转基因检测方法

‘壹’ 如何测试转基因食品

为了保障消费者的知情权与选择权，市场上的转基因产品标识一般直接印制在产品标签上，以转基因大豆油为例，标注为“转基因大豆加工品”或“加工原料为转基因大豆”。

‘贰’ 利用转基因测试纸检测是否是转基因食品

目前转基因的检测方法转基因作物检测方法大体分为两种：一是检测是否含有外源蛋白，即外源基因表达产物，主要采用酶联免疫吸附法和试纸条法；二是检测是否含有外源基因(DNA)，主要有Southern杂交技术、基因芯片法和PCR检测法。理论上来说，以上所介绍的转基因检测方法，只要改变相应的检测靶标，都可检测不同的转基因产品。但是实际应用中，以检测外源蛋白的转基因检测方法存大很大的局限性，食品的复杂成分会干扰检测效果，并且加工过的转基因食品中的蛋白质抗原性很容易受破坏，从而会影响检测结果的灵敏度。此外，该方法需要大量的抗体和抗原。目前，商品化的ELISA检测试剂盒和胶体金试纸条只能检测少数几种转基因产品，且一种试剂盒或试纸条只能针对某一特定转基因产物，不能针对多种混合成分的食品样品进行检测。基因水平的检测方法具有适用范围广的优势，只要样品中有DNA存在，就能被检测，不受食品混合、复杂成分的干扰，适用于转基因原料、初加工和深加工食品的检测，而且有很好的特异性和灵敏度，已经发展为常用的转基因食品检测方法。目前，所有商业化的转基因食品都有相应的PCR检测方法标准。目前，转基因PCR检测产品多数产自国外，价格都比较高，国内就广州有家迪澳生物，转基因检测产品在算是国内最齐全的，有仪器及配套试剂。

‘叁’ 转基因作物检测方法

转基因作物检测大体分为两种：一是检测是否含有外源蛋白，即外源基因表达产物，主要采用酶联免疫吸附法和试纸条法；二是检测是否含有外源基因(DNA)，主要有Southern杂交技术、基因芯片法和PCR检测法。

‘肆’ 转基因的植株要怎样检测

在植物遗传转化中，外源基因导入植物细胞的频率是相当低的。在数量庞大的受体细胞群体中，通常只有为数不多的一小部分细胞获得了外源DNA，而目的整合到基因组并实现表达的转化细胞则更少。

因此，必须采用一定的检测方法，才能筛选和鉴定出含有目的基因的重组体。目前已发展出一系列的转基因植物的筛选和鉴定方法。在这些鉴定和筛选方法，根据检测的基因功能来划分，可分为调控基因（包括启动子终止子等）检测、选择标记基因检测和目的基因直接检测。

根据检测的不同阶段区分，有整合水平检测和表达水平的检测，基因整合检测方法主要有Southern杂交、PCR、PCR-Southern杂交、原位杂交和DNA分子标记技术法，表达水平的检测包括转录水平检测和翻译水平检测，转录水平的检测法有Northern杂交和反转录PCR（reverse：transcribed：PCR，RT-PCR）检测，翻译水平的检测有酶联免疫吸附法（enzyme：linked：immuno：sorbent：assay，ELISA）和Western杂交等，其中最简便和使用广泛的表达水平的检测是报告基因检测法。由于这些方法的具体操作已在其他章节（课程）介绍过，这里只侧重介绍基于选择标记基因和报告基因的筛选和鉴定方法。

‘伍’ 转基因作物检测方法有哪些

转基因作物检测大体分为两种：一是检测是否含有外源蛋白,即外源基因表达产物,主要采用酶联免疫吸附法和试纸条法；二是检测是否含有外源基因(DNA),主要有Southern杂交技术、基因芯片法和PCR检测法.

‘陆’ 转基因食品的检测方法有哪些各有什么优缺点

目前转基因成分的检测方法主要有ELISA（酶联免疫吸附法）和侧向流动免疫测定法、普通聚合酶链式反应（PCR）的优缺点、实时荧光定量PCR（qPCR）、恒温荧光PCR检测方法等。

ELISA（酶联免疫吸附法）
ELISA具备了酶反应的高灵敏度和抗原抗体反应的特异性，具有简便、快速、费用低等特点，但易出现本底过高的问题，且只能检测目的蛋白抗原性没有明显变化的粗加工产品。直接法和双抗夹心法都要制备特异的酶标抗体，制备方法较繁琐，且一种酶标抗体只能检测一种蛋白，而适用于间接法的酶标抗抗体已有商品出售。一种转基因蛋白的检测试剂盒是否能在表达相同外源蛋白的不同植物之间通用还要进行试验。

侧向流动免疫测定法：
“侧流”型免疫测定是最近15年发展起来的，该方法之前主要用于医学领域。与ELISA相似，这种测定方法也是基于三明治夹心式技术原理，但该方法是在一种固相支持物上而不是在管子里进行，标记的抗原-抗体复合物侧向迁移，直至遇到在一种固定表面上的抗体。目前市场上已出现了用于侧向流动免疫测定并能用于野外测试的试剂盒。与DNA为基础的检测方法相比，该方法的样品处理简单。由于目标蛋白一般是水溶的且抗体具有高度专一性，因此检测样品仅需要初步处理便能达到测试的要求，具有快速、简便、适合野外操作等优点。侧向流动免疫测定试纸条是一种很快速简便的定性检测方法，将试纸条放在待测样品抽提物中，5～10分钟就可得出结果，不需要特殊仪器和熟练技能。但一种试纸条只能检测一种蛋白质，且只能检测有无存在外源蛋白而不能区分具体的转基因品种。侧向流动免疫测定方法是定性或是半定量。按照合适的采样步骤，可以在给定的一批样品中以99%的置信水平检测出少于0.15%的转基因成分。

普通聚合酶链式反应（PCR）的优缺点
优点：
1)准确度较高
2)灵敏度高
3)价格低
缺点：
1)操作复杂需要一定的专业背景
2)电泳时使用的染料对人体有一定危害
3)只能检测一个指标

实时荧光定量PCR（qPCR）的优缺点
优点
1)灵敏度高
2)准确度高
3)高通量
4)可以实现实时监控
5)可以实现定量判断
缺点
1)价格高昂
2)操作复杂
3)配套产品少
4)维护费用高

恒温荧光PCR检测方法：
恒温PCR技术的特点可以概括为比PCR更准确、快速、易于实现。因实现恒温扩增，特殊的引物设计，使得检测更准确；无变性、退火等环节，全过程均在进行DNA片段的复制，没有时间损耗，使检测更快速；无热循环需求，设备简单，更易于推广应用。为PCR技术推广应用创造了全新的空间。目前主流的实时恒温荧光PCR仪有广州迪澳生物Deou—308C恒温荧光检测仪、3M Molecular Detection System、Optigene Genie II 和 Genie III、Qiagen TuberScaner II、Envirologix DNAble等。

‘柒’ 转基因的检测方法比较

目前常用的转基因检测方法有试纸条法、普通聚合酶链式反应（PCR）、实时荧光定量PCR、恒温荧光PCR、数字PCR
试纸条：简单、快速，但对于深加工食品不适用
普通聚合酶链式反应（PCR）：准确度较高，灵敏度高，价格低，缺点是专业性要求高，电泳的染料对人体有害，只能检测一个指标
实时荧光定量PCR：灵敏度高、准确度高、高通量、可实时监控，可定量判断、自动化程度高，缺点是仪器价格高昂、操作复杂、配套产品少、维护费用高
恒温荧光PCR：灵敏度高、特异性强、快速还可实时监控，仪器性价比高，利于推广
数字PCR：准确度高、重现性好、可绝对定量、检测通量高、灵敏度好，但仪器价格昂贵

‘捌’ 转基因生物检测有哪些方法

转基因就是通过生物技术，将某个基因从生物中分离出来，然后植入另一种生物体内，从而创造一种新的人工生物。例如，科学家认为北极鱼体内某个基因有防冻作用，于是将它抽出，再植入蕃茄之内，制造新品种的耐寒蕃茄就是一种转基因生物。含有转基因生物成份的食品称为转基因食品。
转基因生物具有外来的基因，对大自然生态系统来说是全新品种，若释放到环境，会改变物种间的竞争关系，破坏原有自然生态平衡，导致物种灭绝和生物多样性的丧失。转基因生物会在自然界中自我繁殖，并和其近亲品种杂交，从而使得外来基因在自然中以不可控制方式传播，造成不可挽回的基因污染。

‘玖’ 转基因植物有哪些分析鉴定方法

分析、确定了75个品种的转基因构建成分,为开展转基因检测奠定了基础。

2、不同类型的植物提取基因组DNA的方法略有差异,该研究优化了CTAB、SDS快速提取法,并选择了磁珠吸附试剂盒法,成功提取了适合于PCR反应的植物基因组DNA。

3、以植物内源基因18SrRNA为靶标,设计、优化后筛选出特异性引物和探针,建立了以18SrRNA为目标的检测植物基因组DNA提取质量的PCR与荧光PCR鉴定体系。

4、首次以CaMV35S、FMV启动子、NOS终止子、标记基因NPTII、抗除草剂基因EPSPS、PAT、抗虫基因CryIAb为检测目标,设计、筛选出特异性引物,优化实验参数,建立了转基因植物PCR定性检测方法体系,灵敏度达0。

1﹪。

5、克隆了CaMV35S、FMV启动子、NOS终止子、标记基因NPTII、抗除草剂基因EPSPS、PAT、抗虫基因CryIAb的阳性质粒作为转基因植物检测的阳性对照。

6、于反应体系中引入UNG酶,建立了无污染的荧光PCR扩增体系。

7、首次以FAM荧光素标记探针5端作为发光基团,以TARMA标记探针3端为淬灭基团,以CaMV35S、FMV启动子、NOS终止子、标记基因NPTII、抗除草剂基因EPSPS、PAT、抗虫基因CryIAb为检测目标,设计、筛选出特异性引物和探针,优化实验参数,建立了转基因植物通用性荧光PCR定性检测方法体系。

8、以FAM和TET两种荧光素标记外源基因和内源基因,建立了转基因大豆抗除草剂基因EPSPS和转基因玉米抗虫基因CryIAb的荧光PCR定量检测体系,两体系的灵敏度均达到0。

1﹪以上。

9、首次利用反向PCR技术扩增出华番1号基因组未知DNA序列,并通过DNA测序,利用BLAST软件进行同源性比较,找出载体与基因组整合位点DNA序列。

10、利用荧光PCR技术,设计出特异性引物与探针,优化实验参数,建立了一种灵敏、精确、定量和鉴定华番1号品种特异性的高效检测体系。

这在国内为首次利用整合位点进行转基因植物检测和品种特异性鉴定的方法……