色谱检测黄曲霉毒素方法

1. 家庭如何检验黄曲霉素

一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法是利用单克隆抗体而设计的固相免疫分析法。

由此产生的一步式黄曲霉毒素快速检测试纸可在5—10分钟完成对样品中黄曲霉毒素的定性测定，借助黄曲霉毒素标准样品这种方法能估算黄曲霉毒素的含量，非常适用于现场测试和进行大量样品的初选。

薄层分析法(TLC)是检测黄曲霉素最为经典的方法，也是以前最为常用的方法，至今仍为一些检测机构所用，也是一种国标方法。其原理是针对不同的试样，用适宜的萃取溶剂将黄曲霉素从试样中萃取出来，经柱层析净化后，再在薄板上展开后分离。

(1)色谱检测黄曲霉毒素方法扩展阅读：

HPLC法是近年来发展起来的一种检测方法。其原理是在高效液相色谱仪上添加柱后衍生系统分离，再用荧光检测器测定。与其配套的柱后衍生系统有碘衍生化法、溴衍生化法及较为先进的电化学衍生化法和光化学衍生化法。当前，该方法大多用免疫亲和柱来净化、分离，其净化效果优异。

该法能准确地分离不同种类的黄曲霉素(例如：AFB1、AFB2、AFG1和AFM1等)，检测速度快且定性与定量准确，检测限低，可作为仲裁法使用，但仪器设备价格昂贵，前处理方法相对繁琐，若用到免疫亲和柱则会使试样检测费用增加，对操作人员的身体健康仍存在一定的危害。

2. 如何检测黄曲霉毒素M1

检测黄曲霉M1的方法一般就是免疫亲和层析净化高效液相色谱法和酶联免疫吸附法（试剂盒）这两种方法。前一种方法主要使用到高效液相，后一种使用的是酶标仪。由于高效液相色谱法费用高试用繁琐，所以现在市场上检测黄曲霉M1主要还是酶联免疫法。

CSY-E96H黄曲霉毒素快速检测仪 （黄曲霉素快速检测仪|黄曲霉素检测仪|黄曲霉毒素测试仪）采用固相酶联免疫吸附ELISA的原理,即酶联免疫法；可定量检测粮食、食品、饲料、油脂、乳制品、药物、饮料、牛奶、酒等产品中的黄曲霉毒素(B1，B2，G1，G2 M1 M2 AFM1、AFP1、AFQ1、AFB1-2，3-环氧化物）含量。并且可以连接食品安全监控系统，黄曲霉毒素快速检测仪、药物残留检测仪广泛应用于产品质量监督检验、卫生防疫、环境保护、工商管理、水产品批发市场、面制品生产基地、养殖场、粮库、超市、商场、各大食品安全监测系统等部门。

3. 黄曲霉毒素B1的检测方法

GB2761-2014《食品安全国家标准 食品中真菌霉素的限量》中对于黄曲霉毒素B1的限量以及检测方法做了修改，婴幼儿配方食品及婴幼儿辅助食品按照GB5009.24规定的方法测试，其他食品按照GB/T18979规定的方法测定。 TLC法是测定黄曲霉毒素的经典方法，是中国测定食品及饲料中AFT黄曲霉素B1(AFB1)的标准方法之一（GB/T5009.23-2006）。其原理是针对不同的样品，用适宜的提取溶剂将AFB1从样品中提取出来，经溶剂萃取纯化，再在薄层板上层析展开，分离，利用AFB1的荧光特性，根据荧光斑点的大小和强弱，比较测定黄曲霉毒素含量。
TLC有单项展开法和双向展开法，TLC法由于设备简单，易于普及，所以国内外仍在使用，但由于该法样品前处理繁琐，且提取和净化效果不够理想，提取液中杂质较多因而在展开时影响斑点的荧光强度，而双向展开虽避免了杂质干扰，增加了灵敏度，但增加了操作步骤和时间。 酶联免疫法检测AFB1的理论基础是抗原抗体反应，其采用单克隆或多克隆抗体技术，具有特异性强、分析时间短等优点。其原理是抗原（或抗体）吸附于载体上的免疫吸附剂和用酶标抗体（或抗原）与标本中的待测物（抗原或抗体）起特异的免疫学反应，最后用测定酶活力的方法来增加测定的敏感度。大体分为2类：一是用双抗体夹心法检测样本中的AFTB1， 二是用竞争法检测样本中的AFTB1,。为了使用方便，目前国内外已研制了酶标记免疫吸附测定试剂盒及配套仪器,方法也被列入国家标准(GB/T5009.22 1996第二法)。
但由于ELISA法中酶的活性易受反应条件影响，因此ELISA法测定结果稳定性较差，分析结果的准确性不高，容易出现假阳性结果。 一般来说，组织中黄曲霉毒素含量很低，而液相色谱串联质谱法具有比高效色谱法更高的灵敏度和准确性，如今这种方法还极少使用在测定组织霉菌毒素含量中。该方法检测限可达0.02~0.025 ppb。 84%甲醇水溶液提取样品中,正己烷脱脂,HLB固相萃取柱净化。采用电喷雾电离,正离子扫描,选择多反应检测模式（MRM）监测,外标法定量，该法灵敏,结果可靠。

4. 黄曲霉毒素M1怎么检测

病情分析：检测黄曲霉M1的方法一般就是免疫亲和层析净化高效液相色谱法和酶联免疫吸附法（试剂盒）这两种方法。
指导意见：前一种方法主要使用到高效液相，后一种使用的是酶标仪。由于高效液相色谱法费用高试用繁琐，所以现在市场上检测黄曲霉M1主要还是用的后一种方法。

5. 高效液相色谱仪测定茶叶中黄曲霉毒素B1的方法是什么

楼主你好：
高效液相色谱仪测定茶叶中黄曲霉毒素B1的方法
1.适用范围本方法适用于出口茶叶中黄曲霉毒素B1含量的检验。
2.原理概要样品用三氯甲烷提取，提取液经硅胶柱净化，净化后的提取液用三氟乙酸衍生，用配有荧光检测器的高效液相色谱仪测定，外标法定量。
3.主要试剂和仪器3.1.主要试剂三氯甲烷；正己烷；苯；甲醇：紫外光谱级；乙腈：紫外光谱级；三氟乙酸；乙腈-水溶液（1＋1）；三氯甲烷-甲醇溶液（95＋5）；苯-乙腈溶液（98＋2）；黄曲霉毒素B1标准品：纯度≥99%；黄曲霉毒素B1标准溶液：准确称取适量的黄曲霉毒素B1标准品，以苯-乙腈溶液于棕色容量瓶中，配成浓度为10μg/mL标准贮备液。根据需要，再配成适当浓度的标准工作溶液。3.2.仪器高效液相色谱仪，配有荧光检测器；天津恒奥硅胶小柱；天津恒奥振荡器：HMS系列；天津恒奥超声波：HU、HS系列；
天津恒奥氮吹仪；天津恒奥滤膜：有机系用，0.45μm；天津恒奥微孔滤膜过滤器
旋转蒸发器；微量注射器；离心管：5mL具塞磨口；粉碎机。
4.试样的抽取与制备4.1.抽样方法从整批产品堆垛的上下不同部位随机抽取2.2规定的件数，逐件开启。分别倒出全部茶叶于塑料布上，用取样铲从每件中各取出有代表性的样品约500g。将所取样品充分混匀，用四分法或分样器逐步缩分出500g，装入洁净密封的样品筒内，加封后，标明标记，及时送实验室。4.2.试样制备将所取回样品全部磨碎，通过20目筛，混匀，均分成两份试样，装入洁净容器内，密封，标明标记。4.3.试样保存将试样于室温下保存。注：在抽样和制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。更多质量检测、分析测试、化学计量、标准物质相关技术资料请参考国家标准物质药检所标准品目录，药品对照品请参考 http://www.rmhot.com/plist_3/plist_3_0_0_1.html
5.过程简述5.1.提取称取试样5.0g（精确到0.1g）置于100mL具塞锥形烧瓶中，加入15mL三氯甲烷，于振荡器上提取30min，然后经垫有玻璃纤维的漏斗过滤。收集滤液于旋转蒸发器的具尾管圆底烧瓶内，并用三氯甲烷洗涤滤渣，收集滤液至约20mL。5.2.净化用旋转蒸发器将上述滤液在50℃水浴中浓缩至约1mL，经0.45μm滤膜过滤后，注入硅胶小柱中。用2～4mL正己烷洗涤烧瓶后淋洗小柱，弃去流出液。然后用3～4mL三氯甲烷-甲醇溶液以每秒钟2滴的流速洗脱，收集洗脱液于离心管中。用氮气仪缓缓吹干，供衍生用。5.3.衍生5.3.1.试样加200μL正己烷和50μL三氟乙酸于上述离心管中，盖紧磨口塞，超声振荡1min，静置10min，用氮吹仪缓缓至干。用乙腈-水溶液（1＋1）定容至1.0mL，超声1min，用0.5μm滤膜过滤，滤液供液相色谱用。5.3.2.标准工作溶液取1.0mL标准工作溶液，用氮吹仪缓缓吹干，按5.3.1步骤操作。5.4.测定5.4.1.色谱条件色谱柱：NOVA PAKc18，300mm×3.9mm（内径）；流动相：甲醇-水溶液（42＋58）；流速：0.8mL/min；荧光检测器：激发波长375 nm，发射波长425 nm；色谱柱温度：室温。5.4.2.测定根据样液中黄曲霉毒素B1的含量情况，选定峰高相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中黄曲霉毒素B1衍生物的响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作溶液和样液的衍生物溶液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，黄曲霉毒素B1衍生物保留时间约为8min。5.4.3.空白试验除不加试样外，按上述测定步骤进行。
6.结果计算用色谱数据处理机进行数据处理
7.低限和回收率测定7.1.低限本方法的测定低限为0.001mg/kg。7.2.回收率回收率的实验数据：黄曲霉毒素B1的添加浓度在0.001～0.5mg/kg范围内，回收率为89.1%～104.9%。