生化检测的方法

‘壹’ 生化检验是怎样的

生物化学是探讨生命奥秘的一个科学分支，利用生物化学来对病人进行检验的方法就叫生物化学检验。

我们知道，人体是个复杂的有机体，大约由60亿个细胞组成，而每个细胞又含有数目惊人的分子。人体中还有各种糖类、脂肪、蛋白质、维生素、无机盐、矿物质、微量元素。人体为了维持生命和自身成分的稳定，无时无刻不在进行着化学反应。我们肚子饿时会吃个馒头，馒头通过唾液中的淀粉酶作用，经过一系列化学反应就变成了糖，糖再经过一系列化学反应变成了能量，能量可以维持人体的正常生命活动。在吃馒头的过程中就发生了无数的化学反应。

我们人体内有多种物质，如果这些物质能保持一个均衡比例的话，人就是健康的；如果这些物质中有的多了，有的少了，就会引起疾病。通过对这些物质的监测，我们就能诊断疾病。生化检验就是做这项工作的，它通过对病人的血液、尿液、唾液、泪液、体腔积液等体液样品的生化指标进行分析，帮助医生诊断疾病、制定治疗方案。生化检验不像B超、放射等检查那样需要病人的参与，它只要能取到病人的体液即可进行检查，非常方便。

现在，人们已经研制出了全自动生化检验仪器，一台仪器就可以对人体做全部生化检验。检查人员只要把样品送入仪器，自动离心、分析、汇总、打印，这个过程一般10分钟就能完成。而在未发明这种仪器之前，生化检验要做几个小时，病人拿到报告就更慢了。

随着生化检查技术的提高，一些以前靠影像仪器诊断的疾病，现在也可以通过生化检查来完成了，比如，心肌梗塞病人的血中会出现“心肌肌钙蛋白”，通过化验患者血液即可确诊是否患有心肌梗塞。现在很多医院就是用生化检验来进行临床诊断的。

‘贰’ 临床生化检验方法分几级

临床生化检验方法根据其准确度与精密度的不同可以分为决定性方法、参考方法、常规方法等三级。
1．决定性方法（definitive method） 是指准确度最高，系统误差最小，经过详细的研究，没有发现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法。用于发展及评价参考方法和一级标准品。
2．参考方法（reference method） 是指准确度与精密度已经充分证实的分析方法，干扰因素少，系统误差与重复测定的随机误差相比可以忽略不计，有适当的灵敏度、特异性及较宽的分析范围。这类方法在条件许可的实验室中应经常使用。用于评价常规方法和试剂盒，鉴定二级标准品。
3．常规方法（routine method） 指性能指标符合临床或其他目的的需要，有足够的精密度、准确度、特异性和适当的分析范围，而且经济实用。这类方法经有关学术组织认可后可称为推荐方法（recommended method），推荐方法应具有足够的实验证据。

‘叁’ 自动生化分析仪常用分析方法有哪几种

自动生化分析仪上常用的分析方法主要有以下三种：
(1)终点分析法(平衡法)包括一点终点法、两点终点法和双波厅猜长法终点法。
(2)连续监测法(又称动态分析法、速率法或动力学法)是测定底物的消耗或产物生成速度的化学方法。
(3)比浊测定法是通过检测物质对光的散射或透射强度来咐此测定物质的方衡伏迅法。另外，还有均相酶免疫分析法。

‘肆’ 常用生化检测项目分析方法举例及参数设置

常用生化检测项目分析方法举例及参数设置

常用生化检测项目有哪些你知道吗?你对常用生化检测项目了解吗?下面是我为大家带来的关于常用生化检测项目分析方法举例及参数设置的知识，欢迎阅读。

一、常用生化检测项目

1.终点法检测常用的有总胆红素(氧化法或重氮法)、结合胆红素(氧化法或重氮法)、血清总蛋白(双缩脲法)、血清白蛋白(溴甲酚氯法)、总胆汁酸(酶法)、葡萄糖(葡萄糖氧化酶法)、尿酸(尿酸酶法)、总胆固醇(胆固醇氧化酶法)、甘油三酯(磷酸甘油氧化酶酶法)、高密度脂蛋白胆固醇(直接测定法)、钙(偶氮砷Ⅲ法)、磷(紫外法)、镁(二甲苯胺蓝法)等。以上项目中，除钙、磷和镁基本上还使用单试剂方式分析因而采用一点终点法外，其它测定项目都可使用双试剂故能选用两点终点法，包括总蛋白、白蛋白测定均已有双试剂可用。

2.固定时间法苦味酸法测定肌酐采用此法。

3.连续监测法对于酶活性测定一般应选用连续监测法，如丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、γ谷氨氨酰基转移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。一些代谢物酶法测定的项目如己糖激酶法测定葡萄糖、脲酶偶联法测定尿素等，也可用连续监测法。

4.透射比浊法透射比浊法可用于测定产生浊度反应的项目，多数属免疫比浊法，载脂蛋白、免疫球蛋白、补体、抗"O"、类风湿因子，以及血清中的其他蛋白质如前白蛋白、结合珠蛋白、转铁蛋白等均可用此法。

二、分析参数设置

分析仪的一些通用操作步骤如取样、冲洗、吸光度检测、数据处理等，其程序均已经固化在存储器里，用户不能修改。各种测定项目的分析参数(analysisparamete)大部分也已设计好，存于磁盘中，供用户使用;目前大多数生化分析仪为开放式，用户可以更改这些参数。生化分析仪一般另外留一些检测项目的空白通道，由用户自己设定分析参数。因此必须理解各参数的确切意义。

一、分析参数介绍

(一)必选分析参数

这类参数是分析仪检测的前提条件，没有这些参数无法进行检测。

1.试验名称 试验名称(test code)是指测定项目的标示符，常以项目的英文缩写来表示。

2.方法类型(也称反应模式) 方法类型(assay)有终点法、两点法、连续监测法等，根据被检物质的检测方法原理选择其中一种反应类型。

3.反应温度 一般有30℃、37℃可供选择，通常固定为37℃。

4.主波长 主波长(primary wavelength)是指定一个与被测物质反应产物的光吸收有关的波长。

5.次波长 次波长(secondary wavelength)是在使用双波长时，要指定一个与主波长、干扰物质光吸收有关的波长。

6.反应方向 反应方向(response direction)有正向反应和负向反应两种，吸光度增加为正向反应，吸光度下降为负向反应。

7.样品量 样品量(sampling volum)一般是2μl～35μl，以0.1μl步进，个别分析仪最少能达到1.6μl。可设置常量、减量和增量。

8. 第一试剂量 第一试剂量(first regengt volum)一般是20～300μl，以1μl步进。

9. 第二试剂量 第二试剂量(second regengt volum)一般也是20～300μl，以1μl步进。

10.总反应容量 总反应容量(total reacting volum)在不同的分析仪有一个不同的规定范围，一般是180～350μl，个别仪器能减少至120μl。总反应容量太少无法进行吸光度测定。

11.孵育时间 孵育时间(incubate time)在终点法是样品与试剂混匀开始至反应终点为止的时间，在两点法是第一个吸光度选择点开始至第二个吸光度选择点为止的时间。

12.延迟时间 延迟时间(delay time)在连续监测法中样品与反应试剂(第二试剂)混匀开始至连续监测期第一个吸光度选择点之间的时间。

13.连续监测时间 连续监测时间(continuous monitoring time)在延迟时间之后即开始，一般为60～120s，不少于4个吸光度检测点(3个吸光度变化值)。

14.校准液个数及浓度 校准曲线线性好并通过坐标零点的，可采用一个校准液(calibrator);线性好但不通过坐标零点，应使用两个校准液;对于校准曲线呈非线性者，必须使用两个以上校准液。每一个校准液都要有一个合适的浓度。

15.校准K值或理论K值 通过校准得到的K值为校准K值(calibrate coefficient)或由计算得出的K值为理论K值。

16.线性范围 即方法的线性范围(linearity range)，超过此范围应增加样品量或减少样品量重测。与试剂/样品比值有关。

17.小数点位数 检测结果的小数点位数(decimal point digit)。

(二)备选分析参数

这类分析参数与检测结果的准确性有关，一般来说不设置这类分析参数，分析仪也能检测出结果，但若样品中待测物浓度太高等，检测结果可能不准确。

1.样品预稀释 设置样品量、稀释剂量和稀释后样品量三个数值，便可在分析前自动对样品进行高倍稀释。

2.底物耗尽值 底物耗尽值(substrate exhaust limit)在负反应的酶活性测定中，可设置此参数，以规定一个吸光度下降限。若低于此限时底物已太少，不足以维持零级反应而导致检测结果不准确。

3.前区检查 免疫比浊法中应用，以判断是否有抗原过剩。将终点法最后两个吸光度值的差别(ΔA)设置一个限值，如果后一点的吸光度比前一点低，表示已有抗原过剩，应稀释样品后重测。

4.试剂空白吸光度范围 超过此设定范围表示试剂已变质，应更换合格试剂。

5.试剂空白速率 连续监测法中使用，是试剂本身在监测过程中没有化学反应时的变化速率。

6.方法学补偿系数 用于校准不同分析方法间测定结果的一致性，有斜率和截距两个参数。

7.参考值范围 对超过此范围的测定结果，仪器会打印出提示。

(三)某些参数的特殊意义

1.最小样品量 最小样品量是指分析仪进样针能在规定的误差范围内吸取的最小样品量。一般分析仪的最小样品量是2μl，目前也有小至1.6μl的。在样品含高浓度代谢产物或高活性酶浓度的情况下往往需采用分析仪的最小样品量作为减量参数，从而使分析仪检测范围(与线性范围不同)的上限得以扩大。

2.最大试剂量 方法灵敏度很高而线性上限低的检测项目，如血清白蛋白的溴甲酚氯法测定，以往手工法操作时样品量10μl，试剂量4ml，这样试剂量/样品量比例(R/S)为200，线性上限则为60g/L。此法移植到分析仪上后，R/S却很难达到200，致使线性上限变低。因此对这类检测项目最大试剂量非常重要。

3.弹性速率 在酶活性测定中，当酶活性太高，在连续监测期中已不呈线性反应时，有些仪器具有弹性速率(flexrate)功能，能自动选择反应曲线上连续监测期中仍呈线性的吸光度数据计算结果，使酶活性测定的线性范围得以扩大。如AST可从1000U/L扩展至4000U/L，从而减少稀释及重测次数、降低成本。

4.试剂空白速率 当样品中存在胆红素时，胆红素对碱性苦味酸速率法或两点法测定肌酐有负干扰。因为胆红素在肌酐检测的波长505nm有较高光吸收，而且胆红素在碱性环境中可被氧化转变，因而在肌酐反应过程中胆红素的光吸收呈下降趋势。若在加入第一试剂后一段时间内设置试剂空白速率，因为此段中苦味酸尚未与肌酐反应，而胆红素在第一试剂的碱性环境中已同样被氧化转变，因而以第二试剂加入后的速率变化，减去试剂空白速率变化，便可消除胆红素的负干扰，见图7-8。

二、单波长和双波长方式

(一)概念

采用一个波长检测物质的光吸收强度的`方式称为单波长(mono-wavelength)方式。当反应液中含有一种组分，或在混合反应液中待测组分的吸收峰与其它共存物质的吸收波长无重叠时，可以选用。在吸光度检测中，使用一个主波长和一个次波长的称双波长方式。当反应液中存在干扰物的较大吸收、从而影响测定结果的准确性时，采用双波长方式更好。

(二)双波长的作用

双波长(di-wavelength)测定优点是①消除噪音干扰;②减少杂散光影响;③减少样品本身光吸收的干扰。从光源，到比色杯、单色器、检测器的整个光路系统中，均存在着随时间发生变化的不稳定的检测信号，即噪音，而双波长检测是同时进行的，两种波长检测产生的噪音基本上相同，因而能消除噪音干扰。当样品中存在非化学反应的干扰物如甘油三酯、血红蛋白、胆红素等时，会产生非特异性的光吸收，而干扰测定结果的准确性。采用双波长方式测定可以部分消除这类干扰，提高检测的准确性。

(三)次波长的确定方法

当被测物的主波长确定之后，再选择次波长。如根据甘油三酯等干扰物吸收光谱特征，选择次波长，使干扰物在主、次波长处有尽可能相同的光吸收值，而被测物在主、次波长处的光吸收值应有较大的差异。一般来说，次波长应大于主波长100nm。以主波长与次波长吸光度差来计算结果。

(四)双波长的具体应用

对于某些反应速度快且无法设置为两点终点法的分析项目，尤其是单试剂分析中，可以利用双波长的方式来部分消除样品本身的光吸收干扰。目前用单试剂法测定的项目应用双波长的为血清总蛋白(双缩脲法)主波长500nm，次波长576nm;血清白蛋白(溴甲酚氯法)主、次波长分别为600和700nm;钙(偶氮砷Ⅲ法)主、次波长分别为 660、770nm;磷(紫外比色法)主、次波长为340、405nm，镁(二甲苯胺蓝法)主、次波长为505和 600nm。

三、单试剂和双试剂方式

反应过程中只加一次试剂称单试剂方式，加两次试剂便为双试剂方式。目前的生化分析仪大多可用双试剂方式分析，其优点是：①可提高试剂的稳定性，多数双试剂混合成单一工作试剂时，其稳定时间缩短;②能设置两点终点法，来消除来自样品本身的光吸收干扰;③在某些项目检测时能消除非特异性化学反应的干扰。如血清ALT测定，血清中的内源性丙酮酸及其它酮酸也可与试剂中的指示酶(乳酸脱氢酶)起反应，使结果偏高。若先加入缺乏α-酮戊二酸的第一试剂，使其它酮酸与指示酶反应之后再加入含有α-酮戊二酸的第二试剂，启动真正的ALT酶促反应生成丙酮酸，而丙酮酸与乳酸脱氢酶的反应消耗的NAD+能真正反映ALT的活性，从而消除以上副反应的影响。

四、测定过程的自动监测

各种自动生化分析仪或多或少都具有对测定过程进行各种监测的功能，以便在没有人"监督"化学反应的情况下提高检测的准确性。高档分析仪的监测功能更强。

1.试剂空白监测 每种试剂都有一定的空白吸光度范围，试剂空白吸光度的改变往往提示着该试剂的变质：如利用Trinder反应为原理的检测试剂会因酚被氧化为醌而变为红色;碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转移酶、淀粉酶等检测试剂会因基质分解出硝基酚或硝基苯胺而变黄;有些试剂久置后变浑浊。这些情况均可使空白吸光度升高。丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶等负反应检测项目，其试剂在放置过程中空白吸光度会因NADH自行氧化为NAD+而下降等。

试剂空白的测定方法有两种：①每瓶试剂在使用前通过对试剂空白校准来确定试剂空白吸光度，这种方式适用于先取样品后加试剂的分析仪。②每个样品测定前均检测试剂空白吸光度，适用于先加试剂后取样品的分析仪。

2.试剂空白变化速率监测 一些酶试剂在反应温度下不稳定，其空白吸光度可随着时间逐渐发生变化，这种变化的主要原因与工具酶或辅酶的纯度有关，且因试剂的组成和生产厂家的不同而不同。这种变化会影响测定结果的准确性，一般使结果偏高。如果设置此项监测，分析仪在结果计算时会自动减去试剂空白变化速率。在以监测NAD(P)H减少为指示反应的酶活性测定中，空白速率可监测并消除由NADH自身氧化所造成的吸光度下降;在色素原为底物的酶活性测定中，空白速率可监测并消除底物自身分解造成的吸光度升高。有关空白速率监测在胆红素对碱性苦味酸速率法测定肌酐负干扰消除中的作用，已如前述。

3.样品信息监测 由于样品的溶血、脂浊、黄疸会对测定结果产生非化学反应的干扰。根据溶血、脂浊、黄疸的光谱吸收特性，用双波长或多波长检测其性质和程度，一般是测定样品在600nm/570nm、700nm/660nm和505nm/480nm吸光度比值的大小来分别判断样品溶血、脂浊和黄疸程度。然后在结果计算时自动减去这部分干扰，这将有利于提高分析结果的可靠性。

4.结果可靠性监测

(1)终点监测：终点法测定要判断所选的测光点是否到达终点或平衡点。一些分析仪在所选终点后再选一个测光点，比较这两点吸光度的差异来判断反应是否到达终点。

(2)线性期监测：连续监测法选择时间-吸光度反应曲线上的线性期来计算酶活性或被测物浓度，因此仪器要确定此连续监测期是否呈线性。其监测方法为①将连续监测到的各吸光度值进行线性回归，计算出各点的方差，根据方差值的大小来判断是否呈线性;②取连续监测期开始若干点的变化速率与连续监测期最后若干点的变化速率进行比较，来判断是否为线性期。

5.底物消耗的监测 在连续监测法测定酶活性时，如果在监测期内吸光度上升或下降超过其底物耗尽值，则说明该样品酶活性非常高，底物将被耗尽，监测期的吸光度将偏离线性，使测定结果不可靠。此时不打印结果或打印结果同时也打印出底物耗尽提示，该样品应稀释一定的倍数重新测定。此监测对于采用负反应分析酶活性的方法甚为重要。见图7-9

6.方法线性范围监测 每种待测物分析都有一个可测定的浓度或活性范围，样品结果若超过此范围，分析仪将显示测定结果超过线性范围的提示，多数分析仪会自动将样品减量或增量重新测定。

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‘伍’ 生化实验方法分类尿素实验算哪一类

生化实验方法分类尿素实验算哪一类❓
正确答案：利友绝尘用生物化学方法检测细菌代谢产物的试验称为细菌的生化反应常用于鉴定细菌。 (1)常用检好禅测细菌糖代谢的生化反应试验有：①糖发酵试验；②VP(V)试验；③甲基红宏卖(M)试验；④枸橼酸盐利用(C)试验等。 (2)常用检测蛋白质代谢产物的试验有：①吲哚(靛基质)试验；②硫化氢试验；③尿素分解试验等。
利用生物化学方法检测细菌代谢产物的试验,称为细菌的生化反应,常用于鉴定细菌。(1)常用检测细菌糖代谢的生化反应试验有：①糖发酵试验；②VP(V)试验；③甲基红(M)试验；④枸橼酸盐利用(C)试验等。(2)常用检测蛋白质代谢产物的试验有：①吲哚(靛基质)试验；②硫化氢试验；③尿素分解试验等。

‘陆’ 生化分析仪检测方法中的终点法、两点法、双波长法有什么区别

我们在购买生化仪的时候，生化分析仪的参数上的检测方法可能存在多个，包括终点法、固定时间法（两点法）、连续察野监测法（速率法）、双波长法等等，这些检测方法有什么不同，各有什么作用呢？

终点法：被测物质在反映过程中完全被转变为产物，到达反映终点，根据终点吸光度的大小求出被测物浓度，称终点法。此方法参数设置简单，反映时间一般比较长，精密度好。

固定时间法（两点法）：指在【时间-吸光度曲线】上选择两个测光点，次两点既不是初始吸光度点，也不是终点吸光度点，用这两个值吸光度差值计算。

连续监测法（速率法）：是在测定酶活性或用酶法测定代谢产物时，连续选取【时间-光度曲线】（各两点吸光度差值相等）的吸光度值，并以此线性期的耽误吸光度变化值计算结果。

双波长法：采用一个主波长一个次波长的检测方法：1、消除噪音干扰；2、减少杂散光影响；3、减少样品本身光吸收的干扰，检测结果更准确。次波长大于主波长100nm，主次波长处有尽可能相同的光吸收值。

这些测试方法各有优势，从多个方面取长补短，是生化分析仪的检测数据的准确性加以完善，更能反映人体的健康状况拿没纳和一些潜在疾病的风险。

康宇医疗生化分析仪目前分为全自动和半自动的多个型号消没，全自动的生化分析仪其中也包含了多种检测方法，使检测结果更加准确，适用于各类综合医院、妇幼保健院、儿童医院、乡镇卫生院、诊所的医疗

‘柒’ 生化分析仪的几种基本分析方法

生化分析仪已经成为医院检验科必备的检测设备，按照生化分析仪的结构原理，生化分析仪可以分为管道连续流动式、分立式、离心式和干片式等几种，目前临床最常用的是分立式生化分析仪，其常用检测方法包括终点法、固定时间法和连续监测法。
1、终点法
2、固定时间法
3、连续监测法
通常情况下，全自动的生化分析仪是几种检测方法并存，如康宇医疗全自动生化分析仪检测方法就包括终点法、动力学法、免疫比浊发、固定时间发、双试剂法等，仪器检测范围宽泛，是基层医院首选的医疗设备。

‘捌’ 全自动生化分析仪常见的检测方法有哪些，各有什么优势

双波长法：使用一个主波长和一个次波长检测物质的光吸收强度的方式称为双波长法。当反应液中存在干扰物的较大吸收，从而影响测量结果的准确性时，采用双波长方式更好。终点法：完全被转化成产物，不再进行反应达到终点，取反应终点的吸光度来计算被测物质的浓度。生化检验中除酶和BUN、CRE外几乎都用终点法来进行检测。透射比浊法：又称浊度测定法。为测量透过悬浮质点介质的光强度来确定悬浮物质浓度的方法，这是一种光散射测量技术分类：免疫比浊法，散射比浊法，光扫描比浊法，乳胶比浊法，光电比浊法，微生物比浊法等十余类。固定时间法（两点法）：是取尚在反应中的两点间的差值来计算结果。此两点既不是反应起始点也不是终点。主要用于检测一些非特异性的项目，如肌酐。连续监测法（动力学法、速率法）：是在测定酶的活性或酶代谢产物时，连续取反应曲线中呈线性变化吸光度值（△；A/min）来计算结果。因在反应线性时间内各点间的吸光度差值为零故又称谓零级反应。针对以上这些检测方法的对比，我们可以看出在生化分析仪的检测过程中如何正确应用这些检测方法的。康宇医疗的全自动生化分析仪同时兼顾好几种测试方法，在检测过程中，根据所需，以长补短，使测试结果更准确，保证仪器的准确度。

‘玖’ 常规生化检查有哪些

生殖器官的检查包括对阴茎、尿道、睾丸、附睾、精索、前列腺等器官的视诊、触诊等。查看阴茎是否为严重包茎，有无硬结炎症、肿瘤、发育异常等。尿道排尿困难、瘘孔、下裂、硬结及狭窄。对前列腺检查其大小，有无肥大、硬结、肿物，取前列腺液送实验室检查。测量睾丸的大小、硬度，有无硬结、压痛、鞘膜积液、肿物，是否为隐睾。输精管的硬度，有无结节、压痛以及有无精索静脉曲张等。
睾丸体积的检查常用以下方法：
（1）卡尺测量法。此法所测结果较准确，但比较繁琐。方法为用卡尺分别测量睾丸的长径、宽径、厚径；然后用各种公式计算出睾丸体积。
（2）测量子比较法。睾丸体积测量子为不同体积的状如睾丸的椭圆形硬物，依其大小标为1～25号。测量时将被测睾丸拉起，绷紧阴囊皮肤，将测量子于睾丸旁逐一与之比较，与睾丸大小最相近的测量子体积，即可视为睾丸体积。
正常男子睾丸体积的个体变异很大，左右两侧的两个睾丸亦有一定差异，因而所测结果只能作为参考。对睾丸发育状况以及生殖能力的估计须经多方面检查加以综合分析，才能得出结论。
据调查，正常成年男子的睾丸体积（包括阴囊皮肤在内）大多相当于15至25号测量子的体积。
精液检查是男性不育的必查项目。检查包括精液量、颜色、粘稠度、酸碱度：液化情况、精子密度、活力、形态等。
（1）颜色。正常人精液颜色是灰白色，禁欲时间长精液呈浅黄色。若精液呈乳白色或略带黄绿色，常是由于生殖道或副性腺感染，精液中含有白细胞之故，精液发红或夹有血丝血凝块，称血性精液。
（2）精液量。正常健康男子，每次性交射出的精液量为15～6毫升，精液体积异常一是过少，少于1毫升；二是过多，超过8毫升。精浆是精子的营养来源，其中含有稳定精液酸碱度的缓冲物，能保护精子在酸性阴道分泌物内的存活。精子只占精液量的1％，精液体积异常一般是精浆成分出现变化。如果精液量过少，精浆不能稀释精子，精子往往失去活力，从而造成不育；精液过多时，精子密度降低，精液过稀，易于从阴道内流失，不利于受孕。
排精量不足1毫升或只有二三滴时，称之为精液量过少。性交次数过于频繁时，精液可以显着减少，可禁欲5～7天重新测定。如果取精不得当，使精液失去，也可能造成精液量过少。造成精液量过少的原因还有：
①附性腺因素：包括睾丸功能障碍；附性腺出现感染或其他病变时。
②射精管梗阻：可因尿道狭窄、尿道憩室引起，也可能因感染水肿造成。
③膀胱括约肌功能紊乱，或局部神经支配失调时，可出现部分性逆行射精。
精液量过多可见于精囊炎，当炎症分泌物过多时，精囊液显着增加。大多数原因不明的少精子症患者，可采用分段射精和离心分离精子的方法取精，将精液离心浓缩精子后进行人工授精。
如果患者睾丸发育不良、射精管道完全阻塞、不射精、逆行射精时则根本无精液排出。
（3）酸碱度。正常酸碱度为pH72～80。过高或过低都可影响精子的活动和代谢。若超过85，常说明精囊有炎症，或精液放得时间过久。若低于7，则是射精管阻塞，也可能是精液被尿污染。
（4）液化。精液刚射出时是粘稠的液体，但因受精囊分泌的凝固酶的作用很差，或畸形精子超过30％，常可造成不育。
（5）精液理化性状异常。正常精液射出后很快凝成胶冻状，在以后的15～30分钟内又全部液化。如果精液射出后不凝固，或液化不全，过稠或脓性分泌物使精子活力下降，造成生育能力低下。生殖道感染也可引起不育。精液中致病菌大于103个／毫升，非致病菌大于103个／毫升，均可引起不育。
生精障碍（1）性染色体异常可使睾丸等性器官分化不良，造成真假两性畸形以及生精障碍；常染色体异常可导致性腺及生精细胞代谢紊乱。造成不育。
（2）隐睾症或双侧睾丸发育不全者无生精能力。单侧睾丸功能正常者，仍可生育。
快凝结成胶冻状，继而在15～30分钟内又因前列腺分泌的液化酶而恢复成液状。这种过程称为精液液化。若超过30分钟还不液化，即为不正常。精液不液化，精子不能自由活动，当然也就不会生育。精液不液化的原因，大多是由于前列腺的液化功能障碍所致。
精液粘度和液化时间是精液正常与异常的重要指标之一，主要取决于男性生殖腺中蛋白溶解酶的活性。无论精液粘稠度增高或降低，都可改变精子在精液中的活动能力。精液粘度和液化时间的异常与生殖道炎症、酒精中毒、酶原疾病等有关。
精液电描记图是测定精液粘度和液化时间的一种方法。把精液置于装有凝固描记仪的空气恒温器内检测，记录精液液化的电描记图，判断精液的粘度和液化时间。精液电描记图测定排除了主观因素和环境因素的影响，整个过程由电子描记显示图形，较为准确可靠，可用于诊断因精液物性质障碍有关的男性不育症和观察治疗效果。
（3）精子数量。精子的数量一是指每毫升精液中的精子数；二是指一次射出的精液中的总精子数。精子数量的个体差异很大，与其年龄、健康状况以及近日是否有过射精有关。检查前应禁欲3～10天。一般成人每毫升精液中精子数量为2000万～15亿／毫升。要反复检查多次。一般认为，如果多次检查精子数量均低于2000万／毫升，应视为精子过少。这类患者即使精子形态、活力等均正常，生育能力亦较常人低，甚至造成不育。大于25亿／毫升者称为精子过多症。
精子数量减少的原因，可因睾丸本身发育障碍、外界环境因素、内分泌疾病等原因所致。精子密度过高也会影响精子的活动，发生流产的机会也比较多。有些人虽然精子密度低于2000万／毫升，但精子活动力强，畸形率低，依然能生育；有些人尽管精子数量并不少。但活动精子百分率低，畸形精子多，结果也不能生育。一般认为，精子计数的最低限度，密度是1000万／毫升；每次排出精子总数是5000万。低于这个标准，基本上无生育力。
（4）精子活力：一般取已液化的精液一滴，在显微镜下观察，并计数，大约计算出活动与不活动精子的百分率。一般可将精子的活动力分为五级：
1级精子毫无活动，全部为死精子。
2级精子原地打转，动作迟钝。
3级精子能活动，但不活泼，缓慢向前游动，方向不呈直线。
4级精子以中等速度直线向前游动。
5级精子活泼，快速直线向前游动。
精子活力包括精子活率和精子活动力。
精子爬高试验是测定精子活动速度的一项试验，是判断男子生育力的一项指标。取塑料管灌满含有果糖的精液营养液，管的上端结扎。下端垂直插入含有少量精液的试管内。放入37℃恒温水浴箱中8小时，取出，将塑料管剪成1厘米长12段，依次把每段精液溶化后滴于计数盘上作精子计数，计算精子上升的高度及数字，以判断精子活力。
此法简单易行。对测定精子运动速度、判断生育能力有一定的价值。
（5）存活率。通常在射精后1小时内，能活动的精子至少占70％，若少于50％则为不正常。输精管道及附属性腺的炎症、精液标本放置在过热或过冷的环境中、盛放精液容器中的影响、长期禁欲、精子受免疫影响而导致精子凝集等原因可致精子活动能力及存活率减弱。
（6）精子形态。形态正常的精子不应少于85％以上。如畸形精子在10％以下时，对生育无显着影响；在20％以下时，仍有生育可能，若超过20％则可能造成不育。
精子分头、体、尾三部分，正常精子长约50～60微米，外形如蝌蚪状。头部正面为卵圆形，前面是扁平的，侧面是梨状的。前缘锐薄，尾部长而弯曲，能作摇摆状活动，于液体中以每秒25微米的速度向前移动。正常精子头部可以变异为大头、小头、圆头及尖头等不同形态。幼稚型精子可呈小头状，可见头部胞质残余及体部胞质残余等。衰老的精子在头部胞浆内可见深染颗粒、头部深染或不着色等。
①头部：精子头长35～50微米，宽20～30微米；精子头呈规则椭圆形。只要精子其他形态正常。精子头大小不是重要因素。精子头部异常包括：圆锥形（长宽分别小于5和2微米，或长超过5微米，宽小于3微米）、不规则形、双头和“梨形”。
②中段：中段长50～70微米，宽10微米。宽超过2微米多反映胞浆小滴未完全退化，如果胞浆小滴大于精子头的一半，意味着精子不成熟，属异常，若小于或等于头的一半应属正常。中段断裂也属异常。
③尾部：尾长45微米。尾部异常常见为断裂、双尾或卷曲。卷曲可能与锌元素含量有关。其他缺陷可能与无症状生殖系统感染有关。
一个精子可能有多种缺陷，可以按其主要缺陷统计。精子形态判断时应包括以下内容。
>60％的正常椭圆形精子头（包括半数左右的可疑者），若<30％不正常；<6％的圆锥形精子头，若超过10％不正常；<86％的不规则精子头。若超过50％不正常；<05％的不成熟精子，增多意味着精子生成或精子成熟过程出现障碍；20％尾部畸形，若超过25％不正常。
如果形态异常的精子超过70％，特别是妻子有习惯性流产时，男方很可能具有染色体异常。如果异常精子少于70％，也许是精索静脉曲张、职业或环境接触毒物、放射线、微波、服用药物、感染及应激等因素影响了睾丸生精过程。精子形态异常时，因为头过大或其他形态异常不利于穿透宫颈粘液所形成的微小通道。宫颈粘液中常可见到头特别小的精子，多数因为无顶体存在。如果畸形精子症找不出任何明确原因时则为原因不明的睾丸生精障碍，可以采用中医药治疗方法促进生精。
精液异常的原因有：
（1）睾丸疾患：
（1）有隐睾病史者，无精子症发生率显着升高，即使有精子，精液质量也异常。
②睾丸损伤，伴有阴囊血肿或血尿，无精子症或精液异常发生率显着增加。
③曾发生过睾丸扭转可有无精子症和少精子症。
④睾丸炎和附睾炎的病人，其精子密度和活动率显着降低。
（2）泌尿生殖道疾病：
（1）性传播疾病一般不影响精子密度。但精子活动率下降。
②泌尿生殖系统炎症常使异常精液质量，精子形态和活动率较低。
（3）其他系统疾病：
（1）青春期前后发生腮腺炎可引起无精子症，精液异常。
（2）支气管炎特别是支气管扩张无精子症发生率显着增高。气管炎患者的精'液分析异常率增高；③糖尿病与射精功能障碍相关，但不引起精液质量异常。
④6个月内曾发高烧的可使精液异常率明显升高。
（4）其他：
①长期服用对生育产生影响的药物。无精子率显着升高，如各种细胞毒及抗肿瘤药物、某些磺胺药等。
②高温工作中缺乏适当劳动保护条件，产棉区长期食用未经处理的棉籽油。常见到睾丸萎缩、少精子、死精子或无精子症患者。
3体外异种受精实验：常规精液分析的各项指标完全正常，有时也不一定能使精子具有受精能力。目前常用人精子穿透仓鼠卵子的异种受精实验。验证男性不育者的实际生育能力。
精子穿透仓鼠卵试验是根据仓鼠卵去除透明带后，几乎不再具有种属特异性的特点而设计的，用人精子穿入仓鼠卵的百分率来评价精子的受精能力。
一般从4～12周龄的雌性仓鼠获取卵子，经处理放入含有一定数量已获能精子，在370c温度中孵育3～5小时，然后吸出卵子在显微镜下观察。凡卵子卵浆内有肿大的精子、头并附有尾部者认为已受精，并且计数。
这种方法是诊断男性不育症一种很有实用价值的方法。
精子宫颈粘液穿透试验是：
（1）玻片法：使精子与宫颈粘液直接接触，试验不能真实地反映客观情况，并难以标准化及定量。
（2）毛细管法：将粘液放入一端封闭的毛细管中，另一端直立浸在粘液中，观察精子群的活动能力。
精子穿透宫颈粘液能力与精子活动力的大小有关。宫颈粘液有筛选形态异常精子的能力，不合格的精子不能穿透宫颈粘液。如果精子在试验中穿透能力正常，常提示不孕是由女方宫颈粘液异常所致。
前列腺液检查正常前列腺液为白色，呈微酸性，pH63～65。内含总脂286毫克％，其中磷脂占65％。白细胞数在10个以内，并可见到少许上皮细胞、淀粉样物体及精子。患前列腺炎时，镜检白细胞数增加，或见成堆的脓细胞，卵磷脂颗粒减少。
内分泌检查目前常用的方法有：血浆睾酮水平测定；人体绒毛膜促性腺激素刺激试验；促性腺激素释放激素刺激试验。
克罗米芬是合成的女性激素衍生物，此药可诱发排卵和产生精子，临床常用于治疗少精子症。应用克罗米芬以后能增强丘脑下部促性腺激素释放激素的分泌，睾丸分泌睾酮也因而增加。所以克罗米芬刺激试验，是检查丘脑下部功能的良好办法。
试验需时12天，在服克罗米芬之前，先查两天血浆和黄体生成素的基础水平。从第三天开始连续服克罗米芬10天，用量为200毫克／日，一次或分次口服。在服药后第九、十两天测定血浆睾酮和黄体生成索的浓度。正常用此药10天后与对照值相比较，黄体生成素的增长幅度为72％～245％，卵泡刺激素为45％～130％，睾酮为40％～220％。从增长幅度可以看出。卵泡刺激素增长幅度不如黄体生成素及睾酮明显，因此阳性指标是以黄体生成素及睾酮的增长幅度为主。青春期前儿童的刺激试验反应为阴性时，提示青春期尚未开始，但不能预示是否开始发育。16岁时一般呈阳性反应，若年龄超过17岁，兴奋反应不明显，则应进行垂体功能检查。在青春期少年或青春期后成年，若克罗米芬刺激试验是阴性，那么，一般来说，年龄越大，则垂体功能低下的可能性越大。成年男性病人患单纯垂体性幼稚症，可以本试验阴性作为诊断参考。至于原发性睾丸功能低下病人，一般是黄体生成素值偏高，用药兴奋后不再上升。原发性无精子或精子稀少的病人，本试验呈阳性。
人体绒毛膜促性腺激素刺激试验人体绒毛膜促性腺激素（HCG）是由胎盘分泌的激素。HCG能促进男性胎儿的睾丸分泌少量睾酮，对男性胎儿的副性器官发育有意义。虽然在妊娠终未HCG已降至很低水平，但已成熟的睾丸已能分泌睾酮，足以使睾丸正常下降。HCG也能促进女性卵巢分泌雌激素和排卵，临床上常用此药治疗不育症。为男病人进行HCG刺激试验，可检查体内的睾丸组织是否具有分泌功能。检查结果如为阳性，表明体内睾丸组织有分泌功能。如检查结果反应偏低，应考虑为隐睾症或原发性睾丸功能低下。如为阴性反应，也不能立即作出相反的诊断。女性病人检查HCG的变化，目的在于诊断早期妊娠、葡萄胎及绒毛膜上皮癌等疾病。
促性腺激素释放激素刺激试验。在下丘脑的神经分泌物中，含有促性腺激素释放素（GnRH）。若GnRH神经元损伤或垂体功能低下时，睾酮的分泌会有明显减少。GnRH刺激试验的目的，在于检查垂体的功能。
血浆睾酮水平测定血浆中睾酮的浓度个体差异很大。正常壮年期男性（20～50岁）的水平最高，平均约为570～7009微克％，50岁以后，其浓度逐渐减少。血浆睾酮的水平在昼夜间有差异，早晨8～10时最高，午夜2时最低。睾酮分泌过多，原因可为睾丸的良性问质细胞瘤，血浆睾酮比正常人多100倍，因而表现为肌肉和骨骼的生长过快，性器官过早发育和副性征过早出现。睾酮分泌不足，可见于因手术、感染、化学中毒、放射线损伤或发育不全等原因而致睾丸功能低下。也可能继发于垂体病变，因促性腺激素减少。以致睾丸间质细胞发育不良。目前测定血浆中睾酮含量的方法很多。如放射免疫法，由于血浆用量较少，误差也少，有一定优越性。
睾丸活组织检查男性能否生育首先检查睾丸组织是否受到过损害，生精功能是否正常。进行睾丸活组织检查，除诊断男性不育外，还可诊断睾丸其他疾病。睾丸活组织检查有两种方法。
（1）穿刺法。用针管及针头，抽吸少许睾丸组织。
（2）切开法。阴囊皮肤作2厘米左右的小切口，剪下一小块睾丸组织。
睾丸组织切片检查时可见，在正常情况下，青春期前曲细精管细小，无基底膜，仅有原始生殖细胞和支持细胞，间质细胞不明显。青春期后则表现为曲细精管直径加宽，有较薄的基底膜。上皮细胞能显示精子发育成熟的各个时期。精原细胞靠近基底膜，成熟的生殖细胞靠近白细胞管管腔，管腔内可有较多精子。睾丸的生殖病理变化，主要出现在曲细精管生精上皮和曲细精管基底膜。
男性不育症经睾丸活动组织检查，一般常见的病变如下：睾丸不成熟，其组织为青春期前的组织；精子发生低下，各时期精子都有，但数量减少；曲细精管变性，曲细精管透明变性或纤维化；克氏综合症，可见曲细精管细小，无生精细胞，唯有支持细胞的基底膜增厚，有时表现为透明；单纯支持细胞综合症，无各期生殖细胞，仅有支持细胞：成熟障碍或生精阻滞生精过程被阻止在初级精母细胞或精原细胞阶段；睾丸组织接近正常，不育的原因应考虑输精管道被阻塞。
总之，睾丸活组织检查，是确诊男性不育症的重要方法。
输精管、精囊造影常用于男性不育症的检查通过尿道或阴囊部注入造影响剂，使射精管、精囊、输精管及附睾显影，以了解各部输送通道梗阻、炎症、结核、先天性畸形及其临近组织的有关病变。
常用的输精管、精囊造影方法有下述两种。
（1）经输精管法。切开阴囊外上部，显露输精管，用注射针刺入输精管注入造影剂15～5毫升。
（2）经尿道逆行插管法。先用尿道镜或膀胱镜插入尿道后，在精阜两旁找到射精管开口，将细导管插入1～3厘米，然后注入造影剂2～5毫升。
输精管、精囊造影对于诊断男性不育的原因有着重要意义，可以发现精子运输通道的先天性畸形、炎症、肿瘤等疾病，另外对前列腺病变的诊断也有一定的帮助。
多普勒超声检查对可疑的精索静脉曲张及隐性精索静脉曲张患者，通过一般物理检查不易确诊时用多普勒超声仪检查能获得较为准确的结果。
免疫学检查目前最常用的抗精子抗体测定技术有精子凝集试验、毛细血管内凝集试验、胎盘内凝集试验、补体依赖性精子制动试验以及抗体标记荧光免疫技术等。
精子凝集试验的血清精子凝集抗体滴度取1∶32作为有临床意义的低限标准。低于1∶32者生育力稍有减低。1∶64～1∶512为中滴度，可以生育，但生育力较低，1∶512以上为高滴度，表明被检者无生育力。精浆中的抗精子抗体滴度与血清中的滴度也不完全一致。精浆的精子凝集抗体滴度1∶16，生育力显着降低。但并不是不能生育；滴度高于1∶32，可能不育。这些滴度数值只适用于精子计数每毫升2000万以上的男性不育患者。
汉光免疫法检测，不管其他方法检测抗精子抗体是否阳性，它总是约有30％的患者出现阳性反应。所以，临床上价值不大。
混合抗球蛋白反应试验，此法特异性较强。测定抗精子抗体的准确性超过90％。由于操作技术简单，可作为一种筛选试验。
染色体检查染色体异常者一般生育功能都受到影响。如果一个不育患者的睾丸体积小于12毫升，或者两性畸形都应该检查染色体，因其染色体异常的可能性很大。另外，妻子有习惯性流产或畸胎史时，夫妻双方应做染色体鉴定。
染色体异常有两种情况：一种是染色体的数目异常；另一种是染色体的结构畸变。
在男性不育中，性染色体数异常引起的病症常见的是先天性曲细精管发育不全综合症，其典型核型是47XXY，还有47XXY／46XY嵌合型。在女性不育中，性染色体异常的疾病有性腺发育不全。而染色体结构畸变中，染色体易位是引起不育症的一个主要的原因。如果夫妇有一方是染色体平衡易位携带者，虽然他本身并无异常表现，但可能给后代带来染色体异常的危险性。这样的胚胎在妊娠早期流产的可能性很大，幸存者可能是染色体病患者。因而在妊娠20周左右应做产前诊断，通过羊水细胞培养鉴定胎儿的染色体的结构和数目是否正常，异常时应及早做人工流产。
检查染色体一般是从患者静脉采血15毫升，鉴定核型和分辩染色体的数H和形态结构。染色体检查为遗传疾病以及某些其他疾病的病因、发病机制、诊断、预防以至预后等提供了科学依据。
交媾试验：交媾试验是检查精子是否能穿过宫颈的试验方法。
精子射进阴道后要穿过宫颈。宫颈粘液由宫颈腺体分泌。宫颈粘液的量和性质随月经周期中雌激素和孕激素水平出现周期性变化。在月经中期，宫颈粘液大且稀薄、拉丝长，使精子易穿过。如果精子活动能力差，或宫颈粘液少而粘稠，或存在抗精子抗体等，将会影响精子穿透宫颈粘液。
（1）试验的时间：在月经周期中，宫颈粘液能够允许精子穿透的时间的长度每个妇女不同。同一个妇女的每个周期也有差异。应因人而异确定出进行精子穿透试验的最佳时间。可采用B超监测排卵来判断排卵日期。试验应该尽可能靠近排卵期进行，可以根据基础体温、宫颈粘液的变化和阴道细胞学检查来确定排卵时间。
每对夫妇在进行试验前应该至少禁欲2天。在同房前24小时内禁止阴道内用药或冲洗。上床前把大小便排尽，避免同房后几小时内上厕所。性交后仰卧，屈膝，垫高臀部休息至少30分钟，防止精液流出。试验应在性交后6～8小时进行，18～24小时进行也是可以的。
（2）性交后试验技术：医生将没有涂抹滑润剂的阴道窥器插入阴道，用不带针头的注射器、吸管，分别吸取阴道后穹窿、宫颈外口和宫颈内口的宫颈粘液，高倍显微镜下观察精子情况。
①阴道后穹窿样本。由于阴道内酸性环境，精子在阴道内仅能存活2小时，检查阴道样本的目的在于证实精液确实进入阴道内。
②宫颈外口样本。宫颈外口精子数目随着性交后时间延长而减少。性交后2～3小时，在宫颈下段积聚大量的精子。在宫颈粘液中，根据精子移动情况可以分为4级：1迅速和直线向前运动；2缓慢直线或非直线运动；3非向前运动；4不活动精子。
一对正常夫妇性交后，在宫颈内样本通常用400倍视野可以观察到25个以I级和Ⅱ级活动精子，如果用高视野有10个以上I级活动精子，即可以认为是良好的；如果仅有5个活动精子，并且为迟钝缓慢或转圈运动形式，则说明精液中精子数目少和活动率差，或者宫颈粘液异常。
性交后4小时开始，宫颈外口的精子数目逐渐减少。所以在4小时以上间隔时间检查，从宫颈下段收集到的宫颈粘液中仅可发现很少的精子。
③宫颈内口样本。在射精后，少数精子迅速到达宫颈内口，而且数目逐渐增多。约在2～3小时后达到一个高峰。在24小时之内，精子数目相对稳定。
所以在性交后6～10小时，用高倍视野具有I和Ⅱ级活动度的精子数目大多为10个，即属于正常范围。在性交后10～24小时，可检测到的精子数目与6～10小时相似。
（3）试验结果：性交后试验的目的，不仅在于检查性交后数小时以后，在宫颈粘液中活动的精子数目，而且还要评价精子的活动状况。在性交后6～10小时宫颈内存在适当数量的活动精子，就可排除由宫颈因素引起的不育。
试验阴性不能轻易下结论，因为有可能选择的时间不当。有时由于性交后试验进行得太早或太晚，可以造成假阴性结果。如果不能利用准确可靠的时间来确定排卵时间，则有必要在一个周期中重复作几次性交后试验。
一旦证实性交后试验为阴性，可以进一步确定是精子质量问题，或是由于宫颈粘液的有害因素，并且可测定宫颈粘液中是否存在抗精子抗体。对于性交后试验阴性的不育夫妇，可以利用人工授精办法，帮助他们受孕。

‘拾’ 食品病原微生物的检测方法有几种生化检测方法分别有什么试验

食品病原微生物的检测方法有几种？生化检测方法分别有什么试验？

正确答案：答：分别有生化检测方法核兄乎和分子生物学检测方法。生化检测方法有：糖酵解试验，淀粉尘慧水解试验，V-P试验，靛基质实改悉验，硝酸盐还原试验，明胶液化试验，尿素酶试验，氧化酶试验，硫化氢试验和三糖铁琼脂试验。