常规细菌学检测方法是

1. 细菌形态学检查常用的方法有什么

细菌形态学检查方法：常用染色方法

１．美蓝染色法

在已干燥、固定好的抹片上，滴加适量的美蓝染色液，经１一２分钟，水洗，干后镜检，结果是细菌呈蓝色。

２．稀释石炭酸复红染色法

染色方法同美蓝染色法，结果是细菌呈红色。

３．革兰（Ｇｒａｍ）氏染色法

（１）在已干燥、固定好的抹片上，滴加草酸按结晶紫染色液，染色２一３分钟，水洗。

（２）加革兰氏碘液于抹片上媒染１一２分钟，水洗。

（３）加９５％酒精于抹片上脱色，约３０秒至１分钟，水洗。

（４）加稀释石炭酸复红（或沙黄水溶液）复染５０一６０秒钟，水洗。干后镜检。结果是细菌染成蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，染成红色的称为革兰氏阴性细菌。

2. 细菌检测最简单的方法

一.使用细菌总数测试片,只需要购买细菌总数测试片,再按要求使用,有说明书.
二.红细胞计数法
首先要了解这个方法的原理.把N个红细胞与细菌均匀混合,再数出一小块区域内的红细胞数n和细菌数m.因为细胞已经均均匀混合,所以,局部的细胞数比和整体的细胞数比是接近相同的.即 n/m=N/M (n为局部红细胞数,N为总红细胞数,m为局部细菌数,M为总细菌数）n,m已数出.N又已知.所以总细菌数N就可以算出来.再取几个局部,算平均值,就能得到较精确的细菌数目.
如果这样做,只要数出一小块区域内的细菌数就可以知道总细菌数.如果不加红细胞,一个一个数,用要数到何年何月啊!细菌可是对数增长.加入红细胞的作用就像比例尺一样,地图上总有1：XXX的比例尺,你在显微镜的一个是视野里看到的红细胞数目就像地图上你测得的距离,数清一个是视野的菌数后,乘以相应分散度就可以了,分散度时用红细胞算的,具体的教材上应该有.不用也可以,不过要换成相应大小别的东西代替,总之用光学显微镜差菌数,这是不可缺少的.
这里运用了样方法,就是在若干样方中计数全部个体,然后将其平均数推广,来估计种群总体数量的方法.样方法相关知识：
①样 方：样方也叫样本,从研究对象的总体中抽取出来的部分个体的集合,叫做样方.
②随机取样：在抽样时如果总体中每一个个体被抽选的机会均等,且每一个个体被选与其他个体间无任何牵连,那么,这种既满足随机性,又满足独立性的抽样,就叫做随机取样(或叫做简单随机取样).随机取样不允许掺入任何主观性,否则,就难以避免调查人员想获得调查属性的心理作用,往往使调查结果偏大.
③适用范围：植物种群密度,昆虫卵的密度 ,蚜虫、跳蝻的密度,细菌数量测量等.
样方法取样方法
①点状取样法点状取样法中常用的为五点取样法,如图A,当调查的总体为非长条形时,可用此法取样.在总体中按梅花形取5个样方,每个样方的长和宽要求一致.这种方法适用于调查植物个体分布比较均匀的情况.
②等距取样法当调查的总体为长条形时,可用等距取样法,如图B,先将调查总体分成若干等份,由抽样比率决定距离或间隔,然后按这一相等的距离或间隔抽取样方的方法,叫做等距取样法.例如,长条形的总体为100 m长,如果要等距抽取10样方,那么抽样的比率为1/10,抽样距离为10 m,然后可再按需要在每10 m的前1 m内进行取样,样方大小要求一致.
样方法的两种边角统计方式如下图（红色为需统计边线）
样方法具体步骤如下：
①确定调查对象；
②选取样方：必须选择一个该种群分布较均匀的地块,使其具良好的代表性；
③计数：计数每个样方内该种群数量；
样方法的两种边角统计方式
④计算：取各样方平均数.

3. 细菌鉴定办法有哪些, 常见细菌的鉴定办法就可以~

一 淀粉水解试验
（一）实验原理
细菌对大分子的淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用,必须靠产生的胞外酶,如淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶将大分子物质分解.胞外酶能分泌扩散到细胞外,将物质分解成小单位如糖、氨基酸、甘油与脂肪酸.这些小单位的物质能被细菌吸收和利用.水解过程可通过底物的变化来证明,如细菌水解淀粉的区域,用碘测定不再产生蓝色；水解明胶可观察到明胶被液化；脂肪水解后产生脂肪酸改变培养基的pH,其中的中性红指示剂使培养基从淡红色变为深红色.
（二）实验方法
将淀粉培养基溶化后,冷至45℃左右,以无菌操作制成平板.
取18-24h的纯培养物点于平板上,每皿可点种3-5个菌株,适温培养2-4d,形成菌落后,在平板上滴加卢戈氏碘液,以铺满菌落周围为度,平板成蓝色.如果菌落周围有无色透明圈出现,说明淀粉已经被水解,实验为阳性,否则为阴性.透明圈的大小一般说明水解淀粉的能力.
（三）实验试剂的配制
肉汤蛋白胨琼脂成分：蛋白胨10g,牛肉膏3g,氯化钠5g,琼脂17g,蒸馏水1000mL,pH7.2.
淀粉培养基制法：在肉汤蛋白胨琼脂中添加0.2％的可溶性淀粉,校正pH值至7.6,分装三角瓶,121℃ 20min灭菌备用.
卢戈氏(Lugol)碘液：碘片1g,碘化钾2g,蒸馏水300ml,先将碘化钾溶解在少量水中,再将碘片溶解在碘化钾溶液中,混匀,定容.
二 糖发酵试验
(一)实验原理
单糖发酵是将葡萄糖,乳糖或麦芽糖等分别加入蛋白胨水培养基内,使其最终浓度为0.75-1％.并加入一定量酚红指示剂及小倒管,制成单糖发酵管,接种细菌经37℃培养18-24小时,若能分解糖产酸则酚红指示剂由红变黄,若能分解甲酸有CO2和H2等气体形成,小倒管内则聚集有气泡；不分解,则指示剂不变色.
(二)实验材料
1．菌种：大肠杆菌,伤寒杆菌18-24小时琼脂斜面培养物.
2．培养基：葡萄糖发酵管,乳糖发酵管等.
(三)实验方法
1．将伤寒杆菌,大肠杆菌按照液体接种方法分别接种于葡萄糖及乳糖发酵管内.
2．置37℃孵箱培养18-24小时.
3．观察结果：由于一些细菌能分解某种糖类产酸,所以培养基中pH下降到7.0以下,在酚红指示剂的显示下,培养基颜色由红变黄.产酸者以“+”表示,如果同时产生气体,则培养基中小倒管内有气泡出现,此乃产酸又产气,以“♁”表示,不分解,则指示剂不变色,用“-”表示.
(四)实验结果
伤寒杆菌 大肠杆菌
葡萄糖 + ♁
乳 糖 - ♁
(五)实验试剂的配制
1.单糖发酵管的制备： 成分：蛋白胨水培养基 100ml ,0.2%酚红 1ml ,所需糖（葡萄糖或乳糖）0.75-1g
制法：
（1）将上述成分溶化,混匀分装于内含有倒置小玻璃管的小试管中,每管约2ml,加塞.
（2）小倒管排气,灭菌（8-10磅,20-30分钟）,贮存备用.
用途：供单糖发酵试验用.
2.0.2%酚红配制法
酚红（phenol red）0.2g ,0.lmol/LNaOH 8ml ,蒸馏水 92ml
将酚红入研钵徐徐加入0.lmol/LNaOH研磨,再补足蒸馏水即成.若需长时间保存,可高压灭菌后贮存备用.
三 甲基红（M.R）试验
(一)实验原理
某些细菌如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸,继而分解为甲酸、乙酸、乳酸等,使培养基pH值降至4.5以下,加入甲基红指示剂呈红色,此为阳性反应；若产酸量少或产生的酸进一步转化为醇、醛、气体和水等,则培养基的酸碱度仍在pH 6.2以上,加入甲基红指示剂呈现黄色,为阴性反应.
(二)实验材料
1. 菌种：大肠杆菌,产气杆菌18-24h琼脂斜面培养物.
2. 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基.
3. 试剂：甲基红试剂.
(三)实验方法
1. 分别将大肠杆菌,产气杆菌接种于两支葡萄糖蛋白胨水培养基中.
2. 置37℃培养2-3天取出,分别滴加甲基红试剂2-3滴,混匀,观察结果.
(四)实验结果
大肠杆菌：+,产气杆菌：-.
(五)实验试剂的配制
1．甲基红试剂的配制
甲基红 0.04g, 95%酒精 60ml , 蒸馏水 40ml .
先使甲基红溶解于酒精中,再加入蒸馏水,混合,摇匀即成.
2.葡萄糖蛋白胨水培养物
成分：蛋白胨5g 葡萄糖5g
制法：
（1）将上述成分溶解于蒸馏水中.
（2）调节pH至7.6,用滤纸过滤除渣.
（3）分装中试管,每管约3-4ml,灭菌后备用.
用途：供甲基红及V-P试验用.
四 产吲哚（indole）试验
(一)实验原理
某些细菌如大肠杆菌,变形杆菌等具有色氨酸酶,能分解蛋白胨水培养基中的色氨酸,产生靛基质（无色吲哚）,再与欧立希试剂（对二甲基氨基苯甲醛）反应,形成红色化合物—玫瑰吲哚,即为阳性反应.
(二)实验材料
1. 菌种：大肠杆菌,伤寒杆菌18-24小时琼脂斜面培养物.
2. 培养基：蛋白胨水培养基.
3. 试剂,欧立希（Ehrlich）试剂（对二甲基氨基苯甲醛）
(三)实验方法
1. 分别将大肠杆菌,伤寒杆菌接种于两支蛋白胨水培养基中.
2. 置37℃培养2-3天后,每管沿管壁各加欧立希试剂0.5-1ml于培养液面上,待1-2分钟后观察结果：在交界面出现玫瑰红色环即为吲哚试验阳性,无红色环即为阴性.
(四)实验结果
大肠杆菌：+ ；伤寒杆菌：- .
(五)实验试剂的配制
1.蛋白胨水培养基的制备
成分：蛋白胨10g 氯化钠5g 蒸馏水1000ml
制法：
（1）先用少量蒸馏水将蛋白胨和氯化钠相混合溶解,再加足蒸馏水量.
（2）调节pH至7.6、用滤纸过滤.
（3）分装中试管,每管约3-4ml,加塞灭菌后备用.
2. 欧立希（Ehrlich）试剂的配制
对位二甲基氨基苯甲醛 4g
95%酒精 380ml
浓硫酸或浓盐酸80ml
三种成分混合即成,瓶口要严密,以免挥发.
五 硝酸盐还原试验
(一)硝酸盐还原试验原理：
硝酸盐还原反应包括两个过程：一是在合成过程中,硝酸盐还原为亚硝酸盐和氨,再由氨转化为氨基酸和细胞内其他含氮化合物；二是在分解代谢过程中,硝酸盐或亚硝酸盐代替氧作为呼吸酶系统中的终末受氢体.能使硝酸盐还原的细菌从硝酸盐中获得氧而形成亚硝酸盐和其他还原性产物.但硝酸盐还原的过程因细菌不同而异,有的细菌仅使硝酸盐还原为亚硝酸盐,如大肠埃希菌；有的细菌则可使其还原为亚硝酸盐和离子态的铵；有的细菌能使硝酸盐或亚硝酸盐还原为氮,如假单胞菌等.硝酸盐还原试验系测定还原过程中所产生的亚硝酸盐.
(二)培养基：
硝酸盐培养基.
(三)试剂：
甲液（对氨基苯磺酸0.8g+5mol/L醋酸100ml）；乙液（α-奈胺0.5g + 5mol/L醋酸100ml）.
(四)方法：
被检菌接种于硝酸盐培养基中,于35℃培养1～4d.将甲、乙液等量混合后（约0.1ml）加入培养基内,立即观察结果.
(五)结果：
出现红色为阳性.若加入试剂后无颜色反应,可能是：①硝酸盐没有被还原,试验阴性；②硝酸盐被还原为氨和氮等其他产物而导致假阴性结果,这时应在试管内加入少许锌粉,如出现红色则表明试验确实为阴性.若仍不产生红色,表示试验为假阴性.
若要检查是否有氮气产生,可在培养基管内加一小倒管,如有气泡产生,表示有氮气生成.
(六)应用：
本试验在细菌鉴定中广泛应用.肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐；铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌等假单胞菌可产生氮气；有些厌氧菌如韦荣球菌等试验也为阳性.
(七)实验试剂的配制
硝酸盐液体培养基
蛋白胨5.0g,KNO3 0.2g, 蒸馏水1000 mL,pH7.4,每管分装4-5mL,121℃灭菌15-20min.
六 产氨实验（尿素分解实验）
(一)实验原理
某些细菌如变形杆菌,具有尿素分解酶,能分解尿素而产生氨,氨溶于水变成氢氧化铵,使培养基变碱而呈红色即为阳性.
(二) 实验材料
1. 菌种：变形杆菌,伤寒杆菌18-24小时琼脂斜面培养物.
2. 培养基：尿素培养基.
(三) 实验方法
1. 分别以斜面接种法将变形杆菌,伤寒杆菌接种于两支尿素斜面培养基上.
2. 置37℃培养18-24小时.
3. 取出观察结果,培养基变为红色,即尿素分解试验阳性,若不变色,即为尿素分解试验阴性.
(四) 实验结果
变形杆菌：+ ；伤寒杆菌：- .
(五) 实验试剂的配制
1.尿素培养基的制备
成分： 蛋白胨1g 、氯化钠5g、葡萄糖1g、蒸馏水900ml、琼脂15-20g 、0.1%酚红 12ml 、20%尿素水溶液（无菌）100ml .
制法：（1）除尿素、琼脂和酚红外,其余成分溶于水中,加热溶化,矫正pH至6.8-6.9.
（2）加入琼脂和酚红,115℃磅灭菌10min.
（3）冷却至60℃后加入无菌尿素溶液,摇匀.
（4）分装中试管（无菌）,每管3-4ml,置成斜面备用.
说明：（1）尿素不耐热,也不能久存,只能用滤器除菌.
2.无菌尿素溶液制备：称取尿素20g,混合于100ml蒸馏水中,充分摇匀,用G6滤菌器过滤除菌,以达到无菌的目的.
七 柠檬酸盐利用试验
(一)实验原理
本试验用于检测细菌利用柠檬酸的能力.细菌利用柠檬酸盐的能力不同,如各种肠细菌可利用柠檬酸为碳源,而大肠埃希氏菌则不利用柠檬酸盐.因此,能否利用柠檬酸盐是一项鉴别性特征.培养基中含有柠檬酸钠时,如将柠檬酸分解为CO2,则培养基中由于有游离钠离子呈碱性,使培养基中酚红指示剂（pH6.8-8.4,黄→红）由淡粉红色变为玫瑰红色以识别之.
(二)材料
柠檬酸钠 2g、K2HPO4 1g、NH3H2PO4 1g、NaCl 5g、MgSO4 0.2g、琼脂 1.5 2g、1%溴麝香草酚蓝(酒精溶液)或0.04%苯酚红 10ml、水 1000ml
将上述各成分加热溶解后,调PH6.8,然后加入酚红指示剂,摇匀,用脱脂棉过滤.制成后为黄绿色,分装试管.121℃灭菌20min后制成斜面.
(三) 实验内容
1.将试验菌在斜面上划线接种,适温培养3-5天.
2.若该菌能利用柠檬酸盐,则可在此斜面上生长并将培养基由原来的淡粉红色变为玫瑰红色,此为阳性；颜色不变者为阴性.
八 油脂水解试验
(一)原理
某些细菌能够分泌脂肪酶（胞外酶）,能将培养基中的脂肪水解为甘油和脂肪酸.所产生的脂肪酸,可通过预先加入油脂培养基中的中性红加以指示[指示范围pH6.8（红）～pH8.0（黄）].当细菌分解脂肪产生脂肪酸时,培养基中出现红色斑点.
(二)实验内容
1.将装有油脂培养基的锥形瓶置于沸水浴中融化,取出并充分振荡（使油脂均匀分布）,再倾入培养皿中,待凝固后制成平板.
2.翻转平板使底皿背面向上,用记号笔在其背面玻璃上划成两半.一半用于接种金黄色葡萄球菌作为阳性对照菌,另一半用于接种实验菌大肠杆菌或产气肠杆菌.接种时用接种环取少量菌在平板两边各划线接种.
3.将接种完的平板倒置于37℃恒温箱中,培养24h.
4.观察结果时,注意观察平板上长菌的地方,如出现红色斑点,即说明脂肪已被水解,此为阳性反应.
（三）培养基配制
油脂培养基：蛋白胨10g,牛肉膏5g,氯化钠5g,香油或花生油10g,中性红（1.6%水溶液）约0.1ml,琼脂15-20g,蒸馏水1000mL,pH7.2,121℃灭菌20min.
九 接触酶试验
(一)实验原理
本试验用于检测细菌是否具有接触酶活性.接触酶又称为过氧化氢酶,是一种以正铁血红素作为辅基的酶,能将过氧化氢分解为水和氧.一般好氧细菌与兼性厌氧细菌（除某些链球菌、乳酸杆菌等外）都能产生接触酶,而厌氧细菌不产生接触酶,这是用以区别好氧和厌氧菌的方法之一.
(二)材料
牛肉膏、蛋白胨琼脂培养基,3%过氧化氢.
牛肉膏、蛋白胨琼脂培养基：牛肉膏 0.3g、蛋白胨 1g、氯化钠 0.5g、琼脂 2g、自来水 100mL、pH 7.0～7.2 、灭菌.
(三)实验内容
1.接种试验菌,适温下培养18-24小时.
2.将3%的过氧化氢滴于斜面菌苔上（或涂有菌苔的载玻片上）,静置1-3分钟后,如有气泡产生即为阳性.不产生气泡者为阴性.
(四) 应用
革兰阳性球菌中,葡萄球菌和微球菌均产生过氧化氢酶,而链球菌属为阴性,故此试验常用于革兰阳性球菌的初步分群.
十 革兰氏染色
(一)实验原理
革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法.通过结晶紫初染和碘液媒染后,在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物,革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密,故遇乙醇或丙酮脱色处理时,因失水反而使网孔缩小,再加上它不含类脂,故乙醇处理不会出现缝隙,因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内,使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差,在遇脱色剂后,以类脂为主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出,因此通过乙醇脱色后仍呈无色,再经沙黄等红色染料复染,就使革兰氏阴性菌呈红色.
(二)实验方法
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤,具体操作方法是：
1.涂片固定.
2.草酸铵结晶紫染1分钟.
3.自来水冲洗.
4.加碘液覆盖涂面染约1分钟.
5.水洗,用吸水纸吸去水分.
6.加95%酒精数滴,并轻轻摇动进行脱色,20秒后水洗,吸去水分.
7.蕃红梁色液（稀）染2分钟后,自来水冲洗.干燥,镜检.
[染色的结果]：革兰氏正反应菌体都呈紫色,负反应菌体都呈红色.
(三)应用
其重要的临床意义在于：1.鉴别细菌 2.选择药物 3.与致病性有关：：革兰氏阳性菌能产生外毒素,革兰氏阴性菌能产生内毒素,两者的致病作用不同.

4. 细菌学有哪些检验方法

直接涂片检查：取混匀新鲜尿涂片，健康人的尿涂片无细菌。若每个油镜视野下可见1条或以上的细菌，提示为菌尿。并可行革兰氏染色，初步确定尿路感染细菌是阳性球菌或阴性杆菌。细菌培养：目前多采用定量接种环法，培养24h，计数菌落。阴性杆菌分裂快，菌落数>l〇5cfo/ml，提示菌尿，菌落数104〜105cfo/ml为可疑。阳性球菌分裂慢，菌落数>103cfU/ml为菌尿。结核菌检查：尿结核菌检查是确定有无泌尿系结核的重要方法，尿沉渣涂片抗酸染色较简单，阳性率为50%〜70%;清晨第1次尿送检则阳性率高。尿结核菌培养阳性率可达90%，但结核菌生长缓慢。使用改良罗氏培养基，一般需4〜8周始能报告结果。近年常用聚合酶链反应（PCR)方法，使含微量结核菌DNA扩增，40条结核菌即可有阳性结果，此法特异性强，2d可有结果，但时有假阳性或假阴性的情况。菌尿的辅助检查亚硝酸盐试验：革兰阴性杆菌如大肠、副大肠杆菌能将尿中的硝酸盐还原为亚硝酸盐，而球菌和结核菌无还原硝酸盐的能力，因此亚硝酸盐试验阳性，提示革兰阴性杆菌的感染。氯化三苯四氮唑试验（TTC试验）；大部分革兰阴性活杆菌能将无色TTC还原为红色的三苯甲替，而球菌及变形杆菌则呈阴性。故可用以初步判定是哪一类细菌感染。尿抗体包裹细菌（ACB):肾盂肾炎为肾实质感染，在细菌抗原作用下，机体可产生相应抗体，抗体将致病菌包裹，在荧光镜下观察用荧光素标记的抗人体蛋白抗体处理的尿细菌，若表面有荧光抗体包裹则大多属肾盂肾炎，膀胱炎为黏膜浅表感染，故细菌表面无荧光抗体包裹。用ACB法有助于上、下尿路感染的定位诊断。但在前列腺炎患者，其ACB试验亦呈阳性，应注意鉴别。其他：另外还有过氧化物酶试验、葡萄糖氧化酶试验、鲎试验及尿氧压测定均可帮助诊断尿路感染，但目前临床上应用较少。

5. 病原微生物中细菌常见检测方法有哪些

1、快速测试片技术法

快速测试片是指以纸片、纸膜、胶片等作为培养基载体，将特定的培养基和显色物质附着在上面，通过微生物在上面的生长、显色来测定食品中微生物的方法。

细菌总数检测纸片的研制始于 20 世纪 80 年代，其主要优点是简便、实用、经济、操作性强。近年来以滤纸和美国某公司的 Petrifilm 为载体的测试片已开始被广泛应用。

2、生物电化学方法

生物电化学方法是指通过电极测定微生物产生或消耗的电荷，从而提供分析信号的方法。微生物在滋生代谢过程中，培养基的电化学性质如电流、电位、电阻和电导等会发生变化，所以可以通过检测分析这些电化学参量的变化来实现对微生物的快速测定。

常见的有：阻抗分析法、电位分析法、电流分析法等。生物电化学方法具有测量快速、直观、操作简单、测量设备成本低和信号的可控性等特点。

3、微菌落技术

微菌落是指细菌生长繁殖早期在固相载体上所形成的只能借助于显微镜观察的微小菌落。微菌落技术具有快速、经济、实用的特点，其研究始于 20 世纪50年代，定量测定技术从 20 世纪 70 年代开始，国外已有报道将该法应用于水、食品中细菌总数的快速检测。

4、气相色谱法

气相色谱应用到微生物的检测中，主要是依据不同微生物的化学组成或其产生的代谢产物各异，利用上述色谱检测可直接分析各种体液中的细菌代谢产物、细胞中的脂肪酸、蛋白质、氨基酸、多肽、多糖等，以确定病原微生物的特异性化学标志成分，协助病原诊断和检测。

5、高效液相色谱法

利用高效液相色谱检测可分析各种体液中的细菌代谢产物、病原微生物等，以确定病原微生物的特异性化学标志成分，协助病原诊断和检测。

6. 常见的尿细菌学检查方法是什么

尿细菌学检查对诊断尿路感染具有重要价值。主要有以下两种方法。

（1）尿涂片找细菌。尿路细菌感染时尿中含有大量细菌，尿液涂片镜检易找到细菌。每高倍视野细菌数少于10个或未找到，提示中段尿培养阴性或菌落数低于103/ml。如果细菌数为15～30个/高倍视野，中段尿培养菌落数常大于105/ml。据中山医科大学叶任高教授经验，其可靠率为90%以上。并认为，即使已开始使用抗生素的病例，尿培养阴性，尿沉渣革兰染色找细菌仍有可能找到，这样就可弥补在应用抗生素的情况下尿细菌培养阴性的缺点。另外，应用革兰染色涂片找细菌可以初步确定尿路感染是阳性球菌或阴性杆菌，作为使用抗菌药物的参考。

（2）尿液细菌培养。正常人尿内有一定数量的细菌，尿道口周围亦有大量细菌。正常人尿道口及阴道存在以下细菌：表皮葡萄球菌、链球菌、枯草杆菌、假白喉棒状杆菌、变形杆菌、大肠杆菌、乳酸杆菌、卡他布兰汉氏菌及耻垢分枝杆菌等。外阴冲洗不净，细菌常混入尿中，但细菌数小于103/ml。尿细菌培养的目的主要是运用中段尿培养菌落计数的方法以鉴别是否为尿路感染。

若尿菌落数大于105/ml为感染，准确率约80%；细菌数小于103/ml或有多种细菌生长，为污染所致，无临床意义。但值得注意的是球菌，特别是粪球菌及肠球菌繁殖缓慢，其尿菌落数若为103～104/ml之间，即有诊断价值；细菌数在103～105/ml者不能排除感染，考虑是否因应用抗生素、清洗消毒剂混入、尿过频、细菌生长缓慢等因素所致，必要时复查。

不论中段尿，还是导尿，都不可避免前尿道细菌的污染。因此，做细菌培养而不加含菌量计数，结果很不可靠。但在常规消毒下做膀胱穿刺取尿作定性却很可靠，只要培养出细菌，不论细菌数多少，均认为是感染，不会出现假阳性。尿细菌定量培养结果很可靠，但遇到下列情况时需做膀胱穿刺尿培养：没有条件做尿含菌量计数的单位，在诊断上有困难时；高度怀疑有尿路感染而尿含菌量却低；反复尿定量细菌培养结果均可疑者；要进一步确定是否有混合感染存在；可疑的厌氧菌所致者。以上情况均考虑做膀胱穿刺尿培养。

方法如下：鼓励患者饮水，使膀胱充盈至耻骨联合以上，扪及膀胱后即可穿刺。先剃毛、消毒，用9号10cm长的针头连接注射器，在耻骨联合上方正中线穿入皮肤，然后猛力穿入膀胱，将尿液收集于无菌试管送检。拔针后用无菌纱布覆盖。本法是避免污染的最好方法。

缺点是患者有一定的痛苦。

急性泌尿系感染多为单种细菌，大肠杆菌占60%～80%，余为金黄色葡萄球菌、变形杆菌、粪肠球菌；慢性感染常混合其他细菌；绿脓杆菌多在手术或插管后引起感染。

7. 简述细菌检测的方法及优缺点

简述细菌检测的方法及优缺点：
可以直接用显微镜观察其运动情况。另外，鞭毛是细菌的运动器官，因此还可以通过检测细菌鞭毛的存在来间接判断细菌是否具有动力。记忆中的方法有这些：

1.使用显微镜
可以用普通的光学显微镜，通过一些特殊的方法观察菌液中细菌的活动情况。有条件的话还可以使用一些比较高端的显微镜，比如相差显微镜等。
2.使用半固体培养基进行培养
有鞭毛的细菌可沿穿刺线扩散生长，穿刺线周围会变模糊；无鞭毛的细菌只能沿穿刺线生长，周围澄清透明。
3.鞭毛染色
使用特殊染料染色，以方便在显微镜下观察。
4.免疫学方法
通过抗原抗体反应，检测细菌鞭毛的存在。