临床病原学常见的检测方法

‘壹’ 病原学检测方法灵敏度最低有哪些

X-pert、TB-DNA、AFB。病原学检测方法是用已知抗体，借助各种免疫学方法，检测标本中未知的病原体抗原，该方法的最低灵敏度有三种，分别为：X-pert、TB-DNA、AFB。

‘贰’ 疟疾应采用何种病原学诊断方法

一、疟疾检测方法

疟疾检查一般需从受检者耳垂或指尖采血作薄血膜和厚血膜涂片，以姬氏染液或瑞氏染液染色后镜检，应在发作开始（恶性疟）或发瞎首作后数小时至10小时（间日疟、三日疟）采血。磨贺数恶性疟初发时只能查到环状体，而配子体在周围血液中出现时间则在查到环状体之后10天左右。除重症病人外，一般在周围血液中难查到恶性疟的滋养体和裂殖体。薄血膜涂片经染色后原虫形态结构完整，清晰，可辩认原虫的种类和各发育阶段的形态特征，适用于临床诊断，但虫数较少容易漏检。厚血膜涂片在处理过程中原虫皱缩，变形，而且红细胞已经溶解，鉴别有困难，但原虫较集中，易被发现，熟识其形态特征后拍运可提高检出率，常用于流行病学调查。

疟疾病原学检查：

从患者周围血液中检出疟原虫，是疟疾确诊的依据。应用间接免疫荧光法检测特异性疟原虫抗体，已在流行病学调查中使用。近年来发展的新方法，如用单克隆抗体检测病人血中的疟原虫抗原，DNA探针检测疟原虫的核酸，或PCR法扩增少量疟原虫的DNA，以提高检出率等均取得一定的成绩。

‘叁’ 2021天津医疗卫生检验学：梅毒检测方法

梅毒是由苍白(梅毒)螺旋体引起的慢性、系统性性传播疾病。主要通过性途径传播，临床上可表现为 一期梅毒 、 二期梅毒 、 三期梅毒 、 潜伏梅毒 和先天梅毒(胎传梅毒)等。梅毒在考试中的常考难点为梅毒的检测方法，目前，在医学上梅毒常用的检测方法主要分为两类，一类是病原学检测;另一类是血清学检测。

一、病原学检测法：以直接观察病原体为目的的检测，目前在临床上应用的较少，能够开展的医院也不多。病原学检测包括：①暗视野显微镜检查。②镀银染色检查。

二、血清学检测则又包括两大类：

(一)以非梅毒螺旋体抗原的血清试验：

①VDRL(性病研究实验室试验)。

②USR(不加热血清反应素试验)。

③RPR(加速血浆反应素环状卡片试验)。

④TRUST(甲苯胺红不加热血清试验)。

目前RPR和TRUST是我国主要采取的两种非梅毒螺旋体抗原血清检测方法。

(二)以梅毒螺旋体抗原的血清试验：

①FTA-ABS(密螺旋体荧光抗体吸收)

②TPPA/TPHA(梅毒密螺旋体凝集试验)

③TP-ELISA(酶联免疫吸附试验)

④CIA(发光法)

⑤GICA(胶体金免疫层析法)

⑥WB(蛋白印迹试验)

⑦PCR聚合酶链反应

⑧梅毒螺旋体IgM抗体检测

通过检查血液中的抗体来判断是否感染的检测，是目前在临床上广泛被采用的检验梅毒的手段。

(三)目前临床上检测梅毒较常用的检测方法有及其优缺点：

1.化学发光法ELISA：其敏感度及特异性较高，在操作中可以同一时间进行多份抗体检验，该方法较简单，常用来进行大批量的筛查。

缺点：结果阳性不能区分既往感染和现症感染。

2.TRUSTRPR：该方法操作简便、迅速，适用于大量标本检测。用于临床初筛试验、梅毒的病程和疗效观察。

缺点：TRUST在硬下疳出现后4周才能检出，对一期梅毒检出率较低，适合诊断二期梅毒。还易出现生物学假阳性反应;肉眼观察结果，判断主观。

3.TPPA：敏感性和特异性均较高，能够作为非梅毒螺旋体抗原血清学试验初筛阳性标本的确证试验。

缺点：手工操作，步骤繁琐，对操作人员要求较高。结果依赖肉眼判断且不宜保存，不适用于大批量筛查实验。

以上通过将梅毒检测方法分为两个方向，总结了在临床检测中的常用方法，考生可根据具体问题具体分析。

‘肆’ 感染性疾病病原检查方法有哪些

感染（infection）是病原体（pathogen）和人体在一定条件下相互作用的病理过程，感染的病原体包括各种细菌、病毒、寄生虫、真菌、支原体、衣原体、螺旋体等。病原体的来源可分为外源性和内源性感染两种类型。外源性感染是由于外界的病原体侵入人体，如志贺菌、结核分枝杆菌、人免疫缺陷病毒（HIV）等引起的感染。内源性感染是人体内经常寄生的微生物，如大肠埃希菌、肠球菌、某些真菌等在一定条件下引起的感染。感染后是否引起感染性疾病（infection diseases）与病原体的数量、毒力和人体的抵抗力有关，并决定感染的发生、发展和结局。病原体感染后机体可以出现不感染、隐性感染（covert infection）、显性感染（overt infection）、持续性感染（persistent infection）或病原体携带状态（carrier state）几种类型。感染性疾病是由于感染的病原体毒力强、数量多，超过了机体的抵御能力，定植在机体一定部位增殖、扩散或蔓延、释放毒素，引起机体免疫病理反应，导致组织、器官等损伤，生理功能紊乱，并出现一系列的临床症状和体征。感染性疾病的检查主要包括病原体的检查、感染的血清学试验等，并由此确定感染性疾病的发生和性质；通过病原体的药物敏感试验、耐药株监测和医院感染的监测报告，为临床感染性疾病的最佳治疗药物选择，采取最有效的预防措施，防止感染的传播或流行提供及时、有效的实验数据。
随着现代社会与临床医学的发展，目前感染性疾病的流行病学特点发生了明显变化，主要体现在以下几个方面：①由强毒性病原体引起感染的疾病，如鼠疫、白喉、伤寒、天花、小儿麻痹逐渐减少或绝迹，而条件致病的病原体引起的感染、医院感染逐渐增多。②由新的病原体、原有的病原体变异引起的新感染性疾病，如艾滋病（AIDS）、疯牛病、O157出血性肠炎、严重急性呼吸综合征（severe acute respiratory syndrome, SARS）等陆续出现。③以前的感染性疾病，如淋病、梅毒、结核病等又重新流行。④多重耐药株，如耐万古霉素的肠球菌（VRE）、耐苯唑西林的葡萄球菌（MRS）、耐异烟肼的结核杆菌等，导致抗感染治疗无效或低效。因此，临床感染性疾病的检查应密切结合上述新的变化趋势进行。
细菌感染所致的感染性疾病占首位；病毒性感染在人群中的发生率最高，但不一定致病；真菌感染的发病率近年来显着上升；寄生虫，如隐孢子虫、卡氏肺孢子虫、滴虫等感染开始受到普遍关注。病原体的检查是临床确诊感染性疾病的主要手段，根据需要鉴定到一定水平即可。例如，作为临床病原学诊断，细菌感染只需鉴定到种，必要时才进一步鉴定；若进行流行病学调查，细菌鉴定应达到血清型或基因型。临床病原体检查必须通过采集标本，经过各种试验后才能明确诊断。标本采集质量的好坏直接影响诊断结果，早期采集、无菌采集、适当与适量采集是确保查明病原体的前提。临床病原体检查的方法有多种，包括涂片检查、分离培养、血清学鉴定和分子生物学诊断（molecular biological diagnosis）等，可根据临床需要和标本类型进行选择。临床标本分离培养的阳性结果最具确诊意义，但阴性结果并不能完全除外病原体感染的可能。病原体抗原成分检测可早期、快速诊断感染性疾病，阳性结果表明感染病原体的存在。分子生物学诊断为病原体感染的早期、快速、敏感、特异诊断成为可能，但应排除假阳性或假阴性结果。

‘伍’ 疟疾应采用何种病原学诊断方法

疟疾（拉丁语：Malaria，俗称：打摆子、冷热病）是一种会感染人类及其他动物的全球性寄生虫传染病，主要流行地区包括非洲中部、南亚、东南亚及拉丁美洲。 其病原疟原虫隶属囊泡藻界，借由蚊子散播。感染疟疾后往往会引起发烧、畏寒、疲倦、呕吐和头痛，在严重的病例中还会引起黄疸、癫痫发作、昏迷或死亡。

检查
1.血象

疟疾
红细胞和血红蛋白在多次发作后下降，恶性疟尤重；白细胞总数初发时可稍增，后正常或稍低，白细胞分类单核细胞常增多，并见吞噬有疟色素颗粒。

2.疟原虫检查

血液涂片（薄片或厚片）染色查疟原虫。并可鉴别疟原虫种类。骨髓涂片染色查疟原虫，阳性率较血片高。

3.血清学检查

抗疟抗体一般在感染后2～3周出现，4～8周达高峰，以后逐渐下降。现已应用的有间接免疫荧光、间接血凝与酶联免疫吸附试验等，阳性率可达90%。一般用于流行病学检查。

诊断
1.流行病学

有在疟疾流行区居住或旅行史，近年有疟疾发作史或近期曾接受过输血的发热患者都应被怀疑。

疟疾
2.临床表现

典型的周期性寒战、发热、出汗可初步诊断。不规律发热，而伴脾、肝大及贫血，应想到疟疾的可能。凶险型多发生在流行期中，多急起，高热寒战，昏迷与抽搐等。流行区婴幼儿突然高热、寒战、昏迷，也应考虑本病。

3.实验室检查

主要是查找疟原虫，通常找到即可确诊。血片找疟原虫应当在寒战发作时采血，此时原虫数多、易找。需要时应多次重复查找。并一定要做厚血片寻找。如临床高度怀疑而血片多次阴性可做骨髓穿刺涂片查找疟原虫。

4.分子生物学技术诊断法

（1）聚合酶链反应（PCR）检测检测的灵敏性和特异性均较高。PCR检测方法已在原来的基础上发展成多种方法，如巢式PCR、反转录酶PCR、PCR-ELISA等。除可以直接检测血样中的疟原虫外，还可以检测滤纸干血滴上的疟原虫。已从检测恶性疟原虫发展到检测间日疟原虫。

（2）DNA探针检测DNA探针检测具有良好的特异性和稳定性。

5.治疗性诊断

临床表现很象疟疾，但经多次检查未找到疟原虫。可试用杀灭红内期原虫的药物（如氯喹），治疗48小时发热控制者，可能为疟疾。但注意耐氯喹虫株。

‘陆’ 实验室诊断方法有哪些如何确诊

血清学检测方法：抗体检测可采用竞争酶联免疫吸附试验（ELISA）和间接酶联免疫吸附试验（ELISA）。 病原学检测方法：病毒检测可采用琼脂凝胶免疫扩散、抗原捕获酶联免疫吸附试验（ELISA）、实时荧光反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）、普通反转录聚合酶链式反应（RT-PCR），对PCR产物进行核酸序列测定可进行病毒分型。 疑似患病动物的病料需经国家外来动物疫病研究中心进行确诊。（地址：山东省青岛市南京路369号，联系电话0532 85621552）

‘柒’ 病原微生物中细菌常见检测方法有哪些

1、快速测试片技术法

快速测试片是指以纸片、纸膜、胶片等作为培养基载体，将特定的培养基和显色物质附着在上面，通过微生物在上面的生长、显色来测定食品中微生物的方法。

细菌总数检测纸片的研制始于 20 世纪 80 年代，其主要优点是简便、实用、经济、操作性强。近年来以滤纸和美国某公司的 Petrifilm 为载体的测试片已开始被广泛应用。

2、生物电化学方法

生物电化学方法是指通过电极测定微生物产生或消耗的电荷，从而提供分析信号的方法。微生物在滋生代谢过程中，培养基的电化学性质如电流、电位、电阻和电导等会发生变化，所以可以通过检测分析这些电化学参量的变化来实现对微生物的快速测定。

常见的有：阻抗分析法、电位分析法、电流分析法等。生物电化学方法具有测量快速、直观、操作简单、测量设备成本低和信号的可控性等特点。

3、微菌落技术

微菌落是指细菌生长繁殖早期在固相载体上所形成的只能借助于显微镜观察的微小菌落。微菌落技术具有快速、经济、实用的特点，其研究始于 20 世纪50年代，定量测定技术从 20 世纪 70 年代开始，国外已有报道将该法应用于水、食品中细菌总数的快速检测。

4、气相色谱法

气相色谱应用到微生物的检测中，主要是依据不同微生物的化学组成或其产生的代谢产物各异，利用上述色谱检测可直接分析各种体液中的细菌代谢产物、细胞中的脂肪酸、蛋白质、氨基酸、多肽、多糖等，以确定病原微生物的特异性化学标志成分，协助病原诊断和检测。

5、高效液相色谱法

利用高效液相色谱检测可分析各种体液中的细菌代谢产物、病原微生物等，以确定病原微生物的特异性化学标志成分，协助病原诊断和检测。

‘捌’ 血吸虫病的病原学检查方法有哪些

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(
1
）粪检：从粪便中检出血吸虫虫卵或孵出毛蜘是确定诊断和考核疗效的最可靠的指标。粪检虫卵方法简便易行，但在轻度感染者、晚期患者和经治疗未愈者粪便中虫卵数很少，检出率不高，故粪检虫卵阴性不能排除血吸虫感染。粪检虫卵（毛勤）有定性检查法和定量检查法。①
定性检查：A
．直接涂片镜检法：检出率低，只在感染严重的早期患者可检出虫卵；B
．集卵镜检法：有自然沉淀法、汞醛碘沉淀法和尼龙袋集卵法等。自然沉淀法：较直接涂片镜检法检出率稍高。尼龙袋集卵法：将粪便匀浆滤去粗渣后，置双层尼龙袋（内层120
目，外层2
印目）内淘洗或在水龙头下冲洗，然后收集2
印目尼龙袋内的粪渣镜检。本法较沉淀法简便易行，检出率高，便于流动性普查；C
．孵化法：是根据血吸虫卵内的毛蜘在适宜条件下能很快孵出，并游动于水表面下的特性。方法是取受检粪便约309
，先经沉淀法浓集处理，将处理后的沉渣倒人500
血的三角烧瓶中，加清水至瓶口处，置于20
一30
℃
下进行孵化，在4
、12
、24
小时时，用肉眼或放大镜各观察一次结果。如见水面下有白色点状物作直线来往游动，即为毛坳阳性。采用塑料杯顶管改良法，可使虫卵散失少，毛坳集中便于观察，检出率较三角烧瓶法为高。为提高粪检虫卵的阳性率，最好选用集卵镜检和粪渣孵化两种方法同时进行检查；送检粪量及送检次数与检出率密切相关，送检的次数越多、粪量越大，检出率越高。在血吸虫病流行地区，提倡“一送三检”（留一次全量粪便，分三次检查）或“三送三检”（每次检309
粪便，送检三次），均可明显提高虫卵检出率。②
定量检查：患者每日从粪便中排出的虫卵数与其体内寄生的雌虫数相关，故虫卵的定量在一般情况下可反映出宿主的感染度。粪便中的虫卵定量可采用加藤（Kato
一kats
）集卵透明法，以50mg
粪便中的虫卵数为计算单位；少于100
为轻度感染，100
一中阅为中度感染，多于叨O
为重度感染。(
2
）直肠粘膜活组织检查：用乙状结肠镜或直肠镜观察直肠粘膜的病变；急性期以肠粘膜充血、水肿为主，慢性期时肠粘膜苍白、肥厚及瘫痕形成。各期均可见典型的小斑点或小结节。将夹取疑有虫卵结节的米粒大小粘膜组织，压于两载玻片之间镜检。本法检出血吸虫卵的阳性率很高。对未经治疗的病人，检出的虫卵不论死、活卵均有确定诊断价值；对经特效药物治疗过的病人，则只有检出活卵或近期变性卵才有诊断、治疗意义。活检时要细心操作，以防发生肠大出血或肠穿孔，尤其对晚期血吸虫病患者更应小心操作。
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‘玖’ 病毒鉴定常用方法有哪些

寨卡病毒病的检测方法包括病毒核酸检测、IgM抗体检测、中和抗体检测和病毒分离等。寨卡病毒与黄病毒属其他病毒具有较强的血清学交叉反应，目前主要采用病毒核酸检测。
开展蚊媒寨卡病毒检测时，对捕获的伊蚊成蚊或幼虫进行病毒核酸检测。
开展寨卡病毒实验室检测时，应同时考虑登革病毒和基孔肯雅病毒感染可能。登革病毒和基孔肯雅病毒实验室检测应按照相应的技术指南开展。
（一）临床标本检测。
1．病原学检测
病原学检测主要适用于急性期血液标本，一般认为发病7天内检测阳性率高。
（1）核酸检测：采用荧光定量RT-PCR方法，是目前早期诊断寨卡病毒病的主要检测手段。
（2）病毒分离：将标本接种于蚊源细胞（C6/36）或哺乳动物细胞（BHK21、Vero）进行分离培养，出现病变以后，用检测核酸的方法鉴定病毒。也可使用乳鼠脑内接种进行病毒分离。
2．血清学检测
（1）血清特异性IgM抗体：发病3天后可检出病毒特异性IgM抗体，但发病7天后检出率高。可采用ELISA、免疫荧光等方法检测。IgM抗体阳性，提示患者可能新近感染寨卡病毒，但寨卡病毒IgM抗体与登革病毒、黄热病毒和西尼罗病毒等黄病毒有较强的交叉反应，易于产生假阳性。
（2）中和抗体：采用空斑减少中和试验方法检测。患者恢复期血清中和抗体阳转或滴度较急性期呈4倍及以上升高，且排除登革、乙脑等其他常见黄病毒感染，可以确诊。
（二）媒介标本检测。
1．标本处理
将分类后的伊蚊成蚊或幼虫，按照采集地点，每10～20只为一份进行研磨处理。
2．病毒核酸检测
用RT-PCR的方法进行寨卡病毒核酸检测
3．病毒分离
病毒核酸阳性的标本进行病毒分离。

‘拾’ 细菌感染的病原学诊断方法有哪些（临床微生物学与检验范畴）

微生物感染的病原学实验室诊断方法大致包括：①光学显微镜对标本或组织中的病原体的形态学检改毁查；②病原体的分离培养和鉴定；③用免疫学技术对病原体抗原或相应抗体的检测；④用分子生物学方庆友法对病原体核差备特异性基因的检测。