⑴ 葡聚糖是阴性好还是阳性好我是＜10
阴性好!
深部真菌感染患者血浆1-3-β-D葡聚糖
检测的临床意义
摘要：
目的：探讨深部真菌感染血浆1-3--β-D葡聚糖检测的临床意义。
方法：应用MB-80微生物动态快速检测系统及GKT-5M Set动态真菌检测试剂盒定量检测血浆中1-3--β-D葡聚糖的含量。结果 正常对照组血浆1-3-β-D葡聚糖含量为2.83±2.57pg/ml；深部真菌感染组为54.06±36.13 pg/ml。经T-检验分析，对照组与深部真菌感染组1-3-β-D葡聚糖平均值差异非常显着（t=7.741,P＜0.001）。结论 血浆葡聚糖检测可在拟诊早期为临床医生提供机体是否感染真菌的可*信息，是一种实用的真菌感染早期诊断方法。
⑵ 葡聚糖有多少种
β-葡聚糖是用独特的工艺开发的一种新的产品，其来源于新鲜的食品啤酒酵母。它是一种多糖，主要化学结构β-1，3 葡聚糖和β-1，6葡聚糖，其中前者具有抗肿瘤性质，而且能够极大地提高人体自然免疫力。
⑶ 测定糖的含量的方法有哪些
糖的测定方法
一般有四种方法：
1、 直接滴定法。
原理为 糖还原天蓝色的氢氧化铜为红色的氧化亚铜。缺点：水样中的还原性物质能对糖的测定造成影响。
2、 高锰酸钾滴定法。
所用原理同直接滴定法。缺点：水样中的还原性物质能对糖的测定造成影响，过程较为复杂，误差大。
3、硫酸苯酚法。
糖在浓硫酸作用下，脱水形成的糠醛和羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10-100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。
缺点：如果水样呈橙红色（大部分水样为黄色），会对比色法造成较大的干扰。
4、蒽酮法
糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛和羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的测定。
缺点：，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅。
综合比较；采用蒽酮法能将最为准确地测定尾水中糖的含量。
（一） 直接滴定法
Ⅰ、原理
v 一定量的碱性酒石酸铜甲、乙液等量混合，立即生成天蓝色的氢氧化铜沉淀，这种沉淀很快与酒石酸钠反应，生成深蓝色的可溶性酒石酸钾钠铜络合物。在加热条件下，以次甲基蓝作为指示剂，用标液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，生成红色的氧化亚铜沉淀，待二价铜全部被还原后，稍过量的还原糖把次甲基蓝还原，溶液由蓝色变为无色，即为滴定终点。根据样液消耗量可计算出还原糖含量。
样品经除去蛋白质后，在加热条件下，以次甲基蓝做指示剂，滴定标定过的碱性酒石酸铜溶液（用还原糖标准溶液标定碱性酒石酸铜溶液），根据样品溶液消耗体积计算还原糖量。
Ⅱ、仪器和试剂
1．仪器
酸式滴定管，可调电炉（带石棉板），250ml容量瓶。
2．试剂
1. 盐酸。
2. 碱性酒石酸铜甲液：称取15g硫酸铜（CuSO4·5H2O）及0.05g次甲基蓝，溶于水中并稀释至1000mL。
3. 碱性酒石酸铜乙液：称取50g酒石酸钾钠与75g氢氧化钠，溶于水中，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000 ml，贮存于橡胶塞玻璃瓶内。
4. 乙酸锌溶液：称取21.9 g乙酸锌，加3ml冰乙酸，加水溶解并稀释至100ml。
5. 亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾，用水溶解并稀释至100ml。
6. 葡萄糖标准溶液：准确称取1.0000g经过96℃±2℃干燥2h的纯葡萄糖，加水溶解后加入5ml盐酸，并以水稀释至1000L。此溶液相当于1mg/ml葡萄糖（注：加盐酸的目的是防腐，标准溶液也可用饱和苯甲酸溶液配制）。
7. 果糖标准溶液：按⑹操作，配制每毫升标准溶液相当于1mg的果糖。
8. 乳糖标准溶液：按⑹操作，配制每毫升标准溶液相当于1mg的乳糖。
9. 转化糖标准溶液：准确称取1.0526g纯蔗糖，用100ml水溶解，置于具塞三角瓶中加5ml盐酸（1+1），在68℃~70℃水浴中加热15min，放置至室温定容至1000ml，每ml标准溶液相当于1.0mg转化糖。
Ⅲ、实验步骤
1．样品处理
⑴ 乳类、乳制品及含蛋白质的食品：称取约2.50～5.00g固体样品（吸取25～50ml液体样品），置于250 ml容量瓶中，加50 ml水，摇匀。边摇边慢慢加入5ml乙酸锌溶液及5ml亚铁氢化钾溶液，加水至刻度，混匀。静置30 min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。（注意：乙酸锌可去除蛋白质、鞣质、树脂等，使它们形成沉淀，经过滤除去。如果钙离子过多时，易与葡萄糖、果糖生成络合物，使滴定速度缓慢；从而结果偏低，可向样品中加入草酸粉，与钙结合，形成沉淀并过滤。）
⑵ 酒精性饮料：吸取100ml样品，置于蒸发皿中，用1 mol/L氢氧化钠溶液中和至中性，在水浴上蒸发至原体积1/4后，移入250ml容量瓶中，加水至刻度。
⑶ 含多量淀粉的食品：称取10.00～20.00g样品，置于250ml容量瓶中，加200ml水，在45℃水浴中加热1h，并时时振摇（注意：此步骤是使还原糖溶于水中，切忌温度过高，因为淀粉在高温条件下可糊化、水解，影响检测结果。）。冷后加水至刻度，混匀，静置，沉淀。吸取200ml上清液于另一250ml容量瓶中，慢慢加入5ml乙酸锌溶液及5ml亚铁氢化钾溶液，加水至刻度，混匀，沉淀，静置30 min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。
⑷ 汽水等含有二氧化碳的饮料：吸取100ml样品置于蒸发皿中，在水浴上除去二氧化碳后，移入250ml容量瓶中，并用水洗涤蒸发皿，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀后备用。（注意：样品中稀释的还原糖最终浓度应接近于葡萄糖标准液的浓度。）
2. 标定碱性酒石酸铜溶液：吸取5.0ml碱性酒石酸铜甲液及5.0ml乙液，置于150ml锥形瓶中（注意：甲液与乙液混合可生成氧化亚铜沉淀，应将甲液加入乙液，使开始生成的氧化亚铜沉淀重溶），加水10 ml，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加约9 ml葡萄糖标准溶液或其他还原糖标准溶液，直至溶液兰色刚好褪去为终点，记录消耗的葡萄糖标准溶液或其他还原糖标准溶液总体积，平行操作三份，取其平均值，计算每10 ml（甲、乙液各5 ml）碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量或其他还原糖的质量（mg）。（注意：还原的次甲基蓝易被空气中的氧氧化，恢复成原来的蓝色，所以滴定过程中必须保持溶液成沸腾状态，并且避免滴定时间过长。）
3. 样品溶液预测：吸取5.0 ml碱性酒石酸铜甲液及5.0 ml乙液，置于150 ml锥形瓶中，加水10 ml，加入玻璃珠2粒，控制在2 min内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中滴加样品溶液，并保持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以每两秒1滴的速度滴定，直至溶液蓝色褪去，出现亮黄色为终点。如果样品液颜色较深，滴定终点则为兰色褪去出现明亮颜色（如亮红），记录消耗样液的总体积。（注意：如果滴定液的颜色变浅后复又变深，说明滴定过量，需重新滴定。） 当试样溶液中还原糖浓度过高时应适当稀释，再进行正式测定，使每次滴定消耗试样溶液的体积控制在与标定碱性酒石酸酮溶液时所消耗的还原糖标准溶液的体积相近，约在10ml左右。当浓度过低时则采取直接加入10ml样品溶液，免去加水10ml，再用还原糖标准溶液滴定至终点，记录消耗的体积与标定时消耗的还原糖标准溶液体积之差相当于10ml试样溶液中所含还原糖的量。
4. 样品溶液测定：吸取5.0 ml碱性酒石酸铜甲液及5.0 ml乙液，置于150 ml锥形瓶中，加水10 ml，加入玻璃珠2粒，在2 min内加热至沸，快速从滴定管中滴加比预测体积少1 ml的样品溶液，然后趁沸继续以每两秒1滴的速度滴定直至终点。记录消耗样液的总体积，同法平行操作两至三份，得出平均消耗体积。
5. 计算
样品中还原糖的含量（以某种还原糖计）按下式计算。
X=〔A/(m×V/250×1000)〕×100
式中：X--样品中还原糖的含量(以某种还原糖计)，单位 g/100g；
A—碱性酒石酸铜溶液（甲、乙液各半）相当于某种还原糖的质量，单位 mg；
m--样品质量，单位 g；
V--测定时平均消耗样品溶液的体积，单位 ml；
计算结果保留小数点后一位。
注意：
滴定结束，锥形瓶离开热源后，由于空气中氧的氧化，使溶液又重新变蓝，此时不应再滴定。
（二）高锰酸钾滴定法
v 原理 将样液与一定量过量的碱性酒石酸铜溶液反应，还原糖将二价铜还原为氧化亚铜，经过滤，得到氧化亚铜沉淀，加入过量的酸性硫酸铁溶液将其氧化溶解，而三价铁盐被定量地还原为亚铁盐，用高锰酸钾标准溶液滴定所生成的亚铁盐，根据高锰酸钾溶液消耗量可计算出氧化亚铜的量，再从检索表中查出氧化亚铜量相当的还原糖量，即可计算出样品中还原糖含量。
（三）硫酸苯酚法
Ⅰ、原理
糖在浓硫酸作用下，脱水形成的糠醛和羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10-100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。
多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。再以比色法测定。
Ⅱ、试剂
1． 浓硫酸：分析纯，95.5%
2． 80%苯酚：80克苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。
3． 6%苯酚：临用前以80%苯酚配制。（每次测定均需现配）
4． 标准葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）,或分析纯葡萄糖。
5． 15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。
6． 5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。
7． 6mol/L 氢氧化钠：120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水。
8． 6mol/L 盐酸
Ⅲ、操作。
1．制作标准曲线：准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸馏水补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。
2．样品含量测定：
①取样品1克（湿样）加1ml 15%TCA溶液研磨，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液于10毫升离心管中，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液，重复3次。最后一次将残渣一起到入离心管。注意：总的溶液不要超出10毫升。（既不要超出离心管的容量）。
②离心，转速3000转/分钟，共三次。第一次15分钟，取上清液。后两次各5分钟取上清液到25毫升锥形比色管中。最后滤液保持18毫升左右。（测肝胰腺样品时，每次取上清液时应过滤。因为其脂肪含量大容易夹带残渣。）
③水浴，在向比色管中加入2毫升6mol/L 盐酸之后摇匀，在96℃水浴锅中水浴2小时。
④定容取样。水浴后，用流水冷却后加入2毫升6mol/L 氢氧化钠摇匀。定容至25毫升的容量瓶中。吸取0.2 ml的样品液，以蒸馏补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却室温放置20分钟以后于490nm测光密度。每次测定取双样对照。以标准曲线计算多糖含量。
Ⅳ、注意
（1）此法简单、快速、灵敏、重复性好，对每种糖仅制作一条标准曲线，颜色持久。
（2）制作标准线宜用相应的标准多糖，如用葡萄糖，应以校正系数0.9校正μg数。
（3）对杂多糖，分析结果可根据各单糖的组成比及主要组分单糖的标准曲线的校正系数加以校正计算。
（4）测定时根据光密度值确定取样的量。光密度值最好在0.1——0.3之间。比如：小于0.1之下可以考虑取样品时取2克，仍取0.2ml样品液，如大于0.3可以减半取0.1ml的样品液测定。
（四）蒽酮法
Ⅰ、实验原理
糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛和羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的测定。
该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖和己糖，而且可以测所有的寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应。所以，用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅。故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。
Ⅱ、试剂：
蒽酮试剂，0.20 g蒽酮溶入100 mL 95%浓硫酸中，冰箱保存；
Ⅲ、方法：
样品2.0 mL加5.0 mL蒽酮试剂，混匀，然后水浴煮沸10 min，取出冷却至室温，在620 nm处测定其吸光度，根据标准曲线计算水样中糖的浓度。（标线以葡萄糖为标样）
⑷ G-实验和真菌葡聚糖检测的关系是什么
"葡聚糖广泛存在于真菌细胞壁，特别是β-D葡聚糖占真菌细胞壁质量的90%以上，是真菌细胞壁上的特有成分。通过对真菌β-D葡聚糖的检测，可逆向判断真菌的感染情况。
使用“海浪”牌真菌（1,3）-β-D-葡聚糖检测试剂盒，对血液标本中（1,3）-β-D葡聚糖检测，可了解机体是否感染侵袭性真菌。
"
⑸ 我想做β-葡聚糖的FITC荧光标记，从百度知道知道你很久前做过的，麻烦介绍交流下。
目的：测定肿瘤组织异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(FITC�dextran)粘附水平是否可作为肿瘤血管密度的量化指标。方法：用endolgin疫苗免疫小鼠后，在同一只小鼠上同时建立小鼠Meth A纤维肉瘤模型和藻酸盐包被肿瘤细胞试验模型，2周后将FITC�dextran注射入小鼠体内，然后手术完整摘取肿瘤组织和藻酸盐颗粒，取部分肿瘤组织进行免疫组化检测血管密度的同时，将其他组织和藻酸盐颗粒匀桨并离心，取上清检测荧光强度，分析二者之间是否存在直线相关关系。结果：免疫组化和肉眼观察显示2种测定方法均有明显的血管生成效应，用FITC�dextran粘附测定肿瘤组织血管相对密度和藻酸盐包被试验均能较好地量化测定抗血管生成效果，直线相关分析表示二者的疫苗免疫实验组FITC�dextran的测定值之间呈明显的正性相关关系（r = 0.962，P＜0.01）。结论：和藻酸盐包被试验相比，FITC�dextran测定肿瘤组织血管相对密度是一种简单有效的量化测定肿瘤组织血管生成水平的方法。
【关键词】 肿瘤；血管；动物模型；藻酸盐包被肿瘤细胞试验
Quantitative determination of relative tumor vascularity by FITC�dextran adsorption
TAN Guang�hong， HUANG Feng�ying， WANG Hua， et al.
( Hainan Provincial Key Laboratory of Tropical Medicine, Haian Medical College， Hainan， Haikou 571101, P.R. of China)
〔ABSTRACT〕 Objective: To evaluate whether determination of FITC-dextran adsorption in tumor tissues is suitable for quantitative evaluation of tumor angiogenesis. Methods: After inction of antiangiogenic immunity in mice using xenogenic endogin protein, Meth A fibrosarcoma tumor cells were incubated in the conventional method of setting tumor model. Alginate�encapsulate tumor cell assay was performed on the same mouse at the same time, and no immune mice were used as control as well. 14 days later, alginate beads and the whole tumor tissue were removed surgically and quantified the uptake of FITC�dextran, and partial tumor tissues were used for immunohistochemistry determination of the vessel density, using antibody reactive to CD31. In addition, linear correlation analysis was used to evaluate the relationship. Results: The antiangiogenic effects were significantly inced in the two models respectively, and linear correlation analysis of the uptake of FITC�dextran showed significant positive correlations between the two vaccine�immunized treated groups in the two models (r=0.962, P＜0.01). Conclusion: Determination of relative tumor vascularity in the tumor tissue using FITC�dextran adsorption can be used as an antiangiogenic model in vivo.
〔KEY WORDS〕 Tumor; Blood vessel, Animal model， Alginate�encapsulate tumor cell assay
肿瘤的发生、发展和转移与血管生成（angiogenesis）密切相关。我们在研究实验中发现〔1，2〕，如果抗肿瘤血管生成的治疗方案确实有效，除了表现为肿瘤体积较小，生存时间延长外，在肿瘤的组织切片中也表现为血管密度明显减少。藻酸盐包被肿瘤细胞模型是目前定量测定肿瘤血管生成的标准方法〔3〕，它的主要原理是将异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖（FITC�dextran）注射进入体内后，葡聚糖就会粘附于内皮细胞表面、部分可能被内皮细胞吸收而滞留于血管腔中。通过测定藻酸盐颗粒中的葡聚糖的荧光强度并和标准曲线相比较，就可得到量化的结果。因此我们设想，如果肿瘤组织中血管密度相对较少，肿瘤组织的血管粘附、吸收和滞留葡聚糖的数量也应该相应减少，通过比较不同肿瘤组织吸收FITC�dextran相对荧光强度，就能够量化了解不同肿瘤组织的血管密度。本研究将FITC�dextran注射于活体荷瘤小鼠中，然后测定肿瘤组织FITC�dextran水平并和藻酸盐包被模型相比较，了解二者之间是否存在相关关系。
1 材料与方法
1.1 实验材料
FITC�dextran购自Sigma Chemical公司，藻酸钠(Alginic Acid，Sodium Salt)购自Sigma Chemical 公司，苯巴比妥钠购自上海新亚药业有限公司，RPMI�1640培养基和胎牛血清(FCS)购自美国GibicoBRL公司。重组猪endoglin蛋白为作者构建表达并纯化〔1〕。6～8周龄雌性BALB/c小鼠购自四川大学动物中心，小鼠Meth A 纤维肉癌（Meth A）细胞株由生物治疗国家重点实验室（四川大学）赠送。大鼠抗小鼠CD31(PECAM�1)单克隆抗体购自BD Pharmingen公司，VECTASTAIN Elite ABC Kit 购自Vector Laboratories公司。荧光酶标仪Microplate Fluorescence Reader，FL600，为Bio�Tek公司产品。
1.2 实验方法
1.2.1 免疫方法 将重组endoglin蛋白冻干粉剂于无菌条件下称量，溶于无菌的生理盐水(NS)中，与灭菌的氢氧化铝凝胶佐剂〔A〕(OH)3按4∶1(V/V)混匀（氢氧化铝终浓度约为2 mg/mL），室温下放置30～60 min。然后将实验小鼠随机分两组，每组各10只。实验组小鼠每只背部皮下注射上述混合好的endgolin蛋白疫苗每次10 μg(100 μL)。对照组每只小鼠注射NS:佐剂为4∶1的混合液100 μL。每组注射均为1周1次，共4次。
1.2.2 细胞培养 从液氮中取出冻存保种的Meth A细胞，迅速置于37 ℃水浴复温融化，在超净工作台内用培养基洗涤1次。然后用完全培养基于37 ℃，5% CO2培养箱中培养。收集对数生长期细胞，1 500 rpm离心3 min，细胞沉淀用无抗生素无血清的培养基洗涤1次，计数细胞数量后用无抗生素无血清的培养基调整细胞浓度至1×107/mL。
1.2.3 藻酸盐包被模型的建立 按文献进行〔3〕，略加改进。无菌条件下，首先将藻酸钠溶于无菌生理盐水，终浓度为1.5% (W/V)；并将收集培养的肿瘤细胞重悬于1.5%藻酸钠溶液中，然后用1 mL加样枪将细胞和藻酸盐混合液缓慢滴入磁力搅拌的250 mM CaCl2溶液中，形成乳白色的小珠。实验前进行预实验，使每个小珠约含有2×105个细胞。继续静置于250 mM CaCl2中30 min即可使用。此后将第4次免疫7 d后的小鼠用苯巴比妥钠0.1 mL (100 mg/kg)腹腔注射麻醉。小鼠麻醉后置于解剖台上，切开背部皮肤，在切口左侧下方上下不同部位各植入1粒按上述方法制备好的藻酸盐小珠，缝合皮肤。14 d以后，从尾静脉注入100 μL(100 mg/kg) FITC�dextran，30 min后断颈处死，取出藻酸盐小珠，常温下加入0.5 mL的生理盐水，混匀标本，放置1 h， 1 500 rpm离心5 min。取上清液200 μL用荧光酶标仪测定荧光强度，用不同浓度的FITC�dextran制备标准曲线，得出每只小鼠的测定值。
1.2.4 小鼠肿瘤模型的建立 上述藻酸盐小珠植入小鼠体内后，同时将Meth A细胞接种到每只小鼠的右侧胁肋部皮下，每只接种2×106个细胞(0.2 mL)。14 d后断颈处死，在取出藻酸盐小珠的同时，用手术器械分离出完整的肿瘤组织，准确称重后剪碎肿瘤组织，按重量每克肿瘤组织加入生理盐水2 mL，磨碎成匀浆，在摇床上摇动1 h后1 500 rpm离心5 min，同样取上清200 μL测定荧光强度，对照相应标准曲线得出各个标本的测定值。
1.2.5 肿瘤组织血管免疫组化染色 参考文献〔1，2〕取各组新鲜肿瘤组织进行冰冻切片。抗CD31免疫组化方法按Vector Laboratories公司试剂盒操作说明书进行。肿瘤组织微血管定量也按相关文献报道方法进行〔1，2〕。
1.3 统计学分析
模型内肿瘤体积和荧光强度比较用Student's T检验，模型间相关性用线性相关分析。
2 结果
2.1 肿瘤生长和免疫组化检测肿瘤血管密度
用重组猪的endoglin蛋白作为抗肿瘤血管生成疫苗具有明显的抑制肿瘤生长和抗血管生成的作用，疫苗免疫组肿瘤生长明显慢于非免疫对照组；疫苗免疫组和非免疫对照组肿瘤重量分别为(0.52±0.13) g和(2.37±0.31) g（P＜0.001），（图1 A）。14 d后处死小鼠，用抗CD31免疫组化染色肿瘤组织血管，和非免疫对照组相比（图1C），结果发现，疫苗免疫组肿瘤组织血管明显减少（图1D），疫苗免疫组和非免疫对照组肿瘤组织血管密度平均每高倍视野分别为(10.82±3.91)和(46.58±8.73)（P＜ 0.001）（图 1 B）。
注：A：肿瘤重量；B：微血管密度定量分析；C：疫苗免疫治疗组肿瘤组织免疫组化；D：非免疫对照组肿瘤组织免疫组化；Trea：疫苗免疫治疗组；Cont：非免疫对照组。
图1 Endoglin重组蛋白抑制肿瘤血管生成（略）
2.2 FITC�dextran粘附测定肿瘤组织血管生成状况
肿瘤细胞接种14 d后处死小鼠，经尾静脉注射FITC�dextran，取出肿瘤组织后测定相对的FITC�dextran粘附数量，疫苗免疫组和非免疫对照组FITC�dextran 的粘附量分别为(2.53±0.82) μg和(7.56±1.27) μg，统计分析表明两组间具有显着性差异（P＜0.001）（图2 A）。
2.3 藻酸盐包被实验测定肿瘤组织血管生成效应
当14 d后切开植入藻酸盐颗粒部位的皮肤后，肉眼就可看见疫苗免疫组（图 2 C）的藻酸盐颗粒表面几乎没有可见的血管，而非免疫对照组的藻酸盐颗粒（图 2 D）均见有明显的血管分布，疫苗免疫组FITC�dextran 的粘附量也明显低于非免疫对照组，分别为(0.76±0.35) μg和(2.34±0.79) μg，统计分析表明两组间同样具有显着性差异（P＜0.001）（图2 B ）。
2.4 肿瘤组织FITC�dextran粘附与藻酸盐包被实验测定相关性分析
将肿瘤组织与藻酸盐包被实验测定疫苗免疫实验组的FITC�dextran粘附量数值进行相关性分析，将这两组数值代入直线相关公式求出相关系数r值，并进行假设检验，结果相关系数r=0.962，假设检验P＜0.001，表明二者之间呈明显的直线正相关（图3）。
注：A：肿瘤组织直接测定的FITC�dextran量；B：藻酸盐包被肿瘤细胞试验测定的FITC�dextran量；C：疫苗免疫治疗组藻酸盐小珠；D：非免疫对照组藻酸盐小珠；Trea：疫苗免疫治疗组；Cont：非免疫对照组。
图2 肿瘤组织直接测定FITC�dextran和藻酸盐包被肿瘤细胞试验（略）
图3 肿瘤组织直接测定和藻酸盐包被肿瘤细胞试验测定的FITC�dextran呈直线正相关（略）
3 讨论
Endoglin是一种细胞膜表面分子，主要表达于激活的内皮细胞表面；研究证实endoglin是肿瘤血管生成的一个新的标志〔4〕，用抗endoglin抗体在动物肿瘤模型中已取得了良好的抗血管和抑制肿瘤生长的效果〔5，6〕。本研究所应用的猪endoglin是我们从猪胚肝中克隆得到cDNA的基础上，将其构建于原核表达载体，然后诱导表达并经严格纯化得到的重组蛋白质。在以往的研究中，我们已经证实用这种重组蛋白作为小鼠endoglin的异种同源蛋白疫苗，免疫小鼠能诱导小鼠产生抗猪和鼠自身endoglin的抗体，并且在多个肿瘤模型中发现具有抗肿瘤血管生成从而明显抑制肿瘤生长的作用〔1，2〕。本研究用免疫组化和藻酸盐包被肿瘤细胞实验都发现用猪的endoglin 重组蛋白作为疫苗免疫小鼠后，确实具有抗小鼠Meth A纤维肉瘤血管生成的作用。
抗肿瘤血管生成研究是当今肿瘤研究中的一个热点，几乎每天都有新的研究成果发表于不同的学术刊物上，因此，一种简便有效而又能够定量的抗血管生成模型对肿瘤抗血管生成研究具有十分现实的意义。当前，研究中常用的抗肿瘤血管生成模型主要包括：角膜模型、鸡胚内囊膜模型和藻酸盐包被肿瘤细胞模型等，前者需要在小鼠的角膜上进行微创手术，一般实验者很难掌握，实验结果难以量化处理。而鸡胚内囊膜模型的操作也比较复杂，许多药物还不适合用于此模型，同样也难以进行量化处理。藻酸盐包被模型尽管能准确量化，并且能从外观上看出抗血管生成效果，但是需要进行麻醉和手术，在这个过程中实验小鼠很容易死亡。另外，藻酸盐浓度控制得不好或是操作过程中出错都可导致包被于藻酸盐中的肿瘤细胞死亡，影响实验结果。在本研究中，我们直接用接种2周的肿瘤组织为研究对象，因为任何有效的抗肿瘤血管生成的治疗都会抑制肿瘤血管生成，致使肿瘤生长减慢，除了表现为肿瘤体积减少和重量较轻以外，整个肿瘤组织血管密度和血管腔容积也应该相应减少。因此，当从外周把FITC�dextran灌注进机体后，在相同重量的肿瘤组织中，血管密度和血管容积均减少的肿瘤组织粘附、吸收和滞留FITC�dextran的量也应该相对减少，这样通过测定相同重量的不同肿瘤组织就可以量化比较出这些差异，本研究的实验结果完全支持这些观点。经相关分析，实验结果和现在文献常用的藻酸盐包被肿瘤细胞实验结果呈显着的直线正性相关关系。但是，由于直接测定肿瘤组织血管相对密度的操作方法就是常规的建立肿瘤模型的方法，具有过程简单，易于操作等优点。尽管目前文献尚未见有实际应用的报道，但是我们认为这一种直接测定肿瘤组织粘附FITC�dextrane进而量化肿瘤血管相对密度的方法实用可行，具有推广应用的价值。
【参考文献】
1 Tan GH, Wei YQ, Tian L, et al. Active immunotherapy of tumors with a recombinant xenogeneic endoglin as a model antigen 〔J〕. Eur J Immunol, 2004,34(7):2012�2021.
2 Tan GH, Tian L, Wei YQ, et al. Combination of low�dose cisplatin and recombinant xenogeneic endoglin as a vaccine inces synergistic antitumor activities〔J〕. Int J Cancer,2004,112(4):701�706.
3 Hoffmann J, Schirner M, Menrad A, et al. A highly sensitive model for quantification of in vivo tumor angiogenesis inced by alginate�encapsulated tumor cells 〔J〕. Cancer Res,1997,57(17):3847�3851.
4 Fonsatti E, Vecchio LD, Altomonte M, et al. Endoglin: an accessory component of the TGF�β�binding receptor�complex with diagnostic, prognostic, and bioimmunotherapeutic potential in human malignancies 〔J〕. J Cell Physiol,2001,188(1):1�7.
5 Seon BK, Matsuno F, Haruta Y, et al. Long�lasting complete inhibition of human solid tumors in SCID mice by targeting endothelial cells of tumor vasculature with antihuman endoglin immunotoxin 〔J〕. Clin Cancer Res,1997，3(7): 1031�1044.
6 Matsuno F, Haruta Y, Kondo M, et al. Inction of lasting complete regression of preformed distinct solid tumors by targeting the tumor vasculature using two new anti�endoglin monoclonal antibodies 〔J〕. Clin Cancer Res,1999,5(2):371�382.
⑹ G试验和GM试验的区别及其临床应用是什么
曲霉菌检测在血清学方面主要有血清曲霉特异性抗原（半乳甘露聚糖）检测，简称GM试验，也是侵袭性曲霉病的早期诊断指标，在血液系统恶性肿瘤患者应用中具有较好的敏感性和特异性。此外还有血清真菌特异性抗原（1，3-β-D葡聚糖抗原）检测，简称BG试验，也能对临床常见的侵袭性真菌感染作出早期判断，尤其是能很好地将念珠菌的定植与感染区分开。这两种方法在欧美等国已被批准使用，但也各有一定的局限性，如GM试验只针对曲霉感染，对其它真菌检测无效，且敏感性和特异性受诸多因素影响。而BG试验虽能测得包括曲霉和念珠菌在内的更多致病性真菌，初步的临床研究显示有较好的敏感性和特异性，但不能检出接合菌和隐球菌，也不能鉴定具体菌属和菌种。 x0dx0aG试验因为针对真菌表面的3-β-D葡聚糖抗原，而3-β-D葡聚糖抗原为真菌所共有，所以G试验可用于区分真菌和细菌感染，但却无法用于具体种属的鉴定。GM试验针对的是曲霉菌特异性抗原，且可用于曲霉菌感染的早期诊断，国外报道GM试验的敏感性和特异性都很高，但似乎还需更多实验证实。x0dx0aGM试验其敏感性可达1ng/ml，ELISA检测血清中半乳甘露聚糖用于诊断曲霉具有良好的灵敏度（64.5％－100％）和特异度（80％－98.7％），可以用于曲霉菌的早期诊断及治疗的监测。而且阳性结果出现在临床症状或影像学特征之前。该试验还可以检测肺泡灌洗液和尿液标本，是目前国际上一致认可的一项侵袭性曲霉菌病的诊断方法。其缺点是某些药物和食物可以导致假阳性，假阳性率可以高达18％。因此半乳甘露聚糖常为一过性，建议对于高危人群应进行动态监测，每周采集标本两次监测。x0dx0a1，3-β-D葡聚糖试验：又称为G试验，可用于对系统性真菌病的诊断筛查，该方法敏感性可达1pg/ml，特异性高，研究显示1，3-β-D葡聚糖对真菌感染诊断的敏感性和特异性分别为63－100％和74－100％，缺陷在于容易引起假阳性，而且无法区分真菌种类。1，3-β-D葡聚糖是除了结合菌属外所有真菌（包括念珠菌属、曲霉菌属、镰孢菌属、酵母菌、毛孢子菌属、支顶孢属等）细胞壁的特有成份，而原核生物、病毒和人类细胞壁缺乏此多糖。因此，如果在血液或其他无菌体液中检测到1，3-β-D葡聚糖，就将可能提示真菌感染的存在。1，3-β-D葡聚糖已经成为真菌感染的有效标帜物。
⑺ 葡聚糖凝胶色谱层析柱图结果怎么分析
1.凝胶的预处理
交联葡聚糖凝胶的市售商品多为干燥颗粒，使用前必须充分溶胀。方法是将欲使用的干凝胶缓慢地倾倒入5～10倍的去离子水中，参照相关资料中凝胶溶胀所需时间，进行充分浸泡，然后用倾倒法除去表面悬浮的小颗粒，并减压抽气排除凝胶悬液中的气泡，准备装柱。在许多情况下，也可采用加热煮沸方法进行凝胶溶胀，此法不仅能加快溶胀速率，而且能除去凝胶中污染的细菌，同时排除气泡。
2.装柱
层析柱的选择一般根据分离样品的种类和样品的数量而定。纯化蛋白质时，柱床体积应为样品体积的25～100倍。去除盐及游离荧光素约为样品体积的4～10倍。柱太短，影响分离效果。柱长一些，分离效果好，但柱太长，则延长分离时间，样品也稀释过度。层析柱的内径也要选择适当。内径过细，会发生“器壁效应”，即靠近管壁的流速要大于中心的流速影响分离效果。所以层析柱的内径和高度应有一定的比例。对于除盐来说应为1︰5～1︰25；对于纯化蛋白质来说应为1︰20～1︰100。
凝胶柱的装填方法和要求，基本上与离子交换柱的制备相同。一根理想的凝胶柱要求柱中的填料(凝胶)密度均匀一致，没有空隙和气泡。通常新装的凝胶柱用适当的缓冲溶液平衡后，将带色的兰葡聚糖–2000、细胞色素，或血红蛋白等物质配制成质量浓度为2g/L的溶液过柱，观察色带是否均匀下移，以鉴定新装柱的技术质量是否合格，否则，必须重新装填。
3.加样与洗脱
（1）加样量：加样量与测定方法和层析柱大小有关。如果检测方法灵敏度高或柱床体积小，加样量可小；否则，加样量增大。例如利用凝胶层析分离蛋白质时，若采用28Onm波长测定吸光度，对一根2cm×6Ocm的柱来说，加样量需5mg左右。一般来说，加样量越少或加样体积越小(样品浓度高)，分辨率越高。通常样品液的加入量应掌握在凝胶床总体积的5％～10％。样品体积过大，分离效果不好。
对高分辨率的分子筛层析，样品溶液的体积主要由内水体积(Vi)所决定，故高吸水量凝胶如Sephadex G-200，每mL总床体积可加0.3～0.5mg溶质，使用体积约为0.O2倍总体积；而低吸水量凝胶如Sephadex G–75，每mL总床体积加溶质质量为0.2mg，样品体积为0.Ol倍总体积。
（2）加样方法：如同离子交换柱层析一样，凝胶床经平衡后，吸去上层液体，待平衡液下降至床表面时，关闭流出口，用滴管加入样品液，打开流出口，使样品液缓慢渗入凝胶床内。当样品液面恰与凝胶床表面持平时，小心加入数mL洗脱液冲洗管壁。然后继续用大量洗脱液洗脱。
（3）洗脱：加完样品后，将层析床与洗脱液储瓶、检测仪、分部收集器及记录仪相连，根据被分离物质的性质，预先估计好一个适宜的流速，定量地分部收集流出液，每组分一至数mL。各组分可用适当的方法进行定性或定量分析。
凝胶柱层析一般都以单一缓冲溶液或盐溶液作为洗脱液，有时甚至可用蒸馏水。洗脱时用于流速控制的装置最好的是恒流泵。若无此装置，可用控制操作压的办法进行。样品体积不宜过多，最好为床体积的1％～5%，最多不要超过10%。样品浓度也不宜过大，浓度过大粘度大，分离效果差，一般不超过4%。
洗脱液应与膨胀一致，否则更换溶剂，凝胶体积会发生变化，影响分离效果。洗脱液要有一定的离子强度和pH值。分离血清蛋白常用0.02～0.1Mol/L pH 6.9～8.0的PBS液（0.14Mol/L NaCl）和0.1Mol/L pH8.0Tris-HCl缓冲盐溶液（0.14Mol/L NaCl）。
凝胶再生和保存
凝胶层析的载体不会与被分离的物质发生任何作用，因此凝胶柱在层析分离后稍加平衡即可进行下一次的分离操作。但使用多次后，由于床体积变小，流动速率降低或杂质污染等原因，使分离效果受到影响。此时对凝胶柱需进行再生处理，其方法是:先用水反复进行逆向冲洗，再用缓冲溶液平衡，即可进行下一次分离。
对使用过的凝胶，若短时间保存，只要反复洗涤除去蛋白质等杂质，加入适量防腐剂即可；若长期保存，则需将凝胶从柱中取出，进行洗涤、脱水和干燥等处理后，装瓶保存。
⑻ （1-3）-β-D-葡聚糖检测的质控品检测方法是什么要步奏
这个我查了点资料，给你地址，参考下吧！！
http://wenku..com/view/96cded4469eae009581becc0.html
http://wenku..com/view/eea402da7f1922791688e8c6.html
⑼ 动态浊度法检测（1-3）-β-D-葡聚糖的原理
鲎试剂中含有对葡聚糖敏感的G因子和会形成凝胶的凝固蛋白。当葡聚糖激活G因子形成活化的G因子，会近一步激活凝固蛋白形成凝胶。在凝胶形成的过程中，反应液的OD值逐步升高。反应液OD达到某一预设值的反应时间是和反应液葡聚糖的浓度成反比例关系的。微生物检测仪Elx808监控反应液中OD值的动态变化，通过TALgent软件处理数据，做成标准曲线，再根据标准曲线自动计算出反应液中葡聚糖浓度。（厦门..鲎试剂）
⑽ 动态浊度法检测（1-3）-β-D-葡聚糖的原理
鲎试剂中含有对葡聚糖敏感的G因子和会形成凝胶的凝固蛋白.当葡聚糖激活G因子形成活化的G因子,会近一步激活凝固蛋白形成凝胶.在凝胶形成的过程中,反应液的OD值逐步升高.反应液OD达到某一预设值的反应时间是和反应液葡...