至最后肋的背膘厚的测定比背中线的具更准确的预测指示作用。Paylean在降低膘厚方面影响不大，但可以大大提高眼肌面积。4.5克/吨的添加水平并没有明显降低背膘厚，但已经提高了眼肌面积。
关于ractopamine的研究表明，在上市体重前90磅的活猪对ractopamine的反应并不是恒定的，而是先升高，后达到一个平台，然后再下降。最大的反应是在日增重达到22~26磅或添加20ppm paylean 的19-24天时。
试验表明，低~中瘦肉率的基因型猪在150~240磅体重时，添加paylean组可以在其瘦肉生长下降时产生提高无脂瘦肉的影响。
与许多胴体改良剂一样，paylean对无脂瘦肉生长的有利影响需要一定的氨基酸水平。日粮赖氨酸水平和每天赖氨酸摄入量都要有相应的提高。在150~240磅体重范围可以设计2个赖氨酸水平的日粮。
Paylean 的功能是通过把营养素重分配把脂肪生长转向瘦肉生长。采食量因商品猪生产环境、品种和季节的不同而异。低能量饲料一般限制瘦肉的生长，但paylean的添加仍可提高34%的无脂瘦肉生长。这就使得其在商业环境中推广利用更为广泛。
饲喂paylean的回报在2个方面。其一，提高了生长速度、饲料效率和屠宰率（表4）。所有生产者都可获得这$3.64的回报。其二，paylean最大的优势是能获得额外的10.45磅的无脂瘦肉生长，这可以带来$9~11。Ractopamine 改变了瘦肉的分布，提高了后腿瘦肉的比率。当然评估瘦肉增量仍有不少困难。因为它才使最后肋的背膘厚降低0.03inches 。即使光学测量仪和标准胴体也只能预测paylean的一半反应。
Ractopamine的最适用量和销售策略将由添加ractopamine通过不同质量的胴体定价系统，为养猪生产者带来的额外收益决定，当瘦肉比肥肉的价格高得多时，paylean 的用量和使用期就可以增加。饲料成本、市场价格和猪肉加工定价系统均影响paylean的最佳添加量。已经证实Paylean 对猪肉品质有很小的影响，Ractopamine 在提高肌肉中的蛋白质含量时也提高了后腿的可加工比例。猪肉风味鉴定小组发现paylean的与对照组的多汁性、风味和嫩度均无区别，有2个试验表明添加后能使猪肉产生略高的剪切力。就瘦肉生长速度、瘦肉饲料转化率和胴体瘦肉率而言，Paylean的最适添加量和添加时机取决于胴体瘦肉的定价，主要是因添加Paylean而获得的额外瘦肉的报酬来决定。
莱克多巴胺的含量检测
一、液相方法
试剂和溶液
乙腈和甲醇：色谱纯；
甲醇、二氯甲烷、正已烷：分析纯；
2%冰乙酸：取5ml 冰乙酸，用水定容到250ml。
提取液：取900ml甲醇，用水定容到1000ml,再加2ml浓盐酸，混匀。
流动相：取320ml乙腈，用水定容到1000ml，再加20ml冰乙酸和0.87g戊烷磺酸钠，混匀。
莱克多巴胺标准贮备液：准确称取莱克多巴胺（纯度≥99%）0.1000g，置于100ml容量瓶中，用甲醇溶解，定容，其浓度1000μg/ml的贮备液，置4℃冰箱中保存。
莱克多巴胺标准工作溶液：分别准确吸取一定量的标准贮备液，置于10ml容量瓶中，用2%冰醋酸稀释、定容，配制成浓度为0.01μg/ml、0.1μg/ml、0.2μg/ml、0.5μg/ml、1.0μg/ml、2.0μg/ml的标准溶液，分别进HPLC检测。
仪器和设备
高效液相色谱仪：配荧光检测器；
离心机；
振荡器；
微孔滤膜（0.45μm）。
HPLC色谱条件
色谱柱：C18柱，250×4.6mm(i.d),粒径5μm；
柱温：室温；
动相：320ml乙腈+680ml超纯水+20ml冰乙酸+0.87g戊烷磺酸钠；
激发波长：226nm
发射波长：305nm。

② 如何检查瘦肉精

目前，检测“瘦肉精”残留的方法主要有四种，即高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱-质谱法（GC-MS）、毛细管区带电泳法（CE）和免疫分析技术（IA）。目前，我国将HPLC法作为“瘦肉精”检测残留的半确证性方法，其最低检测限范围为1～15纳克/克。IA技术主要有放射免疫分析技术（RIA）和酶免疫分析技术（EIA）。RIA最低检测限可达到0.5纳克/克，国外已生产出RIA测定克伦特罗的试剂盒。检测克伦特罗较高效的EIA是ELISA技术，检测限可达0.05纳克/克，最高可达0.003纳克/克。我国研制的“瘦肉精”多克隆抗体检测试剂盒，对样品检测的特异性强，检测时间短，可同时检测多个样品。

③ 瘦肉精检测方法有哪几种

目前的瘦肉精检测方法，大致有一下四种方法，市场上的一些检测物品也是根据这些方法衍生而来的。

气象色谱-质谱法，简称GC-MS，GC-MS法优点是把色谱高效快速的分离效果和质谱高灵敏度的定性分析有机合起来，能在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析，而且具更高的检测极限。

高效液相色谱法，此法适合测定热不稳定和强极性的β-激动剂及其代谢产物，而且，HPLC可以与柱前提取、纯化及柱后荧光衍生化反应和质谱（MS）等系统联用，容易实现分析过程的自动化。其优点是专属性好、选择性强、检测精确度较高，而且假阳性率低；缺点是样品处理时间长，检测过程烦琐、难于操作，需贵重仪器，在实际应用中受到一定的限制。

酶联免疫吸附法，利用免疫学抗原抗体特异性结合和酶的高效催化作用，通过化学方法将植物辣根过氧化物酶（HRP）与克伦特罗（CL）结合，形成酶偶联克伦特罗。将固相载体上已包被的抗体（羊抗兔IgG抗体）与特异性的抗克伦特罗抗体结合，然后加入待测克伦特罗和酶偶联克伦特罗，它们竞争性与克伦特罗抗体结合，洗涤后加底物，根据有色物的变化计量待测克伦特罗量。

胶体金免疫层析法，利用竞争法胶体金免疫层析技术，检测液中的Clen与金标垫上的金标抗体结合形成复合物，若Clen在检测液中浓度低于灵敏度值，未结合的金标抗体流到T区时，被固定在膜上的Clen-BSA偶联物结合，逐渐凝集成一条可见的T线；若Clen浓度高于灵敏度值，金标抗体全部形成复合物，不会再与T线处Clen-BSA偶联物结合形成可见T线。

④ 莱克多巴胺是什么东西

莱克多巴胺是一种人工合成的β-肾上腺受体激动剂(俗称β-兴奋剂)类化合物，是由美国制药公司研究出的毒性小、代谢快的克伦特罗替代品，属于第二代瘦肉精。

因其具有调节蛋白质合成的作用，国外也称为蛋白质再分配剂(Repartitioner)，在临床上主要用于治疗支气管哮喘、充血性心力衰竭症和肌肉萎缩症等。

(4)莱克多巴胺高效液相检测方法扩展阅读

莱克多巴胺的毒性远低于具有相同功能的其它瘦肉精添加物。常规剂量的瘦肉精类药物可在机体内被代谢并排出体外，不会对机体造成伤害，

但过量摄入莱克多巴胺，人体会出现不同程度的中毒反应，其症状与动物中毒症状相似，表现为肌肉震颤、四肢麻痹、心动过速、心律失常、腹痛、肌肉疼痛、恶心眩晕等症状，重者可引发高血压、心脏病甚至死亡。

当莱克多巴胺的使用量为临床使用量的5～10倍时，可以增加胴体蛋白质含量、减少脂肪组织，有效提高瘦肉率和饲料利用率。

参考资料来源：中国淮滨-关于“莱克多巴胺”的科学解读

⑤ 求助一份莱克多巴胺试剂盒说明书

莱克多巴胺(Ractopamine)快速检测试剂盒说明书
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测猪尿和猪肝等样本中的莱克多巴胺，在微孔条上预包被上偶联抗原，样本中的莱克多巴胺将和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗莱克多巴胺抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含莱克多巴胺量成负相关，与标准曲线比较即可得出莱克多巴胺含量。

一、概要简介
莱克多巴胺（Ractopamine）属于beta兴奋剂， β-兴奋剂是营养重分配剂一种，是一类结构和功能类似肾上腺素和去甲肾上 腺素的苯乙醇胺类衍生物，它可以加快畜禽生长速度，降低酮体脂肪含量，提高瘦肉率。在欧盟β-兴奋剂已被禁止用于家禽的生长促进剂，我国在《禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录》中也有明文规定， 但由于莱克多巴胺属于非处方药，且价格远低于克仑特罗，因此其非法应用者不断增多。我公司研制的莱克多巴胺ELISA快速检测试剂盒可用于动物组织、饲料、尿液中莱克多巴胺的残留检测。
试剂盒特性：
试剂盒灵敏度 0.5ppb
样本回收率：
尿样…………………………… 80%±10%
肌肉肝脏……………………… 75%±10%
饲料…………………………… 60%——120%
交叉反应率：
莱克多巴丁胺 ………………………22.3%
二、试剂盒组成
1、 96孔板酶标板 X 1块
2、 标准液X6瓶,800l/瓶，为Ractopamine水溶液 ： 0ng/ml, 0.5ng/ml，1.5ng/ml, 4.5ng/ml,13.5ng/ml,40.5ng/ml
3、酶标记物12ml ………………………………红色帽
4、Ractopamine抗体 7ml…………………………绿色帽
5、底物液 A液 7ml………………………………白色帽
6、底物液 B液 7ml………………………………红色帽
7、终止液 7ml………………………………黄色帽
8、20倍浓缩洗涤液 40ml…………………………透明帽
9、4倍浓缩复溶液50ml …………………………透明帽

三、操作步骤
样本处理
检测室须具备的仪器：
——均质器
——振荡器
——离心机
——20l，50l，100l，200l微量加样器
试剂
——甲醇
——乙醇
——二氯甲烷
配液：
buffer 1：
无水Na2CO3 48g
NaCL 15g
去离子水 100ml
1 尿样本处理
尿样不用处理，清亮尿样，用试剂盒提供的缓冲液以1：10倍稀释后，取50l进行测定，暂不使用的样品应冷冻保存。
注：样本被稀释了10倍，尿液中检测下限为10ppb（因部份样本存在一定的杂质干扰）
2 组织样本
1）称取组织3g±0.1g ，加入无水乙晴9ml， 充分振荡10min。
2) 3000g ，15℃以上离心10min 。取上清夜3ml.在氮气流下吹干。
3）加入（buffer 1） 1ml混合后，加入3ml异丁醇振荡萃取5min，3000g ，15℃以上离心5min，取出上层有机相，再加入3ml异丁醇振荡萃取5min 。合并两次萃取的有机相，氮气流下吹干。
4）用2ml 已稀释了的复溶液溶解，取50l进行分析。
注：样本被稀释了2倍，检测下限为1ppb
3 饲料样本
1）准确称取2.0±0.1g饲料于40ml离心管中。
2）加入10ml甲醇:乙醇（1:1；V/V），充分振荡10min， 4000rpm离心10min。
3）取上清2ml，氮气吹干。
4）加入1ml二氯甲烷，溶解残留物，再加入1ml 复溶液，充分混合5min，10000rpm离心10min，取上层液用试剂盒提供的缓冲液根据饲料的种类来进行不同倍数的稀释。
配合料按1：10倍稀释，浓缩料、预混料按1：30倍进行稀释，然后取50l用于ELISA分析。
注： 配合料被稀释了50倍。检测下限为25ppb
浓缩料、预混料被稀释了150倍.检测下限75ppb

四、酶标免疫分析程序
1、将试剂盒从冷藏环境中取出并将所需试剂从盒中取出，置于室温（20-24℃）平衡30min以上, 注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、配液：将40ml浓缩洗涤液（20倍浓缩）用蒸馏水或去离子水稀释至800ml备用。（按需量稀释）
3、取出需要数量的微孔板及框架，将不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃不要冷冻。
4、编号：将样品和标准品对应微孔按序编号，每个样品和标准品均需做2孔。
5、用加样器每孔加标准品或样本50l 后，每孔再加50l抗体溶液。
6、用盖板膜盖板后置于25℃环境反应1h。
7、小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤液每孔250l充分洗涤4－5次，每次间隔15－30秒，用吸水纸拍干。
8、加酶标记物：每孔加入100l。用盖板膜盖板后置25℃
环境反应30min，取出重复第7步。
9、显色：每孔加入底物液A液50l，再加底物液B液50l，轻轻振荡混匀25℃环境避光显色30min。
10、测定：每孔加入终止液50l，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测），测定每孔OD值。
四、结果
结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方法，定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与其所含莱克多巴胺量成负相关。
1、用样品的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围(ng/ml)。假设样品1的吸光度值为0.301, 样品2的吸光度值为0.812, 标准品吸光度值分别是：0ng/ml为1.500；0.5ng/ml为1.280；1.5ng/ml为1.080； 4.5ng/ml为0.710； 13.5ng/ml为0.405；40.5ng/ml为0.250。则样品1的浓度范围是13.5ng/ml-40.5ng/ml; 样品2的浓度范围是1.5ng/ml-4.5ng/ml。
2、所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（B）除以第一个标准（0标准）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。
B
百分吸光度值（%）＝ — ×100%
B0
B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
B0—0µg/L标准溶液的平均吸光度值
以莱克多巴胺浓度(µg/L)的自然对数值为X轴，百分吸光度值为Y轴，绘制标准曲线图。相对应每一个样品的浓度(µg/L)可以从标准曲线上读出。也可以用回归方程法，计算出样本溶液浓度。利用计算机专业软件，更便于大量样品的快速分析。
五、注意事项
1、室温低于20℃或试剂及标本没有回到室温（20-24度）会导致所有标准的OD值偏低（非常关键）。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。（非常重要）
3、混合要均匀，洗板要彻底，在EIA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性（非常重要）。
4、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。
5、不要使用过了有效日期的试剂盒，稀释或搀杂使用会引起灵敏度的降低。不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6、储存条件
保存试剂盒于2-8℃，不要冷冻，将不用的微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
7、试剂变质的迹象
发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。
0标准的吸光度 （450/630nm）值小于0.5个单位（A450nm<0.5 ）时，表示试剂可能变质。

⑥ 莱克多巴胺检测卡快速检测兽药的检测原理

莱克多巴胺检测卡快速检测兽药的野斗检测原理：样品溶液滴入样品孔后，样品溶液中的莱克多巴胺与金标抗体相结合，阻止金标抗体与纤维素膜上莱克多巴胺偶联物结合。当样品溶液中的莱克多巴胺含量大于检测限时检测颂数磨线不显色，毕橡结果为阳性。当样品溶液中莱克多巴胺含量小于检测限时检测线显紫红色，结果为阴性。莱克多巴胺快速检测卡用于检测尿液、组织、饲料中莱克多巴胺残留。

⑦ 请问有谁做过瘦肉精含量测定的实验,怎样测

瘦肉精”又称盐酸克仑特罗，是一种白色或类白色的结晶粉末，猪食用后在代谢过程中能够促进蛋白质合成，加速脂肪的转化和分解，提高猪肉的瘦肉率。

含有“瘦肉精”的猪肉如果被人食用后，临床表现会有如下症状：急性中毒会造成心悸，面颈、四肢肌肉颤动，手抖甚至不能站立，头晕、乏力；原有心律失常的患者更容易发生反应，如心动过速，室性早博，心电图示S-T段压低与T波倒置；原由交感神经功能亢进的患者，如有高血压、冠心病、甲状腺功能亢进者，上述症状更易发生；与糖皮质激素合用，可引起低血钾，从而导致心律失常。

如发生中毒情况需实施急救治疗：洗胃、输液，促使毒物排出；在心电图监测及电解质测定下，使用保护心脏药物如6-二磷酸果糖（FDP）及β1-受体阻滞剂倍他乐克

市民在购买猪肉过程中，如果发现猪肉肉色较深、肉质鲜艳，后臀肌肉饱满突出，脂肪非常薄，这种猪肉则可能使用过“瘦肉精”，尽量不要买.瘦肉精的四种检测方法 1. 1金标快速检测卡本试剂运用抗原抗体的特异反应以及侧向层析和胶体金技术进行尿液中克伦特罗分子的快速定性检测。样本中的瘦肉精在流动的过程中与胶体金标记的特异性的单克隆抗体结合,抑制了抗体和NC膜检测线上瘦肉精—BSA偶联物的结合。将尿样收集在干净容器中,尿样可直接测定,肉样粉碎后用HCL溶液定容,超声提取过滤加NaOH再加磷酸二氢钠过滤后C1小柱卒取而得试样,取出试剂将试剂板置于平坦的台面上,用塑料管吸取尿样或试样,然后垂直滴加2~3滴尿样或试样于试剂板的加样孔内,测试结果在3~5min读取,当试剂板的测试区出现一条紫红色带则为阳性,出现两条紫红色则可判断为阴性。 1. 2酶联免疫法(ELISA) 本方法的检测依据是抗原抗体反应,将克伦特罗特异性抗体吸附在固相载体表面,加入酶标克伦特罗结合物、标准溶液或者样液,游离的克伦特罗,酶标结合物与结合在固体表面的克伦特罗特异性抗体竞争,未结合的酶标克伦特罗结合物洗涤除去。加入酶底物,在结合酶的催化作用下,无色底物降解产生蓝色物质,加入终止剂后颜色转变为黄色。通过酶标检测仪,在450nm波长处测得吸收值。尿样可直接测定,肉样粉碎后用HCL溶液定容,超声提取过滤加NaOH再加磷酸二氢钠过滤后C18小柱卒取而得试样。用标准溶液或试样加入酶标板上相应微孔中,反应1h后洗涤4次,加入显色溶液15min后再加入终止液,然后在酶标仪上测定计算,总用时约3h。 1. 3高效液相色谱法(HPLC) 组织如肉样剪碎后,用高氯酸溶液匀浆,进行超声加热提取后,用异丙醇加乙酸乙酯萃取,有机相浓缩,经弱阳离子交换柱进行分离,用乙醇+氨(98+2)溶液洗脱,洗脱液经浓缩,经流动相磷酸二氢钠+甲醇(65+35)定容后在高效液相色谱仪上进行测定,外标法定量计算出结果。总用时约4h。 1. 4气相色谱-质谱法(GC-M S) 组织如肉样剪碎后,用高氯酸溶液匀浆,进行超声加热提取后,用异丙醇加乙酸乙酯萃取,有机相浓缩,经弱阳离子交换柱进行分离,用乙醇+氨(98+2)溶液洗脱,洗脱液经浓缩,经N,O-双三甲基硅烷三氟乙酰胺(BSTFA)衍生后于气质联用仪上进行测定,以美托络尔为内标定量计算出结果。样品处理过程与1. 3基本一样,总用时约4h。