分子检测方法学

A. 高中化学有哪些方法测定相对分子质量

端基分析法-数均
蒸气压渗透法-数均
冰点降低和沸点升高法-数均
渗透压法-数均
光散射法-重均
特性粘度法-黏均
体积排除色谱-重均和数均
飞行质谱-重均和数均
核磁、红外光谱也可测量分子量。
常用色谱和渗透压这两种

B. 1.写出基因工程第四个步骤中,要从分子水平上检测的内容及采用的检测方法

从分子水平上检测有DNA分子杂交技术，分子杂交技术和抗原-抗体杂交技术。
1.DNA分子杂交技术检测的是转基因生物的DNA是否插入了目的基因。将转基因生物的基因组DNA提取出来，在含有目的基因的DNA片段上用放射性同位素等作标记，以此作为探针，使探针与基因组DNA杂交，如果显出杂交带，就表明目的基因已插入染色体DNA中。
2.分子杂交技术检测目的基因是否转入出了mRNA。从转基因生物中提取出mRNA，用标记的目的基因作为探针，与mRNA杂交，如果显出杂交带，则表明目的基因转入出了mRNA。
3.抗原-抗体杂交检测目的基因是否翻译成蛋白质。从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原-抗体杂交，若有杂交带出现，表明目的基因已形成蛋白质产物。

C. 高分子材料的检测方法

各种方法，热分析，核磁，红外·······LZ这个太多了

D. 如何在分子水平检测正选择

摘要：过去的若干年见证了强有力的统计 手段在检测适应的分子进化方面的应用。这些方法比较蛋白编码基因的同义和非同义取代速率，并将非同义速率高于同义速率的情况作为达尔文选择的证据。目前已 经在从病毒到人的多种生命系统中鉴定出了大量分子适应的实例。虽然此前的分析因把速率对位点和时间求均值而缺乏说服力，较新的方法针对单个位点和线系而设 计，并已取得了成功。本文中我们总结了最近的检测分子适应的统计方法，并讨论其局限和未来可能的改进。

“近来在酶分子上得到有说服力的选择造成的改变的例子非常困难，更不必说发现适应性改变的例子了。”

虽然达尔文的关于自然选择的进化理论在 表形特征方面已经被广泛认为是成功的，但是自然选择在分子进化上的重要性长期以来一直存在争议。中性理论认为多数可观测的分子变异，无论种内的多态性还是 种间的差异，都是由选择上中性的突变的随机固定造成的。分子水平适应的比较可信的例子并不多见。已经建立了几种针对真实数据的检测中性的方法，虽然它们能 很充分地从大量基因中排除严格的中性，但是并不能为达尔文正选择提供足够充分地证据。

关于适应性分子进化最可靠的例子来自对蛋白编码DNA序列上同义和非同义取代速率的比较。这为自然选择的研究提供了很好的蛋白质分子的例子。表一列出了部分例子，参见Hughes对其中很多研究的细节描述。这里我们总结了较新的增加对分子水平适应进化的检测能力的方法学上的进展。并且检查了他们的优缺点，这样他们能被用来检测更多类型的分子适应。

用非同义／同义速率比例测量选择

传统来说，同义和非同意取代速率（框壹）的定义是，基于两条DNA序列比较的背景，用ds和dn作为每个位点上同义和非同义取代的数目[5]。这样，比值omega＝dn/ds就度量了两种速率之间的差距，并且成为编码取代模型的数学描述中最容易理解的一种（框贰）。如果一个氨基酸改变是中性的，它将被与同义突变相同的速率被固定，omega＝1。如果是一个有害的氨基酸改变，纯化选择（box 1）将消除它的固定速率，此时omega<1。只有当这个氨基酸改变提供了一个选择优势时，它才会被以高于同义突变的速度固定，omega>1。这样，一个显着大于1的omega比值成为可靠的分歧选择{diversifying selection}<所谓分歧选择和正选择是一回事，而纯化选择则是负选择的另一种叫法，下文会提到>的证据。

基于编码的分析（框贰）不能推论同义取代是被选择驱动还是突变驱动<这里的突变是指随机突变>，但是它不能假定同义取代是中性的。例如，较高的密码子使用偏好既可能是选择的作用（例如，翻译效率[6]）也可能是突变的作用，并能极大地影响同义取代速率。然而，通过引入参数pai_j作为此模型中密码子j的参数（框贰）。取代速率的估计将可以完整地解释编码使用偏好（框壹）而不必考虑其来源。因为参数omega是一个蛋白质分子上选择压力的度量，他把编码倾向分析与其他基于群体遗传假定之上的更通用的中性检测区别开来[7,8]。这些通用的检测通常无法决定偏离严格中性模型的原因，例如群体大小的改变，环境波动或不同的选择模式。估计两条序列的dn和ds值

两类方法已经被建议来估计dn和ds值，在两条编码蛋白序列之间。第一类方法包括超过一打的直观方法，多是1980年代初期以来开发的[5,9-15]。这些方法涉及以下步骤：统计两条序列上的同义（S）和非同义（N）位点，统计两条序列的同义和非同义差异，并针对同一位点的多次取代进行纠错。S和N被定义为序列长度乘以蛋白质承受选择前同义和非同义改变的比例。多数这类方法采取的是核苷酸取代过程的简化假设，并引入了对数据的不可被纠正的ad hoc处理。因此，我们把这类评估dn和ds的方法称为近似方法。Miyata和Yasunaga[5]，以及 Nei和Gojobori[9]，假设了相等的转换速率（T－C和A－G）和颠换速率（TC－AG），以及统一的密码子使用。由于转换在第三位“摆动”位置上比颠换更可能是同义的，所以忽略转/颠换速率比例会导致低估S和高估N[10]。已有很多工作努力在统计位点和差异时整合这种转/颠换速率偏好（框壹）[10-14]。密码子使用偏好的效果在很大程度上被忽略了。然后，极端的密码使用偏好可以对dn和ds的估计产生毁灭性的影响[15,18]。最近，一种ad hoc方法可以同时整和转换和密码使用偏好的问题[15]。

第二类方法是基于明确的编码取代模型的最大似然方法（框贰）[16,19]。模型中的参数（例如，序列分析的t参数，转颠换速率比例的K参数，以及dn/ds 比值的omega参数）来自对数据的最大似然估计，并按照其定义用于计算dn和ds的值[15,16,20]。一个主要的特征是这个模型的公式建立是基于同时速率水平的（其中不可能有多重改变），并且概率理论用一步就完成了所有困难的工作：估计诸如k这样的突变参数；校正多重匹配，密码子改变的加权，等等。

统计检测可以检测出是否dn是显着高于ds的。对于近似方法来说，正态近似被应用于dn-ds。对于最大似然方法来说，可以使用似然比例检测。在这种情况下，null模型的omega值固定为1，而备择模型估计omega为自由参数。两个模型间的对数似然差异的两倍，被用一个自由度的卡方分布来比较，以此检测是否omega不等于1。

计算模拟被用来检查差异估计方法的好坏。其结果对真实数据的观察值是稳定的[14,15,19]。我们在对人和猩猩alpha－2 球蛋白基因分析中，用不同估计过程证实了这一结果（表2）。在比较中，最大似然法中各种不同的假定都是关注于转颠换速率偏好和编码偏好的。和复杂的模型相比，仅仅只考虑转颠速率或只考虑密码子偏好的简单模型都经不住似然率检验，因而被放弃{reject}了。这样，根据ML法解释这两种偏好的估计（模型8，表2）显然可以期望将是最可靠的了。我们作出了如下观察：

*假设比方法更重要。在相似的假定下近似方法和ML方法得到相似的结果。如果都使用忽略转颠换偏好和密码使用偏好的预设模型，Nei和Gojobori的方法与ML法会得到类似的结果（模型1，表2）。而当使用考虑转颠换偏好而忽略密码使用偏好的模型时，Ina和Li的方法亦得到和ML法相似的结果（模型2，表2）。当同时考虑两种偏好时，Yang和Nielsen的方法[15]与ML法得到相似的结果（模型6，表2）。然而，对亲源关系较远的序列，近似方法中的ad hoc处理会导致严重的偏离，即使使用了正确的假定也不能避免。

*忽略转颠换速率偏好会导致S的低估，ds的高估，以及omega的低估[10]。

*在这些数据中的编码使用偏好有相反的倾向。忽略密码使用偏好导致高估S，低估ds和高估omega。设想这个基因有极高的GC含量在第三位密码子上，T占9％，C占52％，A占1％，G占37％。绝大多数第三位密码子上的改变（即发生在氨基酸水平选择之前的改变）是C和G之间的转换。这样，同义位点的数目就比频率相等情况下的期望值少一半。虽然，理论上说，这种由非平均密码子频率造成的偏好可能会在相反的方向上[15]，我们还没有遇到一个真实的基因是这样的情况。这样，在检测沉默位点上的GC含量和ds间关系时，密码使用偏好就可以误导之前所做的那些分析的结果[21]。

*因为那些分析在估计ds时忽略了密码子使用偏好。即使对高度相似的序列，不同的方法也会产生不同的估计值。表2中使用的序列只有大约10％的沉默位点差异和小于1％的非同义位点差异。然而，对omega的估计值有三倍的差距。这是因为所有的估计过程都是把所有的位点数目区分成同义和非同义两类，对一类的低估必然造成对另一类的高估，因而会产生omega比值的较大误差。

E. 小分子RNA的检测方法

实时荧光定量PCR技术是1996年由美国Applied biosystems公司推出在定性PCR技术基础上发展起来的核酸定量技术。该技术在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，使每一个循环变得“可见”，最后通过Ct值和标准曲线对样品中的DNA (或cDNA) 的起始浓度进行定量的方法。实时荧光定量PCR是目前确定样品中DNA (或cDNA)拷贝数最敏感、最准确的方法。
目前市场上miRNA qPCR检测方法主要有以下两种：1. 两步法； 2.三步加尾法。两种方法的主要差别在于qPCR之前的cDNA制备过程（如图）。其中两步法是通过独特设计的茎环结构引物进行反转录将miRNA反转录成cDNA。而三步法则是给miRNA序列加polyA尾，之后再利用反转录过程将miRNA反转录成cDNA并加上独特设计的尾部序列。

两步法的优势在于特异性很高，但是最新的研究报道显示在编辑过程中，miRNA 的3’序列的多样化现象(Heterogeneity)，这种现象的发生使得目前市场上qPCR两步检测法的准确性受到影响（如图）。而三步法则不受这一现象的影响，而且随着科学家们的不断摸索创新，三步法的特异性如今已经可以和两步法媲美。更重要的是低廉的价格也是三步检测法越来越受到广大研发人员喜爱的重要原因。

F. 分子互作检测方法有哪些

生物分子的相互作用可通过多种检测手段进行检测，如荧光能量共振转移（FRET），荧光偏振（FP），时间分辨荧光（TRF）均相时间分辨荧光（HTRF），Western-Blot等， 而这些检测技术均可在酶标仪中实现。

G. 生物材料检验的传统方法有哪些传统的检验方法与新方法相比有什么优缺点

主要有三种，两者是互补的。
微生物传统检测方法主要指传统的培养检测方法、经典的PCR等分子检测方法、基于抗原抗体反应的免疫学检测方法等等，很多这些传统的检测方法都作为经典写进了国标，在很多方面仍具有不可替代性。
但不可否认，很多微生物传统检测方法过程繁琐、质量难控、费时费力、易发生主观片面错误。
随着科技的进步，科学家发展了很多微生物新兴检测方法，如基于物理方法——气味指纹技术、基于化学方法——光谱指纹技术、基于代谢方法——色谱指纹技术等快速无损检测技术，微流控芯片技术，基于CRISPR分子检测技术。
这些新兴检测方法操作简单、准确性好、高灵敏度、快速自动化检测及分析，极大弥补了微生物传统检测方法的不足；未来微生物检测发展方向，还是要结合传统检测方法与新兴检测方法的互补。

H. sne是什么分子生物学检测方法

分子生物学（molecular biology ）：从分子水平上研究生命现象物质基础的学科。研究细胞成分的物理、化学的性质和变化以及这些性质和变化与生命现象的关系，如遗传信息的传递，基因的结构、复制、转录、翻译、表达调控和表达产物的生理功能，以及细胞信号的转导等。

分子生物学中最基本的技术是蛋白质的表达和纯化。首先是编码目的蛋白的DNA序列被克隆（用PCR技术和限制性内切酶）到作为表达载体的质粒中。随后构建好的质粒被引入到宿主细胞。编码序列在质粒上的特殊的启动子元件的驱动下，被宿主细胞的表达系统所表达。质粒上通常还带有抗生素抗性标签以便于质粒筛选。

质粒可以被插入到细菌或动物细胞。外源DNA被引入细菌被称为转化，可以通过电穿孔法、微注射法、正吸收和融合来实现；外源DNA被引入真核细胞，如动物细胞，被称为转染，转染技术包括磷酸钙法、脂质体法和一些有专利权的商用转染试剂。DNA也可以以病毒或病原菌为载体被带入宿主细胞；应用这种病毒或病菌的转染技术于细胞时，用术语来说就是“对细胞进行转导（transce）”。

多聚酶链式反应(PCR)是一项用于体外复制DNA的极为通用的技术。简而言之，PCR技术可以使单链DNA被复制数百万次，也允许用事先确定好的方式对被复制的DNA序列进行改动。例如，PCR技术可以用于引入限制性酶切位点，或者对特定的DNA碱基进行突变（改变）。PCR技术还可以用于从cDNA文库获得特定的DNA片断，或者从另一个角度，用于判断一个cDNA文库中是否含有特定的DNA片断。

凝胶电泳是分子生物学最主要的一项技术。其基本原理是：DNA、RNA和蛋白质可以用电场来进行分离。在琼脂糖凝胶电泳中，DNA和RNA可以被琼脂糖凝胶按其分子大小进行分离。同样，蛋白质可以被SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）按分子量大小分离；此外，蛋白质还可以由于所带电荷的不同被等电聚焦电泳分离。

I. 邻氯苯甲酰氯检测方法

邻氯苯甲酰氯检测方法是分子检测。
苯甲酸中的羟基被氯原子取代而生成的酰卤，分子式。
具有刺激性气味的无色液体。
沸点197.2℃，相对密度1.2120（20/4℃）。
蒸气具有催泪性。
苯甲酰氯可由α,α,α-三氯甲苯部分水解制得，也可由苯甲酰直接氯化制得。
实验室中可由苯甲酸与五氯化磷反应制得。
苯甲酰氯主要用于制造过氧化苯甲酰，它是重要的自由基引发剂。

J. 高分子测分子量的方法都有哪些

分子测分子量的方法：

高聚物的分子量及分子量分布，是研究聚合物及高分子材料性能的最基本数据之一。它涉及到高分子材料及其制品的力学性能，高聚物的流变性质，聚合物加工性能和加工条件的选择。也是在高分子化学、高分子物理领域对具体聚合反应，具体聚合物的结构研究所需的基本数据之一。

分子量检测方法：GPC 凝胶渗透色谱，飞行质谱法(Maldi-tof)

分子量测定仪器参数

GPC 流动相 ：THF(四氢呋喃)，H2O(水相)，DMF( N,N-二甲基甲酰胺), 二氯甲烷，TCB(三氯苯)

检测方法：端基滴定法 冰点降低法 蒸汽压下降法（VPO） 膜渗透压法 。

检测仪器：核磁共振 流动分析仪/流动注射分析仪(FIA SFA CFA)

电容水分测定仪 电阻水分测定仪

红外水分测定仪 紫外可见分光光度计

红外光谱(IR、傅立叶) 气相分子吸收光谱仪（GMA）