微生物的传统检测方法有哪些通过显微镜直接观察。一般来说，在一定的培养条件下（相同的培养基、温度以及培养时间），同种微生物表现出稳定的菌落特征。这些特征包括菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等方面。因此可以通过显微镜观察菌落特征对微生物种类进行判断。使用选择培养基培养微生物或人为提供有利于目的菌株生长的条件。
② 大肠杆菌与大肠菌群检测方法
进入无菌室步骤
1． 进入无菌室前应打开紫光灯进行灭菌，时间为0。5—1小时。
2． 关灯后0•5小时后放可进入。
3． 进入更衣间更换衣服，佩带口罩、帽子、鞋套
实验步骤
1， 进入无菌室后，先把酒精灯点燃，然后在用酒精棉进行手部消毒。（酒精棉是用75%的酒精加入脱脂棉中制成）
2， 准备双料管3根，单料管6根，培养皿7个。
3， 直接从原液中吸取10ml放入双料管，（3根每根各10ml）
4， 再吸取原液1ml放入单料管中（3根每根各1ml）
5， 再吸取原液1ml放入培养皿中（2个培养皿各1ml）
6， 再吸取原液1ml放入盐水管中制成－1梯度的样液
7， 更换一根吸管，从－1梯度的样液吸取1ml样液放入单料管中（3根每根各1ml）
8， 再吸取－1梯度样液1ml放入培养皿中（2个培养皿各1ml）
9， 再把每个培养皿中到入营养琼脂平铺底部摇允（注另作3个培养皿：空气空白，把培养皿打开十分钟倒入营养琼脂平铺底部摇匀。琼脂空白，把培养皿中倒入营养琼脂平铺底部摇匀。盐水空白，吸1ml生理盐水放入培养皿中，倒入营养琼脂平铺底部摇匀。）
10， 把全部作好的放入培养箱中，温度36C＋－1×C，大肠24H＋－2H，菌落48H＋－2H，（待培养皿中的琼脂凝固后反转过来放入培养箱中）
11， 梯度：－1梯度为1ml原液加入9ml生理盐水配成
－2梯度为1ml－1梯度样液加入9ml生理盐水配成
－3梯度－4梯度配制方法和－1、－2梯度的配制方法一样
12， 如果大肠初发酵产生气泡，用接种笔沾一个产气的液在伊红美兰平板上画之字形然后放入培养箱中36C，24H＋－2H 。（接种笔在每次使用前必须在酒精灯上消毒。所画之形不能划破伊红美兰琼脂表面）
13， 取出后在用接种笔在伊红美兰平板之字形上挑菌，放入乳糖复发酵管中 ，然后再培养36C＋－1C，24H＋＋－2H。
14， 再在伊红美兰平板之字形上挑菌，放到载玻片上作镜检。（方法见标准）
15， 只有镜检成紫红色和乳糖复发酵管产气同时成立的情况下，才能断定这根管是不合格。
16， 清洗消毒这根试管前必须进行消毒霉菌，121C，0。5小时同时不能放气。
③ 怎么检验饮料中的大肠杆菌
大肠杆菌检验（包括(一)检验方法；(二)培养基 ）
(一)检验方法
1．乳糖发酵试验。以无菌操作采取样品，采取量及稀释倍数，依据国家或当地卫生标准要求及样品污染情况而定。将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在l m J以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，lm1及1mI以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管，置36±l℃温箱内，培养24±2小时，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性；如有产气者，则按下列程序进行。
2．分离培养。将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36±l℃温箱内，培养18～24小时，然后取出，观察菌落形态，并作革兰氏染色和证实试验。
3．证实试验。在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落l～2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36±1℃ 温箱内培养24±2小时，观察产气情况。凡乳糖管产气，革
兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。
4．报告。根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每l 00ml(g)大肠菌群的最可能数。
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(二)培养基
①乳糖胆盐发酵培基
成分：蛋白胨：20g
猪胆盐(或牛，羊胆盐)：5g
乳糖:10g
0．04％溴甲酚紫水溶液: 25m1
蒸馏水: 1 000m1
制法：将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，分装每管l 0ml，并放入一个小倒管，高压灭菌115℃15分钟。
附注：双料乳糖胆盐发酵培基除蒸馏水外，其他成分加倍。
用途：乳糖发酵试验用。
原理：细菌分解糖类是依靠细菌细胞所产生的各种酶类的作用，细菌产生的分解糖类的酶，随细菌种类不同而异，可以此来鉴别细菌。
乳糖是双糖，细菌分解双糖的酶大多是胞外酶。乳糖被乳糖酶水解成葡萄糖和半乳糖，葡萄糖可直接被细菌利用，而半乳糖则需在细胞内转化为葡萄糖后再被利用。
糖发酵试验主要是测定细菌分解糖类以后所产生的酸，以培基pH降低(指示剂变色)作为观察结果的指标。
大肠杆菌等细菌在酸性环境中，由于甲酸脱氢酶的作用，可使甲酸分解成CO2和H2，在培基中产生大量气体，进入倒管中，以便观察。
注：常用于供发酵试验的各种糖类、醇类和糖苷类(见表3-1)
②伊红美蓝琼脂培基
成分：蛋白胨 10g
乳糖 10g
磷酸氢二钾 2g
琼脂 17g
2％伊红Y溶液 20ml
0．65％美蓝溶液 10ml
蒸馏水 1000ml
pH7.1
制法：将蛋l白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正pH，分装于烧瓶内，高压灭菌121℃15分钟备用。临用时加入乳糖，并加热溶化琼脂，冷至50一55℃，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。
原理：大肠菌群细菌发酵乳糖产酸，使伊红与美蓝结合而成黑色化合物，故菌落呈黑紫色，有时还可产生金属光泽。黑色程度与光泽产生情况与伊红、美蓝二者比倒有关。不发酵乳糖的细菌(如沙门氏菌、志贺氏菌)则为无色菌落。
③乳糖发酵培基
成分：蛋白胨 20g
乳糖 10g
O．04％溴甲酚紫水溶液 25ml
蒸馏水 1000ml
pH7．4
制法：将蛋白胨及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，按检验要求分装30ml、10ml或3ml，并放入一个小倒管，高压灭菌115℃15分钟。
附注： ’
(1)双料乳糖发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。
(2)30ml和10ml乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用．3ml乳糖发酵管供大肠菌群
证实试验用。
4．蛋白胨水
成分：蛋白胨(或胰蛋白胨) 20g
氯化钠 5g
蒸馏水 1 000ml pH7．4
④ 测定饮用水中大肠杆菌的数目
测定饮用水中大肠杆菌的数目可取一定量的饮用水，之后按一定倍数稀释，再用加入伊红美蓝的鉴别培养基培养，取黑色金属光泽菌落数在20至220之间的平板进行计数．
故选：B．
⑤ 水中大肠杆菌滤膜法检验
1. 消毒设备按照产品使用说明操作，待设备运转正常后，取水样进行消毒效果检验。消毒剂发生器按照产品使用说明书操作，待设备运转正常后，在出口处采集样品，按说明书规定的有效剂量稀释后，进行消毒效果检验。消毒剂按产品使用说明书稀释配制水样。2. 细菌加标操作程序(1) 在脱氯自来水中加入大肠杆菌，实验用菌种为大肠杆菌8099。加标量为>5×100-2×1000/100ml。(2) 将装有加标菌水样的三角烧瓶放入恒温水浴箱(20℃)中，开动磁力搅拌器5min，使细菌在水中分布均匀。先取2份细菌加标的水样，进行大肠杆菌活菌计数(阳性对照组)。(3) 待水温恒定后按说明书规定的最小剂量加入消毒剂，迅速搅拌均匀，从加入消毒剂起计时。设定3个工作时间，说明书规定的最短作用时间为T，3个作用时间分别为0.5T，T和1.5T，作用后分别吸取水样，注入装有中和剂(如硫代硫酸钠)无菌三角烧瓶中，以终止消毒作用。 对饮用水消毒处理器和消毒剂发生器应根据消毒产物的产生量及处理水最高流量进行加标采样。(4) 将中和的水样，分别取100ml、10ml、1ml各两份，用滤膜法进行大肠菌活菌计数。(5) 将未接种大肠杆菌的试验用同批培养基平板2个，置温箱中培养(阴性对照组)。试验重复三次。3. 上述试验同时，测定消毒成分和剂量，记录作用时间和水温。4. 结果评价消毒后水中大肠菌群指标应符合《生活饮用水水质卫生规范》规定5．√－ 必需测定项目 ； △ －如含有，需测定http://szbbs.soufun.com/2810026793~-1/23633781_23633781.htm
水中大肠菌群检验方法的改进
晁福环;芮期义;王新为;高明;欧阳川
<正> 水中细菌,包括致病菌与指标菌,因受自然条件或水处理过程的影响可以形成生理上存在缺陷,这些细菌称为损伤菌。损伤菌在适宜条件下仍可发育成正常菌落,可是直接暴露于含有抑制剂的选择性培养基时就不易生长。因此,现有远藤培养基滤膜法有可能使大肠菌检
【作者单位】：军事医学科学院卫生学环境医学研究所;军事医学科学院卫生学环境医学研究所;军事医学科学院卫生学环境医学研究所;军事医学科学院卫生学环境医学研究所;军事医学科学院卫生学环境医学研究所 300050 天津;300050 天津;300050 天津;300050 天津;300050 天津
【DOI】：cnki:ISSN:1004-8685.0.1991-01-021
【正文快照】：
水中细菌,包括致病菌与指标菌,因受自然条件或水处理过程的影响可以形成生理上存在缺陷,这些细菌称为损伤菌.损伤菌在适宜条件下仍可发育成正常菌落,可是直接暴露于含有抑制剂的选择性培养基时就不易生长.因此,现有远藤培养基滤膜法有可能使大肠菌检出菌数偏低,影响水质卫生学评价的准确性。为提高检出率,本文在水中大肠菌损伤状况及生长特点研究的基础上,对现用远膝培养基进行了改进研究. 一、天然水及经不同条件处理后水中大肠菌损伤状况见表l、2.裹l不同条件处理后水中大肠,抓伤状况实较条件翻伤和.。,卜飞,了气P侧价与脚脚日)‘t习分钟…
http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-ZWJZ199101021.htm
1 材料 呋喃唑酮片（地产及市售，规格0．10g／片），混合纤维素酯微孔滤膜，孔径规格0．45μm、1．2μm、3．0μm，大肠杆菌CMCC（B）〔4〕、胆盐乳糖增菌液（BL）、伊红美蓝琼脂（EMB）及大肠杆菌生化反应用培养基均由中国药品生物制品检定所提供。
2 方法和结果 供试液先经离心，取上清液依次经过孔径为1．2μm或3．0μm的微孔滤膜和0．45μm的微孔滤膜过滤后取0．45μm的滤膜加入BL中增菌。
2．1 由于呋喃唑酮几乎不溶于水，故选用一次离心法、二次离心法和离心-滤膜法〔1，2〕以及离心-双重滤膜法进行方法比较，结果表明只有离心-双重滤膜结合法能确保阳性菌的检出。
表1 不同方法阳性菌的检出试验结果
方法 BL增菌48h EMB平板分离 大肠杆菌
检出结果
一次离心法 微混 未长菌落 未检出
二次离心法 澄清 未长菌落 未检出
离心-滤膜法 澄清 未长菌落 未检出
离心-双重滤膜法 混浊、产气 典型的大肠
杆菌菌落 检出
2．2 人工污染呋喃唑酮片大肠杆菌的检出情况 选用8批样品加入大肠杆菌进行人工污染5d后，采用离心-双重滤膜法进行检验，结果表明8批均能检出。
表2 人工污染大肠杆菌的阳性检出情况
药品
批次 BL增菌
48h EMB
平板分离 大肠杆菌
检出结果 检出率
％
8批 8批出现混
浊、产气 8批呈典型菌落 8批检出 100
注：上述EMB平板分离的典型菌落均经生化反应确认检出大肠杆菌
3 讨论
3．1 虽然呋喃唑酮在水中的溶解仅达40mg／L〔3〕，但由于呋喃唑酮在BL增菌液中的最低抑菌浓度即MIC为0．01mg／L〔4〕，采用一次离心、二次离心法均未能使BL增菌液中的浓度低于0．01mg／L，采用2次离心-滤膜法，则由于供试液经孔径0．45μm滤膜过滤时残留呋喃唑酮，当加入BL增菌液后，呋喃唑酮的浓度仍高于MIC，因此大肠杆菌仍无法繁殖，而本文采用的离心-双重滤膜法，既能除去水中溶解的微量呋喃唑酮，又能把离心后上清液残留的呋喃唑酮截留在孔径1．2μm或3．0μm的滤膜上，最大程度地降低孔径0．45μm滤膜上的呋喃唑酮，也降低了BL增菌液中的呋喃唑酮浓度，所以大大提高了阳性检出率。
3．2 人工污染大肠杆菌5d仍能检出，说明离心-双重滤膜法检验过程中不影响大肠杆菌在BL增菌液中的繁殖，能有效地保证样品的阳性检出率。
3．3 离心-双重滤膜法能在很大程度上解决难溶于水的抗菌剂在BL增菌液中的浓度，故对今后开展口服抗生素控制菌的检验具有较高的参考意义。
3．4 因埃希氏杆菌属的菌体，直径为0．4～0．7μm，长度为1．0～3．0μm，笔者认为采用3．0μm孔径的滤膜比1．2μm的滤膜可使实际检验效果更佳。同时，笔者也认为选择何种规格的滤膜可因样品而异，这方面还有待进一步深入探讨。http://www.wanfangdata.com.cn/qikan/periodical.articles/haixyx/haix99/haix9903/990393.htm
⑥ 做生产用水微生物的细菌总数和大肠菌群德检测依据是什么
一、水质微生物及指示菌
在各种水体，特别是污染水体中存在有大量的有机物质，适于各种微生物的生长，因此水体是仅次于土壤的第二种微生物天然培养基。水体中的微生物主要来源于土壤，以及人类的动物的排泄物及污染。水体中微生物的数量和种类受各种环境条件的制约。
一般认为，水中微生物以革兰氏阴性杆菌占有较大优势。与其他水体相比，河水及溪水中革兰氏阳性菌相对较多，这是因为陆地微生物冲洗污染的缘故。
水体中的致病性微生物一般并不是水中原有微生物，大部分是从外界环境污染而来，特别是人和其它温血动物的粪便污染。水中常见的致病性细菌主要包括：志贺氏菌、沙门氏菌、大肠杆菌、小肠结炎耶尔森氏菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌等。
在实际控制中，对水质卫生质量的评价和控制，是无法对各种可能存在的致病微生物一一进行检测，而一般利用对指示菌的检测和控制，来了解水体是否受到过人畜粪便的污染，是否有肠道病原微生物存在的可能，从而评价水的质量，以保证水质的卫生安全。
目前，世界各国一般认为大肠菌群是指示水质受粪便污染较好的指示菌。
我国水质控制也采用大肠菌群作为指示菌，GB5749-85《中华人民共和国国家标准
生活饮用水卫生标准》规定，生活饮用水中大肠菌群每升不得超过3个。
在某些情况下，水体中的细菌总数也可指示水体受粪便等污染物污染的情况。这里的细菌总数其实是指营养琼脂培养后形成的菌落总数。目前世界各国对于控制饮用水的卫生质量，除采用大肠菌群等指标外，一般还采用细菌总数这个指标。我国GB5749-85《中华人民共和国国家标准
生活饮用水卫生标准》中规定生活饮用水细菌总数每毫升不得超过100个。
二、水质微生物检验方法
GB5750-85《中华人民共和国国家标准 生活饮用水标准检验法》提供了水质中细菌总数和总大肠菌群的检测方法。
（一）细菌总数的检测：
国家标准中，细菌总数是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24h培养后，所生长的细菌菌落的总数。
对生活饮用水，直接吸取1ml水样于平皿中，加入营养琼脂后混匀，37℃培养24h，进行计数。
对水源水，根据情况对样品进行10倍梯度稀释，选择适宜稀释液1ml，加注平皿，营养琼脂混匀，37℃培养24h，进行计数。
按照规定格式报告每毫升水中细菌总数。
（二）总大肠菌群的检测：
国家标准中，利用总大肠菌群作为粪便污染的指标。总大肠菌群是指一群需氧及兼性厌氧的，37℃生长时能使乳糖发酵，在24h内产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。水样中总大肠菌群数的含量，表明水被粪便污染的程度，而且间接地表明有肠道致病菌存在的可能。
国家标准提供了多管发酵法及滤膜法检测总大肠菌群的方法。
多管发酵法检测总大肠菌群，分为三步：初发酵试验，平板分离，复发酵证实试验。初发酵试验，采用乳糖蛋白胨培养液37℃培养24h，观察产酸产气情况。对阳性管培养物，接种于品红亚硫酸钠培养基或伊红美蓝培养基，观察菌落特征，并进行革兰氏染色和镜检。对典型和可疑菌落，接种于乳糖蛋白胨培养液，进行复发酵证实试验，并根据标准所附检数表报告结果。
其中，对生活饮用水，初发酵试验接种水样总量300ml，即100ml接种2管，10ml接种10管，采用两个稀释度，12支发酵管。对水源水，初发酵试验接种水样总量55.5ml，即10ml接种5管，1ml接种5管，0.1ml接种10管，共采用三个稀释度，15支发酵管。两种接种方法，所用的检数表是不同的。
滤膜法检测总大肠菌群，就是利用微孔滤膜，过滤一定量水样，将水样中含有的细菌截留在滤膜上，然后将滤膜帖放在选择性培养基上（如品红亚硫酸钠培养基），经培养和证实试验后，直接计数滤膜上生长的典型大肠菌群菌落，并计算出每升水样中含有的总大肠菌群数。
三、说明：
1．菌落总数测定中，应选择合适的稀释度进行。生活饮用水，国家标准规定每毫升不得超过100个，因此可以直接吸取1毫升到平板进行培养。
2．培养时间。与食品中菌落计数不同，测定水中细菌总数，培养时间采用24h。
3．总大肠菌群的测定方法，由于饮用水和水源水可能的污染程度不同，因此采用不同的接种量，检数表也不相同。
4．当接种量超过1毫升时，一般采用多倍浓度培养液。如配制3倍浓缩乳糖蛋白胨培养液50mL，加入100mL水样后，总体积为150mL，培养液恢复到正常浓度。
5．滤膜法检测总大肠菌群，一般在检测较大量低浊度水样时采用，大量水样滤过滤膜后，水中所含有的所有细菌均截留在滤膜上。