1. 酶联反应的检测方法
根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件,可设计出各种不同类型的检测方法。用于临床检验的ELISA主要有以下几种类型:
2.2.1双抗体夹心法测抗原
双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法,操作步骤如下:
1) 将特异性抗体与固相载体联结,形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。
2) 加受检标本,保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合,形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。
3) 加酶标抗体,保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。
4) 加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色,测知标本中抗原的量。在临床检验中,此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原,例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要获得针对受检抗原的异性抗体,就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。如抗体的来源为抗血清,包被和酶标用的抗体最好分别取自不同种属的动物。如应用单克隆抗体,一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗,分别用于包被固相载体和制备酶结合物。这种双位点夹心法具有很高的特异性,而且可以将受检标本和酶标抗体一起保温反应,作一步检测。
在一步法测定中,当标本中受检抗原的含量很高时,过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合,而不再形成夹心复合物。类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象,此时反应后显色的吸光值(位于抗原过剩带上)与标准曲线(位于抗体过剩带上)某一抗原浓度的吸光值相同(参见1.3.2,图1-4),如按常法测读,所得结果将低于实际的含量,这种现象被称为钩状效应(hook effect),因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。钩状效应严重时,反应甚至可不显色而出现假阴性结果。因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常增高的物质(例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等)时,应注意可测范围的最高值。用高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应。
假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇,例如HBsAg的a决定簇,也可用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物。但在HBsAg的检测中应注意亚型问题,HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4个亚型,虽然每种亚型均有相同的a决定簇的反应性,这也是用单抗作夹心法应注意的问题。
双抗体夹心法测抗原的另一注意点是类风湿因子(RF)的干扰。RF是一种自身抗体,多为IgM型,能和多种动物IgG的Fc段结合。用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有RF,它可充当抗原成份,同时与固相抗体和酶标抗体结合,表现出假阳性反应。采用F(ab')或Fab片段作酶结合物的试剂,由于去除了Fc段,从而消除RF的干扰。双抗体夹心法ELISA试剂是否受RF的影响,已被列为这类试剂的一项考核指标(参见6.2)。
双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原,但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原,因其不能形成两位点夹心。
2.2.2 双抗原夹心法测抗体
反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物,以检测相应的抗体。与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。此法中受检标本不需稀释,可直接用于测定,因此其敏感度相对高于间接法。乙肝标志物中抗HBs的检测常采用本法。本法关键在于酶标抗原的制备,应根据抗原结构的不同,寻找合适的标记方法。
2.2.3 间接法测抗体
间接法是检测抗体常用的方法。其原理为利用酶标记的抗抗体(抗人免疫球蛋白抗体)以检测与固相抗原结合的受检抗体,故称为间接法(见图2-3)。操作步骤如下:
1)将特异性抗原与固相载体联结,形成固相抗原。洗涤除去未结合的抗原及杂质。
2)加稀释的受检血清,保温反应。血清中的特异抗体与固相抗原结合,形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后,固相载体上只留下特异性抗体,血清中的其他成份在洗涤过程中被洗去。
3)加酶标抗抗体。可用酶标抗人Ig以检测总抗体,但一般多用酶标抗人IgG检测IgG抗体。固相免疫复合物中的抗体与酶标抗体抗体结合,从而间接地标记上酶。洗涤后,固相载体上的酶量与标本中受检抗体的量正相关。
4)加底物显色
本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的诊断。间接法的优点是只要变换包被抗原就可利用同一酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法。
间接法成功的关键在于抗原的纯度。虽然有时用粗提抗原包被也能取得实际有效的结果,但应尽可能予以纯化,以提高试验的特异性。特别应注意除去能与一般健康人血清发生反应的杂质,例如以E.Coli为工程酶的重组抗原,如其中含有E.Coli成份,很可能与受过E.Coli感染者血甭中的抗E.Coli抗体发生反应。抗原中也不能含有与酶标抗人Ig反应的物质,例如来自人血浆或人体组织的抗原,如不将其中的Ig去除,试验中也发生假阳性反应。另外如抗原中含有无关蛋白,也会因竟争吸附而影响包被效果。
间接法中另一种干扰因素为正常血清中所含的高浓度的非特异性。病人血清中受检的特异性IgG只占总IgG中的一小部分。IgG的吸附性很强,非特异IgG可直接吸附到固相载体上,有时也可吸附到包被抗原的表面。因此在间接法中,抗原包被后一般用无关蛋白质(例如牛血清蛋白)再包被一次,以封闭(blocking)固相上的空余间隙。另外,在检测过程中标本须先行稀释(1:40~1:200),以避免过高的阴性本底影响结果的判断。
2.2.4 竞争法测抗体
当抗原材料中的干扰物质不易除去,或不易得到足够的纯化抗原时,可用此法检测特异性抗体。其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体量越多,结合在固相上的酶标抗体愈少,因此阳性反应呈色浅于阴性反应。如抗原为高纯度的,可直接包被固相。如抗原中会有干扰物质,直接包被不易成功,可采用捕获包被法,即先包被与固相抗原相应的抗体,然后加入抗原,形成固相抗原。洗涤除去抗原中的杂质,然后再加标本和酶标抗体进行竞争结合反应。竞争法测抗体有多种模式,可将标本和酶标抗体与固相抗原竞争结合,抗HBc ELISA一般采用此法。另一种模式为将标本与抗原一起加入到固相抗体中进行竞争结合,洗涤后再加入酶标抗体,与结合在固相上的抗原反应。抗HBe的检测一般采用此法。
2.2.5 竞争法测抗原
小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点,因此不能用双抗体夹心法进行测定,可以采用竞争法模式。其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合。标本中抗原量含量愈多,结合在固相上的酶标抗原愈少,最后的显色也愈浅。小分子激素、药物等ELISA测定多用此法。
2.2.6 捕获包被法测抗体
IgM抗体的检测用于传染病的早期诊断中。间接法ELISA一般仅适用于检测总抗体或IgG抗体。如用抗原包被的间接法直接测定IgM抗体,因标本中一般同时存在较高浓度的IgG抗体,后者将竞争结合固相抗原而使一部份IgM抗体不能结合到固相上。因此如用抗人IgM作为二抗,间接测定IgM抗体,必须先将标本用A蛋白或抗IgG抗体处理,以除去IgG的干扰。在临床检验中测定抗体IgM时多采用捕获包被法。先用抗人IgM抗体包被固相,以捕获血清标本中的IgM(其中包括针对抗原的特异性IgM抗体和非特异性的IgM)。然后加入抗原,此抗原仅与特异性IgM相结合。继而加酶标记针对抗原的特异性抗体。再与底物作用,呈色即与标本中的IgM成正相关。此法常用于病毒性感染的早期诊断。甲型肝炎病毒(HAV)抗体的检测模式见图2-7。
类风湿因子(RF)同样能干扰捕获包被法测定IgM抗体,导致假阳性反应。因此中和IgG的间接法近来颇受青睐,用这类试剂检测抗CMV IgGM和抗弓形虫IgM抗体已获成功。
2.2.7 ABS-ELISA法
ABS为亲和素(avidin)生物素(biotin)系统(system)的略语。亲和素是一种糖蛋白,分子量60000,每个分子由4个能和生物素结合的亚基组成。生物素为小分子化合物,分子量244。用化学方法制成的衍生物素-羟基琥珀酰亚胺酯可与蛋白质和糖等多种类型的大小分子形成生物素标记产物,标记方法颇为简便。生物素与亲和素的结合具有很强的特异性,其亲和力较抗原抗体反应大得多,两者一经结合就极为稳定。由于一个亲和素可与4个生物素分子结合,因此如把ABS与ELISA法可分为酶标记亲和素-生物素(LAB)法和桥联亲和素-生物素(ABC)法两种类型。两者均以生物素标记的抗体(或抗原)代替原ELISA系统中的酶标抗体(抗原)。在LAB中,固相生物素先与不标记的亲和素反应,然后再加酶标记的生物素以进一步提高敏感度。在早期,亲和素从蛋清中提取,这种卵亲和素为碱性糖蛋白,与聚苯乙烯载体的吸附性很强,用于ELISA中可使本底增高。从链霉菌中提取的链霉亲和素则无此缺点,在ELISA应用中有替代前者的趋势。由于ABS-ELISA较普通ELISA多用了两种试剂,增加了操作步骤,在临床检验中ABS-ELISA应用不多。
2. igm病毒感染是通过什么可以检查出来
IgM不是病毒,这是一种免疫球蛋白,这种免疫球蛋白,如果检测为阳性提示正在受到某种病毒的感染。病毒感染多数没有特效药物,一般通过支持疗法和抗病毒治疗,加强免疫系统的功能而清除病毒。痊愈后IgM会转为阴性。
3. 有哪些方法可以检测梅毒
您好,专科专治,男性病建议您先去正规专业的男科医院检查下,根据自身的情况来分析,然后针对性的治疗。平时合理的饮食,预防各种疾病的发生。祝您健康!
4. ABO血型抗体有哪两种它们的检测方法分别是什么
ABO血型抗体
一般分为二类;"天然"抗体和免疫抗体,都是通过免疫产生的。
一般天然抗体是IgM,免疫抗体是IgG
ABO血型抗体为天然的IgM,不能通过胎盘。而O型血的妈妈有可能由于食物或外来物质在体内产生了抗A或B的抗体,而这个抗体是IgG,可以通过胎盘。
ABO血型鉴定
ABO
blood
groups
取静脉血少许,放入生理盐水中混匀,配成2%红细胞原液
【正常参考值】
根据红细胞膜上的A、B凝集原和血清内抗A、抗B凝集素的不同,将红细胞血型分为O、A、B、AB四型。
【异常结果分析】
用标准血清及标准红细胞鉴定ABO血型结果
AB型
ABO血型交叉配合试验
ABO
blood
groups
cross-matching
静脉血3ml
【正常参考值】
同型交叉配血主侧和次侧均无凝集、无溶血。
【异常结果分析】
同型配血,主侧和次侧均无凝集、无溶血,表示无输血禁忌,可以输血。否则会导致严重或致命的输血反应。在此系统中还有若干种亚型,在定血型和交叉配血时应予注意。
Rh血型鉴定
Rh
blood
group
取静脉血少许,放入生理盐水中混匀,配成2%红细胞原液
【正常参考值】
我国人Rh阳性>99%、Rh阴性<l%。
【异常结果分析】
Rh血型是一个比较复杂的血型系统,人类红细胞表面的Rh抗原主要有D、C、E、c、e等,其中D抗原性最强。因此一般临床上只做D抗原的鉴定。受检红细胞与抗D血清发生凝集者为阳性,反之为阴性。测定Rh血型对于溶血性输血反应和新生儿Rh溶血症极有价值。
溶血性输血反应:Rh阴性者接受Rh阳性者血液,则Rh阳性血液中的抗原将刺激Rh阴性人体产生Rh抗体。如果再次输入Rh阳性血液,即可导致溶血性输血反应。
新生儿溶血症:Rh阴性母亲怀Rh阳性胎儿,第一胎时,母体受胎儿抗原致敏产生抗体,但抗体效价较低一般不易发生溶血;若怀第二胎时仍为Rh阳性胎儿,则抗体通过胎盘进入胎儿体内可导致新生儿溶血病发生。Rh阴性母亲在孕前曾接受Rh阳性者血液,则第一胎时即可引起Rh阳性胎儿的新生儿溶血病。
ABO血型鉴定的原理
ABO血型鉴定的原理是根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原,将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。可利用红细胞凝集试验,通过正(血清试验)反(细胞试验)定型准确鉴定ABO血型。
所谓正定型是用已知抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原,所谓反定型是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗A或抗B。
5. 什么是梅毒螺旋体IgM抗体检测
硬下疳初起患者血液循环中抗梅毒IgM抗体水平低下,用暗视野显微镜检查梅毒螺旋体是最好的方法。如果患者不规则用药治疗,则影响螺旋体检查,可用19SIgM进行检测,作为证实试验。
6. 诺如感染可以查血清特异性IGM抗体吗
目前常用的检测方法有病毒核酸检测和新冠肺炎特异性抗体血清检测。核酸检测是检测病毒基因中某些特定核酸序列,是针对病毒的直接检测。抗体检测是间接检测,是检测人体对新冠病毒的免疫反应,当病毒侵入人体后,人体免疫系统会产生大量的免疫球蛋白,最常见的是IgM和IgG。
Q
检测发现新冠病毒血清特异性IgM阳性能否作为确诊依据?
A
不能!新冠病毒特异性抗体的血清学检测标本易获取,操作简单快捷,易于基层开展,可以作为初筛手段,但确诊新冠肺炎还需要结合核酸检测或者动态观察IgM和IgG滴度来判断。从抗体角度来讲,确诊依据必须是:特异性IgM、IgG抗体双阳性或IgG抗体由阴性转为阳性或IgG抗体滴度恢复期较急性期4倍及以上升高。
7. 梅毒的检测
血清检查即可
8. 血清IgG,IgM,IgA检测一般所用的试剂盒哪家公司的比较好其检测方法一般采取什么方法
血清IgG,IgM,IgA检测一般采取生化法.北京华英生物技术研究所可以完成此类检测.
9. 风湿病的免疫检验
风湿病的免疫检验
自身免疫病(AID)是指由于过度而持久的自身免疫反应导致组织器官损伤并引起相应器官病变或临床症状的一类疾病。风湿病是一类涉及到关节、软骨、肌肉等结缔组织的慢性疾病。下面是我为大家带来的风湿病的免疫检验的知识,欢迎阅读。
一、抗核抗体测定
(Antinuclear antibody ,ANA) ANA是抗细胞核多种成分的自身抗体,无种属及器官特异性。ANA可分为抗DNA抗体、抗组蛋白抗体、抗非组蛋白抗体、抗核仁抗体及其他细胞成分抗体。这些抗体共同组成ANA谱。
抗核抗体(ANA)的检查最常用于筛查全身性风湿病和自身免疫病。ANA的检查可观察到能与细胞核内的核酸和蛋白抗原起反应的自身抗体。细胞内可能存在对多种抗原起反应的抗体。只有某种抗体的效价很高时,IFA才能加以鉴别。
1、homogenous(均质型)
又称弥散型,相应的抗原是双链DNA和组蛋白复合物。常见于SLE,特别是肾脏受累病人。也可见于其它结缔组织病,如:风湿性关节炎,MCTD,干燥综合征,硬皮病,慢性活动性肝炎及原发性胆汁性肝硬变。
2、Peripheral(周边型)
相应的抗原为双链DNA,多见于活动性SLE病人。
3、Speckle(斑点型)
主要是针对ENA的抗体,包括Sm,RNP,SSA,SSB,Scl-70。一般认为低效价的斑点型ANA不是结缔组织病特有的,实际上不代表临床异常。高效价的抗Sm抗体多与SLE有关。高效价的抗RNP自身抗体见于MCTD,但也见于SLE。抗SSA和抗SSB抗体,见于S.S,也可见于SLE。当病人有抗SSA抗体时,通常以皮肤表现和光过敏为主。,也存在于ANA阴性狼疮和新生儿狼疮。Scl-70抗体与硬皮病有关。
4、Nucleoli(核仁型)
其靶抗原是与RNA分子相关的核蛋白。多见于硬皮病。
5、Centromere(着丝点型)
抗着丝点抗体(ACA),多见于全身性硬皮病的CREST综合征。
常用检测方法为IFA、ELISA、免疫印迹法、RIA、免疫斑点法、胶体金标斑点免疫渗滤法等。其中IFA是应用较广的一种方法。一般采用鼠肝切片或Hep-2细胞为底物抗原片,当加入病人血清时,病人血清中的ANA可与细胞中相应抗原成分结合。再加入荧光标记抗人IgG,在荧光显微镜下可见细胞核内亮绿色荧光。
〖参考值〗 <1:10或阴性
〖临床意义〗
ANA阳性见于多种疾病,常用于风湿病及自身免疫病的诊断。SLE患者阳性率在95%以上,且效价常在1:80以上。在其他风湿病如RA、系统性硬化症、皮肌炎、干燥综合征 (SS)、混合结缔组织病(MCTD)等也可阳性。其他如肝病,病毒感染等也可呈低效价阳性。
〖注意事项〗
在大约1%的正常人的体内可测到低效价的非特异性抗核抗体,80岁以上老人的检出率可高达50%。高效价的ANA一般与活动期SLE密切相关。采用Hep-2细胞检测ANA,可见到不同的染色模型。
此外,口服避孕药的妇女也可检测到ANA。
二、可提取性核抗原(Extractable nuclear antigen ENA)抗体
ENA是细胞内许多小分子的RNA和多肽组成的非组蛋白的酸性核蛋白颗粒。分布在细胞质中的称为小细胞浆核糖核蛋白(scRNPs);分布在细胞核内的称为小细胞核核糖核蛋白(snRNPs)。目前已发现的有20余种,其中常用的抗ENA抗体有如下几种。
(一)抗Sm抗体
Sm是病人Smith的缩写。Sm抗原属于SnRNP,由5个RNA和多肽组成,抗原表位在29KD、28KD和13.5KD多肽上,抗Sm抗体是酸性糖蛋白,是SLE的标记抗体。
(二) 抗nRNP(u1RNP)抗体
u1RNP是u1RNA和蛋白质组成的,抗原表位在73KD、32KD和17.5KD多肽上,是混合结缔组织病(MCTD)的重要血清标志。
(三)抗SSA抗体
SS为干燥综合征的缩写。此抗体又称抗RO抗体。SSA抗原是RNA和蛋白质复合物,抗原表位在52KD多肽上,主要见于原发性干燥综合征患者及SLE。
(四)抗SSB抗体
SSB抗体常伴随SSA抗体同时出现,又称抗La抗体,SSB抗原属于SnRNP,是含有RNA和50KD蛋白质的复合物。抗原表位在45KD、47KD和48KD多肽上。与SSA抗体并存对诊断SS有特异性。
(五)抗Scl-70抗体
Scl-70抗原表位在86KD、70KD的片段上,是DNA拓扑异构酶I的降解产物,抗Scl-70抗体几乎仅见于硬皮病,阳性率30%左右。
(六)抗Jo-1抗体
Jo-1抗体是组氨酰tRNA合成酶,抗原表位在55KD多肽,抗Jo-1抗体是多发性肌炎和皮肌炎的标记抗体,阳性率25-40%。
(七)抗核糖体抗体
核糖体在核仁合成,然后转入胞浆,抗原表位在大亚基上的38KD、16KD和15KD多肽上。抗核糖体抗体阳性主要见于SLE,阳性率20-30%。
检测以上抗体的方法主要有:对流免疫电泳法(CIE)、双相免疫扩散法,免疫印迹试验(IBT),免疫斑点技术和ELISA法等。一般采用兔胸腺或牛胸腺提取物或细胞提取物作为抗原。近年来,应用分子重组抗原制备的试剂盒已投入市场。
〖参考值〗阴性
〖临床意义〗
1. 抗n RNP抗体:见于35-40%的SLE病人,在MCTD病人中阳性率可达95-100%,也可见于其他风湿性疾病。
2. 抗Sm抗体:主要见于SLE及重叠综合征,急性期病人75%为阳性。一般SLE患者30-40%阳性率。但Sm抗体阳性者90%以上为SLE,故称之为SLE的标记抗体。
3. 抗SSA和抗SSB抗体:见于40-45%的SS病人。抗SSA抗体也可见于25%的SLE病人及其他风湿性疾病;抗SSA抗体与新生儿狼疮和先天性传导阻滞有关。抗SSA抗体也可见于病毒感染等非风湿性疾病。抗SSB抗体对原发性干燥综合征较特异,但阳性率仅27%左右。
4. 抗Scl-70抗体:一般仅见于系统性硬化症病人,阳性率20-60%。
5.抗Jol-1抗体见于30%的多发性肌炎病人及10%的皮肌炎病人。抗Jol-1抗体与多发性肌炎病人间质性肺炎的发生率增加有关。
6.抗rRNP 抗体:主要见于SLE患者,阳性率20%左右,与中枢神经系统病变有关,多在疾病活动期出现。
〖注意事项〗
判断试验结果时要结合临床表现作出评价,也应根据试验方法来作出解释。对流免疫电泳法和双相扩散法敏感性低,但特异性较高;免疫印迹法、斑点免疫法及ELISA方法敏感性提高,但特异性相对减少。
三.抗双链DNA抗体(Antidouble-stranded DNA , A-dsDNA,)
A-dsDNA 对SLE有高度特异性,是针对细胞核脱氧核糖核酸的自身抗体。临床上常用的检测方法有:①Farr¡®s法:125I-DNA与待检标本中的A-dsDNA形成免疫复合物,加饱和硫酸铵使复合物沉淀,以γ计数器分别测定上清中游离及沉淀物中已结合的125I-DNA含量,可计算出血清中A-dsDNA的结合活性。
②ELISA法:将小牛胸腺DNA包被在微孔板中,加入病人血清,如有A-dsDNA则结合到微孔板上,加入酶标抗人IgG,加入底物显色后经酶标仪比色可知血清中A-dsDNA抗体的量。
③免疫荧光法:采用马疫锥虫或短膜虫作为基质,加入病人血清。血清中的A-dsDNA与膜上的天然DNA结合,加入荧光标记抗人IgG。马疫锥虫和短膜虫的动基体会发出绿色荧光。
④金标斑点法:双链DNA包被于硝酸纤维膜上,加入病人血清,加入金标记抗人IgG,如有A-dsDNA存在,会显示红色斑点。
〖参考值〗依方法不同参考值也有不同。
Farr¡®s法:≤ 0.20 免疫荧光法:<1:10ELISA法:依试剂盒而定,一般<70u
金标法:阴性
〖临床意义〗
A-dsDNA 阳性对 SLE 有较高的特异性。大约60%的活动性 SLE 病人会出现 A-dsDNA。其他风湿性疾病也会出现,但阳性率非常低,如RA、S.S。
〖注意事项〗
假阳性结果非常少见,但阴性亦不能排除SLE的诊断。
四.抗中性粒细胞胞浆抗体( Antineutrophil cytoplasmic antibody,ANCA) 测定
ANCA是针对中性粒细胞胞浆多种成分的 自身抗体,主要有髓过氧化物酶(MPO)和蛋白酶3( Proteinase 3 ,PR3)的抗体 。主要用于诊断Wegener 肉芽肿和系统性血管炎,特别是伴有肾病、呼吸疾病或其他类型血管炎引起多器官损害的患者。检测方法有IFA、ELISA、 IBT等。
〖参考值〗 阴性。
〖临床意义〗
免疫荧光法检查ANCA阳性一般分为两种荧光类型,一种是胞浆型,称为cANCA,一种是核周型,称为pANCA。cANCA产生弥漫性细胞浆染色,是针对PR3的抗体 ,一般见于wegener肉芽肿病(WG),特别是肾和肺受累的病人。pANCA产生核周染色,是针对MPO的抗体 ,主要见于系统性血管炎病人。
在WG病人中,cANCA阳性率在活动期可达80%,且有较高的抗体效价。在缓解期抗体阳性率低,且效价下降,或完全消失。
〖注意事项〗
ANCA 阳性也可见于 Good-Pastare¡®s 综合征和SLE病人。WG的诊断不能单纯依赖ANCA的结果,还要结合其他临床表现,试验室检查和组织病理学检查才能确定。ANCA效价不能完全反应疾病的活动以及对治疗的反应。pANCA 阳性不是特异性的抗MPO抗体,也可以是抗粒细胞胞浆中其他酶的抗体,如弹性蛋白酶,组织蛋白酶G等。ANCA检测应注意排除其他自身抗体的交叉反应,如ANA。因其可产生假阳性应注意鉴别,并进行ANA检测。
五、抗线粒体抗体(Antimitochondrial antibody,AMA)
AMA是以细胞浆中的线粒体为抗原的一种自身抗体,无器官和种属特异性。一般采用大鼠肾及胃作为抗原基质,采用IFA检测,阳性可见大鼠肾和胃的细胞浆呈现细颗粒状荧光。
采用免疫印迹法可将与线粒体抗原的反应分为从M1到M9九种类型,高效价的M2和M9型自身抗原与原发性胆汁性肝硬变相关。目前已有检测M2的ELISA试剂盒供应。
〖参考值〗 阴性 >1:10 为阳性
〖临床意义〗
AMA是原发性胆汁性肝硬化的标记抗体,阳性率达90%,并且50%患者抗体效价达1:1280或更高。此外,也可见于慢性活动性肝炎、隐匿性肝硬化。肝外阻塞性黄疸患者AMA常阴性,因此可作为鉴别诊断的一个指标。正常人中阳性率<10%,且效价较低。
六.抗平滑肌抗体(Antismooth muscle antibody,ASMA )
ASMA是抗肝细胞膜上一种肌动球蛋白的自身抗体。这种肌动球蛋白与平滑肌有交叉抗原性,因此与平滑肌有反应。一般采用IFA法,以大鼠胃作为抗原基质,阳性可见胃壁平滑肌呈现亮绿色荧光。
〖参考值〗 阴性,>1:10为阳性
〖临床意义〗
主要见于明显活动期的自身免疫性肝炎患者,阳性率在80%以上,效价 在1:80以上。急性病毒性肝炎早期ASMA也可阳性,且早于 HBsAg出现。其他疾病如传染性单核细胞增多症、SS、RA、支原体肺炎、肿瘤和病毒感染者也有不同程度的阳性率。正常人中仅有2%阳性。
七. 抗甲状腺球蛋白抗体(ATGA)和抗甲状腺微粒体抗体(ATMA)
ATGA 是由甲状腺炎引起的自身抗体 ,抗原是一种糖蛋白。ATGA有器官特异性而无种属特异性。ATMA 的抗原是甲状腺滤泡上皮细胞胞浆内的脂蛋白。常用检测方法有:IFA、IHA、RIA、ELISA等。
〖参考值〗
IHA: 血清效价 ≤1:32, >1:32为阳性,ATGA 和ATMA
ELISA:正常为阴性,P/N < 2.1,>2.1 为阳性, ATGA 和 ATMA
RIA:ATGA <30%;ATMA <15%
l〖临床意义〗
主要见于桥本甲状腺炎、甲亢、甲低患者,也可见于甲状腺瘤、恶性贫血、重症肌无力、Edison 病和肝脏疾病等。SLE及其他自身免疫病也有一定的阳性率。
正常人也可检出这两种抗体 ,并且随着年龄的增长,阳性率增加,特别是40岁以上妇女,可达18%左右。
应该注意到,有的患者ATGA阴性,但ATMA阳性,因此两种抗体同时检测可提高抗甲状腺自身抗体的检出水平。
八. HLA-B27测定
HLA-B27 抗原为人类MHC I类 抗原B位点的表达产物,可分为几种亚型。HLA -B27的检测方法有多种,补体依赖性微量细胞毒法(CDMA);流式细胞仪法;玫瑰花法;ELISA法;等电聚焦法等。近来应用PCR法检测HLA-B27,敏感而特异,并且可进行B27亚型的分析。
l〖参考值〗
非洲-美洲人:3-4%;l 高家索人:6-8%;l 亚洲人:1%。
〖临床意义〗
强直性脊柱炎(AS)患者HLA-B27阳性率为90-95%。大约42%的青年类风湿关节炎(JRA)存在HLA-B27,Reiter¡®s 综合征患者阳性率大约79%。此外,肠病性关节炎、银屑病性关节炎也有一定的阳性率。RA病人阳性率不高。
〖注意事项〗
在评价HLA-B27阳性结果时应结合临床表现综合考虑,不能单纯依靠此结果作出诊断。
其他免疫指标及检测
C反应蛋白(C-Reactive Protein,CRP )
CRP是一种急性时相蛋白,由肝细胞合成,可与肺炎球菌细胞壁C多糖发生沉淀反应,故称CRP。在各种炎症的急性期或组织创伤时,血清CRP浓度急剧升高。CRP不仅可结合多种细菌( bacteria ),真菌(fungi)及原虫(protozoal)体内的多糖物质,而且在钙离子存在下,还可以结合磷脂酰胆碱和核酸。结合后的复合体具有激活补体(complement)的作用。〖参考值〗 <8mg/L
〖临床意义〗
血清CRP 升高多见于:急性、慢性细菌感染;组织损伤坏死;急性心肌梗死;各种炎症;外科手术;肿瘤浸润;急性风湿热和活动性类风湿关节炎,以及其它关节炎性疾病。但病毒性感染一般CRP不升高,因此可作为病毒性感染和细菌性感染的'鉴别指标。
〖注意事项〗
CRP测定方法不同,在判定结果时应予考虑。此外,雌激素、口服避孕药可使CRP增高,皮质激素和抗炎药可使CRP下降。
类风湿因子(Rheumatoid Factor,RF)
RF是一种自身抗体,可与变性的IgG发生反应,与IgG 的Fc段结合。RF可分为IgG、IgM、IgA、IgD和IgE五型。凝集试验检测的主要为IgM型RF。RF主要见于类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis RA),也可见于其他结缔组织病及其他疾病。检测方法有乳胶凝集试验、致敏羊红细胞凝集法、速率散射比浊法、ELISA法等。
〖参考值〗
乳胶法:阴性或<1:20 速率散射比浊法:<30IU/ml
〖临床意义〗
RF见于90%以上的RA病人,效价常在1:160以上,含量多>80IU/ml。,一般方法所检测的大部分是IgM-RF。
关于RF分型,临床应用尚不广泛。多数作者认为:IgM-RF效价高低可在一定程度上反映RA的活动性,但无明确的密切关系;IgG-RF与RA患者的滑膜炎、血管炎和关节外症状密切相关;IgA-RF见于RA、硬皮病、Felty综合征和系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE),也是RA临床活动性的一个指标;IgE-RF 除RA患者外,也见于Felty综合征和青年型RA。高水平 IgM-RF阳性病人预后较差。
从早期RA患者的X线片分析,IgM-RF持续阳性的病人更易发生骨侵蚀。IgA-RF在SS病人中阳性率较高;IgE-RF在恶性关节炎病人中阳性率较高。在RA病人,高效价RF存在并伴有严重的关节功能受限时,常提示预后不良。
〖注意事项〗
正常人也可有4%左右的阳性率。随年龄增加,RF的检出率会增加。RA病人RF也可阴性,不能单纯依靠RF阳性来诊断RA。RF还可见于其它多种疾病,其中最常见的是干燥综合征(S.S), 发生率在90%以上,且含量一般较高。其它常见的RF阳性的疾病有: SLE、系统性硬化症、高球蛋白血症、结节病、梅毒、麻风、病毒感染、肝硬化等等。有些效价可在1:160以上,含量在80IU/ml以上,在解释结果时应予注意。
冷球蛋白(Cryoglobulin CG,)
冷球蛋白是一种球蛋白,4℃时发生沉淀,30 ℃易聚合,37℃又溶解。CG分为三类:
1.I型(单克隆型):大多为IgM或IgG 型,无抗补体作用。
2.II型(混合型):两种或两种以上单克隆Ig混合,以IgM+IgG最常见,也可见IgA+ IgG;IgG+IgM+IgA等。有抗补体作用。
3. III型(多克隆型): 没有单克隆蛋白。
其检测方法有血球压积管法(定性)和分光光度计法(定量)。
〖参考值〗 定性法:阴性 定量法:<80μg/ml。
〖临床意义〗
SLE 病人血清中可出现混合型CG。在血管炎、肾小球肾炎、淋巴细胞增生性疾病也可阳性。在巨球蛋白血症或多发性骨髓瘤病人伴雷诺氏现象时与I型冷球蛋白血症有关。 II型冷球蛋白血症与自身免疫病例如血管炎、肾小球肾炎、SLE、RA 和 SS 有关。在某些感染如肝炎、传染性单核细胞增多症、巨细胞病毒感染和弓形虫病也可出现。
小结:
胞浆抗体
Hep-2细胞具有许多胞浆抗原。如有特异性胞浆抗体存在,可出现强阳性胞浆荧光。包括抗线粒体抗体(AMA)、抗核糖体抗体、抗肌动蛋白抗体即抗平滑肌抗体(ASMA)、抗高尔基体抗体、抗丝抗体(如Vimentin)。一般最有意义的是AMA和ASMA,可是荧光染色Hep2细胞却不能鉴定这两种抗体,可应用鼠肾和鼠胃切片作进一步分析。
系统性风湿病活动期的评价
自身抗体检测以诊断全身性疾病比监测该病活动更有意义。但抗dsDNA抗体效价却与活动性有关。应定期检测抗dsDNA抗体的效价及C3、C4的含量。以及测定循环免疫复合物(CIC)的含量。ESR和CRP在炎症反应时常常升高。RA病情加重时,CRP明显增高。SLE活动期,CRP一般正常。
器官特异性自身免疫性疾病
组织抗体
许多自身抗体可采用IFA测定,用鼠肾和胃的切片能测出抗线粒体、平滑肌、肝肾微粒体和胃壁细胞的抗体。甲状腺组织切片可测定抗甲状腺自身抗体。
自身免疫性肝病
在肝脏病变中,ANA阳性率可达40-80%。抗线粒体抗体(AMA)与原发性胆汁性肝硬变有关。特别是高效价的M2和M9线粒体抗原。
约一半的自身免疫性肝炎的病人有较高效价的ASMA。此外,肝肾微粒体抗体(LKMAs),抗可溶性肝抗原(SLA)抗体,抗肝细胞膜抗体等也可用于自身免疫性肝病诊断和监测。
其他
肾脏疾病常测定的抗体有抗dsDNA抗体,抗肾小球基底膜抗体等,还可测定CIC,以及作肾组织活检进行荧光染色。
韦格纳肉芽肿病是一种发生于上下呼吸道的坏死性血管炎,也累及肾脏,病人常死于肾和肺衰竭。检查抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCAs)是诊断指标之一。也可通过ELISA测定抗髓过氧化物酶抗体,抗蛋白酶3抗体,有助于诊断和鉴别诊断。
胃肠道疾病中,恶性贫血与抗胃壁自身抗体有关,与抗内因子抗体的相关性达75%。抗胰岛细胞抗体(ICAs),抗谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)与I型糖尿病有一定关系。重症肌无力病人可出现抗骨骼肌抗体。多发性肌炎和皮肌炎可有抗Pm1和抗Jo-1抗体。抗心肌抗体常见于心肌梗死、心脏手术或心肌损伤后。
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