‘壹’ 根据检测原理不同,食品中抗生素残留的检测方法可分为哪几种
分为四种:酶抑制率法 分光光度法 胶体金法 滴定分析法
酶抑制率法
在一定条件下,有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用,其抑制率与农药的浓度呈正相关。正常情况下,酶催化神经传导代谢产物(乙酰胆碱)水解,其水解产物与显色剂反应,产生黄色物质,在412nm处测定吸光度随时间的变化值,计算出抑制率,通过抑制率可以判断出样品中是否有高剂量的有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。
分光光度法
不同的物质由于其分子结构不同,对不同波长光的吸收能力也不同,因此具有其特有的吸收光谱。即使是相同的物质由于其含量不同,对光的吸收程度也不同。标准曲线法就是利用这一特性来测定物质含量,先配制一系列浓度由小到大的标准溶液,分别测定出它们的A值,以A值为横坐标,浓度为纵坐标,作标准曲线。在测定待测溶液时,操作条件应与制作标准曲线时相同,以待测液的A值从标准曲线上查出该样品的相应浓度。
胶体金法
将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上,胶体金标记试剂(抗体或单克隆抗体)吸附在结合垫上,当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后,通过毛细作用向前移动,溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应,再移动至固定的抗原或抗体的区域时,待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留,聚集在检测带上,产生显色反应。当光源照射到检测带,反射光被收集并转化为电信号,根据信号的强弱即可判断被测物质的阴阳性。
滴定分析法
滴定分析法是将一种已知准确浓度的试剂溶液,滴加到被测物质的溶液中,直到所加的试剂与被测物质按化学计量定量反应为止,根据试剂溶液的浓度和消耗的体积,计算被测物质的含量。
‘贰’ 抗生素检测的主要方法
由于抗生素在废水中的浓度相对较低,所以抗生素的检测一般都是微量或是痕量分析,常采用具有高灵敏度的仪器进行检测。各研究机构对畜禽废水中抗生素的检测技术主要有色谱法和其联用技术、酶免疫分析法、毛细管电泳法等。 液相色谱法(LC)在废水抗生素的检测中是最常见的,LC具有分离效能好,检测速度快且重现性好的特点。LC法所用的检测器有紫外检测器(UV),荧光检测器,以及二级管阵列检测器。
高效液相色谱-紫外检测器
高效液相色谱-紫外检测器联用检测技术是最早用于环境中抗生素的分离检测,由于其操作简便以及成本低,被用于畜禽废水中抗生素的检测。
液相色谱-荧光检测器
液相色谱-荧光检测器因为其检测限低所以也被用于畜禽废水中抗生素的检测,通常对本身具有荧光性的抗生素液相色谱-荧光检测器可以直接检测出,但是对于本身不具有荧光性或荧光性差的抗生素,需要对其衍生化来提高目标物的荧光特性以便检测。
液相色谱串联质谱技术
色谱可以用于多组分混合物的分离和分析,可以对有机化合物进行定量分析,但是定性较困难,质谱仪能够对单一组分提供高灵敏度和特征的质谱图,但对复杂化合物无分析能力。所以将色谱与质谱进行联用(或是串联质谱),对复杂化合物中微量和痕量组分的定性和定量分析具有重要的意义。
由于畜禽废水中有多种类的抗生素同时存在,利用色谱和质谱的联用技术可以提高抗生素的定性、定量分析的可靠性、准确性、灵敏度。 酶免疫分析方法具有操作简单,前处理简化,分析成本低、灵敏、特异性强、检测快速,不需要昂贵的仪器等,而且可以同时测定几个样品,但是酶免疫分析方法对试剂的选择性高,很难同时分析多种成分,对结构类似的化合物有一定程度的交叉,分析分子量很小的化合物和不稳定的化合物有一定的困难。
用酶免疫分析方法试剂盒检测地表水、地下水中的四环素和泰勒菌素,检测分别为0.05μg/L,0.1μg/L。其结果表明,该方法成本低、检测快,可用于水中的四环素、氯四环素、泰勒菌素的初筛检测。 经典的放射免疫测定基本原理和酶免疫分析是相同的,但所不同的是反应的放大指示系统不是酶和底物,而是放射性同位素。用于抗原或抗体标记的同位素通常是放射性较小的β放射原,最常用的是同位素是3H和14C,放射性不强、用量也极微小,比较安全。
‘叁’ 动植物性食品抗生素残留的来源有哪些
目前应用于食品中抗生素残留的检测方法依据检测原理的不同主要有:微生物检测法、理化检测法和免疫分析法。
1、微生物检测法
抗生素对微生物机能和代谢具有抑制作用,利银昌渗用该性质可实现对样品中抗生素残留的定性或锋脊定量分析,而且检测费用较低,但是花费时间长、特异性差、灵敏度低、对微量残留检测易产生误差。
2、理化检测法
理化检测法是一种根据抗生素的分子理化性质对其进行分离和检测的方法,如色谱法(高效液相色谱法、气相色谱法、质谱法等)、电泳法(毛细管电泳法等),这种方法检测灵敏度较高、结果稳定、重复性好、精确可靠,是目前食品中抗生素残留测定的确证检测方法,但是为了减少背景干扰样品前处理方法复杂,分析速度慢,分析仪器昂贵,需要专业的操作人员等缺点限制迅缓了该方法的普遍推广应用。
‘肆’ 鳊鱼杀死5天检测出恩诺沙星超标怎么回事
如果鳊迅瞎鱼杀死5天后仍然测出恩诺沙星超标,说明这个鱼之前在喂养时饲料里或者投亩迹空放过抗生素州如药,这个对人体健康是有有影响的,最好不要吃。
‘伍’ 乳品最好的抗生素检测方法是什么啊,急求!!
目前,鲜奶中抗生素残留的检测方法大致分为三类:生物测定法、免疫法、理化分析法。下面介绍几种常用的牛奶中抗生素检测方法。
(1)TTC法属生物检测法:
如果牛奶中含有抗生素,则加入菌种(嗜热链球菌)经培育2.5~3小时后,加入TTC指示剂(三苯基四氮唑)不发生还原反应,所以样品呈无色状态;如果牛奶中不含抗生素,则样品呈红色.
(2)戴尔沃检测法:
该法也是生物测定法,是利用微生物—嗜热芽胞菌在64℃条件下培养2.5~3小时后会产酸,酸引起指示剂BCP(溴甲酚紫)变为黄色;若牛奶样品中不含抗生素,培养后样品呈黄色,如样品中含有抗生素, 指示剂将不变色.
(3)Snap法
检测结果快速准确, 9分钟内即可检测出牛奶中B-内酰胺类、四环素类、磺胺类等抗生素的残留含量,且有半定量的读数,可监控牧场用药的情况;检测仪器稳定性良好,结果重现性高,整个检测过程简单方便;但需购置专用仪器和试剂,成本较高。
(4)高效液相色谱检测法
它是一种理化检测方法,一般要经过样品的提取、脱蛋白、离心、层析柱净化、衍生化等步骤,能检测抗生素的具体含量,敏感性较高,但检测程序复杂,费用较高,需购买色谱仪等检测设备,不适合小型检验室。
(5)纳米胶体金层析法
该方法是基于竞争法胶体金免疫层析技术,将检测液加入试纸卡上的样品孔,检测液中的抗生素与金标垫上的金标抗体结合形成复合物,若抗生素在检测液中浓度低于100ng/mL,未结合的金标抗体流到T区时,被固定在膜上的抗生素BSA偶联物结合,逐渐凝集成一条可见的T线;若抗生素浓度高于100ng/mL,金标抗体全部形成复合物,不会再与T线处抗生素BSA偶联物结合形成可见T线。未固定的复合物流过T区被C区的二抗捕获并形成可见的C线。C线出现则表明免疫层析发生,即试纸有效.结果解释
阴性:C线显色,T线肉眼可见,无论颜色深浅均判为阴性。
阳性:C线显色,T线不显色,判为阳性。
无效:C线不显色,无论T线是否显色,该试纸均判为无效。
保存和稳定性
4-30℃阴凉干燥处保存,不可冷冻,避免阳光直晒,生产日期起18个月内有效。
纳米胶体金层析法适用于样品的初筛,检测时间短,出结果速度快,且能在常温下保存18个月之久,操作简单,无需任何专业的技术,没有检测环境的需求不管是奶农还是奶站工作人员还是专业的检测人员,都可以方便使用。
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‘陆’ 抗生素残留危害这23个真相你必须知道
抗生素滥用和耐药性一直是人们担心的话题。抗生素残留究竟有多大危害?耐药性又有多大风险?我们一起起来聊聊关于抗生素残留的23个真相。
1、什么是兽用抗菌药?
总有人说我们吃的肉类中有抗生素残留。抗生素,又叫抗菌药,包括抗生素和人工合成抗菌药,它能够杀死细菌或阻止细菌生长,可用于预防和治疗细菌性感染。其中,用在动物身上的抗菌药就是“兽用抗菌药”,常使用的包括青霉素、头孢菌素等抗生素,以及氟喹诺酮类、磺胺类、喹恶林类合成抗生素。
2、畜禽养殖中为什么要用抗菌药?
养殖动物使用抗菌药的初衷和最终目的还是保护人的健康。
当养殖动物抵抗力下降时,致病微生物就会使它们生病。若不及时治疗,疾病容易在养殖动物中扩散,严重影响动物的健康,导致产品质量下降并降低产量。有时动物生的病还可能传染给人,例如猪链球菌病、猪丹毒等,这些疾病叫“人畜共患病”,对人和动物的健康都谨含卖是巨大威胁。
老派因此,及时、合理的使用抗菌药, 既可以保障消费者健康,也可以保障产品质量,还可以避免经济损失。抗菌药在防治畜禽疾病方面发挥了重要作用,它是当今全球畜禽养殖业大规模、集约化发展的基石之一。
3、为什么有时候需要同时使用多种抗菌药?
有时动物感染了多种致病微生物,只使用一种抗菌药就无法起效,我们就不得不使用多种药物。实际上,有时两种抗菌药同时使用可以起到“互相帮助”的效果,即使用更少的量也能实现更好的抗菌效果,还能降低或避免毒副作用,最典型的例子是青霉素和链霉素联用。另外,多种抗菌药的联合打击还可以防止有“漏网之鱼”,避免或延缓细菌耐药性的产生。
当然,多数情况下只需用一种抗菌药,联合用药仅适用于少数情况,且一般二联即可,三联、四联并无必要。
4、什么是兽药残留?
动物身上使用兽药后,药物或其代谢物有可能蓄积或留存在肉和内脏或者进入奶、蛋等畜禽产品,这些进入食品的兽药就是兽药残留。
5、兽药在动物中的残留和消除过程是怎样的?
兽药在动物体内会经过吸收、分布、代谢和排泄过程。“吸收”、“分布”是药物进入动物体内发挥作用并残留的过程。“代谢”、“排泄”是药物从动物体内清除的过程 。在规范使用的情况下,绝大部分药物被代谢和排泄掉,在动物体内的残留水祥逗平很低。
6、什么是休药期?
“休药期”( Withdrawal Time, WDT )是指从动物停止用药 到 允许上市销售的 间隔时间。在这段时间里,动物体内的药物残留被逐步代谢和排出体外,其残留水平下降到限量值以下,肉、蛋、奶等动物性食品的安全性得以保障。不同药物在动物体内代谢的规律不同,因此不同药物的休药期也可能不同。
7、抗菌药残留是否会危害人体健康?
任何物质都需要达到一定的量才会导致健康危害 。通常情况下,食品中药物残留的量很低,一般不足以产生健康危害 。如果兽用抗菌药残留达到较高水平且长期摄入,可能带来过敏反应、慢性毒性、破坏胃肠道菌群平衡等健康影响。
8、什么是最高残留限量?
最高残留限量( Maximum Resie Limits, MRLs )指动物性食品中规定的药物残留最高浓度,它是基于一套严格且复杂的科学评估程序得出的。由于评估时留下了很大的安全系数,因此按照正常的饮食结构,只要残留不超标,终生食用都不会对人体健康造成危害。
9、我国的兽药残留限量标准情况如何?
我国兽药残留限量标准分为四类:
1) 不需要制定最高残留限量的兽药 88 种;
2) 需要制定最高残留限量的兽药 94 种;
3) 可以用于食品动物,但不得检出兽药残留的兽药9 9 种。
4) 农业部明令禁止使用的兽药31 种,比如瘦肉精。
10、国际上兽药残留标准的情况如何?
目前国际食品法典(CAC)制定了67种兽药残留 限量,并对12个兽药提出了风险 管理建议。各国结合本国实际,分别制定了本国标准,例如美国已制定 95种兽药的残留限量,欧盟有139种。我国兽药残留限量标准中有98% 的可比项目已达到或超过国际标准。
11、为何我国兽药使用量较大?
兽药的总使用量在很大程度上取决于养殖规模和人口规模 ,因此我国的兽药总使用量必然比许多国家要高。我国是世界上人口 最多的国家,肉蛋奶的消费量巨大,因此动物养殖规模也十分庞大,2013年全国畜禽出栏和存栏总量已达到:1.5亿头牛、5.6 亿只羊、12亿头猪、120 亿只禽 。
美国的动物养殖规模世界第二,其兽药使用量同样远高于其他国家。当然,我国养殖业也存在一些兽药使用不合理或者滥用 的个别情 况,需要进一步加强监管和引导。
12、我国兽药残留的状况如何?
近年来,随着农产品质量安全监管不断深入,处罚力度加大,兽药滥用的情况得到一定的遏制,兽药残留的整体状况较好。例如监测数据显示,2015 年下半年的畜禽及蜂产品的兽药残留合格率达到 99 % 。
13、什么是耐药性?
大家最担心的就是抗生素的耐药性了。
耐药性其实跟生物的自然选择有点类似。随着药物的使用,一些细菌逐渐适应并发展出抵抗药物作用的能力,这就是耐药性或抗药性。不仅细菌会产生耐药性,病毒、寄生虫、肿瘤细胞等等都会产生耐药性。
14、细菌为什么会有耐药性?
在微生物世界里,每个细菌都是一个生命个体。好比我们每个人都不同一样,细菌的本事不完全相同。有些细菌天生“身体好”“本领强”,对某些抗菌药物就是不敏感。这些细菌就在抗菌药的威严下侥幸逃脱,进而发生自身遗传改变(基因突变)产生耐药性。也有些细菌可以向别的细菌拜师学艺,学会耐药的本领。于是就逐渐产生耐药性了。
15、耐药菌的危害表现在哪些方面?
细菌获得耐药性后,它的致病性并不会增强,也不会产生新的感染类型。其实,耐药菌最主要的危害是会给治疗带来困难。如果细菌对多种抗菌药耐药,甚至对大多数抗菌药都耐药,就会导致我们以前常用抗菌药治疗无效,可能造成病死率提高,显着延长病程和治疗时间,因为你又得重新开发新的治疗方法和药物,医疗成本也难免会增加。
16、有没有办法对付耐药菌?
既然细菌这么容易产生耐药性,而且耐药性会有这么大麻烦,我们该如何对付耐药性呢?
科学家总结认为,我们能做到主要有几点:
(1)合理、谨慎地使用抗菌药,避免细菌耐药性产生,这是目前最有效、易推行的方法。
(2)寻找抗菌药替代品或替代疗法。
(3)结合耐药性监测,采用轮换、穿梭用药可以减少细菌耐药性甚至恢复细菌敏感性。
(4)针对耐药菌,研制新的抗菌药。
17、动物身上的耐药菌对人有无危害?
虽然细菌耐药性的产生和传播规律有待研究 ,但目前国际上的主流观点认为:动物源耐药菌的产生与传播,会增加食品安全和公共卫生风险,但尚未对人类健康和生命构成直接威胁。威胁人类健康的耐药菌甚至“超级细菌”主要来自人用抗生素滥用和医院内交叉感染。
18、哪些国家使用促生长作用的抗菌药?
抗菌药物对养殖动物的生长有一定促进作用,曾在全球范围广泛应用。不过,出于抗生素耐药性及环境考虑,一些国家和地区逐步停止这类抗菌药的使用。但是,问题总有两面性。停止使用后,随之带来饲料消耗增加、产量下降、动物死亡率上升、治疗用抗生素增加等问题反而更加严峻。综合考虑两方面的权衡,目前中国、加拿大、美国、巴西、俄罗斯等畜牧业大国均允许使用促生长作用的抗菌药。
19、兽药使用有哪些政府监管措施?
我国农业部制定公布了禁止使用的兽药和其他化合物目录、饲料中允许添加的药物饲料添加剂品种目录、《兽用处方药和非处方药管理办法》、《兽用处方药目录》、《兽药停药期规定》、《动物性食品中兽药最高残留限量》,以及多项兽药残留检测方法标准。除此之外,农业部还制定并实施国家兽药残留监控计划 ,对动物性食品中兽药残留进行监管。
20、环境中为什么能检测到抗菌药 ?
抗菌药广泛用于人类医疗、动物疾病控制和预防,以及用于种植业和工业用途。这些药物随生产生活进入环境是难以避免的,随着检测手段越来越先进,自然环境中检出抗生素也就不奇怪了。此外,自然环境中的很多微生物也会产生抗生素,比如青霉素就是从青霉菌的代谢物中发现的。
21、哪些环境中能检测到抗菌药?
根据中国、美国、加拿大、澳大利亚、德国、意大利、西班牙、瑞典、日本等国家的数据,土壤和污泥、废水、地表水、地下水、饮用水都能检测到抗菌药成分,这种情况在各国普遍存在。但是抗菌药在环境中的浓度普遍很低,水体中的浓度一般在十亿分之一左右。
22、环境中的抗菌药成分能不能自然降解?
世界卫生组织的技术报告指出,水环境中绝大多数药物的浓度均能自然降解,如吸附到沉积物上、日光降解和生物降解。饮水及废水的处理过程也会降低抗菌药的浓度。另外在合适的堆肥条件下,畜禽粪便堆肥过程也可以有效减少抗菌药在粪便中的浓度,将对环境的影响降到最小。
23、饮水中微量的抗菌药是否会危害健康?
世界卫生组织发布的 《 饮用水中的药物残留 》 技术调查报告指出:饮用水中检测出的药物浓度比最低治疗剂量低若干个数量级(通常低 1000 倍以上,而且往往远低于 1000 倍), 这些极低浓度的药物残留对人体健康造成危害的可能性非常低。比如某媒体报道,自来水中检出阿莫西林8 8 纳克/升,以此估算,需要每天喝5 5 吨水以上才可能有健康风险。你确定你能喝这么多水吗?不怕撑死吗?参考资料:中国兽药协会(China Veterinary Drug Association(CVDA)) 《兽药安全二十三问》
‘柒’ 请教检测食物含抗生素的简单方法(我是老师想做这方面实验)
牛奶中抗生素残留的几种常用检测方法
随着奶牛饲养业的发展,抗生素在预防和治疗奶牛疾病方面得到广泛的应用。生鲜牛奶中抗生素的来源主要是:第一,治疗泌乳期病牛时使用的抗生素会从奶牛体内移行到乳腺残留进入牛奶中,资料表明治疗后的奶牛,其挤出的牛奶5天内都有抗生素残留;其二,为了预防奶牛疾病并提高产量,在奶牛饲料中添加抗生素也会造成牛奶中抗生素的残留;第三,由于牧场管理不善,挤奶、储奶没有严格的卫生制度和配套的设施,人为添加或造成牛奶抗生素的污染。
牛奶中含有抗生素,不仅对人的健康造成很大的危害,而且对乳品加工企业带来经济损失(因无法生成酸奶和奶酪)。因此必须严格控制牛奶中抗生素残留,除了要做好科学饲养、精心管理;正确挤奶和预防疾病外,还要规范抗生素的使用,按国标中有关规定,用药后的奶牛5天后所产的牛奶才可作为原料乳,并且要检测其残留。世界粮农组织(FAO)、世界卫生组织(WHO)、欧盟(EC)及美国的食品和药品管理局(FDA)等对食品中抗生素最大残留量都有明确的规定,我国也有鲜奶中抗生素残留量检验标准(GB4689.27—94)。
目前,鲜奶中抗生素残留的检测方法大致分为三类:生物测定法(微生物测定法、放射受体测定法)、免疫法(放射免疫法、荧光免疫法、酶联免疫法)、理化分析法(波谱法、色谱及联用技术)。下面介绍几种常用的牛奶中抗生素残留检测方法。
TTC法
TTC法是我国鲜奶中抗生素残留量检验标准(GB4689.27—94)的检测法,属生物检测法。其测定原理基于抗生素对微生物的抑制作用。如果牛奶中含有抗生素,则加入菌种(嗜热链球菌)经培育2.5~3小时后,加入TTC指示剂(三苯基四氮唑)不发生还原反应,所以样品呈无色状态;如果牛奶中不含抗生素,则样品呈红色.这样实验后样品颜色不变的为阳性,样品染成红色的为阴性。
TTC法的具体操作步骤:
1.菌液制备:将单菌种(嗜热链球菌)以脱脂乳为培养基,在36±1℃培养箱中培养15小时后,再以脱脂乳以至于1:1稀释待用;
2.取待检样液9mL,在80℃水浴加热5分钟后冷却到37℃以下,加活菌液1mL,在36℃±1℃水浴2小时,加入4%的TTC指示剂0.3mL, 36℃±1℃水浴培养30分钟;
3.若样液颜色不变为阳性,呈红色为阴性;若阳性的样液,再置于水浴中培养30分钟,不显色的为阳性,呈红色为阴性.
TTC法测定各种抗生素的灵敏度为:青霉素:4ppb,链霉素:500ppb,庆大霉素:400ppb,卡那霉素:5000ppb.它具有费用低,易开展的优点;缺点是耗时长,要求操作人员需有一定专业知识且实验过程中菌液的制备、水浴过程控制都要求严格遵守操作规程,否则易出现假阳性,以致出现检验结果的不稳定性。
Delvotest? sp法(戴尔沃检测法)
该法最早在香港传到广东的,其使用是基于20世纪80年代初香港要求广东出口的生奶必须“无抗”且要求采用Delvotest法检测。该方法也是生物测定法,其试剂是由荷兰DSM公司生产并由AOAC认证。原理是利用微生物—嗜热芽胞菌在64℃条件下培养2.5~3小时后会产酸,酸引起指示剂BCP(溴甲酚紫)变为黄色;若牛奶样品中不含抗生素,培养后样品呈黄色,如样品中含有抗生素, 嗜热芽胞菌生长受到抑制而无法产酸,指示剂将不变色.
Delvotest? sp 法的操作步骤:
1.以无菌操作将一片营养药片夹放入小试管内;
2.用微量移液管将0.1mL牛奶样品注入小试管内;
3.把小试管放入已预热至64℃的水浴箱或恒温器中培养;
4).定时3小时取出观察颜色变化.如果底部2/3的固体介质是黄色,则为阴性, 如果底部2/3的固体介质是紫色,则为阳性.
Delvotest? sp 法具有广谱性,可检测到?-内酰胺类抗生素在内的更多抗生素,如磺胺类、四环素类、大环内酯类、氨基糖苷类、氯霉素等,其中对青霉素和磺胺类抗生素特别灵敏. 其灵敏度为:青霉素:3ppb,链霉素:300ppb,庆大霉素:400ppb,卡那霉素:2500ppb。Delvotest? sp 法集操作方便,严格实用,容易判断,结果可靠,费用适中等优点;但也易出现假阳性,实验证明:当牛奶样品中添加微生物防腐剂(如乳酸链球菌素—Nisn)或样品中有足够的洗涤剂残留时,便可影响嗜热芽胞菌生长而使实验为阳性。
Snap?法
该方法是酶联免疫法,由美国IDEXX公司生产其检测分析仪及其试剂盒,均获得AOAC认证,它利用了竟争酶联免疫技术。其基本原理是用特异性抗体将固相载体激活,加入含待测抗原的溶液和一定量的酶标记抗原在45℃±5℃共同保温,使样品内的抗生素与内置抗生素标志物竟争与固定的抗体结合,然后进行洗涤和显色,内置抗生素标志物与固定的抗体结合形成的复合体,通过酶的作用分解可形成有色物质,通过测定色度并与参照物对照,就可以确定结果是阳性或阴性。
Snap?法操作步骤:
1.加入乳样于样品管中,摇匀,加热样品和检测板5分钟;
2.加入乳样于样品孔中,当激活圆环开始退却时,按Snap键;
3.反应4分钟,由Snap?读数仪读取并打印结果.检测读数小于1.05时判为阴性,大于1.05时判为阳性.
Snap?法是一种将酶化学反应的敏感性和抗原抗体免疫反应的特异性相结合的方法,其敏感性和特异性好,检测的灵敏度以普遍使用的?-内酰胺类计:青霉素:5ppb,阿莫西林:10ppb,氨苄西林:10ppb,头孢西林:8ppb.其他抗生素如四环素等的检测,则需购买相应的试剂来检测. Snap?法检测结果快速准确, 9分钟内即可检测出牛奶中?-内酰胺类、四环素类、磺胺类等抗生素的残留含量,且有半定量的读数,可监控牧场用药的情况;检测仪器稳定性良好,结果重现性高,整个检测过程简单方便;但需购置专用仪器和试剂,成本较高。
高效液相色谱检测法
它是一种理化检测方法,是利用抗生素分子中的基团所具有的特殊反应来测定其含量.检测的过程采用了气相色谱理论,通过高压液相和高灵敏度的检测器,分离速度快、效率高和操作自动化。一般要经过样品的提取、脱蛋白、离心、层析柱净化、衍生化等步骤,能检测抗生素的具体含量,敏感性较高,但检测程序复杂,费用较高,需购买色谱仪等检测设备,不适合小型检验室。
传统的抗生素检测方法不少,有的操作烦琐,有的实验条件要求高,有的检验时间太长;这些不仅会给乳制品生产企业造成经济上和时间上的损失,而且检测结果常常会被原辅材料和人为操作等因素所影响.鉴于牛奶中抗生素残留是涉及人类健康的公共卫生问题,乳品企业及牧场应重视和加强检测工作,应用一些简单、快速和准确性高的方法来监控产品的质量,保证消费者的健康。
http://szddi.com/foodonline/newsdetail.asp?id=15933
反应原理
本产品主要是利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的基本原理来进行的。在整个反应当中,样品中氯霉素含量越多,反应呈色就越淡。反之,样品中氯霉素含量越少,则呈色越深。
试剂盒组成
1、微量测试孔:每条8孔,每板12条
2、氯霉素标准溶液:
0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35 ppb、4.05 ppb,1.5ml/瓶
3、10倍浓缩萃取稀释液:一瓶,30ml/瓶
4、10倍浓缩洗涤液:一瓶,30 ml /瓶
5、氯霉素酶标记物: 一瓶,8 ml/瓶
6、底物溶液:一瓶,12 ml/瓶
7、反应终止液:一瓶,13 ml/瓶
使用说明
A、注意事项
1、使用前先将氯霉素标准溶液6瓶,浓缩萃取稀释液,浓缩洗涤液,酶标记物,底物溶液及微量测试孔条置于室温下,回温30分钟。
2、原倍萃取稀释液及洗涤液配制
用蒸馏水将10倍浓缩萃取稀释液及浓缩洗涤液分别以1: 9的比例稀释(即1mL浓缩液+9mL蒸馏水),即可作为样品萃取稀释液与微孔板清洗液。
3、回温后,取出所需微量测试孔条,将剩余板条立即放回铝箔袋中用胶带封好,置于4oC保存。
B、样品制备
1.待测物为生乳,则依以下方法进行处理 (5倍稀释)
取100ul待测生乳加入400ul萃取稀释液,振荡混合后备用。
2.待测物为蜂蜜,则依以下方法进行处理
a.取2g蜂蜜、4ml蒸馏水与2ml 乙酸乙酯置入离心管中,震荡约5分钟,使其充分混合均匀。
b.离心10分钟(3000rpm),取0.5ml上清液(乙酸乙酯)至玻璃管中,于50℃下氮气吹干(温度请勿超过50oC)。
c.加入0.5ml萃取稀释液,震荡约10秒钟后备用。
3. 待测物为血清、则依以下方法进行处理
a.抽取待检动物血液,离心或静置取其较透明之上层液(血清层)使用,注意不要有溶血。
b.将3ml血清加入离心管中,再加入6ml乙酸乙酯,震荡混合约30秒。
c.离心10分钟(3000rpm),取2ml上层液(乙酸乙酯)至玻璃管中,于50oC下氮气吹干。
d.于此玻璃管中加入正己烷2ml,先将残余物完全溶解后,再加入1 ml萃取稀释液,震荡约30秒钟。
e. 离心10分钟(3000 rpm),用吸管吸去上层液(正己烷) 及中间乳化层部分,弃掉。再吸取下层液(水层)备用。
f.若有乳化现象,请先将大部分上层液(正己烷)取出后,再将玻璃管置入80oC水中,隔水加热约5~10分钟,可改善乳化情形。
4. 待测物为鸡肉或鱼、虾,则依以下方法进行处理
a.将3克样品剪碎后放入50 ml离心管中,再加入6ml乙酸乙酯,并以均质机均质约1分钟,再震荡约30秒。
b.离心10分钟(3000rpm),取2ml上清液(乙酸乙酯)至玻璃管中,于50oC下氮气吹干。
c.于此玻璃管中加入正己烷2 ml,先将残余物完全溶解后(若未能完全溶解,可能会导致回收率降低),再加入1 ml萃取稀释液,震荡约30秒钟。
d.离心10分钟(3000 rpm),用吸管吸去上层液(正己烷) 及中间乳化层部分,弃掉。再吸取下层液(水层)备用。
e.若有乳化现象,请先将大部分上层液(正己烷)取出后,再将玻璃管置入80oC水中,隔水加热约5~10分钟,可改善乳化情形。待测物为血清、则依以下方法进行处理
5.待测物为内脏(肝、心等),则依以下方法进行处理(5倍稀释)
同上述步骤a~d,但下层液吸出后,再以萃取稀释液稀释5倍(即下层液50ul加萃取稀释液200ml)。
6.待测物为饲料,则依以下方法进行处理(10倍稀释)
同上述步骤a~d,但下层液吸出后,再以萃取稀释液稀释10倍(即下层液30ul加萃取稀释液270ml)。
C、操作步骤
本产品的酶标记物与氯霉素标准溶液均直接使用,无需再稀释。
1、于适当微孔中分别加入100mL标准溶液(0,0.05,0.15,0.45,1.35和4.05ppb)。
2、在另外的微孔中加入100mL 已完成前处理的样品溶液。
3、再于每一微孔中另再加入50mL酶标记物。
4、轻敲盘子四周,使其充分混合后于室温下避光静置温育1小时。
5、将微孔中的反应液甩掉,再将洗液加满每一微孔后甩掉,重复洗3次。
6、最后一次甩掉后,在吸水纸上拍干。
7、于每一微孔中加入底物溶液100mL后,轻敲盘子四周,使其充分混合。
8、于室温下避光静置温育20分钟。
9、于每一微孔中加入100mL反应终止液。
10、用酶标仪于波长450nm下判读。
D、判定
1. 计算B/B0值。用样品或标准液吸光度值(B)除以零标准吸光度值(B0)再乘以100%。
2. 以B/B0值为纵坐标,以标样浓度的对数值为横坐标,做标准半对数曲线。
3. 根据每个样品的B/B0值就可从曲线上读出相对应样品的浓度。
4. 由于样品经过了预先稀释,因此根据标准曲线所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释倍数。
E、标准曲线
F、灵敏度
氯霉素试剂检测盒的平均检测下限为 0.05ppb,此浓度之吸光值与阴性标准溶液(0ppb)之吸光值有明显的差异。
G、 特异性
针对以下抗生素进行交叉反应之测试,结果如下:
Chloramphenicol =100%
Chloramphenicol(free base) <0.1%
Gentamycin <0.1%
Tetracycline <0.1%
Penicillin G <0.1%
Sulfamethazine <0.1%
H、再现性
针对氯霉素检测试剂盒精密度测试,重复6次,所得不同浓度标准溶液的吸光值变异系数(%CV)如图2所示,显示氯霉素试剂盒有很高的再现性:
I、回收率
生乳(添加1.0ppb)104~117%
蜂蜜(添加0.3ppb)90~110%
虾及鱼肉(添加0.5ppb)95~110%
鸡肉(添加0.5ppb) 90~120%
血清(添加0.5ppb)100~120%
内脏(添加1.0ppb) 100~120%
饲料(添加2.0ppb)80~110%
氯霉素检测试剂盒
简介
氯霉素(Chloramphenicol)是一种广谱抗生素。由于其具有效果好以及价格低廉等优点,目前已被普遍应用于各类家禽、家畜、水产品及蜂制品的各种传染性疾病的治疗。然而氯霉素有其严重的副作用,它会抑制人体骨髓的造血功能,从而引起再生障碍性贫血和粒细胞缺乏症。目前,我国已禁止其使用。
我公司采用国内外先进的工艺与技术,研发出氯霉素ELISA检测试剂盒,简化了样品处理方式,使用简便,省时省力省钱,整个操作过程不到90分钟。本产品检测范围广(鸡肉、鱼、虾、蟹、牛奶、血清、肌肉、组织、饲料与蜂蜜等),回收率为80%-120%,灵敏度可达到0.05ppb,是各类企业及各级政府检测机构的理想产品。
简单
1. 样品提取方便快捷。
2. 90分钟得到结果。
3. 只需基本的实验室设备。
4. 操作人员只需最基本的实验知识。
准确
1. 结果重现性高。
2. 精确至0.05ppb。
3. 与其它抗体的交叉反应率极低。
技术支持
我们为用户提供最方便、快捷、周到的服务。
产品规格
包装:每包96孔
灵敏度: 0.05ppb
测试区间:0.05ppb-4.05ppb
检测时间:80分钟(提取后)
储存条件:2-8℃
http://www.practical-bio.com.cn/htm/procts_05.htm
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这些限值指标要求是强制性要求,不论是明示执行相应国家标准、行业标准、地方标准、团体标准或者企业标准的肥料,还是未标明执行标准的进口肥料,只要明示用于农田,都必须达到的限值要求。