玻利维亚病毒检测方法

A. 花卉类病毒的诊断和鉴定方法有哪些

类病毒因为不具有外壳蛋白，所以不能用血清学、电镜等方法来诊断和检测。类病毒常用的检测方法有生物学检测、双向电泳、RT-PCR和分子杂交等方法。

1 生物学检测

利用类病毒的特异鉴别寄主来诊断和检测。如菊花矮化类病毒（CSVd），可以从待检样品中抽提低分子RNA，接种到特定的指不植物，如菊花的Mistletm品种、爪哇三七（Gynura auanyiana）、番茄（Lycopersicon esculentum）。接种缓冲液的组成是100mmolTris，10mmolEDTA，pH7.5。接种时用沾有接种原的刹须刀在菊花和爪哇三七的茎部轻轻切割5～10刀，再用棉棒涂抹。番茄可以用4～5叶期的幼苗直接用涂抹法接种。被接种植物放在30℃左右的温室培育，观察症状。接种36d后，菊花上出现黄色斑点，顶叶较少，从上数第3～5叶上症状更明显。接种45d后，爪哇三七出现顶叶卷曲症状。但没有柑橘裂皮病类病毒接种时症状明显。接种60d后，番茄上不表现任何症状。但回接菊花的Mistletm品种，证明CSVd在番茄上属于潜伏侵染。

生物检测需要严格的温度条件，如果温度条件控制不严格便难以得到可信的结果。此外，检测批量样品，还需要较大的空间。

22 双向电泳检测

2.1 核酸的抽提

抽提缓冲液的组成为0.13mol Tris-HCl、0.017mol EDTA、1mol LiCl、0.83%DS，5%PVP，简称为TESLP。1g鲜菊花叶片加2～5倍体积的TESLP缓冲液磨碎，加入等体积的水饱和酚∶氯仿（1∶1）处理，离心分离后用乙醇沉淀回收全核酸。之后用methoxy ethaml除去多糖，用CTAB回收核酸，加等体积的4mol的LiCl，离心回收2mol LiCl的可溶组分，用乙醇沉淀浓缩后溶于适当体积的TE（10mmol Tris-HCl，1mmol EDTA，pH8.0）溶液中。

2.2 正反向电泳

按照Singh等的方法进行。首先在室温下用1倍TBE电泳缓冲液分离核酸，直到染料XC-FF达近底部的7.5%为止。然后换成加热到沸腾的0.125倍TBE电泳缓冲液，颠倒正负极并用表面加热器保持电泳板的温度在80℃以上，直到染料XC-FF到达胶的上端。电泳完后用银染色观察核酸的有无（图1）。

图1 正反向电泳法检测菊花矮化类病毒RNA示意图

与生物接种相比，正反向电泳凝胶电泳检测菊花矮化类病毒，可以从相当于2.8mg鲜重的菊花样品中检测到菊花矮化类病毒CSVd，并同时可检测10～20个样品材料。总之，制备用于正反向电泳的粗核酸的方法简便，需要的鲜叶量少，可以作为该类病毒的常规检测方法。正反向电泳凝胶电泳与双向凝胶电泳比较，省去了第一项电泳完后割胶回收的试验步骤，操作更为简便。

B. 葡萄扇叶病毒病是怎样检验与检疫的

鉴别寄主：可通过嫁接传染到木本指示植物或汁液摩擦接种草本鉴别寄主进行鉴定。常用的鉴别寄主及其症状表现如下。

沙地葡萄等及其种间杂种：产生系统性黄色花叶、环状和线纹斑及斑点，叶片和节间畸形。

苋色藜和昆诺藜：接种5～7d后，顶端叶片出现褪绿斑、明脉和系统性斑驳及叶片畸形。

黄瓜：接种叶产生淡绿色局部病斑，以后出现系统性花叶或斑驳。

菜豆品种Bountiful：接种叶局部褪绿斑，系统性褪绿或坏死花叶、斑驳或形成环斑。

千日红：接种后1周出现局部褪绿斑，以后变为红色斑。系统性褪绿斑，叶片扭曲。

本氏烟：系统性斑驳，叶片畸形，植株矮化。

克利夫兰烟：系统性斑驳和植株矮化。

枯斑寄主：烟草。

体外稳定性：

①钝化温度。中国分离物68～70℃，日本分离物60～65℃。

②稀释终点。中国分离物10-4，日本分离物10～10-4。

③体外存活期。20℃下中国分离物20～30d，日本分离物15～30d。

血清学检测：血清学病毒免疫原性中等，而且容易制备无寄主蛋白的抗原。凝胶扩散试验，抗原同抗血清反应产生一条清晰的沉淀带。最常用的是ELISA技术，采用该技术时，葡萄的叶片、休眠枝条韧皮部组织和幼根等均可作为检测材料。该病毒与南芥菜花叶病毒有近缘关系，二者可同时侵染葡萄，因此，采用血清学方法不能将其区分，需借助分子生物学的方法。

分子生物学检测：已制备出该病毒的RNA1和RNA2及卫星RNA相应的cDNA探针，可以成功用于GFLV检测。此外，根据报道的序列设计引物采用RT-PCR和IC-RT-PCR也已广泛用于该病毒检测。

电镜观察：在葡萄根和叶肉细胞见到病毒粒子，量少，排成短行；而在草本试验寄主（苋色藜、昆诺藜、克里夫兰烟、矮牵牛）中，粒子极多，成平行排列，像是彼此重叠的平行管。管有膜，内含成排的粒子。粒子无包被，和胞间连丝相通，或在细胞壁的突起内，聚集的粒子靠近大内含体（泡囊—液胞型内含体），或杂在其中。内含体由核糖体、内质网束和有膜的泡囊（内含细纤维）组成（Savinoetal.，1985）。在核质内偶尔见到成行的粒子空壳。病毒在细胞质内含体中复制。内含体中的膜状泡囊可能是复制点，在此复制RNA和装配聚合蛋白（Pfeifferetal.，2000）。

检疫危险性评价：我国生产上栽植的生食和酿酒葡萄，大部分是欧亚品种。近10年又从英国、法国、保加利亚、罗马尼亚、匈牙利、捷克、斯洛伐克、阿尔巴尼亚、波兰、前苏联、日本、朝鲜、泰国、加拿大、墨西哥、巴西、尼日尔爾利亚等国家和地区引进大批葡萄苗，调查中发现引进葡萄也有扇叶病发生。GFLV汁液能传毒，种子、花粉、苗木、砧木、接穗也能传毒。同时，还有线虫作为介体传毒，给该病远距离传毒、蔓延酿成良好的条件，对我国葡萄业潜在威胁相当严重。国内已有发生。根据季良进行危险性评价的标准，危险度值9分，为高危检疫性有害生物。

地理分布：目前该病毒在世界各葡萄产区都有分布（Hewittetal.，1970；Vuittenez，1970）。

检疫国家地区：阿尔巴尼亚、马耳他、马来西亚、南斯拉夫、瑞士、新加坡、澳大利亚、新西兰、印度尼西亚、秘鲁、英国、比利时、意大利、荷兰、葡萄牙、匈牙利、罗马尼亚、冰岛、摩洛哥、斯洛伐克、南非、东非、尼日尔爾利亚、塞内加尔、加拿大、智利、希腊、德国、瑞典、丹麦、保加利亚等。

应检植物：葡萄繁殖材料和大豆种子。

检疫措施：引进葡萄苗和砧木，要求附有出口国的检疫证书，声明产自未发病区，入境后经检验确证不带扇叶病毒则可种植。

C. 六招教你检测是否中病毒木马介绍

六招教你如何检测病毒木马，赶紧来学学哦!下面由我给你做出详细的六招教你检测病毒介绍!希望对你有帮助!

六招教你检测病毒木马介绍：

六招教你检测病毒木马一、进程

首先排查的就是进程了， 方法 简单，开机后，什么都不要启动!

第一步：直接打开任务管理器(计算机 爱好 者，学习计算机基础， 电脑入门 ，请到本站http://www.woaidiannao.com，我站同时提供计算机基础知识教程，计算机基础知识试题供大家学习和使用)，，查看有没有可疑的进程，不认识的进程可以Google或者网络一下。

PS：如果任务管理器打开后一闪就消失了，可以判定已经中毒;如果提示已经被管理员禁用，则要引起警惕!

第二步：打开冰刃等软件，先查看有没有隐藏进程(冰刃中以红色标出)，然后查看系统进程的路径是否正确。

PS：如果冰刃无法正常使用，可以判定已经中毒;如果有红色的进程，基本可以判断已经中毒;如果有不在正常目录的正常系统进程名的进程，也可以判断已经中毒。

第三步：如果进程全部正常，则利用Wsyscheck等工具，查看是否有可疑的线程注入到正常进程中。

PS：Wsyscheck会用不同颜色来标注被注入的进程和正常进程，如果有进程被注入，不要着急，先确定注入的模块是不是病毒，因为有的杀软也会注入进程。

六招教你检测病毒木马二、自启动项目

进程排查完毕，如果没有发现异常，则开始排查启动项。

第一步：用msconfig察看是否有可疑的服务，开始，运行，输入“msconfig”，确定，切换到服务选项卡，勾选“隐藏所有 Microsoft 服务”复选框，然后逐一确认剩下的服务是否正常(可以凭 经验 识别，也可以利用搜索引擎)。

PS：如果发现异常，可以判定已经中毒;如果msconfig无法启动，或者启动后自动关闭，也可以判定已经中毒。

第二步：用msconfig察看是否有可疑的自启动项，切换到“启动”选项卡，逐一排查就可以了。

第三步，用Autoruns等，查看更详细的启动项信息(包括服务、驱动和自启动项、IEBHO等信息)。

PS：这个需要有一定的经验。

六招教你检测病毒木马三、网络连接

ADSL用户，在这个时候可以进行虚拟拨号，连接到Internet了。

然后直接用冰刃的网络连接查看，是否有可疑的连接，对于IP地址，可以到相关网站查询，对应的进程和端口等信息可以到Google或网络查询。

如果发现异常，不要着急，关掉系统中可能使用网络的程序(如迅雷等下载软件、杀毒软件的自动更新程序、IE浏览器等)，再次查看网络连接信息。

六招教你检测病毒木马四、安全模式

重启，直接进入安全模式，如果无法进入，并且出现 蓝屏 等现象，则应该引起警惕，可能是病毒入侵的后遗症，也可能病毒还没有清除!

六招教你检测病毒木马五、映像劫持

打开注册表编辑器，定位到HKEY_LOCAL_ NTCurrentVersionImage File Execution Options，查看有没有可疑的映像劫持项目，如果发现可疑项，很可能已经中毒。

六招教你检测病毒木马六、CPU时间

如果开机以后，系统运行缓慢，还可以用CPU时间做参考，找到可疑进程，方法如下：

打开任务管理器，切换到进程选项卡，在菜单中点“查看”，“选择列”，勾选“CPU时间”，然后确定，单击CPU时间的标题，进行排序，寻找除了System Idle Process和SYSTEM以外，CPU时间较大的进程，这个进程需要一起一定的警惕。

D. 猫杯状病毒症状会传染人吗

一、猫杯状病毒的症状

猫杯状病毒属于猫咪呼吸道的传染病。

猫咪得猫杯状病毒时会有打喷嚏，流脓鼻涕，眼睛会分泌出很多眼屎，而且猫咪会发烧。严重一点还有可以引发其他疾病，比如说猫咪结膜炎和口腔溃疡等等。

当猫咪没有及时得到治疗，会因为引发肺炎而导致猫咪呼吸困难，还有其他并发症，这样猫咪死亡的几率会很高。

二、猫咪得猫杯状病毒的原因

1.传染源：本来家里的猫咪是健康的，但是不小心接触到病毒，所以猫咪就生病了。传染源很大可能就是外出的主人摸了已经有猫杯状病毒的猫咪带回家的。

2.传播途径：猫杯状病毒是通过猫咪本身和猫咪的排泄物和分泌物传染给猫咪的。所以要保持猫咪自身和家里的卫生。

3.易感动物：猫咪身体抵抗力，疫苗失效，年龄大了都有可能导致猫咪得这种病的。而且成年的猫咪比幼猫得猫杯状病毒的几率要高很多。

三、判断猫咪得猫杯状病毒的方法

从症状上判断猫咪是否得了猫杯状病毒还是不够准确，所以需要主人带猫咪去医院做检查。

猫杯状病毒的检查方法

1.抗体检测

2.病毒抗原或者基因检测：医生会用试纸板，PCR等给猫咪检测。试纸板可以在宠物店买到，也可以现在家里测试一下。

四、猫杯状病毒的治疗方法

1.保持体液寄电解质平衡：可以给猫咪注射补充液，补充钾离子；

2.抗生素：猫咪抗生素必须在医生的指导下才能进行，不然给猫咪补充太多抗生素，会形成抗体；

3.打疫苗：等猫咪痊愈后，需要给猫咪补打疫苗；

4.退烧药：猫杯状病毒最严重最危险的情况就是猫咪高烧不退，所以在给猫咪治疗时，先给猫咪退烧。

猫杯状病毒的治疗需要找到原因再对症下药，这样猫咪痊愈的速度会快很多。

五、猫杯状病毒的预防方法

1.打疫苗：给猫咪打疫苗是预防疾病最好的方法了，所以在接猫咪回家时，要给猫咪打够疫苗。

2.定时清洁消毒：当家里猫咪确诊是猫杯状病毒了，要及时给家里清洁消毒。平时也要多给猫窝，猫咪的玩具清洁消毒，晒太阳。

3.外出回家后要消毒：家里干净卫生，猫咪接触猫杯状病毒的几率很低，但是猫杯状病毒有可能被外出的主人带回家，所以主人在外面接触了其他猫咪，回家要先消毒在和家里的猫咪玩耍。

猫杯状病毒的死亡率虽然高，但是给猫咪做好预防，猫咪得杯状病毒的几率会降低的。

温馨提示：点击《猫杯状病毒的症状与治疗》可以了解更多关于猫咪杯状病毒的知识。

E. 番木瓜花叶病毒病是怎样检验与检疫的

鉴别寄主：

番木瓜：温室培养的幼苗接种约5d后叶片出现系统明脉，叶片下卷，15～20d后产生斑驳或花叶症状。

千日红：接种后4d内产生非系统性局部褪绿斑，很快形成周边红色的坏死。

苋色藜：接种7～10d内产生非系统性局部褪绿斑。

望江南：接种3～4d内非系统性局部褪绿斑。

枯斑寄主：千日红。

体外稳定性：

①钝化温度。73～76℃（在番木瓜病株汁液中）。

②稀释终点。10-4。

③体外存活期。180d。

血清学检测：病毒的免疫原性很强。它与抗血清混合后反应灵敏度很高，能产生絮状沉淀。一般将受侵染的植株直接研磨得到的粗汁液与抗血清进行琼脂扩散试验即能获得阳性反应，无须通过其他的血清学方法检测。与苜蓿黄花叶病毒外壳血清学远源相关，而与马铃薯X病毒外壳无血清学关系。

电镜观察：在寄主植株中含量很高，在任何部位的细胞质中都能发现病毒粒子。受侵染的细胞中含有内含体。富集病毒粒子的带状结构绑扎在一起形成内含体。用AzureA染色后，在光学显微镜下观察，内含体能作为马铃薯X病毒属病毒的检测依据。

检疫危险性评价：本病的病原体木瓜花叶病毒，可经木瓜繁殖材料进行远距离传播，但无传毒介体，可影响木瓜的产量和品质。国内尚未发生。季良进行危险性评价时，危险度值7分，为中危检疫性有害生物。

地理分布：玻利维亚、秘鲁、美国、委内瑞拉、意大利、印度、坦桑尼亚、阿根廷、多米尼加共和国、圣文森特和格林纳丁斯西岛国、特立尼达和多巴哥岛国、关岛等。美国主要分布在佛罗里达州与维吉尼亚两个州，但其造成的经济损失并不大。

检疫国家地区：马来西亚、新加坡、澳大利亚、印度尼西亚、秘鲁、阿尔及利亚、冰岛、摩洛哥、斯洛伐克、荷兰等。

应检植物：木瓜繁殖材料。

检疫措施：进口木瓜繁殖材料时须经国家检疫机构特许审批，限量进口，并要求附有出口国《检疫证书》，保证不带此类病毒。入境后须经指定的隔离检疫站进行一年以上生育期检验，确认无病后在隔离条件下繁殖无病毒种苗，才允许用于生产种植。