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检测是否转录用到的方法

发布时间:2023-02-02 05:07:16

① 检验目的基因是否转录用什么方法

应用分子杂交进行检测。
分子杂交技术:不同的DNA
片段之间,DNA
片段与RNA
片段之间,如果彼此间的核苷酸排列顺序互补也可以复性,形成新的双螺旋结构。这种按照互补碱基配对而使不完全互补的两条多核苷酸相互结合的过程称为分子杂交。检测目的基因是否进行转录,即有无互补RNA产生,可以使用分子杂交技术。

② 设计一个检测某一基因是否转录的检测方法的实验,简述其过程与原理。

原理:转录是以一条DNA链为模板,合成出一条mRNA的过程。所以,检测某一基因在特定条件下是否转录,可以提取样品的mRNA,反转录成cDNA,然后用扩增该基因的PCR引物扩增,如果有条带就是说明转录,没有条带就是不转录。
过程:
1.提取样品mRNA;
2.反转录合成cDNA;
3.设计该基因特异的PCR引物;
4.进行PCR扩增,电泳,检测结果。

③ 检测转基因生物是否转录出mRNA,应通过何种分子杂交方法实现

检测目的基因是否导入用的是DNA-DNA分子杂交,检测是否转录用DNA-RNA分子杂交,检测是否翻译用抗原-抗体杂交。
前两者都是通过一条被标记的DNA单链作为基因探针来实现的。这个探针具体的做法就是:用目的基因转录出的mRNA为模板,以被放射性同位素标记的脱氧核苷酸为原料,用逆转录的方法合成一条被标记的DNA,然后把模板的mRNA给水解掉,这样就得到一条被标记的DNA单链,这就是探针。它的特点就是可以和目的基因转录的mRNA互补配对(即能形成杂交带),所以把探针放在受体细胞中如果发现有杂交带产生,就说明目的基因转录了。
另外,这个探针也可以用来做DNA-DNA分子杂交,即检测目的基因是否导入,方法:先取出受体细胞中DNA然后高温变性成单链,把探针放进去,然后降温复性,如果形成杂交带说明,这些DNA中有能和探针互补的DNA片段,即目的基因。因为这个探针本身就是由mRNA逆转录来的,它的碱基序列与目的基因的一条链完全相同,当然就可以和另外一条链刚好互补了。
这样可以吗?

④ 分子杂交如何检测转录

检测目的基因是否导入用的是dna-dna分子杂交,检测是否转录用dna-rna分子杂交,检测是否翻译用抗原-抗体杂交。
前两者都是通过一条被标记的dna单链作为基因探针来实现的。这个探针具体的做法就是:用目的基因转录出的mrna为模板,以被放射性同位素标记的脱氧核苷酸为原料,用逆转录的方法合成一条被标记的dna,然后把模板的mrna给水解掉,这样就得到一条被标记的dna单链,这就是探针。它的特点就是可以和目的基因转录的mrna互补配对(即能形成杂交带),所以把探针放在受体细胞中如果发现有杂交带产生,就说明目的基因转录了。
另外,这个探针也可以用来做dna-dna分子杂交,即检测目的基因是否导入,方法:先取出受体细胞中dna然后高温变性成单链,把探针放进去,然后降温复性,如果形成杂交带说明,这些dna中有能和探针互补的dna片段,即目的基因。因为这个探针本身就是由mrna逆转录来的,它的碱基序列与目的基因的一条链完全相同,当然就可以和另外一条链刚好互补了。
这样可以吗?

⑤ 检验目的基因是否转录用什么方法

应用分子杂交进行检测。
分子杂交技术:不同的DNA 片段之间,DNA 片段与RNA 片段之间,如果彼此间的核苷酸排列顺序互补也可以复性,形成新的双螺旋结构。这种按照互补碱基配对而使不完全互补的两条多核苷酸相互结合的过程称为分子杂交。检测目的基因是否进行转录,即有无互补RNA产生,可以使用分子杂交技术。

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