‘壹’ 细胞活性检测的方法有多少种
细胞活性测定方法有台盼蓝染色法、克隆(集落)形成法、 3H 放射性同位素掺入法、 MTT 法等。其中 MTT 法以其快速简便,不需要特殊检测仪器、无放射性同位素、适合大批量检测的特点而得到广泛的应用。但 MTT 法形成的 Formazan 为水不溶性的,需要加有机溶剂溶解,由于在去上清操作时会有可能带走小部分的 Formazan ,故有时重复性略差。为了解决这个问题,研究人员又开发了很多种水溶性的四氮唑盐类:如 XTT 、 CCK-8 ( WST-8 )等。
‘贰’ 实验细胞的活力测定MTS法
BrdU标记法 1.细胞以1.5×105/ml细胞数接种于直径35ml培养皿中(内放置一盖玻片),培养1天,用含0.4% FCS培养液同步化3天,使绝大多数细胞处于G0期。 2.终止细胞培养前,加入BrdU(终浓度为30μg/L),37℃,孵育40min。 3.弃培养液,玻片用PBS洗涤3次。 4.甲醇/醋酸固定10min。 5.经固定的玻片空气干燥,0.3%H2O2-甲醇30min灭活内源性氧化酶。 6.5%正常兔血清封闭。 7.甲酰胺100℃,5min变性核酸。 8.冰浴冷却后PBS洗涤,加1抗即抗小鼠BrdU单抗(工作浓度1:50),阴性对照加PBS或血清。 9.按ABC法进行检测,苏木素或伊红衬染,在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及BrdU阳性细胞数,计算标记指数(LI)。 结晶紫法 1.体外细胞培养结束后,去培养液,加入11%的戊二醛固定,置于振荡器上摇20min。 2.固定细胞用去离子水洗涤至戊二醛液洗净。 3.置空气或烘箱37℃彻底干燥。 4.加入0.1%的结晶紫液对细胞染色,振摇30min。 5.用蒸馏水洗涤,至多余的结晶紫液冲洗干净。 6.置空气或37℃烘箱中彻底干燥。 7.加入10%的乙酸对细胞吸收的结晶紫进行提取。 8.1h后在酶标仪上测定光吸收度,波长595nm。 酸性磷酸酶法 1.96孔细胞培养板中培养细胞,去培养...
‘叁’ 常用的检测细胞活力的方法有哪些(除了MTT)
现在应用最多的是CCK-8法。CCK8基本与MTT是一样的,优点是产物溶于水,所以避免了有机溶剂溶解甲月赞的步骤,既节省了时间,还大幅提高了一致性。
当然最精确的还是同位素标记法。
‘肆’ 如何用TTC法测定细胞活力(具体步骤)
1. 浸泡 将待测种子在 30 ~ 35 ℃温水中浸种(大麦、小麦 6 小时,玉米 5 小时左右),以增强种胚的呼吸作用。
2. 显色 取吸胀的种子 200 粒,用刀片沿种子胚的中心线纵切为两半,将其中的一半置于 2 只培养皿中,每皿 100 个半粒,加入适量的 0.5% TTC 溶液,以覆盖种子为度。然后置于 30 ℃恒温箱中 1 h 。观察结果,凡胚被染为红色的是活种子。
将另一半在沸水中煮 5 min 杀死胚,作同样染色处理,作为对照观察。
3. 计算活种子的百分率
‘伍’ 检测细胞生物学活性有哪些方法
根据每细胞定重量设计用于单细胞、细胞及丝状体微物测定定体积品通离或滤菌体离经洗涤再离直接称重求湿重丝状体微物滤用滤纸吸菌丝间自由水再称重求湿重论细菌品丝状菌品放已知重量平皿或烧杯内于一05℃烘干至恒重取放入干燥器内冷却再称量求微物干重 要测定固体培养基放线菌或丝状真菌先加热至50℃使琼脂熔化滤菌丝体再用50℃理盐水洗涤菌丝按述求菌丝体湿重或干重 除干重、湿重反映细胞物质重量外通测定细胞蛋白质或DNA含量反映细胞物质量蛋白质细胞主要含量比较稳定其氮蛋白质重要组元素定体积品离细胞洗涤按凯氏定氮测总氮量蛋白质含氮量一陆%细菌蛋白质含量占细菌固形物50%吧0%般陆5%代表些细菌则占一三%一四%种变化由菌龄培养条件同所产总含氮量与蛋白质总量间关系按列公式计算: 蛋白质总量=含氮量×陆.二5 核酸DNA微物重要遗传物质每细菌DNA含量相恒定平均吧.四×`一0^(-5)`NG定体积细菌悬液所含细菌提取DNA求DNA含量再计算定体积细菌悬液所含细菌总
‘陆’ 细胞活力测定常用的简便方法是
MTT法又称MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。
缺点:由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水,需被溶解后才能检测。这不仅使工作量增加,也会对实验结果的准确性产生影响,而且溶解甲瓒的有机溶剂对实验者也有损害。
细胞活力常用百分比表示,活力的大小对试验结果有很大影响。细胞活力的测定有许多方法,最简便常用的方法是台盼蓝(trypanblue)染色法。台盼蓝又称锥蓝,是一种阴离子型染料,这种染料不能透过活细胞正常完整的细胞膜,故活细胞不着色,但死亡细胞的细胞膜通透性增加,可使染料通过细胞膜进入细胞内,使死细胞着色呈蓝色。
‘柒’ 细胞活力测定常用的简便方法
又称MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。
缺点:由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水,需被溶解后才能检测。这不仅使工作量增加,也会对实验结果的准确性产生影响,而且溶解甲瓒的有机溶剂对实验者也有损害。
‘捌’ MTT法细胞活力检测细胞活力时,如何确定加药物的时间
博凌科为解答:一般文献报道的方法,是贴壁细胞在细胞贴壁后加药物(一般为上板后24h),而悬浮细胞是上板同时加。 但是,在操作中具体要根据实验本身要检测的指标来确定时间。如果是做有关细胞增殖的药物,加药的时机影响不大,主要是药物的作用时间起决定性因素;如果要检测的是其他一些指标(比如药物对细胞黏附功能的影响),就要在细胞贴壁以前加药了
‘玖’ 细胞活性检测的方法有多少种 每种的原理是什么
简单说几个把
染色体法 主要在培养基中利用死活细胞对燃料亲和力不同 来判断
克隆形成实验 原理是单个细胞在体外增至六代后,后代形成的细胞群体 ,通过计算其克隆形成率 来判断
比色法 也是比较经典的 M,RR 活体细胞中的线粒体中的琥珀酸脱氢酶可以将M,rr还原成蓝紫色的结晶甲醋 死细胞无此功能