bca蛋白检测试剂盒使用方法

❶ bca法测蛋白浓度为什么稀释蛋白质浓度

BCA法测定蛋白质浓度原理：

BCA与二价铜离子的硫酸铜等其他试剂组成的试剂混合一起即成为苹果绿，即 BCA 工作试剂。在碱性条件下，BCA 与蛋白质结合时，蛋白质将 Cu2+ 还原为 Cu+，工作试剂由原来的苹果绿色变为紫色复合物。562 nm 下其光吸收强度与蛋白质浓度成正比。

BCA 蛋白浓度测定试剂盒，Abbkine的蛋白质定量试剂盒(BCA法)提供一个简单，快捷，兼容去污剂的方法，准确定量总蛋白。

成分：

试剂 A，100 mL

试剂 B，2 mL

标准蛋白(BSA)1 mL×2，1 mg/mL

保存条件运输温度:室温(标准蛋白 4~8 ℃ 运输)

保存温度:室温(标准蛋白 -20 ℃ 保存)

有效日期:12 个月

使用方法：

方法一:96 孔板

1.配制 BCA 工作液:根据标准品和样品数量，按 50 体积试剂 A，1 体积试剂 B 配制适量 BCA 工作液。充分混匀。

2.将蛋白标准品按 0 μL，1 μL，2 μL，4 μL，6 μL，8 μL，10 μL 加入 96 孔板的蛋白标准品孔中。加灭菌双蒸水补足到 10 μL。取 10 μL 待测样品加入 96 孔板的待测样品孔中。每个测定要做 2~3 个平行。

3.向待测样品孔和蛋白标准品孔中各加入 200 μL BCA 工作液(即样品与工作液的体积比为 1:20)，混匀。

4.37 ℃ 温浴 30 min。冷却至室温。

5.酶标仪 562 nm 波长下测定吸光度。

6.制作标准曲线。从标准曲线中求出样品浓度。

❷ BCA蛋白浓度检测的实验试剂

Bicinchoninic acid (BCA )法是在世界上常用的蛋白浓度检验方法之一BCA法基础上改进而成。其原理与Lowery法蛋白定量相似，即在碱性环境下蛋白质与Cu 2+ 络合并将Cu 2+ 还原成Cu + 。两分子BCA与一个Cu + 螯合形成稳定的紫蓝色复合物，在562 nm处有高的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，据此可测定蛋白质浓度。
组成与储存：
组分名称 规格 保存
BCA Reagent 100ml 2-8℃
Cu Reagent 3.0ml 2-8℃
BSA标准液5 mg/ml 1ml -20ºC冻存
可进行500T微板(microplate)测定或50T2ml比色杯测定。

❸ BCA蛋白浓度检测的实验操作

绘制标准曲线：
取96孔酶标板，按下表加入试剂。
管号
1
2
3
4
5
6
7
8
标准蛋白溶液（μl）蒸馏水（μl）
BCA试剂（μl）
蛋白质浓度（mg/ml）
0
20
200
0
1
19
200
0.025
2
18
200
0.05
4
16
200
0.1
8
12
200
0.2
12
8
200
0.3
16
4
200
0.4
20
0
200
0.5
上述试剂加完后，准确吸取20μl样品溶液于酶标孔中，加入BCA试剂200μl，轻摇，于37℃保温30-60min，冷却至室温后，以空白为对照，在酶标仪上590nm处比色，以牛血清白蛋白含量为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。以标准曲线空白为对照，根据样品的吸光值从标准曲线上查出样品的蛋白质含量。

❹ 蛋白质浓度测定方法

蛋白质浓度测定方法：UV法，BCA法，考马斯亮蓝法等。

3、考马斯亮蓝法。

考马斯亮蓝 (Coomassie Brilliant Blue) 法测定蛋白质浓度，是利用蛋白质―染料结合的原理，定量测定微量蛋白浓度快速、灵敏的方法。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。目前，这一方法是也灵敏度最高的蛋白质测定法之一。

考马斯亮蓝G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰 (lmax) 的位置，由465nm变为595nm，溶液的颜色也由棕黑色变为蓝色。通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。研究发现，染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸（特别是精氨酸）和芳香族氨基酸残基相结合。