检测绿色荧光蛋白的方法

Ⅰ GFP（绿色荧光蛋白）发现过程用到了哪些蛋白质检测技术请阐述原理

A、可用双缩脲试剂检测GFP，产生紫色反应，A错误；
B、氨基酸脱水缩合形成蛋白质时，脱去的水中的H来自氨基和羧基，所以该肽链水解时，水中氢的去向是形成氨基和羧基，B错误；
C、该蛋白质共含有17个游离的羧基，其中有15个在R基中，说明该蛋白质含有2条肽链，又该蛋白质由126个氨基酸组成，所以蛋白质合成时要脱去124分子的水，C错误；
D、该蛋白质共含有17个游离的羧基，其中有15个在R基中，说明该蛋白质含有2条肽链，又游离的氨基总数是17个，所以R基上的氨基有15个，D正确．
故选：D．

Ⅱ 从个体水平考虑,如何检测出绿色荧光蛋白基因能成功表达的转基因鼠

使用紫外线照射小鼠，发绿色荧光的即为绿色荧光蛋白基因成功表达的转基因鼠。

Ⅲ 紧急！！！：绿色荧光蛋白如何识别蛋白质的可溶性

你是想问怎么检测还是怎么设计实验啊？
总得看你的绿色荧光蛋白是放在什么地方表达，与什么蛋白相连才行啊！

看了你的补充，我觉得有可能是这样（纯粹个人猜想）：将gfp基因与目标可溶性蛋白基因连接，表达融合蛋白，如果表达出来的蛋白是可溶的话就可以与某一种底物（或者是酶）反应，从而抑制GFP发荧光或者促进GFP发荧光。而蛋白不溶的话，则不能与底物反应，与可溶性蛋白的效果相反。

我的猜想基于：有文献指出
Yang等报道：将EGFP基因结合到特异性蛋白质表达基因上，而表达融合蛋白，将此融合蛋白做为蛋白激酶的底物，通过水解底物后荧光颜色及强度的改变的检测，能提高蛋白激酶反应灵敏度。

摘自沙新平.报告基因系统的研究进展.国外医学临床生物化学与检测分册.2003.24（1）：26～28

希望这些信息对你有用。

Ⅳ 荧光显微镜怎么看绿色荧光

绿色荧光蛋白是一类存在于包括水母、水螅和珊瑚等腔肠动物体内的生物发光蛋白，当受到紫外或蓝光激发时，发射绿色荧光。

其特点在于：它产生荧光无需底物或辅因子，发色团是其蛋白质一级序列固有的来源于水母的氨基酸残基组成。水母的绿色荧光蛋白很稳定，无种属限制，已在多种动植物细胞中表达成功并产生荧光。GFP 的荧光受外界的影响较小，另外GFP 的检测十分方便，而对细胞的伤害小。

细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。

目前在常用的方法就是采用荧光显微镜观察，荧光显微镜在实验室普及，但不足的是必须采集叶片或动物切片进行观察，对培养的标本进行破坏，无法进行活体观察。

绿色荧光蛋白GFP的发光特性：

GFP吸收的光谱峰值为395nm（紫外），并有一个峰值为470nm的副吸收峰（蓝光）；发射光谱峰值为509nm（绿光），并带有峰值为540nm的侧峰（Shouder）。虽然450～490nm只是GFP的副吸收峰，但由于该激发光对细胞的伤害小，因此通常多使用该波段光源（多为488nm）。

此外，GFP的光谱特性与荧光素异硫氰酸盐（FITC）很相似，两者通常共有一套滤光片。GFP荧光极其稳定，在激发光照射下，GFP抗光漂白（Photobleaching）能力比荧光素强，特别是在450～490nm蓝光波长下稳定。

类似的，GFP融合蛋白的荧光灵敏度远比荧光素标记的荧光抗体高，抗光漂白能力强，因此适用于定量测定与分析。

由于GFP荧光的产生不需要任何外源反应底物，因此GFP作为一种广泛应用的活体报告蛋白，其作用是任何其它酶类报告蛋白无法比拟的。但因为GFP不是酶，荧光信号没有酶学放大效果，因此GFP灵敏度可能低于某些酶类报告蛋白，比如萤火虫荧光素酶等。

Ⅳ 还可以通过哪些方法验证绿色荧光蛋白的表达

制备标准曲线的方法。对rAcGFP1进行系列稀释，在微量比色杯中加入100ul的rAcGFP1稀释后溶液，将微量比色杯插入到微量适配器中，点"Measure Fluorescence Raw."检测，记录检测结果，对其他样品重复4.2-4.3，利用荧光值（FSU）与样品浓度做出标准曲线。

绿色荧光蛋白

是一个由约238个氨基酸组成的蛋白质，从蓝光到紫外线都能使其激发，发出绿色萤光。虽然许多其他海洋生物也有类似的绿色荧光蛋白，但传统上，绿色荧光蛋白（GFP）指首先从维多利亚多管发光水母中分离的蛋白质。

这种蛋白质最早是由下村修等人在1962年在维多利亚多管发光水母中发现。这个发光的过程中还需要冷光蛋白质水母素的帮助，且这个冷光蛋白质与钙离子可产生交互作用。

Ⅵ 观察植物绿色荧光蛋白，要制片，用什么方法徒手切片还是石蜡切片

如果只想看到荧光，可以直接放在紫外灯下，就会显荧光。
如果是观察亚细胞定位，就用激光共聚焦显微镜，不需要那么麻烦的制片过程，直接观察，逐层扫描。如果用洋葱表皮，用镊子撕取，如果用烟草，切一小块儿，然后贴在载玻片上。