抗体检测方法

A. HIV的检测步骤有哪些

艾滋病检测种类：血液试纸和唾液试纸两大类。
目前市场上的艾滋病试纸种类主要分为两大类，其中血液试纸主要包括雅培hiv试纸、爱康hiv试纸等。而唾液艾滋病试纸的种类就显得比较单调，其中使用最广泛的就是美国艾卫艾滋病检测试纸，深受很多的高危人群及恐艾症患者的青睐。

专家指出，自从第一例艾滋病毒被确诊以后，全球对于艾滋病毒的研究已经有30多年的历史，而在这些年中也确实取得了十分重大的突破，其中艾滋病试纸研发问世，其所提倡的艾滋病自测就为艾滋病毒的预防奠定了崭新的里程碑。据本站笔者了解得知，艾滋病试纸是一种使用胶体金免疫层析科技研发的新一代检测试剂，可检测血清或血浆标本中的HIV-1/2特有性抗体，从而准确的判断出患者体内是否含有艾滋病毒，进而了解该患者是否是艾滋病毒感染者。
艾滋病检测试纸优势多，不同艾滋病试纸准确率达99.99%
不同的艾滋病试纸在不同的情况下使用起来具有更高的准确性和方便性。但是这几种常见的HIV检测试纸使用起来主要有以下几个方面的优势：所有操作时间15分钟，所有的检测操作过程简便、出检测结果十分迅速又准确、而且全部都是自带质控对照，检测过程中还不需要使用附加药剂。值得一提的是，自己在家就能够独立完成所有的检测过程，并不再像过去那样一定要到专业的疾控中心检测，这样不但减轻了疑似感染者的心理折磨，而且还出检测结果快速高效，为感染者及时治疗争取了更多有利的时间。
据悉，要想准确知道检测结果，还需要注意的一个问题就是艾滋病检测的最佳时间，而国际上规定以高危发生的日期开始计算，2周后即可检测艾滋病病毒，以6周以后为准。而且如果在检测过程中要想更加准确了解结果，最好是一次性使用多种不同品牌的艾滋病试纸，注意准确率更高，几乎是100%。

B. 免疫学的检测方法

免疫学检测方法可分为体液免疫和细胞免疫。

C. HIV-抗体检测方法的确认实验

免疫印迹试验（WB）、条带免疫试验（LIATEK HIVⅢ）、放射免疫沉淀试验（RIPA）及免疫荧光试验（IFA）。国内常用的确认试验方法是WB。
(一_免疫印迹实验(westernblot，WB)是广泛用于许多传染病诊断的实验方法，就HIV的病原学诊断而言，它是首选的用以确认HIV抗体的确认实验方法，WB的检测结果常常被作为鉴别其他检验方法优劣的“金标准”。
确认试验流程:
有HIV-1/2混合型和单一的HIV-1或HIV-2型。先用HIV-1/2混合型试剂进行检测，如果呈阴性反应，则报告HIV抗体阴性；如果呈阳性反应，则报告HIV-1抗体阳性；如果不满足阳性标准，则判为HIV抗体检测结果不确定。如果出现HIV-2型的特异性指示条带，需用HIV-2型免疫印迹试剂再做HIV-2的抗体确认试验，呈阴性反应，报告HIV-2抗体阴性；呈阳性反应则报告HIV-2抗体血清学阳性,并将样品送国家参比实验室进行核酸序列分析，
WB的敏感性一般不低于初筛实验，但它的特异性很高，这主要是基于HIV不同抗原组分的分离以及浓缩和纯化，能够检测针对不同抗原成分的抗体，因而能够用WB方法鉴别初筛实验的准确性。从WB确认试验结果看出，初筛试验尽管选择质量较好的试剂，如第三代ELISA，仍会有假阳性出现，必须通过确认试验才能得出准确结果。
(二)免疫荧光实验(IFA)
IFA法经济、简便、快速，曾被FDA推荐用于WB不确定样品的诊断。但需要昂贵的荧光显微镜，需要受过良好训练的技术人员、观察和解释结果易受主观因素的影响，结果不宜长期保存，IFA不宜在一般的实验室开展和应用。
HIV抗体确证试验结果报告
HIV抗体确证试验结果用附表3报告。
（1）符合HIV-1抗体阳性判断标准，报告“HIV-1抗体阳性（+）”，并按规定做好检测后咨询、保密和疫情报告工作。符合HIV-2抗体阳性判断标准，报告“HIV-2抗体阳性（+）”，并按规定做好检测后咨询、保密和疫情报告工作。
（2）符合HIV抗体阴性判断标准，报告“HIV抗体阴性（－）”。如疑似“窗口期”感染，建议进一步做HIV核酸检测，尽早明确诊断。
（3）符合HIV抗体不确定判断标准，报告“HIV抗体不确定（±）”，在备注中应注明等待“4周后复检”。

D. 自身抗体的检测方法有哪些

1、抗核抗体检测

抗核抗体是一组将自身真核细胞的各种细胞核成分作为靶抗原的自身抗体的总称，主要是IgG，其次是IgM和IgA，无器官和种属特异性。ANA在大多数自身免疫性疾病中均可呈阳性，正常老年人也可有低滴度的ANA。ANA检测在临床自身免疫病诊断与鉴别诊断中是一个重要的筛查试验。

2、类风湿因子

类风湿因子是变性lgG刺激机体产生的一种自身抗体，主要存在于类风湿关节炎患者的血清和关节液内。主要为lgM型，也有lgG、lgA、lgD和IgE型。

3、抗中性粒细胞胞浆抗体

抗中性粒细胞胞浆抗体是指与中性粒细胞及单核细胞胞浆成分发生反应的抗体。当中性粒细胞受抗原刺激后，胞浆中的α-颗粒释放蛋白酶-3、髓过氧化物酶等物质，刺激机体而产生ANCA。

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自身抗体的产生原因：

人体的生长、发育和生存有完整的自身免疫耐受机制的维持，正常的免疫反应有保护性防御作用，即对自身组织、成分不发生反应。—旦自身耐受的完整性遭到破坏，则机体视自身组织、成分为“异物”，而发生自身免疫反应，产生自身抗体。

正常人体血液中可以有低滴度的自身抗体，但不会发生疾病，但如果自身抗体的滴度超过某—水平，就可能对身体产生损伤，诱发疾病。自身免疫性疾病中有许多自身抗体，其中最重要的是抗核抗体。

E. 抗体效价的检测方法

多采免疫双向扩散法
【基本原理】
*指抗原和抗体在同一凝胶内都扩散，彼此相遇后形成特异性的沉淀线。
-将抗原与抗体分别加入同一凝胶板中两个相隔一定间距的小孔内，使两者进行相互扩散，当抗原抗体浓度之比相适宜时，彼此相遇形成一白色弧状沉淀线。
*优缺点：简便，但敏感性较低，易出现假阴性结果。
免疫双向扩散法的操作步骤
*将玻璃板用水洗净后用75%乙醇冲洗，晾干后放在水平台上备用。
*将1%agar 融化后，置56℃水浴。
*在玻璃板上铺胶，约1.5mm 厚，凝固后打孔(直径 3rnm)，孔间距10mm。
l 抗血清(抗体预先作系列倍比稀释即ml 抗原样品，周围孔内每孔加5m*中心孔加5 1:2、1:4、1:8、1:16、1:32等比例)。
*凝胶板置湿盒内，室温扩散24h。
*观察结果。
凝聚胺法测定孕妇血清IgG抗-A（抗-B）效价的方法待检血清与0.2 mol/L 2?硫基乙醇(2?Me)在试管内等量混合，放入37℃水浴1 h以破坏血清中的IgM抗体，吸取处理后的血清用生理盐水倍比稀释，稀释度分别为2、4、8、16、32、64、128、256、512、1 024，然后每管加入相应的3%～5%红细胞悬液，置37℃水浴30 min，观察是否凝集，不凝集者用生理盐水洗涤3次，然后加入低离子盐水介质(LIM液)，混匀，滴入2滴凝聚胺，混匀后3 000 r/min离心30 s，扣摇肉眼可见明显的凝集(无凝集者须重做)，再加入2滴重悬液，轻摇，观察凝集是否消失，凝集1 min内不消失者表示受检者血清中含有IgG型抗?A(抗?B)。
抗体效价检测的其它方法
*环状沉淀试验，需较多的抗血清，现已很少用；
*对流免疫电泳，比琼脂免疫双扩散法敏感，较简便、实用；
*酶联免疫吸附试验 (ELISA)。
通常抗体效价低于1：128是没有问题的，有些孕妇高达1：256以上，而且抗体效价最好1个月查上一次，有时候会有所变化。

F. 抗体效价测定的方法内容

1．取小试管10支，分别标明1-10号，各管加生理盐水0.2ml，用刻度吸管吸取被检者血清0.2ml加入到第1管充分混匀，再用同一吸管从第1试管中吸出0.2ml加入到第2管，充分混匀后再吸取0.2ml加入第3管，以此倍量稀释。取第10管的0.2ml稀释液弃去。使成 1:2、1:4……。
2．然后各管再加等量含相应抗原的5%红细胞盐水悬液，振摇试管架使之混匀，置 37℃水浴中放置1h，以3000r/min离心15s，观察凝集结果并记录；对凝集强度为“1+”以下及不凝集者，用生理盐水洗涤3遍，末次吸干上清液；各加生理盐水2滴，取出每管加抗人球蛋白试剂2滴，以3000r/min离心15s，观察凝集结果并记录。出现凝集的最高稀释度的倒数为效价。例如右图表抗A血清效价测定结果为256。

G. HIV-抗体检测方法的快速试剂

(一)人类免疫缺陷病毒(HIV)1+2型抗体诊断试剂(胶体硒法)
雅培人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂(胶体硒法)是用于体外，肉眼观察，定性的免疫分析，检测血清或血浆中的HIV-1和HIV-2抗体，用于帮助受感染个体的HIV-1和HIV-2抗体。本品仅用于无偿献血员现场初筛及临床紧急情况的使用，本品检测阳性者，需进行进一步筛查确认。
(二)InstantCHEKTM-HIVl+2金标快速诊断试剂
InstantCHEKTM-HIV1+2是一种快速、简单、灵敏的检验方法， 用以检测艾滋病病毒(HIV-1和HIV-2)的抗体。该方法适用于初筛检测，凡由该试剂测定为阳性者，需用另一种方法检测如ELISA或用蛋白印记法确定。

H. 抗体滴度的检测方法

检测方法同前[11].A450处测定光吸收值.将抗体滴度定义为:实验组和阴性对照组光吸收比值≥2.0时最大的血清稀释倍数
源自: 佐剂DDA和MPL对提高结核杆菌组合D... 《生物化学与生物物理进展》 2005年 余大海,蔡宏,朱玉贤

I. 如何检测体内是否存在抗体

用人们俗称的“两对半”检查， HBsAg (表面抗原)，HBsAb （表面抗体），HBeAg （e抗原），HbeAb（e抗体） ，HbcAb （核心抗原）。这种检查方法较准确，误诊的机率很小，要是没记错的话HBsAg ，HbcAb ，HbeAb这三种指标都为阳性就是“大三阳”了，有较强的传染性，其他指标阳性有可能是“小三阳”或是有抗体，感染后又好了的标志。