⑴ 胶体金法怎么用
胶体金与标记蛋白简介
在不同还原剂的作用下，由氯金酸（HAuCL4）可以制备出金颗粒直径在0.8-500nm的胶体金。制备好的胶体金保存时间较长，可在4℃保存6个月以上，或在室温下可保存1-2个月。
胶体金在做为标记探针时，不同用途选用的胶体金的直径范围也不同，用于免疫快速检测的胶体金颗粒直径范围一般在3-40nm间。
胶体金粒子表面为一层AuC12—，粒子表面带有负电荷金颗粒表面包被一层生物大分子（如蛋白）可以稳定和保护金颗粒，维持胶体的稳定，可防止外来电解质的影响使粒子相互凝聚。
胶体金粒子对蛋白的吸附作用取决于溶液的pH值，这是因为蛋白中氨基酸的净电荷取决于溶液的pH值，在pH=pI时蛋白溶液呈中性。在pH=pI时蛋白溶解度最小，水化程度最小，更容易吸附到疏水的金粒子表面。但在实际的胶体金探针制备中，一般胶体金调整为pH=pI+0.5，这样更有利于结合更稳定。
胶体金探针所用的蛋白通过三种机制于吸附于金颗粒的表面：一、金粒子所带负电荷与蛋白部分碱性氨基酸（如赖氨酸，精氨酸，pH均大于10）所带阳性电荷的最初的相互吸引；二、蛋白通过某些疏水性氨基酸残基（包括色氨酸）与金粒子表面之间的疏水吸附作用；三、蛋白中的半胱氨酸或甲硫氨酸的硫基与金粒子间的电子对的共用以共价键结合。
用于制备胶体金探针的蛋白需要进行前处理后才能与金颗粒更好的结合。未经处理的蛋白质一般来说均含有较高浓度的盐分，而高浓度的盐分往往干扰蛋白与胶体金的吸附结合，或导致胶体金粒子的凝聚，所以首先要去除蛋白质溶液中的盐分。冻干蛋白或高浓度蛋白溶液中蛋白分子常凝聚为多聚大分子，可同时与多个胶体金粒子结合，影响探针的灵敏度，分散蛋白分子为单体也是蛋白前处理的重要一项。处理标记的使其蛋白具有适当的分子量，如果蛋白分子量过小（30kD），形成的蛋白复合体往往是不稳定。把分子量过小的蛋白与其它蛋白（如BSA，牛血清蛋白等）结合后，能制备出稳定性更佳的探针。分子量过大时，影响探针的灵敏度，在已知蛋白的结构与活性中心的前提下，去除对活性无影响的结构部分可提高标记的灵敏度。
二、免疫胶体金产品原理及应用
胶体金探针大多用单克隆抗体标记，应用免疫层析法制成快速诊断产品，具有较高的特异性，而且相对稳定性很高。检测一般在5-10min就可以读出结果，相比其它方法(如ELISA需1-2h，PCR需要时间更长)大大的缩短了检测时间。检测样(可以是组织液、血清、尿液、粪便等)只需做非常简单的处理或不做前处理即可进行检测。结果以颜色的变化读取，不需要特别仪器设备。
免疫胶体金法快速检测试纸利用层析原理、双抗体夹心法或免疫竞争法或间接法，应用被检测物质的特异性和能与其发生特异反应的抗原或抗体，并以金颗粒为显色剂达到快速检测目的。
使用快速检测产品时，在卡的加样孔加入待测样，利用层析原理不断的向另一端层析，随着层析的进行，样本中的待测成分固定于测试线（T线）并以颜色变化显示，并以对照线（即控制线，C线）确保检测的有效性。
⑵ 胶体金试纸条的测试原理是什么
胶体金快速检测卡是采用胶体金免疫层析技术研制而成的，此技术是90年代初在免疫渗透技术的基础上建立的一种快捷简单的免疫学检测技术，市场上一般用到的有双抗体夹心法、双抗原夹心法、小分子竞争法等等。 胶体金是氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，金离子还原后聚合成的一定大...小的金颗粒，它由一个基础的晶核（11个金原子形成的二十面体）和包围在外的双离子层构成（内层为负离子层AuCl2－，外层是带正电荷的H＋）。由于静电作用，金颗粒之间相互排斥而悬浮成为一种稳定的胶体状态，形成带负电的疏水胶溶液，故称胶体金。 。质量差的溶液烧制后，液面有漂浮物，大小不一，形状各异。胶体金颗粒大小，决定了我们用肉眼观察到的胶体金溶液颜色，由红到紫色。 胶体金一般在弱碱环境下带负电荷，会与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，一般称这种结合叫静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。除了与蛋白质结合以外，它还可以与许多其它生物大分子结合，如SPA、PHA、ConA等。根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，从而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。 胶体金标记技术，实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。用于胶体金标记的蛋白必须要经过前处理，其目的在于 1、去除高浓度的盐分，高浓度的盐分往往干扰蛋白与胶体金的吸附结合，或导致胶体金粒子的凝聚，这一步往往采用低浓度缓冲液来进行。 2、使蛋白分子尽量分散为单体，冻干蛋白或高浓度蛋白溶液中蛋白分子往往凝聚为多聚体大分子，可同时与多个胶体金粒子结合，影响标记的灵敏度和定量分析。 3、使蛋白具有适当的分子量。蛋白分子量过小（30 kD），形成的蛋白复合体往往是不稳定，可短时间内失活。而分子量过大时，被认为影响探针的灵敏度，特别是已知蛋白的结构与活性中心的情况下，去除对活性影响的结构部分是提高标记灵敏度，延长探针寿命（防止凝集）的有效办法。把分子量过小的蛋白与其它蛋白（如牛血清蛋白等）结合后，能制备出稳定性更强的探针。 当蛋白前处理完成后，接着要确定胶体金与蛋白结合的最佳pH值。对于理化性质不确定的蛋白这一步尤为重要。过量的蛋白与不同pH值的胶体金结合后，只有某一特定pH值能够形成结合最稳定的探针。在高浓度电解质（如NaCl）作用下不会凝聚。不同蛋白的适宜pH范围的宽窄大不相同。一般选择最小适宜pH值为最佳pH值。但有些探针的实际情况并不完全如此，最稳定的探针并不完全代表活性最好，这要靠实验验证。 在确定最佳pH值后，最后要确定最小蛋白量，即能够形成稳定探针的蛋白的最小量。如果在制备探针时加入太多的蛋白，不仅造成浪费，而且更为严重的是容易造成探针凝聚，并严重影响标记活性。因为探针溶液中的游离蛋白容易抢先与标记位点结合，起到“封闭”（Blocking）作用，而胶体金探针标记不上。在标记位点希少、被标记物含量较少的情况下要特别注意。 胶体金具有很高的动力学稳定性，在稳定因素不受破坏时自身凝聚极慢，可放置数年不发生凝聚。影响稳定的因素主要有电解质、溶胶浓度、温度、非电解质等。金溶胶必须有少量电解质作稳定剂，但浓度不宜过高。高浓度亲水性非电解质能剥去胶粒外面的水化膜使其凝聚。少量的高分子物质促使溶胶凝聚，但一定量的高分子物质反而可增加溶胶稳定性，如蛋白质、葡萄糖、PEG20000等的加入有良好的稳定效果。. 当金溶胶吸附蛋白质后，溶胶的稳定性随溶液pH而变化，而这种变化又取决于吸附蛋白质的等电点，如ConA，过氧化物酶等，当pH较低时保持稳定，提高pH则显得不稳定，接近等电点或略高时又变得稳定了。标记后的胶体金溶液可用0.2～0.5mg/ml PEG20000 作为稳定剂。在4～10℃贮存数月有效，不宜冰冻。贮存中可能会发生程度不同的凝聚，可离心除去。 当今国内有很多胶体金试纸条生产厂商，江浙这一带尤为突出，推荐厂家：苏州快捷康生物技术有限公司。
⑶ 胶体金法检测显示的是黑色的还是白色的
胶体金法检测显示的是黑色的还是白色的？答：黑色液体就是毛发粉末加上特制药水。 圆筒状毛发试纸板 这又是一种试纸板。
⑷ 快速检测所用的胶体金检测卡在室温下可重复使用对吗
不可以。
胶体金快速检测卡检测基础是基于抗原抗体的特异性结合反应。胶体金是由氯金酸在还原剂（如白磷，柠檬酸三钠）的作用下，聚合成特定大小的金颗粒，并由静电的作用成为一种稳定的胶体状态。所以使用了一次之后已经作废，不能在室温下重复使用。
胶体金检测卡的优势，胶体金快速检测卡使用方便，不需要仪器设备，对操作人员要求低，适合现场快速检测或大批量样品的初步快速筛查，保质期12个月，可长期保存。胶体金检测卡检测步骤，取出检测卡平放于桌面上，用附带滴管吸取样品滴样品孔2滴，3-5分钟观察显色区判定结果。
⑸ 如何选择胶体金试纸制作仪器，耗材，原料
一． 制作仪器 用途：将C、T线抗体喷点到NC膜上，形成测试线条。同时将胶体金喷点到玻璃纤维垫上。 喷点仪器现在市面上使用最多的是BIODOT仪器，产地为美国BIODOT公司，国内代理商为基因有限公司。 该仪器又分为三种类型。 1． 喷膜仪器 目前型号为XYZ3050，原来老型号为XYZ3000。称XYZ，是来源于它可以全数字控制三维运动喷点。 XYZ3000在这个行业的很多单位里都是能看到的。之所以称为喷膜，就是因为可以使用BJQ3000这款喷头，以不接触膜（在膜上方）的方式将溶液喷到膜上。实际上整个线是由大量的均匀点组成的，例如1mm的线喷点溶液量是1ul，而这1ul是由10nl/个的点组成，即1mm线是由100点组成。即单位长度内喷点的抗体量是一定的，这在实际应用中，做定量产品是必须的，而用在做其他定性产品也可以很好的控制批间差。也可以用来点生物芯片和传感器。 AJQ3000是一个喷金头，主要是用来将胶体金溶液喷到玻璃纤维的垫子上。由于胶体金溶液很黏稠，所以要使用外部动力促使其喷下，一般用氮气瓶和空气压缩机。 解答一些反馈的问题。BJQ3000的电池阀容易堵的问题，这个阀为了控制精确度将孔径做得非常小，所以绝对是不能够用来喷金溶液，同时喷点的C、T线抗体要求喷点前使用0.45um滤器过滤或者离心1万转/10分钟，以防止大颗粒堵塞管道。 目前反馈堵阀问题的一些单位我自己去看过，基本上都是没处理造成的大颗粒堵阀，少数地方是因为环境尘埃含量太大，使管道堵了。有些人使用BJQ3000喷金溶液，刚开始是没问题的，后期就开始出现喷点断点等不良现象，因为已经被金颗粒堵住了，这个在战友“免疫学小弟”那家工厂就是这样。 2． 划膜仪器 型号有ZX1000，这个就比上面的仪器少一个数字控制运动轴了，是接触膜，用一个划头（型号：FLONTLINE1000）利用膜的毛细作用将抗体划到膜上的。喷金与上同。 其实这个机器也可以配BJQ3000喷头来定量喷点。很多人不知道。价格方面比上面那个便宜一些。 3． 卷状仪器 就是连续化大规模生产仪器了，生产速度一般1卷50m长的膜，30分钟能喷完。这个效率太高，以致很少厂家能用得上，再加上工艺方面的原因，在国内这个机器台数是个位数。 非BIODOT喷点仪器 有些地方有使用非BIODOT的国产喷点仪器，目前我看过一些都不是很好用，唯独给我印象不错的是一个滚轴式的传送喷点机器。它的特点是用滚轮传送进料，划线喷点。效率非常高，估计是现在所有平板喷点（包扩BIODOT和其他）仪器的5倍以上，废品率也不高，较进口价格低（制造人是我一个好朋友，告诉我的是成本价），很是实用。 切条机 用途：将做好的试纸长条分切成可以使用的单人份短条，一般切成宽度3-4mm/条。 1． KINIMATIC 毫无疑问这个品牌的切刀是这个行业里面的NO.1。目前最长时间的我看过用了5年都没出问题。不过现在这个牌子在国内没有代理商，也没有办法保修。 2． BIODOT CM4000 这个太多了，很多单位都有。现在有些生产公司已经开始使用国产的切刀了，毕竟经济一些。质量方面肯定是比进口差，但对公司而言，短期投入越少越好了。 3． 国产（福建产） 国内切刀有好几个产地。但通过比较后发现，福建这个工厂生产的还是比较不错。无论外观还是做工，使用起来也方便。这个产品的模仿原型是BIODOT的CM4000。 4． 滚刀 滚刀由于本身设计上还存在着许多的不足，大多数都是在短期尝试后被放弃。再说在滚刀上投入的精力太大并不划算，废品率总是居高不下。 贴膜机 用途：将NC膜、玻璃纤维、PVC板、滤纸等各部件粘合到一起。 这个只有BIODOT一家有。实用性一般。用手贴贴掉好了，没必要搞个累赘的机器。 读条机 用途：读出反应条带的颜色，并且做对应的数据图像分析。 1．通用读条机 BIODOT TSR3000 其实我个人认为这个产品很值，因为在目前的胶体金研究中，出结果是最麻烦的，每次都是以符合率来做为标准，发的文章水平档次也不高。而这个仪器可以出一份很好的数据分析说明，包括实物照片、吸光曲线图、某点数值、吸收峰面积、同批多样品叠合对比。但好象现在买去的，利用率都不高，因为软件是英文的 ：）。缺点在于只能读可见光。 2. 专用读条机 相对上面的仪器，专用读条机往往是为某个产品专门设计的仪器，如早孕试纸的定量读条机，测心梗的临床用读条机、测荧光产品的读条机。 二． 耗材 NC膜 实验开始阶段最关键的问题就是膜的选择。 技术参数主要涉及的是膜爬速？s/4cm、对抗原抗体的包被能力。表面活性剂在膜制造的时候就加入膜内了，是主要影响因数之一，各品牌间差异较大。 现在膜一共有三个品牌，Whatman& S&S, Millipore, Sartorius. 另外还有MDI印度膜和国产膜。每个品牌下面又有各种不同的型号。所以在选择上对刚入行的新手来说，非常困难。 对于刚开始做研究的客户，millipore的M135将是一个最好的选择。这个膜性能表现中性条件，现在应用在多个产品上均性能优良，最适宜作为开始研究的平台。当然也可以尝试其他膜。 但一进入生产，情况就需要做一些调整，从性价比的角度来看M135价格过贵，会导致生产成本高，利润下降。此时就需要做一些调整，建立供应商筛选流程，和多供应商替换的办法。最理想的情况是三个供应商的产品都能适用于生产，性能不发生大的变化，这是现实可行的。 建议大家采用不处理膜的工艺方式，这样容易进行替换。经常被选择的是S&S的AE99、whatman的8um、millipore的M135、sartorius的CN140。 规格一般是采用25mm*50m和20mm*50m两种常用规格。 价格是一个很敏感的因数，小批量一两卷，就没有谈价的可能和意义。中型批量一般是在100卷，大批量在500-1000，批量越大价格当然也越便宜，毕竟这是一个工业耗品。
⑹ 胶体金判读仪具体是干什么用的仪器能检测哪些
胶体金检测技术就是利用胶体金作为跟踪标志
对食品中的抗原体进行标记
进而得出检测结果的一种免疫标记检测技术
具有检测方便
结果明确的特点
胶体金分析仪就是对胶体金试剂卡检测结果进行判读的仪器
可用于食品安全监管中的快速检测
在医学实验室用于对人体液样本中待测物浓度进行判读