白蛋白检测方法

❶ 测定血清总蛋白的参考方法是

、总蛋白检测方法:凯氏定氮法

将血清与强酸一起加热消化,使血清中的含氮化合物转化为铵盐,再加碱使铵盐成为氨进经蒸馏分离出来,最后用酸滴定测定氮量,按每克氨相当于6.25g蛋白质计算蛋白质的浓度。

2、总蛋白检测方法:双缩脲法

蛋白质中的肽键(-CONH-)在碱性条件下与Cu2+络合成紫红色复合物,产生的颜色强度在一定范围内与蛋白质含量成正比。

3、总蛋白检测方法:酚试剂法

蛋白质分子中的酪氨酸残基和色氨酸残基能够和酚试剂中的磷钨酸-磷钼酸反应生成蓝色化合物。Lowry改良法在酚试剂中加入Cu2+,提高了呈色的灵敏度,其中75%呈色靠铜离子产生。Lowry改良法的灵敏度为双缩脲法的100倍左右。

总蛋白检测方法

4、总蛋白检测方法:UV法

这种方法是在280nm波长,直接测试蛋白。选择Warburg公式,光度计可以直接显示出样品的浓度,或者是选择相应的换算方法,将吸光值转换为样品浓度。蛋白质测定过程非常简单,先测试空白液,然后直接测试蛋白质。从而显得结果很不稳定。蛋白质直接定量方法,适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质。

5、总蛋白检测方法:BCA法

原理 BCA(bicinchonininc acid)与二价铜离子的硫酸铜等其他试剂组成的试剂混合一起即成为苹果绿,即BCA工作试剂。在碱性条件下,BCA与蛋白质结合时,蛋白质将Cu2+还原为Cu+,工作试剂由原来的苹果绿色变为紫色复合物。562nm下其光吸收强度与蛋白质浓度成正比。

BCA蛋白浓度测定试剂盒,Abbkine的蛋白质定量试剂盒(BCA法)提供一个简单,快捷,兼容去污剂的方法,准确定量总蛋白。

❷ 测定血清白蛋白时临床上常使用的方法是

正确答案:A
解析：本题考查瞎老血清白蛋白测定常用的方法，血清白蛋白测定一般采用溴销旦甲酚绿比色磨斗升法，它是目前首先推荐的白蛋白定量方法
。

❸ 尿蛋白高通过什么方法检查

一般来说健康成人尿总蛋白上限为150到200毫克每天，白蛋白尿上限为30毫克每天，尿蛋白检测方法有以下一些方法，第一试纸法，可测最低限为10到20毫克每分升，如果患者的尿ph大于8.0，血液污染可呈假阳性，稀释尿可以呈假阴性，如果试纸法仅显示为少量蛋白，而酸沉淀法有大量蛋白，应当警惕有无球蛋白或者是其他经验蛋白。
二，尿蛋白定量，近年来发现随机一次尿的尿蛋白肌酐比值或者是白蛋白肌酐比值水平与尿蛋白定量有很好的相关性。
三，尿白蛋白，需要通过放射免疫分析法或者是竞争酶联免疫吸附法进行检测，微量白蛋白尿指的是尿白蛋白排泄率在20到200微克每分钟，或者尿白蛋白定量30到300毫克每天。

❹ 血清白蛋白测定注意事项

血清总蛋白测定一般采用双缩脲比色法，它是目前首先推荐的蛋白质定量方法。此法的原理是蛋白质分子中的肽键在碱性条件下与二价铜离子（Cu2+）作用生成蓝紫色的化合物，这种颜色反应强度在一定浓度范围内与蛋白质含量成正比，经与同样处理的蛋白标准液比较，即可求得蛋白质含量。此反应的优点是清、球蛋的反应性相近，操作简单，重复性好，干扰物质少，为首选的常亮知规方法，其缺点是灵敏度较低。
1.黄疸血清，严重溶血，葡萄糖，酚酞及溴磺酞钠对本法有明显干扰，故用标本空白管来消除。但如标本空白管吸光度太高，可影镇册响测定的准确度。
2.高脂血症混浊血清会干扰比色，可采用下述方法消除：取2支带塞试管或离心管，各加待测血清O.1ml.再加蒸馏水0.5ml和丙酮10ml，塞紧并颠倒混匀10次后离心，倾去上清液。将试管倒立于滤纸上吸去残余液体医|学教育网整理。向沉淀中分别加入双缩脲试剂及双缩脲空白试剂，再进行与上述桕同的其他操作和计御键宏算

❺ 蛋白浓度测定的方法具体有哪些

蛋白浓度测定的方法：

1. 紫外分光光度法

紫外光谱吸收法测定蛋白质含量是讲蛋白质溶液直接在紫外分光光度计中测定的方法，不需要任何试剂，操作简单且易回收。蛋白质溶液在280nm附近有强烈的吸收，这是由于蛋白质中酪氨酸、色氨酸残基而引起的，所以光密度受这两种氨基酸含量的支配。另外核蛋白或提取过程中杂有的核酸对测定结果引起极大误差，其最大吸收在260nm。所以同时测定280及260nm两种波长的吸光度，通过计算可得较为正确的蛋白质含量。

2. 双缩脲法

利用半饱和硫酸铵或27.8％硫酸钠——亚硫酸钠可使血清球蛋白沉淀下来，而此时血清白蛋白仍处于溶解状态，因此可把两者分开，这种利用不同浓度的中性盐分离蛋白的方法称为盐方法。盐析分离蛋白质的方法不仅用于临床医学，而且还广泛地用于生物化学研究工作中，如一些特殊蛋白质—酶、蛋白激素等的分离和纯化。

蛋白质和双缩脲一样，在碱性溶液中能与铜离子形成紫色络合物（双缩脲反应），且其呈色深浅与蛋白质的含量成正比，因此可于蛋白质的定量测定。

但必须注意，此反应并非蛋白质所特有，凡分子内有两个或两个以上的肽键的化合物以及分子内有—CH2—NH2等结构化合物，双缩脲反应也呈阳性。本实验用27.8％硫酸钠—亚硫酸钠溶液稀释血清，取出一部分用双缩脲反应测定蛋白质的含量，剩余部分则用滤纸过滤，使析出的球蛋白与白蛋白分离，取出滤液用同一反应测定白蛋白的含量。总蛋白与白蛋白含量之差即球蛋白的含量。白蛋白与球蛋白之比即所谓的白／球比值。

3. Folin-酚试剂法

目前实验室较多用Folin-酚法测定蛋白质含量，此法的特点是灵敏度高，较双缩脲高两个数量级，较紫外法略高，操作稍微麻烦，反应约在15分钟有最大显色，并最少可稳定几个小时，其不足之处是干扰因素较多，有较多种类的物质都会影响测定结果的准确性。其原理是蛋白质中含有酚基的酪氨酸，可与酚试剂中的磷钼钨酸作用产生兰色化合物，颜色深浅与蛋白含量成正比。

4. 考马氏亮蓝G-250

此方法是1976年Bradform建立。染料结合法测定蛋白质的优点是灵敏度较高，可检测到微量蛋白，操作简便、快迅，试剂配制极简单，重复性好，但干扰因素多。考马氏亮蓝G－250具有红色和青色两种色调、在酸性溶液中游离状度下为棕红色，当它通过疏水作用与蛋白质结合后，变成蓝色，最大吸收波长从465nm转移到595nm处，在一定的范围内，蛋白质含量与 595nm的吸光度成正比，测定595nm处光密度值的增加即可进行蛋白质的定量。

以上便是实验室中常见的几种蛋白浓度测定的方法，另外还有凯氏定氮法和BCA法，有凯氏定氮法结果最精确，但操作复杂，BCA法又以其试剂稳定，抗干扰能力较强，结果稳定，灵敏度高而受到欢迎。

❻ 尿微量白蛋白的尿微量检测

尿微量白蛋白指高于正常，但常规方法无法检出的白蛋白尿，他的检测作为早期肾损害诊断的重要指标已受到广泛重视，测定方法包括放射免疫法、ELASA法等。应用较多的是免疫透射比浊法，但报告方式不一，有的以每升尿中白蛋白量表示，有的以24小时排泄量表示，常用的报告方式是以白蛋白/肌酐比值报告。我们以不同表示方法对正常人尿白蛋白的正常值进行了统计分析，并对部分高血压、糖尿病患者进行测定，现报告如下。 1.仪器与方法：尿微量白蛋白测定试剂盒，肌酐测定试剂盒均购于凯创公司。仪器应用瑞士产Cobas MIRA plus全自动生化分析仪。尿白蛋白测定，取标本10 ml，1 500×g离心10分钟，取上清10 μl，加缓冲液250 μl，抗血清50 μl，测定波长340 nm，反应温度37℃，测定时限300秒，5点定标，范围5～200 mg/L。肌酐采用Jaffe′s法，尿标本预先用生理盐水30倍稀释测定。
2.对象：对照组，健康人70例(男43例，女27例)，平均年龄41.2岁(21～54岁)，均排除高血压、糖尿病及其他和肾病有关病史。糖尿病组，42例(男28例，女14例)，平均年龄51.2岁(34～72岁)，病程2～20年。高血压组，62例(男39例，女23例)，平均年龄44.5岁(31～71岁)，血压范围160～190/95～120 mmHg，病程2～27年。临床诊断Ⅰ期21例，Ⅱ期41例，其中Ⅱ期患者以眼底动脉硬化或心脏改变为诊断依据，尿常规分析蛋白定性均为阴性。
3.标本：对照组均分别留取24小时尿和随机尿，测定24小时白蛋白和每升白蛋白及白蛋白/肌酐比值，并以不同方法计算正常值，患者组均取随机尿测定白蛋白及肌酐，以白蛋白/肌酐比值报告，以上标本均当日测定。 1.不同计算方法尿白蛋白正常值：以mg/L计算，范围2.2～41.7，均值12.7；以mg/gCr计算，范围2.7～26.1，均值8.1；以mg/24 h计算，范围2.4～34.3，均值11.4。因尿白蛋白值呈非正态分布，低值无临床意义，在建立参考范围时以百分位数法按单侧值95%上限确定。从以上结果可见，不同计算方法的结果正常值范围有明显差异，尤以每升结果报告时，由于受尿量影响较大，正常范围较宽，这样易使部分异常标本落入正常范围而延误诊断。
2.高血压组：诊断Ⅰ期、Ⅱ期高血压的标准是以是否累及血管、脏器为依据，我们测定的41例Ⅱ期患者中，常规尿蛋白定性均未发现肾脏损害，诊断是以眼底改变和心电图改变为主。我们将测定结果依据高血压病期、病程、舒张压水平分组进行统计，结果。Ⅰ期21例，范围4.6～38.2 mg/gCr，均值17.8 mg/gCr；Ⅱ期41例，范围5.1～62 mg/gCr，均值29.7 mg/gCr；舒张压95～105 mmHg 34例，范围4.6～43.4 mg/gCr，均值16.4 mg/gCr；舒张压106～120 mmHg 28例，范围5.0～62 mg/gCr，均值31.2 mg/gCr；病程2～10年19例，4.6～40.2 mg/gCr，均值13.1 mg/gCr；病程11～15年，28例，范围4.6～54.2 mg/gCr，均值19.3 mg/gCr；病程16～27年，15例，范围5.1～62 mg/gCr，均值37.2 mg/gCr。上述结果中以正常值? mg/gCr为界，Ⅰ期高血压中有4例超过正常值，Ⅱ期高血压中有14例超过正常值，说明这些患者已有轻度肾损害。尤其1期高血压中有五分之一患者出现尿白蛋白异常，尿白蛋白的值与病程及血压水平相关。
3.糖尿病组：42例糖尿病患者按病程分组，2～10年28例，尿白蛋白为5.2～39.6 mg/gCr，均值21.2 mg/gCr，大于25 mg/gCr 13例；11年以上组14例，结果为10.4～68.
1 mg/gCr，均值29.4 mg/gCr，大于25 mg/gCr 8例。通过了解病史并分析结果，坚持长期口服药物或注射胰岛素治疗者与不经常治疗两者结果间有明显差异(P?.01)。
测定尿微量白蛋白最理想的方法是留取24小时标本，但因留取困难，在实际应用上受到限制。随机尿测定是目前最常用，最易行的方法。但应同时测定肌酐，因每日肌酐排除量相对恒定，可避免尿量变化对结果的影响。
尿微量白蛋白测定是一种灵敏、简便、快速的测定方法，易于在常规实验室中广泛应用，对早期肾损害的诊断远远优于常规定性或半定量试验。

❼ 常用的血清蛋白质含量测定方法有哪些

四种血清总蛋白质的测定的方法：

1.基于蛋白分子中含有酪氨酸和色氨酸而使用的酚试剂比色法 由于各种蛋白质分子中上述两种氨基酸的组成比例不同，特别是白蛋白含色氨酸为0.2%，而γ-球蛋白中含量达2%-3%，导致较大的差异。Lowry的改良法在酚试剂中加入Cu2+，集中原法和双缩脲反应两者的作用，使呈色灵敏度提高。其中75%的呈色依赖于Cu2+.反应产物最佳吸收峰在650-750nm，方法灵敏度为双缩脲方法的100倍左右。有利于检测较微量的蛋白质。但试剂反应仍易受多种化合物的干扰。

2.紫外测定法 采用280nm和215/225紫外吸收值，计算蛋白质含量280nm 是由于蛋白质分子中存在芳香族氨基酸所致。方法的特异性和准确性受蛋白分子中该种氨基酸的含量比例影响甚大。尿酸和肝红素在280nm附近有干扰。紫外区200-225nm是肽健的强吸收峰。在此区域其吸收值为280nm的10-30倍，将血清稀释1000-2000倍可以消除干扰物质的影响。

3.采用沉淀反应进行散射比浊法 用磺柳酸、三氯醋酸等配方，此方法甚为简便，不需特殊仪器，技术关键在于：①选择最佳试剂浓度及温度；②混匀技术；③选用的标准；④待测标本中的蛋白浓度。

4.染料结合法 蛋白质可与某些染料特异结合，如氨基黑（amino black）与考马亮蓝（comassive brilliant blue ）。这一性质除了可以用于电泳后的蛋白质区带染色，亦可用于总蛋白质的定量。缺点是多种蛋白质与染料的结合力不一致。考马亮蓝在与蛋白质结合后的吸收峰从465nm移向595nm，这一性质可用分光光度法来定量检测。

❽ 血清白蛋白的测定方法

通过双缩脲试剂可与蛋白质发生有颜色产物的反应方法来测定。

人血浆白蛋白是冻干制剂应为白色或灰白色的疏松体，液体制剂和冻干制剂溶解后，溶液为略粘稠、黄色或绿色至棕色澄明液体，不应有异物、混浊和沉淀。

白蛋白蛋白占血浆胶体渗透压卜埋的80%，主要调节组织与血管之间水分的动态平衡。由于白蛋白分子量较高，与盐类及水分相比，透过膜内的速度较慢，因此使白蛋白的胶体渗透压与毛细血管的静力压相抗衡，以此来维持正常与恒定的血浆容量。

在血液循环中，1g白蛋白可保留18ml水，故每5g白蛋白保留循环内水分的能力约相当于100ml血浆或200ml全血的功能，可起到增加循环血容量和维持血浆胶体渗透压的作用。

血昌冲浆白蛋白蛋白对某些离子和化合物有较高亲和力，能与这些物质可逆结合，发挥转运功能。白蛋白还为机体提供大量的氨基酸储备。50ml20%人血浆白蛋白的氨基酸储备功能相当于400ml全血。

(8)白蛋白检测方法扩展阅读：

药理作用

白蛋白蛋白占血浆胶体渗透压的80%，主要调节组织与血管之间水分的动态平衡。由于白蛋白分子量较高，与盐类及水分相比，透过膜内的速度较慢，因此使白蛋白的胶体渗透压与毛细血管的静力压相抗衡，以此来维持正常与恒定的血浆容量。

在血液循环中，1g白蛋白可保留18ml水，故每5g白蛋白保留循环内水分的能力约相当于100ml血浆或200ml全血的功能，可起到增加循环血容量和维持血浆胶体渗透压的作用。

血浆白蛋白蛋白对某些离子和化合物有较高亲和力，能与这些物质可逆结合，发挥转运功能。白蛋白还为机体提供大量的氨型迅蚂基酸储备。50ml20%人血浆白蛋白的氨基酸储备功能相当于400ml全血。

❾ 监测蛋白质含量

蛋白质含量测定主要有五种方法,分别是凯式定氮法、双缩脲法、紫外吸收法、酚试剂法和考马斯亮蓝法。

1.凯氏定氮法：

蛋白质是含氮的化合物。食品与浓硫酸和催化剂共同加热消化,使蛋白质分解,产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵,留在消化液中,然后加碱蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后,再用盐酸标准溶液滴定,根据酸的消耗量来乘以蛋白质换算系数,即得蛋白质含量。因为食品中除蛋白质外,还含有其它含氮物质,所以此蛋白质称为粗蛋白。

2.双缩脲定氮法：

在强碱性溶液中,双缩脲与CuSO4形成紫色络合物,称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键,或能过一个中间碳原子相连的肽键,这类化合物都有双缩脲反应。紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1~10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有:硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。

3.紫外吸收定宽前氮法：

蛋白质分子中,酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯吵旦环含有共轭双键,使蛋白质具有吸收紫外光的性质。形成颜色产物的量取决于蛋白质的浓度。实际测定时,必须预先用标准蛋白质溶液制作一个标准校正曲线,通常用牛血清白蛋白水溶液做蛋白质标准溶液。

不同浓度的标准蛋白质溶液加入双缩脲试剂后,反应生成的颜色产物用紫外-可见分光光度计在540nm 波长下测定吸光度,以双缩脲试剂加缓冲或水作空白对照。然后将测得的值分别对蛋白浓度(mg/ ml) 作图,得标准曲线。

未知蛋白样品用双缩脲试剂做同样处理,根据测得吸光度值在标准曲线上直接查得未知蛋白质样品中得蛋白质浓度。进行紫外吸收法测定时,由于蛋白质吸收高峰常因pH的改变而有变化,因此要注意溶液的pH值,测定样品时的pH要与测定标准曲线的pH相一致。

4.酚试剂法：

此法的显色原理与双缩脲方法是相同的,只是加入了第二种试剂,即Folin —酚试剂,以增加显色量,从而提高了检测蛋白质的灵敏度。这两种显色反应产生深蓝色的原因是:

①在碱性条件下,蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。

②Folin—酚试剂中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原,产生深蓝色(钼兰和钨兰的混合物)。在一定的条件下,蓝色深度与蛋白的量成正比。

5.考马斯亮蓝法：

考马斯亮兰G-250染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰的位置(λmax),由465nm变为595nm,溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。经研究认为,染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸(特别是精氨酸)和芳香族氨基酸残基相结合。在595nm下测定的吸光度值A595,与蛋白质浓度成正比。

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检查过程

(1) 标准法制定标准曲线取14支试管，分两组按下表a平行操作。绘制标准曲线：以A595nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标，在坐标纸上绘制标准曲线。

(2) 微量法制定标准曲线取12支试管，分两组按下表b平行操作。绘制标准曲线：以A595nm为纵坐标，标准蛋白含量为横坐标，在坐标纸上绘制标准曲线。

(3) 未知样品蛋白质浓度测定测定方法同上，取合适的未知样品体积，使其测定值在标准曲线的直线范围内。根据所测定的A595nm值，在标准曲线上查出其相当于标准蛋白的量，从而计算出未知样品的蛋白质浓度(mg/ml)。

参考资料网络——蛋白质含量测定

❿ 尿微量白蛋白——你们都是怎么测的呢

上海瑞金医院内分泌科现在有2种方法:1)
随机尿,2)
24h尿,早8点到第2天早8点.我都做过.以24h为准.