蛋白酶活性检测方法

㈠ 怎样检测蛋白酶活性

在适宜条件下(温度,pH),加入蛋清,若消失则有活性.

㈡ 测定碱性蛋白酶活有哪些方法

碱性蛋白酶酶活力检测方法

酶活力是指酶催化某些化学反应的能力。酶活力的大小可以用在一定条件下它所催化的某一化学反应的速度来表示。测定酶活力实际就是测定被酶所催化的化学反应的速度。酶促反应的速度可以用单位时间内反应底物的减少量或产物的增加量来表示，为了灵敏起见，通常是测定单位时间内产物的生成量。由于酶促反应速度可随时间的推移而逐渐降低其增加值，所以，为了正确测得酶活力，就必须测定酶促反应的初速度。

碱性蛋白酶酶活测定原理 福林法原理

碱性蛋白酶在碱性条件下，可以催化酪蛋白水解生成酪氨酸。酪氨酸为含有酚羟基的氨基酸，可与福林试剂（Folin)（磷钨酸与磷钼酸的混合物）发生福林酚反应。（福林酚反应：福林试剂在碱性条件下极其不稳定，容易定量地被酚类化合物还原，生成钨蓝和钼蓝的混合物，而呈现出不同深浅的蓝色。）利用比色法即可测定酪氨酸的生成量，用碱性蛋白酶在单位时间内水解酪蛋白产生的酪氨酸的量来表示酶活力，以此计算其酶活力。

酶活力测定实验步骤

酶液制备：精确称取干酶粉1g（±0.001），加入10mL缓冲液（2.2.5），在小烧杯中溶解，并用玻璃棒搅拌，静置片刻后，将上层液小心倾入容量瓶中，沉渣部分再加入少量缓冲液，如此反复搅拌溶解4次，最后全部移入100mL容量瓶中。用缓冲液定容至刻度，充分摇匀，用四层纱布过滤。吸取滤液5mL，移入100mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，所得液位稀释2000倍的酶液。（稀释倍数具体要看待测酶样品的酶活）

酶活定义

碱性蛋白酶活力单位的定义：1克碱性蛋白酶粉在pH10，40℃的条件下，每分钟水解酪蛋白能产生1微克酪氨酸，定为一个酶活力单位。

酶活力测定注意事项

1、酶反应的温度、pH和时间对被水解的肽键数量有直接的影响，因此必须严格控制。

2、用三氯醋酸终止反应后，过滤反应混合物所得的滤液必须是澄清的。

3、因为Folin试剂对酸性环境比较敏感，容易发生变化，因此在测定时有顺序的规定，需要先加入碳酸钠溶液形成一个碱性环境，之后再加入Folin试剂，使其能正常发挥作用

㈢ 化学屏障测定血液蛋白酶含量

化学屏障测定血液蛋白酶含量的方法是：
1. 将血液样本加入混合液中，混合液中含有一定量的蛋白酶底物；
2. 将混合液加入蔽族旁到一定量的化学屏障溶液穗闷中，宏橡屏障溶液中含有一定量的抑制剂；
3. 把混合液加入到一定量的检测液中，检测液中含有一定量的指示剂；
4. 测量混合液中指示剂的浓度，以此来估算血液样本中蛋白酶的含量。化学屏障测定血液蛋白酶含量的方法是：
1. 将血液样本加入混合液中，混合液中含有一定量的蛋白酶底物；
2. 将混合液加入到一定量的化学屏障溶液中，屏障溶液中含有一定量的抑制剂；
3. 把混合液加入到一定量的检测液中，检测液中含有一定量的指示剂；
4. 测量混合液中指示剂的浓度，以此来估算血液样本中蛋白酶的含量。

㈣ 怎样测定蛋白酶活力

先做个底物的标准曲线，然后底物加酶测吸光度，最后从标准曲线上找出对应的点，经过计算就能得到酶活值。

㈤ 怎样检测蛋白酶活性

在适宜条件下(温度,pH),加入蛋山拿清,若消失则有锋烂活性.786-028 786-320 是一些测逗基搭量蛋白酶活性的试剂盒

㈥ 蛋白酶活性测定

由于以蛋白激酶作为靶点的一系列药物的成功开发，各个试剂公司竞相开发相关的激酶检测方法和试剂盒，用于筛选和优化新的化合物作为新药候选者。其中以蛋白激酶的生化检测方法最为繁多，表3给出了一些常用检测方法、激酶抑制剂筛选试剂服务以及检测设备提供商。

蛋白激酶的生化检测侍团裤方法有2种不同的分类：

按照检测目标分类或者按照检测的方法学进行分类。

按照检测目标，可以分为检测ATP的消耗量、检测ADP的生成量、检老简测多肽底物以及检测激酶本身；

而按照检测的方法学分类，则有同位素标记分析法、质谱、核磁共振、反相高效液相色谱、毛细管电泳、生化检测方法等诸多手段。

虽然上述方法早已经见诸报道并被广泛应用，然而，现在最经常使用的还是放射性同或谨位素标记ATP，荧光标记(包括荧光偏振荧光共轭能量转移时间分辨荧光以及化学发光等)检测方法。这些方法均以微孔板作为载体，具有试剂消耗量低，检测速度快，通量高的优点，成为较普遍应用的一些蛋白激酶检测方法。