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糖化血红蛋白检测方法硼离子

发布时间:2023-02-15 20:32:39

‘壹’ 糖化血红蛋白(HbAlc)是检测什么

怎么这么多人问这东西啊,自己网络,别指望别人告诉你,那都是断章取义,由于缺乏专业知识,你很难判断哪些是你需要的,给你点资料吧

HbAlc就是糖化血红蛋白的主要成分,由于血糖受饮食、活动、药物的影响而波动,因此,测定一次血糖只能反映取血瞬间的血糖水平,而不能反映采血前一段时间血糖情况的全貌。而糖化血红蛋白是血红蛋白在红细胞整个生命期间缓慢地、持续地与葡萄糖结合的产物,可以反映采血前1~2月的平均血糖水平,这有利于对患者病情的评估和制定治疗方案。糖化血红蛋白包括HbAla、HbAlb、HBAlc,统称HbAl。HbAlc是糖化血红蛋白(HbAl)的主要成分,是目前常用的测定指标,也是反映血糖的最佳指标。HbAlc的正常值是<6.2%。一般认为糖化血红蛋白升高1%,大致反映过去1~2月平均血糖值升高30mg/dl。
以上是我拷贝的,是否合适你自己判断!

‘贰’ 十万火急 麻烦哪位高人解释下糖化血红蛋白酶法检测中THb试剂和GHb试剂。万谢

饭前餐后监测血糖未必精确 糖化血红蛋白才是“金标准”

饭前或餐后监测血糖,未必精确,因此,临床上有70%的Ⅱ型糖尿病人血糖未达标,导致心脏病、失明、肾病、截肢等并发症上升。内分泌专家提出,应使用国际“金标准”——糖化血红蛋白,每3至6个月检查一次来长期监测血糖,防止慢性并发症尤其是心脑血管并发症的产生。

糖化血红蛋白是“金标准”

上海市第六人民医院副院长、内分泌科主任、上海市糖尿病研究所常务副所长贾伟平告诉记者,很多患者认为监控了餐后或空腹血糖就足够了,但是空腹和餐后血糖的测定,只反映患者的某一具体时间血糖水平,并且容易受饮食、心情和糖代谢等各种因素影响,对血糖波动大的Ⅰ型糖尿病和注射胰岛素的Ⅱ型糖尿病患者来说,仅根据用餐前后的血糖状况来制定合理治疗方案,存在相当大的困难。
国际糖尿病联盟推出了新版的亚太糖尿病防治指南,明确规定糖化血红蛋白是国际公认的糖尿病监控“金标准”,必须控制在6.5%以下,患者应该每3至6个月到医院检测一次糖化血红蛋白。贾伟平表示,糖化血红蛋白是血液中红细胞内的血红蛋白与血糖结合的产物,指标越高说明糖尿病病情越重。糖化血红蛋白的比例,能反应测定前1至2个月的平均血糖水平,因而检查糖化血红蛋白是了解糖尿病长期控制情况的重要依据。

仅30%患者长期监控

在临床中,只有30%左右的患者能做到定期监控糖化血红蛋白。专家表示,良好的血糖控制是预防并发症的关键,而血糖监控在很大程度上取决于患者本人的认知和行动。
由于大部分患者选择可靠性不高的日常监测手段,目前超过60%的Ⅱ型糖尿病患者的糖化血红蛋白含量超过标准。糖化血红蛋白的增高对人体的影响是多方面的,它会改变红细胞对氧的亲和力,加速心脑血管并发症的形成;如果眼睛内的晶体被糖化,则会引发白内障;此外,它可引起肾小球基底膜增厚,诱发糖尿病肾病,并引起血脂和血黏度增高,糖化血红蛋白升高,是心肌梗死、脑卒中死亡的一个高危因素。在男性患者中,糖化血红蛋白每增加1%,死亡率的相对危险率增加24%,女性患者增加28%。一旦糖化血红蛋白超过7%,发生心脑血管疾病的危险性就增加50%以上。

双监测可减少并发症

如果在发现糖化血红蛋白太高时,就及时治疗,可大大减少发生中风、心脏疾病、肾衰竭、失明以及截肢手术的风险。平均每下降1个百分点的糖化血红蛋白,就会使糖尿病的死亡率下降21%,心肌梗塞和心脏病的危险性下降14%,糖尿病微血管症的危险性下降37%。为此,专家提醒,糖化血红蛋白应每3至6个月检查一次,糖尿病病人最好控制在6.5%以下,一旦超过7%,发生并发症的危险性就会增大。
在临床治疗时,如能同时测定血糖与糖化血红蛋白,可以更好地全面判断病情,及时调整治疗方案。当空腹血糖超过患者糖化血红蛋白对应的预测值时,则显示近期血糖控制不好,可能与采血时紧张、劳累、晚餐进食过多、治疗不当、急性并发症等有关,需要调整治疗方案。相反,如果空腹血糖低于对应的预测值,甚至达到正常标准,则显示近期血糖控制良好,治疗对症。

水果中含有大量的维生素、纤维素和矿物质,这些对糖尿病人是有益的。只不过吃水果要有一定的科学讲究。不能不吃,也不能多吃、乱吃。

首先,糖尿病患者应在血糖控制达标的情况下适量食用水果。即糖化血红蛋白<6.5%、空腹血糖<7mmol/L、餐后血糖<10mmol/L,满足这几个条件,糖尿病患者是完全可以适量食用一些水果的。

刘国良介绍,目前糖尿病患者常用的血糖监测指标有空腹血糖和餐后血糖。由于这两种测试方法只能反映瞬时血糖水平变化,需长期反复监测才能综合反映患者的血糖水平,耐受性差,存在局限性。长期依赖这样的血糖检测方法,不利于患者正确了解治疗效果和真实的血糖水平,影响治疗的有效性。

刘教授表示,糖化血红蛋白被称为是评估血糖控制的金标准,与传统血糖检测手段相比,糖化血红蛋白能够反映患者在较长一段时间里的血糖控制水平,具有更准确的临床意义。糖化血红蛋白测定与常规自我血糖监测的有机结合,有助于指导糖尿病患者和医师制定合理的治疗方案,从而使血糖得到较好的控制,最终减少糖尿病并发症发生的危险性。

另外,在选择水果的时候应注意选择含糖量少的水果。比如草莓、猕猴桃、苹果等都可以吃,而香瓜、香蕉、葡萄等含糖量较高,则是糖尿病患者的大忌。每次吃水果的时候可以参照一个苹果大小的量来食用,比如草莓,每次食用2-3两即可,不要贪多。吃完水果后,糖尿病患者应在下一餐中适量减少一点主食,以保证饮食平衡

糖化血红蛋白检测的方法

糖化血红蛋白(HbA1c)检测的方法很多,测定方法主要有四类:色谱法、电泳法、免疫法和化学法。色谱法主要有离子交换层析法、高效液相色谱法(HPLC)和亲和层析法等。
由于糖化血红蛋白的测定方法众多,还缺乏标准化参考方法,国际上正建立这类参考方法。目前最常用的HbA1c测定方法是离子交换层析法和电泳法。前者精密度高、重复性好且操作简单,已被临床广泛采用。国内主要采用Bio-Rex70阳离子树脂微柱层析法,其微柱可重复使用多次。正常参考值:HbA1c:X±2s=6.5±1.5%;>8.0%为HbA1c增高。

离子交换层析法,分手工和仪器两种。手工微柱有Bio-Rad和西班牙BIOSYSYEMS等多家公司产品,手工微柱操作会受到人工因素影响,可能会洗脱不完全或过度洗脱,并受外界环境温度的影响,而某些血红蛋白如HbF异常增加时,也会与糖化血红蛋白同时洗脱,从而使结果产生偏差。相应的仪器以英国DREW SCIENTIFIC公司DS5糖化血红蛋白仪为例(BIO-RAD公司DIASTA亦为同一产品),采用微柱法离子交换层析和梯度洗脱技术可全自动分离血红蛋白的变异体与亚型,除可测定糖化血红蛋白外,还可同时检测出HbS与HbC的存在与否,在计算糖化血红蛋白值时会自动扣除变异体产生的影响,从而使结果更为准确,可靠,CV值小于2%。同时该仪器配有专门的稀释溶血器,可直接进行全血操作,5分钟即可报告结果,并自动储存样品检测结果,层析柱价格也较为低廉,适合于较多标本的医院检测。更大型的仪器有DREW SCIENTIFIC公司的Hb-Gold,除可全自动测定糖化血红蛋白外,还可分离检测血红蛋白的600多种变异体和亚型,用于地中海贫血等疾病的诊断。

亲和层析是目前糖化血红蛋白检测的新方法,该方法特异性强,不受异常血红蛋白的干扰。英国DREW SCIENTIFIC公司的DSI糖化血红蛋白分析仪日前刚刚获得美国食品药品管理署(FDA)的认可获准上市,作为目前世界唯一的快速床边糖化血红蛋白仪,它采用硼酸亲和层析法,只需10ul全血即可在4分钟内快速分离检测糖化血红蛋白,为临床提供即时的化验结果,从而使医生在患者就诊的第一时间明确诊断并制定相应的治疗方案,特别适合于临床科室使用,尤其对于小儿患者而言更有优势。其检测结果也完全达到并超过临床要求,CV值在5%以内。

高压液相方法的仪器有Bio-Rad公司的VariantⅡ等,可全自动分离测定糖化血红蛋白及血红蛋白的变异体和亚型,但仪器的操作保养要求较高。

免疫凝集法的原理是糖化血红蛋白与相应的单抗结合进而发生凝集反应,通过测定吸光度来表示凝集量,可用于全自动生化分析仪上进行测定。专用的仪器也有Bayer的DCA-2000,要求对样品成批试验,每次试验均应使用一个新试剂盒,操作前应注意混匀试剂。需要指出的是免疫凝集法测定糖化血红蛋白,精密度较差,CV值一般大于6%。

离子捕获法亦是新近发展起来的新方法,代表仪器有Abbott的IMX,其原理是糖化血红蛋白与相应抗体结合后,联以荧光标记物,形成一反应复合物,再联结带负电荷的多聚阴离子复合物,而在IMX反应孔中的玻璃纤维预先包被了高分子的四胺合物,使纤维表面带正电,使前述的反应复合物吸附在纤维表面,经过一系列清洗后测定其荧光强度,从而得到糖化血红蛋白的浓度,该方法适用于成批糖化血红蛋白标本的检测。

电泳方法如毛细管电泳也能分离检测糖化血红蛋白和血红蛋白的变异体,但目前尚无商品化,具有批量样本通过能力的仪器面世,相当程度地限制了该方法的临床应用。

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‘叁’ 如何检测自身是否患有糖尿病

如果想要知道自己是否有糖尿病,需要到医院检查,如果血糖异常程度达到了糖尿病的诊断标准,即可诊断为糖尿病。

2型糖尿病的诊断标准为:(1)典型的糖尿病症状(多饮、多食、多尿和体重减轻)加上随机血糖监测大于等于11.1毫摩尔/升;或加上(2)空腹血糖监测大于等于7.0毫摩尔/升;或加上(3)葡萄糖负荷后2小时血糖检测大于等于11.1毫摩尔/升;(4)无糖尿病症状者,需改日重复检查,以明确诊断。

虽然不能评自我感觉判断自己是否有糖尿病,但是在糖尿病初期,很多患者会出现典型的三多一少症状,即多饮、多食、多尿和体重减轻。这时候不能够大意,需要及时到医院接受检查,看是否为糖尿病引起的症状。

还有一些患者在患病初期并没有典型的三多一少症状,而是会出现乏力、头晕、嗜睡、脚像踩在棉花上的异常感觉,当出现这些症状时,也需要及时到医院检查血糖,看是否为糖尿病引起的。

很多人知道糖化血红蛋白,可以用于评估一段时间内的血糖波动,但其在我国不可作为糖尿病诊断。由于糖化血红蛋白的检测方法的标准化程度不高,不可用于糖尿病诊断。正常人的糖化血红蛋白范围在4%~6%之间,当一个人的糖化血红蛋白大于等于6.5%,可以作为诊断糖尿病的参考,此时需要检测血糖,以明确诊断。

对于自己是否得了糖尿病,如果是经常去看医生的人来说,不是一件难事。

去医院看病,很多时候都会检查“血常规”和“尿常规”,在这两项检查中,都会有“葡萄糖”含量。如果在血常规的检查报告单上“葡萄糖”指标超过了正常指标6.1较多,尿常规的“葡萄糖“也同时出现了+号,大夫一定会提醒你注意糖尿病的问题。大夫提醒了以后,可别当成耳旁风,患者就要去专门的“内分泌”科室去进一步检查来予以确诊。

但是,有很多人,一般并不怎么去医院,不能够及时得到大夫的警告。这些人血液和尿液指标超过了正常值,自己还不知道。一般如果超过的不多,很可能会毫无觉察。

在这种情况下,血液和尿液指标就会越来越超标,直至产生了症状。

首先你会发觉近期小便次数频繁,几乎是一小时一去。感觉总是口渴,老是想喝水。这时候,你就要想到:“我是不是得了糖尿病了”。

当然,如果你的周围有人有血糖仪,可以借用一下,让他帮助你测一下血糖,立马你就知道有没有糖尿病了。

如果检测血糖严重超标,唯一的办法就是去看内分泌科医生,然后在医师的指导下予以治疗。

我是小眼睛医生,希望我的回答,对你有所帮助。


糖尿病的诊断标准是什么呢?

对于有典型症状的糖尿病患者,空腹血糖应该大于或者等于7.0mmol/L,餐后血糖应该大于等于11.1mmol/L。

对于没有症状的人,仅仅是空腹血糖大于等于7.0mmol/L或者餐后血糖大于等于11.1mmol/L,重复测试一次,礽达到以上的患者。

对于没有典型症状的患者,仅仅是空腹血糖大于等于7.0mmol/L或者餐后血糖大于11.1mmol/L,糖耐量实验2小时的血糖大于11.1mmol/L者,都认为是糖尿病。



什么时候能够排除糖尿病呢?

如果糖耐量2小时血糖7.8-11.1mmol/L之间,是糖耐量减低。

如果空腹血糖在6.1-7.0mmol/L为空腹血糖受损,都不能诊断为糖尿病。


如果餐后血糖小于7.8mmol/L,同时空腹血糖小于5.6mmol/L,都可以排除糖尿病。


如果我反复发现血糖高,应该怎么办呢?

小眼睛医生认为你需要完善糖耐量试验、胰岛素试验、或者是C肽释放、以及糖化血红蛋白。


相比于胰岛素测量,C肽更加优势。

临床上,对于使用胰岛素释放的患者,血清中的胰岛素往往不能完全放映波动,需要测定C肽,能够反应身体内的胰岛素分泌状体。


为什么需要测糖化血红蛋白呢。

由于白蛋白的半衰期在17-20天,所以糖化血红蛋白能够反应1-2周之间的平均水平,不受血糖的干扰,所以可以作为你近期血糖水平的一个灵敏指标。


如果有什么不明白的,你可以评论告诉我。

当然是医学检测出来的噻!不过细细想来,我在陪读女儿的四年里,从来没有得过皮肤瘙痒的我,隔一段时间就会患一次病,主要是小腹、下身以及大腿处瘙痒,怎么擦药都不见好,我老是以为我湿热重,总是自作聪明地去药房买一些“湿毒清胶囊”或者“皮肤病血毒丸”等药来吃!如今回想起来,那就是血糖高的一种表现。对了,我还频频发作低血糖,其实也是血糖不稳定造成的。女儿高考结束后 ,我一体检,妈呀!血糖高达6.9 所以奉劝中年朋友们,一定要养成经常体检的习惯,最起码三个月或者半年体检一次。

糖尿病是我国第一大代谢性疾病,不仅患病人数众多,且发病具有“年轻化”的趋势。由于糖尿病起病较隐匿,不易察觉,因此大部分患者发现糖尿病时已有较长的病程,可能已对靶器官造成了不同程度的损害。那么,如何确定自己是否患有糖尿病呢?接下来,医学莘将为您解析。

判断有无糖尿病,可根据相关症状进行初步判断,必要时可通过血糖监测明确自己的判断。血糖显着升高后,尿中葡萄糖浓度升高,造成渗透性利尿,会产生“多尿”的症状;“多尿”导致人体丢失大量水分,饮水需求增加,伴随而来的是“多饮”;由于人体的血糖未得到有效利用,导致外周组织器官处于相对“缺糖”状态,故会出现食欲增加,导致“多食”;即使食欲增加,但依然存在葡萄糖的利用障碍,导致脂肪、蛋白质等组织分解增多,长此以往,会导致“体重下降”。因此,多尿、多饮、多食、体重减少,是糖尿病的典型症状,又称为“三多一少”,若出现了上述症状,应高度怀疑糖尿病,建议进一步检查明确病情。

虽然“三多一少”是糖尿病的典型症状,但并非所有糖尿病的患者都会出现“三多一少”,且糖尿病前期的患者通常无症状,因此,血糖监测是筛查糖尿病的有效手段。血糖监测包括空腹血糖与餐后2小时血糖监测,若空腹血糖达到7.0mmol/L,或餐后2小时血糖达到11.1mmoll/L,应考虑糖尿病,建议完善口服葡萄糖耐量试验明确诊断。需要注意的是,青少年起病的1型糖尿病,通常会以糖尿病酮症酸中毒为主要表现,如呕吐、腹痛、脱水、嗜睡、昏迷、呼气有烂苹果味等,此时需高度警惕,有可能是1型糖尿病,这类患者由于绝对缺乏胰岛素,故需要早期给予胰岛素控制病情,避免急性并发症的发生。

综上,判断有无糖尿病,可根据“三多一少”作为筛查线索,但血糖监测是筛查糖尿病最可靠的手段,包括空腹血糖与餐后2小时血糖,青少年应注意1型糖尿病的相关症状。

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如果说起糖尿病的典型症状是什么,相信大多数人都能答得上来,就是“三多一少”,即吃的多、喝的多、尿的多、体重下降,但这些症状并不能作为糖尿病的诊断来用,而且在绝大多数情况下,当这种情况了出现时,实际上糖尿病已经发生了好长时间,早已错过了糖尿病的早期诊断时机。

这是因为糖尿病的发生是由于胰岛细胞不能分泌足量的胰岛素,使血糖中的葡萄糖不能被充分利用而导致血糖升高的一种疾病。研究发现,在糖尿病的早期往往存在一种现象,即体内胰岛素并不缺乏,甚至高于正常水平,但细胞上与胰岛素结合的胰岛素受体功能防碍,致使胰岛素不能发挥作用而引起血糖升高,称为胰岛素抵抗。

这种状态下,胰岛细胞会反射性的分泌出更多的胰岛素来满足需要,而胰岛素降了具有促进血糖利用的作用下,还具有促进脂肪合成与贮存的功能,过多合成的脂肪便会贮存有皮下,导致体重增加甚至肥胖,这也就是为什么胖人更容易得糖尿病的原因。

随着胰岛素抵抗的持续存在,由于胰岛细胞长时间在超负荷工作,正常功能便会受到损伤进行发生防碍,胰岛素的分泌理大为减少,不仅血糖不断升高,脂肪合成也逐渐减少,原本贮存的脂肪不断消耗,体重便开始下降,逐渐出现消瘦。

所以,要想了解自己血糖是否异常,是否发生了糖尿病,最可靠也是唯一的办法就是检测血糖,根据血糖的高低来做出准确的判断。医学上对异常血糖和糖尿病制定如下标准,平常可以随时检测血糖后对照这个标准来做自我分析判断:

要确定是否患有糖尿病需要去医院进行检查。医院通常会根据受测人员的症状以及血糖测试的数值来判断是否患有糖尿病。

1、确诊测试方法

常见的方法有三种:

(1)随机血糖测试

这种方法对于有严重糖尿病症状(食多、饮多、尿多、消瘦)的受测人员比较适合,是一种比较便捷的测试方法。

结果分析: 随机选择时间进行血糖检测,如果测量结果 11.1mmol/l(200mg/dl),则可确诊为糖尿病。

对于没有明显糖尿病症状的受测人员来说,在血糖测试结果 11.1mmol/l(200mg/dl)时,择日再随机进行两次测试,如果测试结果均 11.1mmol/l(200mg/dl),即可确定为糖尿病。

(2)空腹血糖测试

测试前最少8小时受测人员没有吃饭(可以喝水),一般在早上进行测试。

结果分析: 如果受测人员空腹测试的血糖值 7mmol/L(126mg/dl),且有明显的糖尿病症状,则可确定为糖尿病。

对于没有明显症状的被测者,如果血糖测试结果 7mmol/L(126mg/dl)时,再进行随机血糖测试(一般选择餐后2小时),若结果 11.1mmol/L,可确定为糖尿病。

(3)口服葡萄糖耐量测试(OGTT)

这种方法主要是测试人体调节葡萄糖的能力,常用于妊娠期糖尿病的检查,总共需要2~3个小时。受测人员会被要求服用75克的葡萄糖溶液(约300毫升),并收集其在之后30分钟至3小时以内的血糖数值,通常以服用后2小时的血糖值作为判断依据。

结果分析: 如果测得2小时的结果 11.1mmol/l(200mg/dl),即可判断为糖尿病。对于孕妇来说,测试结果若 8.5mmol/L(153mg/dl),即可判断为妊娠期糖尿病。

2、辅助测试方法:

除了上述测试可以直接确诊糖尿病之外,还有两个常见的辅助诊断方法。

(1)糖化血红蛋白(A1C)

糖化血红蛋白检测反馈的是受测人员近三个月的平均血糖水平,国内目前仅将其作为糖尿病诊断的参考项目,一般测试结果 6.5%,则考虑为糖尿病,但仍需上述三种血糖检测方法来确诊。

(2)尿糖检测

这种方法只能初步检测血糖的高低。如果尿糖检测呈阳性,则说明人体血糖水平较高,超出正常水平。但仍需进行血糖检测来判断是否患有糖尿病。


您可以关注下“问上医”定期发布的内容和专栏,其中就有与糖尿病相关的内容。

概述

糖尿病是因胰岛素分泌绝对不足及/或作用缺陷(相对不足)而引起以糖代谢紊乱为主的全身代谢障碍;以持续性高血糖为特征,临床上表现为多饮、多食、多尿、和体重下降为典型症状的内分泌、代谢性疾病。因其与 社会 心理、情绪相关密切,所以糖尿病属于慢性心身疾病之一。

糖尿病的典型症状就是“三多”症群,无症状或者症状较轻诊断都是靠化验,主要是在 健康 体检或者是其他疾病检查中偶然诊断出糖尿病,还有不少患者是首先发现糖尿病的并发症,然后才追溯病根诊断出糖尿病。不论是有无症状或并发症,糖尿病的关键诊断首段就是根据家族史、患病史、临床表现、血糖等生化检查而定,并应对糖尿病类型、代谢紊乱程度以及对存在的并发症和伴随症及其病情程度作出估计,还须排除其他类型糖尿病。而且要参照糖尿病的最新诊断标准确诊。

糖尿病不能根治

根治糖尿病这是每个病人及其家属的梦想,也是医学工作者的追求,但目前的医学水平,尚达不到根治糖尿病的目的。

目前没有任何一种中药或西药可以根治糖尿病,糖尿病的治疗必须是终身的。

糖尿病的自我诊断:

糖尿病的早期一般有多种表现形式,而患者可根据这些表现对自我进行诊断,以便及时就医。 1、不管吃多少,总觉得饿,有些人过去不喜欢吃得甜食,现在也变得喜欢吃了。

2、时常口渴,饮水量比平时明显增多。

3、小便次数增多,一天排尿量多达3-5千毫升。

4、齿槽溢脓。

5、视力无原因的下降,视物模糊。

6、身上发痒或皮肤反复感染。

7、出现肌肉痉挛,腿肚子抽筋。

8、身体倦懒无力,耐力减退。

9、体重下降,普得消瘦。

10、男子出现阳痿。

如果发现以上情况三种以上者,即应该引起注意,可能为糖尿病发病症状,应该及时到医院进行详细检查,进行确诊,以免耽误治疗。

糖尿病的常规诊断:

糖尿病诊断的唯一标准是血糖。

血糖即血液内的葡萄糖,是肌体的能源之一。正常成人的血糖水平是:空腹血糖(FBS):3.6-6.1mmol/L(69-109mg/dl),餐后2小时血糖(20PBS):3.6-7.7mmol/L(65-139mg/dl)。 在测血糖时应该注意,空腹血糖,时间应在12小时内;餐后2小时血糖,是从吃第一口饭开始计算时间。

1、有糖尿病症状为:空腹血糖 7.8mmol/L(140mg/dl) ,或者在平时任何时间血糖 11.1mmol/L(200mg/dl)即可诊断为患上糖尿病。

2、有糖尿病症状而血糖没有达到上述标准,应该再作糖耐量试验。成人空腹口服葡萄糖75g后2小时测血糖,如果血糖 11.1mmol/L(200mg/dl)即可诊断为糖尿病。血糖

‘肆’ 糖化血红蛋白的检测方法

1、阳离子交换色谱法
原理:糖化导致血红蛋白分子表面阳离子丢失。在弱的阳离子交换剂中,例如Biorex70,伴有增加的离子浓度和(或)pH下降,糖化血红蛋白在非糖化血红蛋白前先洗脱。这现象产生了糖化血红蛋白最初的术语“快速血红蛋白”。阳离子交换色谱法可用于小型、微型或大型柱层析方法或部分或全自动的PHLC/FPLC方法。因为,其他翻译后修饰血红蛋白,例如醛亚胺型、甲酰化、乙酰化、乙醛加合物、降解物、老化人工物品和异常血红蛋白电荷交换也不同于正常的HbA0,所以已经列出了许多阳离子交换层析法的干扰因素。使用常规HPLC的方法。分离糖化血红蛋白亚组分是能达到满足需求的临床精密度。然而,已知HbA1c的峰不是均一的而是包含一重要的非糖化血红蛋白部分。少数糖化血红蛋白也整合到HbA0主峰中。通过使用特殊的柱原料(poly-CATA)和30~40 min分离时间可以改善分离效果。这些方法可以作为参考步骤但不适合常规使用。所有的阳离子交换色谱法对pH和温度的变化敏感,因此要控制pH和温度。
说明:根据红细胞代谢动力学推测初始HbA1c值大约每日破坏1/120(≈0.83%)。因为糖化在合适的治疗下甚至健康人也产生,故这个理论值在体外不能达到。控制不理想的糖尿病患者通过加强治疗而达到血糖量正常,可以发现HbA1c值最大下降率以大约每10 d下降正常血糖的1%(绝对的)。由于测定糖化血红蛋白方法的精确性,两次测定值HbA1c的差异大约1%就可认为具有临床相关性。因为这些原因,在HbA1c两次测定间至少有2周的时间,推荐4~6周的间隔。
因为升高的糖化血红蛋白值是长期高糖血症的糖尿病患者相当可靠的指示剂,因而是可能诊断糖尿病的。在未治疗的个体,正常的糖化血红蛋白值临床上可以排除明显的糖尿病。但由于它不能检测糖耐量受损,所以作为诊断和(或)筛选目的唯一的参数,使用糖化血红蛋白是存在问题的。
2、电泳法
原理:相比于非糖化血红蛋白,因糖化而变化的总电荷和糖化血红蛋白的等电点变化是琼脂糖凝胶或者pH梯度5.0~6.5的凝胶等电聚焦电泳分离的基础。琼脂糖凝胶电泳的血红蛋白亚组分分辨率很小,而等电聚焦可以更好地使亚组分分离。可能由于试验的自动化程度不足,重要性已经下降。
3、亲和层析法
原理:硼酸结合顺式-羟基。商品化的m-氨基苯硼酸琼脂糖共价结合的亲和柱已可用于微柱分析检测。将血样本中的血红蛋白加到层析柱后,所有的糖化血红蛋白(HbA1和旁链糖化的血红蛋白;总糖化血红蛋白)与硼酸结合而非糖化血红蛋白通过层析柱可被测量。在加入高浓度也包含顺式-羟基的多羟基复合物,例如山梨醇后,糖化血红蛋白与硼酸的结合被替换而从柱子上洗脱下来。亲和层析法对经翻译以后修饰的血红蛋白和病理血红蛋白的影响相对不敏感。利用亲和层析法,仅能测定总糖化血红蛋白。广泛使用的亲和层析方法,允许用经验算法从总糖化血红蛋白值计算出“标准的HbA1c”。
4、免疫分析法
在缬氨酸β-N-末端糖化的血红蛋白提供了一个容易被抗体识别的抗原表位。可以用单克隆抗体或多克隆抗体进行放射免疫分析和免疫酶学分析测定,抗体特异识别β链N-末端糖化的血红蛋白最后4~8个氨基酸组成的抗原表位。异常的血红蛋白或翻译后经修饰的血红蛋白无干扰。
目前的免疫化学试验不仅检测HbA1c,通常也同时检测HbA2c,因为血红蛋白A2糖化δ链的表位是相同的。抗体直接抗β-链的最后四个氨基酸的糖化表位的免疫化学试验也可用进行检测,例如HbS1c。在大多数情况下HbA2c意义不大,虽然镰刀细胞病时可以准确地测定缬氨酸β-N-氨基末端糖化程度,但它仍不能100%代表HbA1c。
5、离子层析法
离子层析法精密度高、重复性好且操作简单, 被临床广泛采用。检测原理由于血红蛋白β-链N 末端缬氨酸糖化后所带电荷不同, 在偏酸溶液中总糖化血红蛋白( GH b) 及H bA 均具有阳离子的特性, 因此经过阳离子交换层析柱时可被偏酸的缓冲液平衡过的树脂来吸附, 但二者吸附率不同, GH b正电荷较少吸附率较低, H bA 正电荷较多吸附率较高。用不同pH 的磷酸盐缓冲液可以分次洗脱出GH b 和H bA, 用KCN 可将H b转化为高铁氰化血红蛋白, 用分光光度计测定。或者得到相应的H b层析谱, 其横坐标是时间, 纵坐标是百分比。HbA1c值以百分率来表示。现在大部分都用全自动测定仪测定。
6、等电点聚集法
是测定GH b的新技术, 它是在聚丙烯酞凝胶中加人载体两性介质的薄板上形成一个由阳极到阴极逐渐增加的pH 梯度, 溶血液中各个组份将移动到各自的等电点的pH 位置上, 这样就得到比一般电泳法更好的分划效果和比较集中的色带, 通过分辨率高的微量光密度仪扫描, 可以准确地测定出各自组份的含量。由于它能够分辨出一级结构不同的HbA、HbAc、HbF、HbS 及HbC等, 可完全避开各种物质的干扰。
7、化学发光法
采用离子捕捉免疫分析法, 应用抗原抗体反应原理, 联以荧光标记物, 通过连接带负电的多阴离子复合物, 吸附到带正电的纤维表面, 经过一系列彻底清洗等步骤后, 测定荧光强度变化率, 计算浓度。采用专用试剂包和免疫发光分析仪,其检测系统易于规范和重复, 可减少操作技术误差, 检测的灵敏度和特异性高, 批内、批间变异系数小, 回收率高, 准确度高, 交叉污染率小, 影响因素少。
8、酶法
原理为用特殊蛋白酶分解Hb, 3~ 5 min内果糖基氨基酸从H b分离, 果糖基氨基酸氧化酶( FAOD )从果糖基氨基酸产生H2O2, H2O2经POD与DA- 64反应, 选择751 nm 测吸光度改变求得GHb浓度。

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