菌数检测方法

Ⅰ 细菌检测最简单的方法

一.使用细菌总数测试片,只需要购买细菌总数测试片,再按要求使用,有说明书.
二.红细胞计数法
首先要了解这个方法的原理.把N个红细胞与细菌均匀混合,再数出一小块区域内的红细胞数n和细菌数m.因为细胞已经均均匀混合,所以,局部的细胞数比和整体的细胞数比是接近相同的.即 n/m=N/M (n为局部红细胞数,N为总红细胞数,m为局部细菌数,M为总细菌数）n,m已数出.N又已知.所以总细菌数N就可以算出来.再取几个局部,算平均值,就能得到较精确的细菌数目.
如果这样做,只要数出一小块区域内的细菌数就可以知道总细菌数.如果不加红细胞,一个一个数,用要数到何年何月啊!细菌可是对数增长.加入红细胞的作用就像比例尺一样,地图上总有1：XXX的比例尺,你在显微镜的一个是视野里看到的红细胞数目就像地图上你测得的距离,数清一个是视野的菌数后,乘以相应分散度就可以了,分散度时用红细胞算的,具体的教材上应该有.不用也可以,不过要换成相应大小别的东西代替,总之用光学显微镜差菌数,这是不可缺少的.
这里运用了样方法,就是在若干样方中计数全部个体,然后将其平均数推广,来估计种群总体数量的方法.样方法相关知识：
①样 方：样方也叫样本,从研究对象的总体中抽取出来的部分个体的集合,叫做样方.
②随机取样：在抽样时如果总体中每一个个体被抽选的机会均等,且每一个个体被选与其他个体间无任何牵连,那么,这种既满足随机性,又满足独立性的抽样,就叫做随机取样(或叫做简单随机取样).随机取样不允许掺入任何主观性,否则,就难以避免调查人员想获得调查属性的心理作用,往往使调查结果偏大.
③适用范围：植物种群密度,昆虫卵的密度 ,蚜虫、跳蝻的密度,细菌数量测量等.
样方法取样方法
①点状取样法点状取样法中常用的为五点取样法,如图A,当调查的总体为非长条形时,可用此法取样.在总体中按梅花形取5个样方,每个样方的长和宽要求一致.这种方法适用于调查植物个体分布比较均匀的情况.
②等距取样法当调查的总体为长条形时,可用等距取样法,如图B,先将调查总体分成若干等份,由抽样比率决定距离或间隔,然后按这一相等的距离或间隔抽取样方的方法,叫做等距取样法.例如,长条形的总体为100 m长,如果要等距抽取10样方,那么抽样的比率为1/10,抽样距离为10 m,然后可再按需要在每10 m的前1 m内进行取样,样方大小要求一致.
样方法的两种边角统计方式如下图（红色为需统计边线）
样方法具体步骤如下：
①确定调查对象；
②选取样方：必须选择一个该种群分布较均匀的地块,使其具良好的代表性；
③计数：计数每个样方内该种群数量；
样方法的两种边角统计方式
④计算：取各样方平均数.

Ⅱ 微生物生长的几种检测方法

一、生长量测定法

1.1体积测量法：又称测菌丝浓度法。

通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。方法是，取一定量的待测培养液（如10毫升）放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间（如5分钟）和转速（如5000rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。

1.2称干重法：

可用离心或过滤法测定。一般干重为湿重的10-20%。在离心法中，将一定体积待测培养液倒入离心管中，设定一定的离心时间和转速，进行离心，并用清水离心洗涤1-5次，进行干燥。干燥可用烘箱在105℃或100℃下烘干，或采用红外线烘干，也可在80℃或40℃下真空干燥，干燥后称重。如用过滤法，丝状真菌可用滤纸过滤，细菌可用醋酸纤维膜等滤膜过滤，过滤后用少量水洗涤，在40℃下进行真空干燥。称干重发法较为烦琐，通常获取的微生物产品为菌体时，常采用这种方法，如活性干酵母（activitydryyeast,ADY）,一些以微生物菌体为活性物质的饲料和肥料。

1.3比浊法：

微生物的生长引起培养物混浊度的增高。通过紫外分光光度计测定一定波长下的吸光值，判断微生物的生长状况。对某一培养物内的菌体生长作定时跟踪时，可采用一种特制的有侧臂的三角烧瓶。将侧臂插入光电比色计的比色座孔中，即可随时测定其生长情况，而不必取菌液。该法主要用于发酵工业菌体生长监测。如我所使用UNICO公司的紫外-可见分光光度计，在波长600nm处用比色管定时测定发酵液的吸光光度值OD600，以此监控E.Coli的生长及诱导时间。

1.4菌丝长度测量法：

对于丝状真菌和一些放线菌，可以在培养基上测定一定时间内菌丝生长的长度，或是利用一只一端开口并带有刻度的细玻璃管，到入合适的培养基，卧放，在开口的一端接种微生物，一段时间后记录其菌丝生长长度，借此衡量丝状微生物的生长

二、微生物计数法

2.1血球计数板法:

血球计数板是一种有特别结构刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四条沟和两条嵴，中央有一短横沟和两个平台，两嵴的表比两平台的表面高0.1mm，每个平台上刻有不同规格的格网，中央0.1mm2面积上刻有400个小方格。通过油镜观察，统计一定大格内微生物的数量，即可算出1毫升菌液中所含的菌体数。这种方法简便，直观，快捷，但只适宜于单细胞状态的微生物或丝状微生物所产生的孢子进行计数，并且所得结果是包括死细胞在内的总菌数。

2.2染色计数法：

为了弥补一些微生物在油镜下不易观察计数，而直接用血球计数板法又无法区分死细胞和活细胞的不足，人们发明了染色计数法。借助不同的染料对菌体进行适当的染色，可以更方便的在显微镜下进行活菌计数。如酵母活细胞计数可用美蓝染色液，染色后在显微镜下观察，活细胞为无色，而死细胞为蓝色。

2.3比例计数法：

将已知颗粒（如霉菌孢子或红细胞）浓度的液体与一待测细胞浓度的菌液按一定比例均匀混合，在显微镜视野中数出各自的数目，即可得未知菌液的细胞浓度。这种计数方法比较粗放。并且需要配制已知颗粒浓度的悬液做标准。

2.4液体稀释法：

对未知菌样做连续十倍系列稀释，根据估计数，从最适宜的三个连续的10倍稀释液中各取5毫升试样，接种1毫升到3组共15只装培养液的试管中，经培养后记录每个稀释度出现生长的试管数，然后查最大或然数表MPN（mostprobablynumber）得出菌样的含菌数，根据样品稀释倍数计算出活菌含量。该法常用于食品中微生物的检测，例如饮用水和牛奶的微生物限量检查。

2.5平板菌落计数法：

这是一种最常用的活菌计数法。将待测菌液进行梯度稀释，取一定

体积的稀释菌液与合适的固体培养基在凝固前均匀混合，或将菌液涂布于已凝固的固体培养基平板上。保温培养后，用平板上出现的菌落数乘以菌液稀释度，即可算出原菌液的含菌数。一般以直径9cm的平板上出现50-500个菌落为宜。但方法比较麻烦，操作者需有熟练的技术。平板菌落计数法不仅可以得出菌液中活菌的含菌数，而且同时将菌液中的细菌进行了一次分离培养，获得了单克隆。

2.6试剂纸法：

在平板计数法的基础上，发展了小型商品化产品以供快速计数用。形式有小型厚滤纸片，琼脂片等。在滤纸和琼脂片中吸有合适的培养基，其中加入活性指示剂2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC，无色）待蘸取测试菌液后置密封包装袋中培养。短期培养后在滤纸上出现一定密度的玫瑰色微小菌落与标准纸色板上图谱比较即可估算出样品的含菌量。试剂纸法计数快捷准确，相比而言避免了平板计数法的人为操作误差。

2.7膜过滤法：

用特殊的滤膜过滤一定体积的含菌样品，经丫叮橙染色，在紫外显微镜下观察细胞的荧光，活细胞会发橙色荧光，而死细胞则发绿色荧光。

2.8生理指标法：

微生物的生长伴随着一系列生理指标发生变化，例如酸碱度，发酵液中的含氮量，含糖量，产气量等，与生长量相平行的'生理指标很多，它们可作为生长测定的相对值。

2.9测定含氮量：

大多数细菌的含氮量为干重的12.5%，酵母为7.5%，霉菌为6.0%。根据含氮量×6.25，即可测定粗蛋白的含量。含氮量的测定方法有很多，如用硫酸，过氯酸，碘酸，磷酸等消化法和Dumas测N2气法。Dumas测N2气法是将样品与CuO混合，在CO2气流中加热后产生氮气，收集在呼吸计中，用KOH吸去CO2后即可测出N2的量。

2.10测定含碳量：

将少量（干重0.2-2.0mg）生物材料混入1毫升水或无机缓冲液中，用2毫升2%的K2Cr2O7溶液在1000C下加热30分钟后冷却。加水稀释至5毫升，在580nm的波长下读取吸光光度值，即可推算出生长量。需用试剂做空白对照，用标准样品做标准曲线。

2.11还原糖测定法：

还原糖通常是指单糖或寡糖，可以被微生(转载于:mHg）的条件下才能生长，他们有完整的呼吸链，以分子氧为最终氢受体，具有超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶。

兼性厌氧菌:它是以在有氧条件下的生长为主也可兼在厌氧条件下生长的微生物，有时也称“兼性好氧菌”。

微好氧菌:只能在娇滴滴额氧分压（1.33~3.Pa，正常大气中的氧分压为0.2bar）下才能正常生长的微生物。

耐氧菌:耐氧性厌氧菌的简称，是一类可在分子氧存在下进行发酵性厌氧生活的厌氧菌。

厌氧菌:有一般厌氧菌与严格厌氧菌（专性厌氧菌）之分。

超氧阴离子自由基:活性氧的形式之一，因有奇数电子，故带负电荷；它既有分子性质，又有离子性质；其性质极不稳定，化学反应力极强，在细胞内可破坏各种重要生物大分子和膜结构，还可形成其他活性氧化物，故对生物体极其有害。

超氧化物歧化酶(SOD):保护好氧菌免受超氧化物阴离子自由基的毒害的酶。按SOD分子中所含金属辅基的不同分三类：1、含Cu、Zn的SOD，存在于几乎所有真核生物的细胞质中；2、含Fe的SOD，主要存在原核生物中；3、含Mn的SOD，主要存在于真核生物的线粒体中。SOD除可清除超氧阴离子自由基外，还发现在防治人体衰老、治疗自身免疫性疾病、抗癌、防白内障、治疗放射病和肺气肿以及解除苯中毒等方面有一系列疗效。

PRAS培养基:用严格厌氧方法配置、分装、灭菌后的厌氧菌培养基，称为预还原无氧灭菌培养基，即PRAS培养基。

厌氧罐:培养厌氧菌的装置。

亨盖特滚管技术:一种集制备高纯氮、以氮驱氧和全过程实现无氧操作、无氧培养、无氧检测于一体，用于研究严格厌氧菌的技术和装置。

厌氧手套箱:一种用于无氧操作和培养严格厌氧菌的箱形密闭装置。

摇瓶培养:一般将三角瓶内培养液的瓶口用8层纱布包扎，以利通气和防止杂菌污染，同时减少瓶内装液量，把它放在往复式或旋转式摇床上作有节奏的震荡，以达到提高溶氧量的目的。

曲:是一类用麸皮、米糠等疏松的固体营养料接种、培养微生物而制成的含氧活菌产品。

曲法培养:将麸皮、碎麦或豆饼等固态基质经蒸煮和自然接种后，薄薄地铺在培养容器表面，使微生物即可获得充足的氧气，又有利于散发热量，对真菌来说，还有利于产生大量孢子。

通风曲:一种机械化程度和生产效率都较高的现代大规模制曲技术，在我国酱油酿造业中广泛应用。

污染:有害微生物通过气流、水流、接触和人工接种等方式，传播到合适的基质或生物对象上而造成种种危害。

巴氏消毒法:有发过微生物学家巴斯德用于果酒消毒，故名。这是一种专用于牛奶、啤酒、果酒或酱油等不宜进行高温灭菌的也太风味食品或调料的低温消毒方法（一般在60-85度下处理30min至15s）。有两种方法：1、低温维持法；2、高温瞬时法。

间歇灭菌法:适用于不耐热的培养基灭菌。方法是：讲带灭菌的培养基放在80-100度下蒸煮15-60min，以杀灭其中所有的微生物营养体，然后放至室温37度下保温过

夜，诱使其中残存的芽孢发芽，第二天再以同样方法蒸煮和保温过夜，如此重复3天即可在较低的灭菌温度下同样达到彻底灭菌的效果。

连续加压蒸气灭菌法:让培养基在管道的流动过程中快速升温、维持和冷却，然后流进发酵罐。

梅拉特反应:高温灭菌时，培养基中得氨基化合物（氨基酸、肽、蛋白质）的游离氨基与羧基化合物（糖类）的羰基间发生复杂的化学反应，导致培养基褐变同时，还降低了有关营养物成分，故应设法避免。

石炭酸系数:一定时期内，被试药剂能杀死全部供试菌的最高稀释度与达到同效果的石炭酸的最高稀释度之比。

抗生素:一类有微生物或其他生物生命活动过程中合成的此生代谢产物或其人工衍生物，他们在很低浓度时就能一直或干扰他种生物的生命活力，因而可用作有两的化学治疗剂。

抗代谢药物:一类在化学结构上与细胞内必要代谢物的结构相似，并可干扰正常代谢活动的化学物质。3种作用：1、与正常代谢物一起共同竞争酶的活性中心，从而使微生物正常代谢所需要的重要物质无法正常合成，例如磺胺类；2、“假冒”正常代谢物，使微生物合成出无法正常生理活动的假产物，如8-重氮鸟嘌呤取代鸟嘌呤而合成的核苷酸就会产生无正常功能的RNA；3、某些抗代谢药物与某一生化合成途径的终产物结构类似，可通过反馈调节破坏正常代谢调节机制，例如，6-巯基腺嘌呤可抑制腺嘌呤核苷酸的合成。

选择毒力:大于病原菌具高度毒力而对其宿主基本无毒的化学物质来抑制宿主体内病源微生物的生长繁殖，借以达到治疗该宿主传染病的一种措施。

Ⅲ 食品中细菌总数和菌落总数是怎么样测定的

食品中细菌总数和菌落总数的测定方法如下：

平板培养计数法

实验方法原理

菌落总数是指食品经过处理，在一定条件下培养后，所得1 g或1 ml检样中所含细菌菌落总数。菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。菌落总数并不表示样品中实际存在的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。 实验材料

琼脂培养基 食品检样

试剂、试剂盒

乙醇生理盐水氢氧化钠溶液

仪器、耗材

电热恒温培养箱、冰箱、恒温水浴锅、托盘、天平、电炉、吸管、广口瓶、三角瓶、玻璃珠、平皿、试管、试管架、酒精灯、均质器、乳钵、灭菌刀、剪刀、灭菌镊子、酒精、棉球、玻璃、蜡笔、登记薄

实验步骤

一、检验程序

菌落总数检验程序见图5—1

二、检样稀释及培养

1. 以无菌操作，将检样25 g(或25 mL)剪碎以后，放于含有225 mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预先置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8 000 r／min—1 0000 r／mln的速度处理1 min做成1：10的均匀稀释液。

2. 用1 mL灭菌吸管吸取1：10稀释液1 mL，沿管劈徐徐注入台有9 mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液，下同)，振摇试管混合均匀，做成1：100的稀释液。

3. 另取1 mL的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1 mL灭菌吸管。

4. 根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择2—3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。

5. 稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基[可放置在(45土1) ℃水浴锅内保温注入平皿15 mI一20 mL，并转动平皿位混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1 mL稀释液(不含样品)的灭菌平皿内作空白对照。

6. 待琼脂凝固后，翻转平板，置(36土1) ℃恒温箱内培养(48土2) h取出板内菌落数目，乘以稀释倍数，即得I g(1 mL)样品所含菌落总数。

注意事项

1. 平板培养计数法只能检出生长的活菌，不能检出样品中全部的细菌数，总是比实际生存在食品中的细菌数要少，这是因为食品中存在多种细菌，它们的生活特性各异，不可能在统一培养条件下全部生长出来。但是，仍能借此评定整个食品被细菌污染的程度，所以目前一般食品的卫生检验中都普遍采用这种方法。

2. 平板菌落计数测定食品中的菌落总数，一般均采用中温培养，特别是已属于直接供食用的制成食品，因为这些食品卫生的要求，是严格防止消化道传染病病原菌和食物中毒病原菌污染，这些病原菌都属于嗜温性菌，因而测定细菌数时，采用中温培养是比较合理的。

Ⅳ 食品中菌落总数的测定步骤主要为

菌落总数检测一般步骤为：

采样 — 样品制备与稀释 — 倒平板 — 涂布平板 — 倒置培养 — 菌落计数 — 计算菌落总数

样品制备，需要对样品进行均质，根据客户需要检测的样品不同。WIGGENS提供不同的均质设备，如均质机，拍打式均质器等；

样品的稀释，国标中采用1:10的十倍稀释方法，SOCOREX提供各种手动精密移液器，瓶口分液器，移液管控制器为液体操作提供了保证。

倒平板，使用的培养基为含有琼脂的固体培养基。培养基在配备的过程中需要经过煮沸和保温的步骤。WIGGENS红外加热磁力搅拌器，直接使用红外辐射方式进行加热，1L培养基只需要10分钟即可煮沸，极大节约了客户培养基制备时间。在倒平板之前，需要恒温培养基46±1 ℃， WIGGENS恒温水浴锅，可以为用户提供的温度控制和恒温条件；

涂布平板，培养基在培养皿中冷却成固态之后，将稀释后的样品用移液器取1mL,滴到培养基表面，用涂布棒涂匀。WIGGENS有专用的培养皿转盘，可以有效的将样品液均匀的涂布在培养基表面。

倒置培养，将涂布完毕的平板，放入恒温培养箱中进行培养，一般培养时间约为48h。WIGGENS恒温培养箱内容积50-140L各种规格的台式及落地式培养箱，先进的设计及数据接口，可以直接通过电脑编程控制及信息处理，非常适合规范化培养要求。

菌落数计算，经过48小时的培养之后，在培养基表面会长出菌斑，每个菌斑代表一个微生物。一般在培养皿中菌落数为30-300个之间，为有效菌落数。低于30个，会因为样本量不足，随机性大；超过300个，会因为菌落数太多，过于密集产生菌斑重叠等现象，不利于准确计数。WIGGENS菌落计数器，是带有非闪烁式环形光源，放大镜，压力传感器，计数笔等，可以让使用者轻松计数。

计算菌落总数，培养皿中的菌落数需要通过公式换算。 WIGGENS菌落计数器，配套软件可以直接通过压力传感器进行培养皿中菌落计数，通过软件内嵌程序直接计算出被检测样品中菌落总数。

Ⅳ 如何检测空气中细菌总数

检测空气中细菌总数的方法：撞击法
原理：采用撞击式空气微生物采样器采样通过抽气动力作用，使空气通过狭缝或小孔而产生高速气流，从而使悬浮在空气中的带菌粒子撞击到营养琼脂平板上,经37℃、48h培养后，计算每立方米空气中所含的细菌菌落数的采样测定方法。

Ⅵ 食品安全检验中细菌总数的测定有哪几中方法

现在一般是用平板计数法，以前的标准是用营养琼脂，新标准时用平板计数琼脂。还可以用快速测试纸检验。前者比较普遍。

Ⅶ 菌落总数的检验方法

菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。
基本操作一般包括：样品的稀释－－倾注平皿－－培养48小时－－计数报告。
国内外菌落总数测定方法基本一致，从检样处理、稀释、倾注平皿到计数报告无何明显不同，只是在某些具体要求方面稍有差别，如有的国家在样品稀释和倾注培养进，对吸管内液体的流速，稀释液的振荡幅度、时间和次数以及放置时间等均作了比较具体的规定。
检验方法参见：
GB4789.2-2010 《食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定》

Ⅷ 如何测量微生物的菌数

日常生活中我们需要进行菌落总数检测的除了我们关心的各种食物外，还有水、化妆品、空气等。每种都有对应的检测标准和方法。此外，还有关于公共场所的卫生标准里也有一些物品是需要进行菌落计数的，比如旅馆里的浴缸，毛巾，拖鞋，卧具，茶具，理发店的理发用具等等，对于这些物品的菌落计数，我们一般会采用用无菌生理盐水湿润的棉拭子在相应位置涂抹一定面积（如茶具是在内、外缘涂抹50平方厘米），然后放入10毫升生理盐水内，振荡混匀后1:10稀释（通常会做1:10,1:100和1:1000三个稀释度），吸取1毫升稀释后的检样注入灭菌平板。平板放在适宜的温度培养，等平板上长出来菌落进行菌落计数也是有一套标准来进行判读和计算的（内容还是比较多的，手懒不想打了。）总之，这样计数出来的结果，我们称之为菌落总数。

其实，在评价卫生质量尤其是食品的卫生质量时，还有一个重要的指标——大肠菌群：一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌，因为主要来源是人畜粪便，因此能作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有无污染肠道致病菌的可能。食品中的大肠菌群数以100毫升（克）检样内大肠菌群最可能数（MPN）表示。最后，卫生部门还会对相应的致病菌进行专门的检测，沙门菌、志贺菌、副溶血弧菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、蜡样芽孢杆菌等等都有一套完整的检测流程和标准。