㈠ HIV抗体检测怎么做
HIV抗体检测怎么做?HIV抗体检验一般有两种方法,一种是酶联法,第二种是快速法,测定结果仅凭特制的检测试纸在短时间内即可获得。
如何检测HIV
1、酶联法 :即“酶联免疫法”,简称ELISA。它的中心就是让抗体与酶复合物结合,然后通过显色来检测。步骤很简单:ELISA用血清来检测,首先血液要经过至少半个小时的凝集,然后取血清。将酶复合物用稀释液稀释后,加血清及阴性、阳性对照,还有质控品。经过一个小时的孵育,然后洗板,加底物,半个小时避光反应后加终止液即完成反应部分,然后读数。由数值来判断结果的阴性或阳性。
严格的讲,如果第一次检测为阳性的话,无论是哪个实验室,必须按照CDC的HIV操作规程来进行第二次检测,第二次的方法必须与第一次的不同,如还是阳性,将送艾滋病确认实验室确认。
2、快速法 :即“金标法”,又叫“胶体金法”,金标法是国际上较为先进的灵敏,特异,快速,简便,准确率高的体外诊断方法。测定结果仅凭特制的检测试纸在短时间内即可获得。金标法(艾滋病检测试纸),取血后滴在试纸上,用15分钟的时间观察该试纸有无颜色变化。
艾滋病快速检测法可以在家里自己检测,操作简单方便,不需要特殊的仪器,在艾滋病试纸上先滴两滴血,再滴一滴稀释液,然后等待15分钟读取结果。结果判读也很简单,如果试纸上出现一条红色的直线,说明是阴性,如果是两条红线,就是阳性。如果检测出现阳性,按照HIV检测流程,需要进行复测。
使用快速法(艾滋病试纸)进行艾滋病自我检测应该在专业人员指导下进行,以确保整个自测操作过程规范正确,结果准确可靠。
3、蛋白免疫印迹法(WB)
艾滋病确诊实验室常用的方法,主要用于确认试验,当初筛出现阳性时,需采用此方法进行确认实验。基本原理是HIV全病毒抗原经过SDS-PAGE电泳,将分子量大小不等的蛋白带分离开来,然后再把这些已经分离的不同蛋白带电转移到硝酸纤维素膜上。将此膜切割成条状,每一条硝酸纤维素膜上均含有经电泳分离过的HIV病毒抗原。将待检血清样品用稀释液稀释成1/100,再把它直接加到硝酸纤维素膜上,恒温震荡,使其充分接触反应。血清中若含有抗HIV抗体,就会与膜条上的抗原带相结合。加入抗人IgG酶结合物和底物后,即可使有反应的抗原抗体结合带呈现紫褐色,根据出现条带情况判定结果。
㈡ hiv检查什么项目
HIV检查项目是全血游物血清检测。HIV检耐磨指测方法主要有抗体检测,抗原检测,核酸检测,病毒分离,检测试纸检测。抗体检测可用酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫荧光试验(IFA)。
HIV检测是筛查有没有艾滋病毒感染的检测指标,如果有过高危的暴露史,比如不洁的性接触史、输血史,或者和艾滋病人昌配有明确的血液体液暴露的情况下,应该进行相关指标的筛查,另外在进行各种手术、输血之前需要进行病毒联检,其中包括艾滋病毒的筛查。
㈢ 艾滋病哪些方法能查出
我是这方面的专业人员,按照《全国艾滋病检测技术规范》(2004)
5.1.2 筛查方法
5.1.2.1 常用的筛查方法是酶联免疫试验(ELISA)
目前国内外主要使用第三代(双抗原夹心法)试剂,少数使用第二代试剂。血源筛查仍以第三代ELISA为主,国际上有些国家和地区已将线性免疫酶测定(第四代ELISA试剂)用于血源筛查。第四代ELISA试剂是最近发展起来的HIV抗原抗体联合测定试剂,可同时检测P24抗原和抗HIV-1/2抗体。与第三代抗HIV-1/2试剂相比,检出时间提前了4~9.1d。其优点在于能同时检测抗原抗体,降低血源筛查的残余危险度。
5.1.2.2 快速检测(RT)及其它检测
随着对HIV感染者和AIDS病人抗逆转录病毒治疗的进展,及对无症状HIV感染者提供自愿咨询检测(VCT)的迫切需求,简便、快速的HIV检测方法被广泛应用。常用的主要有以下几种:
(1)明胶颗粒凝集试验(PA):PA是HIV血清抗体检测的一种简便方法,是将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体,与待检样品作用,混匀后保温(一般为室温)。当待检样品含有HIV抗体时,经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原-抗体反应,根据明胶颗粒在孔中的凝集情况判读结果。PA试剂有两种,HIV-1和HIV-2抗原共同致敏的PA试剂(AFD HIV-1/2 PA),已经我国食品药品监督管理局(SFDA)注册批准;HIV-1、HIV-2抗原分别致敏的PA试剂(SERODIA-HIV-1/2)可初步区分HIV-1型和HIV-2型,目前我国尚未引进。
(2)斑点EIA或称斑点ELISA(dot-EIA):以硝酸纤维膜为载体,将HIV抗原滴在膜上成点状,即为固相抗原。加血清样品作用,以后步骤同ELISA。阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应时间在10 min以内,使用抗原量少。
(3)斑点免疫胶体金(或胶体硒)快速试验:与斑点EIA相似,也是以硝酸纤维膜为载体。区别在于不用酶标记抗体,而代之以红色的胶体金(或胶体硒)A蛋白,用渗滤法作为洗涤方法。试剂稳定,可室温长期保存。试验时不需任何设备,迅速、简便、特异性较好,敏感性约相当于中度敏感的ELISA,适用于应急检测、门诊急诊个体检测。目前已有在国内被SFDA批准注册的国外进口试剂和国内产品。一般可在1030min内判读结果。
(4)艾滋病唾液检测卡:在硝酸纤维膜上包被人工合成的HIVgp41/gp36蛋白抗原,可同时检测含在唾液中的HIV-1/HIV-2抗体,原理为酶免疫间接法。主要检测唾液中的HIV IgA与IgG抗体,敏感性特异性与ELISA相近,可避免静脉穿刺。但样品预处理时间长且售价较高。以唾液为样品测定HIV抗体的ELISA、免疫印迹法(WB)试剂已经美国FDA批准。
(5)其它快速筛查试验方法:家庭HIV检测(Home Access System)等。
5.1.2.3 尿液HIV抗体检测
1996年美国FDA首次批准HIV-1尿液ELISA试剂,我国也正在研制尿液HIV抗体检测试剂。主要适用于静脉注射毒品(IDUs)人群和其它高危人群的大面积流行病学调查、监测。筛查阳性者仍需采血做确认试验才能确定。
5.1.3 筛查试验
根据检测目的选用符合要求的筛查试剂对样品进行初筛和重复检测(复检)。
5.1.3.1 初筛试验:以第三代ELISA(双抗原夹心法)为例。
(1)实验准备:试验开始前将试剂和样品放置在室温(1823℃), 按实验室SOP做好试剂准备。
磷酸盐缓冲液:若液体内有结晶,应放置在37℃直至溶解,用蒸馏水1:25稀释浓缩液,4℃保存2周。
TMB底物液:使用前配制,TMB液和过氧化脲液等量混匀。
1M硫酸终止液:85 ml蒸馏水中加入5 ml浓硫酸。
备好试剂盒、待检样品和外部对照质控血清后,按试剂盒说明书以及质控和安全防护要求进行筛查检测。
(2)实验操作
①装好所需使用数目的孔条,每孔均加入100μl样品稀释液。设3个阴性对照孔,1个HIV-1阳性对照孔,若需要可再设1个HIV-2阳性对照孔。
②每孔加入50μl待检样品及对照(对照要后加),未用孔用样品稀释液加满以溶解结合物球,以免堵塞洗板机孔。可震摇15S,37±2℃孵育60±5min。
③置洗板机上洗涤6遍(用洗液将反应孔完全加满,静置3060S,共洗涤6遍,洗完后孔上方及底部不应残存液体,禁止在滤纸上拍干)。
④每孔加入100μl底物液,勿搅动,室温避光孵育30±2min。
⑤每孔加入100μl 1M硫酸终止反应,充分混匀。
⑥在2h内置于酶标仪读数,单波长450nm,或双波长450/630nm测OD值。
(3)实验结果
①阴性对照(NC),HIV-1阳性对照(PC1),HIV-2阳性对照(PC2)
NC 必须<0.25方可用,排除NC≥0.25的值,计算NC平均值。
NC界限范围:0.6倍NC均值<NC<1.4倍NC均值。
②符合以下条件的实验成立:
两个以上的NC可用。
PC1-NC均值 ≥ 0.4,PC2-NC均值 ≥ 0.4
③Cut off值 = 阴性对照均值 + 0.100
小于Cut off为阴性,大于或等于Cut off为阳性
(4)报告:对呈阴性反应的样品,可由实施检测的实验室出具HIV抗体阴性报告;对呈阳性反应的样品,须进行复检,不能出阳性报告。
5.1.3.2 复检试验:对初筛呈阳性反应的样品用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的筛查试剂重复检测。如两种试剂复测均呈阴性反应,则报告HIV抗体阴性;如均呈阳性反应,或一阴一阳,需送艾滋病确认实验室进行确认
5.1.4 初筛试验结果的报告
对HIV抗体筛查试验,呈阴性反应者可出具“HIV抗体阴性”报告(可用附表1);对初筛试验呈阳性反应者不能出阳性报告,可出具“HIV抗体待复查”报告(附表1)。
5.1.5 初筛试验呈阳性反应样品的转送
如需送上级实验室进行复测或确认,需要填写“HIV抗体复测送检单”(附表2),经1名检验人员和1名具有中级以上技术职称的人员审核签字。送当地艾滋病筛查中心实验室,再转送艾滋病确认实验室,或在本实验室复检后直接送确认实验室。
5.1.6 对筛查阴性和阳性者,均需做好检测后咨询。
5.2 HIV抗体确认试验
5.2.1 确认试验的试剂
必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂。
5.2.2 确认试验方法
包括免疫印迹试验(WB)、条带免疫试验(LIATEK HIVⅢ)、放射免疫沉淀试验(RIPA)及免疫荧光试验(IFA)。国内常用的确认试验方法是WB。
5.2.3 确认检测流程
有HIV-1/2混合型和单一的HIV-1或HIV-2型。先用HIV-1/2混合型试剂进行检测,如果呈阴性反应,则报告HIV抗体阴性;如果呈阳性反应,则报告HIV-1抗体阳性;如果不满足阳性标准,则判为HIV抗体检测结果不确定。如果出现HIV-2型的特异性指示条带,需用HIV-2型免疫印迹试剂再做HIV-2的抗体确认试验,呈阴性反应,报告HIV-2抗体阴性;呈阳性反应则报告HIV-2抗体血清学阳性,并将样品送国家参比实验室进行核酸序列分析
5.2.5 确认试验结果的判定
下面是我国使用WB确认HIV感染的判定标准和判定结果的基本原则。在实际工作中还应参照所用试剂盒说明书综合判定,遇疑难情况应报上级实验室解决。
5.2.5.1 HIV-1抗体阳性(+)
至少有2条env带(gp41和gp160/gp120)出现,或至少1条env带和p24带同时出现。
5.2.5.2 HIV-2抗体血清学阳性(+)
同时符合以下2条标准可判为HIV-2抗体血清学阳性:
(1)符合WHO阳性判定标准,即出现至少2条env带(gp36和gp140/ gp105)。
(2)符合试剂盒提供的阳性判定标准。
5.2.5.3 HIV抗体阴性(-)
无HIV抗体特异带出现。
5.2.5.4 HIV抗体不确定(±)
出现HIV抗体特异带,但不足以判定阳性。
注:①HIV-1抗体特异带包括:env带:gp160/gp120、gp41;gag带:p55、p24、p17(或p18);pol带:p66(或p65)、p51、p31。②HIV-2抗体特异条带包括:env带:gp140/gp105、gp36;gag带:p56、p26、p16;pol带:p68、p53、p34。(由于使用的毒株不同,HIV-2 env带也可为gp125/gp80、gp36)。
5.2.5 HIV抗体确认试验结果报告
确认试验由确认实验室根据检测结果出具“HIV抗体确认检测报告单”(附表3),报告HIV抗体阳性(+)、HIV抗体阴性(-)及HIV抗体不确定(±)。
5.2.5.1 符合HIV-1抗体阳性判断标准,报告“HIV-1抗体阳性(+)”,并按规定做好检测后咨询、保密和疫情报告工作。
5.2.5.2 符合HIV抗体阴性判断标准,报告“HIV抗体阴性(-)”。如果近期有高危行为,如性乱、注射毒品等,或有急性流感样症状等情况,为排除因“窗口期”而出现的假阴性结果,建议高危行为后3个月时再做抗体检测。也可进行HIV-1 P24抗原或HIV核酸检测,作为辅助诊断。
5.2.5.3 符合HIV抗体不确定判断标准,报告“HIV抗体不确定(±)”,在备注中应注明“3个月后复检”,同时进行以下处理:
(1) 随访复检:每3个月随访复检1次,连续2次,共6个月。如果检测时暴露时间已超过3个月,则在3个月后随访1次即可。将前后2份样品同时检测,仍呈不确定或阴性则报告HIV抗体阴性,如果在随访期间发生带型进展,符合HIV抗体阳性判定标准则报告HIV-1或HIV-2抗体阳性。
(2) 必要时可做HIV-1 P24抗原或HIV核酸测定,但检测结果只能作为辅助诊断依据,确认报告要依据血清学随访结果。
5.2.6 发出确认报告的同时要做好检测后咨询。
5.2.7 HIV抗体确认报告由1名具有高级卫生技术职称的人员复核签字,按原送检程序反馈。如确认对象户口不属于本辖区,确认报告应同时抄送HIV感染者户口所在地的省艾滋病确认中心实验室。其它系统确认的地方人员(包括本地和外地),也应及时向当地卫生行政部门和省艾滋病确认中心实验室报告。
5.2.8 省艾滋病确认中心实验室难以确认的样品,送国家艾滋病参比实验室确认。同一受检对象的样品在不同实验室得到不一致的确认结果时,由国家艾滋病参比实验室和艾滋病确认实验室审评及技术指导专家组予以仲裁。
㈣ HIV的检测步骤有哪些
艾滋病检测种类:血液试纸和唾液试纸两大类。
目前市场上的艾滋病试纸种类主要分为两大类,其中血液试纸主要包括雅培hiv试纸、爱康hiv试纸等。而唾液艾滋病试纸的种类就显得比较单调,其中使用最广泛的就是美国艾卫艾滋病检测试纸,深受很多的高危人群及恐艾症患者的青睐。
专家指出,自从第一例艾滋病毒被确诊以后,全球对于艾滋病毒的研究已经有30多年的历史,而在这些年中也确实取得了十分重大的突破,其中艾滋病试纸研发问世,其所提倡的艾滋病自测就为艾滋病毒的预防奠定了崭新的里程碑。据本站笔者了解得知,艾滋病试纸是一种使用胶体金免疫层析科技研发的新一代检测试剂,可检测血清或血浆标本中的HIV-1/2特有性抗体,从而准确的判断出患者体内是否含有艾滋病毒,进而了解该患者是否是艾滋病毒感染者。
艾滋病检测试纸优势多,不同艾滋病试纸准确率达99.99%
不同的艾滋病试纸在不同的情况下使用起来具有更高的准确性和方便性。但是这几种常见的HIV检测试纸使用起来主要有以下几个方面的优势:所有操作时间15分钟,所有的检测操作过程简便、出检测结果十分迅速又准确、而且全部都是自带质控对照,检测过程中还不需要使用附加药剂。值得一提的是,自己在家就能够独立完成所有的检测过程,并不再像过去那样一定要到专业的疾控中心检测,这样不但减轻了疑似感染者的心理折磨,而且还出检测结果快速高效,为感染者及时治疗争取了更多有利的时间。
据悉,要想准确知道检测结果,还需要注意的一个问题就是艾滋病检测的最佳时间,而国际上规定以高危发生的日期开始计算,2周后即可检测艾滋病病毒,以6周以后为准。而且如果在检测过程中要想更加准确了解结果,最好是一次性使用多种不同品牌的艾滋病试纸,注意准确率更高,几乎是100%。
㈤ 医院检测HIV有几种方法
医院检测艾滋一般有酶联法、金标法。但是检测艾滋一般都是去疾控中心。比较可靠。
一般艾滋的潜伏期也就三四个月,因此一般高危性行为后三四个月可以检查出是阳性。
你所谓的初期应该是感染初期,如果身体素质好的话,临床症状不会太明显,
因为艾滋破坏的是人的免疫系统,后期会发烧,体质弱等。
现在艾滋的检测技术已经相当可以了。
一般检测艾滋是需要去当地疾控中心进行检测,免费的,
但是很多人因为隐私或事件等问题,你也可以用唾液收集器,
收集样本,再寄到当地疾控中心,这些都是免费的。
如果是阳性感染者,那么发生真菌感染的可能性是比较大的,反之一个人因为出现身体异常就怀疑艾滋病是毫无意义的。对于艾滋病1行为 2检测没有3。
感染艾滋病的行为只有共用注射器、买卖血和未戴安全套的非保护性行为以及母婴。如果恐惧艾滋完全可以去天猫选个爱卫自己查查。艾滋病感染的五个必要因素缺一不可,1对方有病毒 2病毒量巨大 3自己有创面 4创面和病毒体液反复接触 5病毒停留在创面上很久。这是你判断自己是否能够感染的核心。艾滋急性期的症状一定包含38度以上的低烧和急性便水状腹泻。
㈥ 艾滋病都有哪些检测方法
艾滋病的检测方法有两种,一种是采用HIV快速检测试纸检测,这种方法检测,方便快捷,二十分钟出显示结果。一种是酶联法,检测等待时间偏长,具体要看医院的情况,慢则一个礼拜。
㈦ 简述hiv的微生物学检测方法有哪些
主要有酶联免疫吸附试验(ELlSA)和免疫荧光试验(lFA)ELISA用去污剂裂解HIV或感染细胞液提取物作抗原IFA用感染细胞涂片作抗原进行抗体检测 如果发现阳性标本应重复一次 为防止假阳性 可做Western blot(WB 蛋白印迹法)进一步确证
WB法是用聚丙烯酰胺凝胶电泳将HIV蛋白进行分离 再经传移电泳将不同蛋白条带转移于硝酸纤维膜上 加入病人血清孵育后 用抗人球蛋白酶标抗体染色 就能测出针对不同结构蛋白抗体 如抗gp120、gp41、p24抗体 特异性较高
用ELISA检测p24抗原 在HIV感染早期尚未出现抗体时 血中就有该抗原存在 由于p24量太少 阳性率通常较低 现有用解离免疫复合物法或浓缩p24抗原 来提高敏感性
用PCR法检测HIV基因 具有快速 高效 敏感和特异等优点医学教育网搜集l整理 目前该法已被应用于HIV感染早期诊断及艾滋病的研究中
常用方法为共培养法 即用正常人外周血液分离单个核细胞 加PHA刺激并培养后 加人单个核细胞诊断及艾滋病的研究中
㈧ HIV有几种检测方法
一、 酶联免疫吸附试验(ELISA)
目前应用的ELISA法有8种之多。它们的特异性和敏感性超过99%。
二、 颗粒凝集法(PA)
PA为快速、简便的一种筛选方法。如属阳性,应经WB证实。PA不需任何特殊仪器,其结果用肉眼可判别。全过程仅需5分钟。缺点有假阳性,且价格昂贵。
三、快速试剂
(一)人类免疫缺陷病毒(HIV)1+2型抗体诊断试剂(胶体硒法)
雅培人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂(胶体硒法)是用于体外,肉眼观察,定性的免疫分析,检测血清或血浆中的HIV-1和HIV-2抗体,用于帮助受感染个体的HIV-1和HIV-2抗体。本品仅用于无偿献血员现场初筛及临床紧急情况的使用,本品检测阳性者,需进行进一步筛查确认。
(二)InstantCHEKTM-HIVl+2金标快速诊断试剂
InstantCHEKTM-HIV1+2是一种快速、简单、灵敏的检验方法, 用以检测艾滋病病毒(HIV-1和HIV-2)的抗体。该方法适用于初筛检测,凡由该试剂测定为阳性者,需用另一种方法检测如ELISA或用蛋白印记法确定。
四、HIV-抗体确认实验
免疫印迹试验(WB)、条带免疫试验(LIATEK HIVⅢ)、放射免疫沉淀试验(RIPA)及免疫荧光试验(IFA)。国内常用的确认试验方法是WB。
(一_免疫印迹实验(westernblot,WB)是广泛用于许多传染病诊断的实验方法,就HIV的病原学诊断而言,它是首选的用以确认HIV抗体的确认实验方法,WB的检测结果常常被作为鉴别其他检验方法优劣的“金标准”。
确认试验流程:
有HIV-1/2混合型和单一的HIV-1或HIV-2型。先用HIV-1/2混合型试剂进行检测,如果呈阴性反应,则报告HIV抗体阴性;如果呈阳性反应,则报告HIV-1抗体阳性;如果不满足阳性标准,则判为HIV抗体检测结果不确定。如果出现HIV-2型的特异性指示条带,需用HIV-2型免疫印迹试剂再做HIV-2的抗体确认试验,呈阴性反应,报告HIV-2抗体阴性;呈阳性反应则报告HIV-2抗体血清学阳性,并将样品送国家参比实验室进行核酸序列分析,
WB的敏感性一般不低于初筛实验,但它的特异性很高,这主要是基于HIV不同抗原组分的分离以及浓缩和纯化,能够检测针对不同抗原成分的抗体,因而能够用WB方法鉴别初筛实验的准确性。从WB确认试验结果看出,初筛试验尽管选择质量较好的试剂,如第三代ELISA,仍会有假阳性出现,必须通过确认试验才能得出准确结果。
(二)免疫荧光实验(IFA)
IFA法经济、简便、快速,曾被FDA推荐用于WB不确定样品的诊断。但需要昂贵的荧光显微镜,需要受过良好训练的技术人员、观察和解释结果易受主观因素的影响,结果不宜长期保存,IFA不宜在一般的实验室开展和应用。
㈨ 艾滋病检测有几种方法
现阶段我国共用三种检测方式在:
第一种:到医院检测(最好到当地三甲医院)需等待检测结果。
第二种:私密自检,通过在tian猫或j东用检测试纸自己进行检测(ai wei DPP等产品)最快20分钟出结果。
第三种:专业机构送检,自己在家采集样本快递到专业检测机构检测,再通过网络查询结果;如:ai wei唾液采集器 1+1联检服务(包含唾检和尿检两种产品),3-7个工作日出结果。
㈩ 如何检测艾滋病 艾滋病自我检测方法介绍
1、艾滋病实验室检测:
AIDS的实验室检测主要包括HIV抗体、HIV核酸、CD4+T淋巴细胞、HIV基因型耐药检测等。HIV1/2抗体检测是HIV感染诊断的金标准;HIV核酸定量(病毒载量)检测和CD4+T淋巴细胞计数是判断疾病进展、临床用药、疗效和预后的两项重要指标;HIV基因型耐药检测可为高效抗反转录病毒治疗(HAART)方案的选择和更换提供科学指导。
2、艾滋病自我检测:
(1)首先要看自己是否有如下高危行为:性生活比较复杂、男同性恋者、吸毒或是与他人混用注射器、曾被感染有艾滋病毒的针头或是血制品感染史、母亲为艾滋病患者等。
(2)如有高危行为者,若是出现以下两种或两种以上情况,要引起高度警觉:近期体重骤降10%以上、慢性腹泻或咳嗽长达一个月以上、持续或间歇发热达一个月以上、全身可触及有淋巴结肿大、反复出现带状疱疹或是慢性播散性单纯疱疹感染、口咽部有念珠菌感染。
(3)抽血进行常规检查,有不同程度的贫血,同时白细胞计数减少提示有病毒感染。尿常规可见尿蛋白。
(4)去医院进行HIV-1抗体的检测,ELISA测定法结果连续两次为阳性者,再行WB法进行确诊。
(5)从血液、单个核细胞及脑脊液中如果能够分离出人免疫缺陷病毒者,可以作为判定感染艾滋病。