阿司匹林药典鉴别方法的原理

‘壹’ 紫外分光光度计测定阿司匹林的原理是什么

【摘要】 目的 测定游离水杨酸含量。方法 紫外分光光度法。结果 水杨酸在1.52～30.4μg/m（r=0.99996）的浓度范围内线性关系良好，平均回收率为100.78%，RSD为1.18%（n=6）。结论 本方法快速、准确、可作为游离水杨酸的检查。
阿司匹林肠溶片是一种解热镇痛、抗炎、抗风湿药物，应用临床已有多年的历史，疗效确切。但在检查其游离水杨酸一项时，《中国药典》一直沿用对照品化学反应目视比色法判断标准，特别当对照品与供试品溶液颜色相近时易造成判定误差。该法也只能半定量，且整个操作过程繁琐。本文对建立紫外分光光度法测定阿司匹林肠溶片中游离水杨酸含量进行分析。
1 仪器与试药
UV-1601紫外分光光度计，阿司匹林对照品（批号:1011-0101）水杨酸对照品（批号:0106-9702），阿司匹林肠溶片3批（①批号:20020401规格:50mg;②批号:030101规格:50mg;③批号:20030618规格:25mg×100片），另外取阿司匹林片1批（批号:020503规格:0.3g×100片）。
2 实验方法与结果

2.1 测定波长的选择 精密称取水杨酸对照品与阿司匹林对照品适量加冰醋酸-甲醇（1∶10）溶液分别制成每1ml约含10μg的水杨酸溶液和每1ml约含100μg的阿司匹林溶液，照分光光度法分别在200～350nm的波长范围内扫描紫外吸收图谱，水杨酸对照品溶液在304±2nm，235±2nm的波长处有最大吸收，阿司匹林对照品溶液在277±2nm，228±2nm的波长处有最大吸收，经将两者的对照品溶液放置24h，再分别扫描吸收图谱，发现阿司匹林对照品溶液在304nm的波长处有明显吸收，说明此溶液放置过程中发生了水解反应，有水杨酸产生，然而在277nm的波长处的变化不大，故选定304nm的波长处为测定游离水杨酸的波长。

2.2 标准曲线制备 精密称定水杨酸对照品约15.2mg，置100ml量瓶中加冰醋酸-甲醇（1∶10）溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取0.5、1.0、2.0、3.0、5.0、8.0、10.0ml分别置50ml量瓶中，各加冰醋酸-甲醇（1∶10）溶液稀释至刻度，摇匀，在304nm的波长处测定吸收度;以浓度和吸收度作线性回归，得回归方程:A=0.04189C+0.00167，r=0.99996。

2.3 测定游离水杨酸 取本品适量（约相当于阿司匹林0.1g），置100ml量瓶中摇匀，过滤，在304nm的波长处测定吸收度，用标准曲线求得含量结果测定3批阿司匹林肠溶片和1批阿司匹林片中游离水杨酸含量并与2000年版二部收载的阿司匹林肠溶片和阿司匹林片项下检查游离水杨酸法比较。结果见表1。

表1 两种方法测得结果

2.4 不符合规定 ≤1.5 阿司匹林片 020503 0.39 不符合规定 ≤0.3

2.4 回收率试验 采用加样回收试验法，取100ml量瓶6只，编号，各精密称取已测定过水杨酸含量的阿司匹林肠溶片细粉适量（约相当于50mg）分别置量瓶中，再于1、2号量瓶中各精密加入水杨酸对照品0.5mg，3、4号量瓶中各精密加入水杨酸对照品1.5mg，5、6号量瓶中各精密加入水杨酸对照品2.5mg，照测定方法，分别依法测定，计算平均回收率，结果见表2。

表2 水杨酸回收率测定结果

3 讨论

溶剂用无水乙醇、甲醇、冰醋酸-甲醇（1:10）溶液为溶剂分别做阿司匹林在各溶剂中的稳定性试验，取阿司匹林对照品分别用上述3种溶剂制成测定溶液，照测定游离水杨酸项下测定，在相同的时间得到数据表明，阿司匹林在无水乙醇和甲醇中水解反应快，故无水乙醇、甲醇不宜作测定本品的溶剂。试验表明，冰醋酸-甲醇（1:10）溶液配制的阿司匹林溶液水解反应较慢，相对稳定，但放置时间长，测得值增大，因此，建议样品溶液即配即用。本法测得的结果与药典法测得的结果相符，但本法准确度高，可作为阿司匹林肠溶片中游离水杨酸的检查。本法也适宜阿司匹林片中游离水杨酸的检查。

‘贰’ 阿司匹林和扑热息痛如何用化学方法鉴别

用FeCl3溶液鉴别。

把氯化铁溶液滴入含扑热息痛的溶液中会出现紫色反应，而阿司匹林中不会产生颜色反应，由此可以区别出二者。

因为扑热息痛中含有酚羟基，所以遇氯化铁溶液显紫色。

(2)阿司匹林药典鉴别方法的原理扩展阅读

1、阿司匹林的理化性质

无臭或微带醋酸臭，微溶于水，易溶于乙醇，可溶于乙醚、氯仿，水溶液呈酸性。

2、扑热息痛的物理特性

从乙醇中得棱柱体结晶。熔点169-171℃，相对密度1.293(21/4℃)。能溶于乙醇、丙酮和热水，难溶于水，不溶于石油醚及苯。无气味，味苦。饱和水溶液pH值5.5-6.5。

‘叁’ 中国药典中阿司匹林药物的检查中,为什么要检查碳酸钠溶液的不溶物

阿司匹林的溶液澄清度检查：该检查系控制阿司匹林原料药中无羧基的特殊杂质的量。其原理是基于阿司匹林分子结构中含羧基，可溶于碳酸钠溶液；而苯酚、醋酸苯酯、水杨酸苯酯及乙酰水杨酸苯酯等杂质不溶的特性。

‘肆’ 阿司匹林的含量怎么测定

阿司匹林含量测定综述 08药学1班：冉贤飞
阿司匹林片为常用的解热、镇痛药，收载于(中国药典2000年版)二部。原含量测定方法为酸、碱中和滴定法。目前市场上流通的解热、镇痛药物中，含阿司匹林或以阿司匹林为主药的较多。除了中国药典的原含量测定方法以外，针对各个剂型有多种含量测定的方法。如采用高效液相法测定其含量，可消除其他含有酸、碱的物质对其测定的干扰，可更有效的控制制剂的质量。方法操作简便，专一性强，结果准确。也有用数学模型进行计算的如近红外漫反射技术，其原理是根据标样集中样品的近红外光谱运用化学计量学方法建立光谱特征值(如吸光度)与待测成分之间的数学关系(简称数学模型)

1．阿司匹林及阿司匹林制剂的含量测定
阿司匹林及阿司匹林制剂的含量测定有多种方法，其中包括药典所载的酸、碱中和滴定法
及紫外分光光度法，高效液相法等。
1．1阿司匹林酸碱滴定法：
直接滴定：方法：取本品0。4g，精密称定，加中性乙醇20ml，溶解，加酚酞指示液3d，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/l）滴定。每1ml滴定液相当于18。02mg 的C9H8O4
水解后剩余滴定：方法：取本品1.5g，精密称定加氢氧化钠滴定液（0.5mol/l）50.0ml，混合，缓缓煮沸10min，放冷，加酚酞指示液，用硫酸滴定液（0.25mol/l）滴定剩余的氢氧化钠。
两步滴定法：取本品10片，精密称定，研细，精密称取片粉适量（约相当于阿司匹林），加中性乙醇20ml,振摇使阿司匹林溶解，加酚酞指示液3d，滴加氢氧化钠滴定液（0.1mol/l）至溶液显粉红色。加定量过量的氢氧化钠滴定液（0.1mol/l）40ml，置水浴上加热15min并时时振摇，迅速放冷至室温，用硫酸滴定液（0.05mol/l）滴定剩余的碱。根据消耗的滴定液体积及滴定度计算含量

1．2阿司匹林制剂的电极法测定
仪器与试剂：电极电位和溶液酸度测试均使用pHs—loC型数字式酸度离子计；参比电极为232型饱和甘汞电极；试剂均为分析纯，实验用水为去离子水经高锰酸钾处理后蒸馏而得。
电极制备：将载体物质三苄基锡辛酸酯20mgl聚氯乙烯（PVC）0．33g和增塑剂邻硝基苯基辛醚o．65g溶解于四氢呋喃（THF）3g中，搅拌澄清后将其倾倒于40 mm×40 mm的水平玻璃板上。待THF挥发完后(约需l 2h)即得到具有弹性的PVC膜。用打孔器切下直径10 mm的圆片并用含5％PVC的THF溶液粘于PVC电极杆端,放置数小时,晾干后电极杆内充以0.1mol／L的水杨酸钠溶液作为内参比溶液并以Ag／AgCl丝作为内参比电极导出至离子计。电极使用前需于0.01mol／l水杨酸钠溶液中浸泡2h进行活化处理。电极及备用膜长期不使用时可洗净后．置于氮气氛围下保存。在此条件保存，电极的各项性能指标至少可于5个月内维持稳定。
阿司匹林制剂的分析：待测样品的处理： 阿司匹林易水解得到水杨酸根离子，且反应定量。因此，通过对水杨酸根离子的测定即可得出样品中的阿司匹林含量。阿司匹林片(A)和复方阿司匹林片（B）均处理如下：将适量药品(10片)研制成粉状，精密称取1—1．5g．在0.5mol／L NaOH溶液25m1中加热回流1h后过滤，定容至250 ml。吸取lOm1滤液，用稀硫酸调至pH 5．5，再用PH 5．5的磷酸盐缓冲液定容至100 mI作为待澜液。使用所配电极通过标准溶液法和样品加入法．分别测定药品A和B经前述处理后所得试样中的水杨酸根离子浓度，通过换算得出药剂中阿司匹林的含量

1．3 HPLC法测定阿司匹林片的含量
仪器与试药 仪器：高效液相色谱仪；CLASS—LC工作站。色谱柱：ODS C18色谱柱(150mm x 4．6mm，填料：Kromasil，粒度：5um)。 试药 阿司匹林对照品，甲醇(色谱纯试剂)，冰醋酸、盐酸(分析纯试剂)。
取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于阿司匹林10mg)，置100m1量瓶中，加0．1mol/l盐酸溶液适量，超声使阿司匹林溶解，放冷至室温，加0．1mol/l盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5m1，置25m1量瓶中，加0．1mol/l盐酸溶液稀释至刻度，格匀，取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图。另取阿司匹林对照品适量，加0．1mol/l盐酸溶液溶解并稀释制成每l m1中约含阿司匹林20ul的溶液，取20ul同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。

1．4动力学光度法测定痕量乙酰水杨酸
原理：碘对Ce4+和As的氧化还原反应有明显的催化作用，乙酰水杨酸和碘容易发生取代反应，使碘的浓度降低，导致碘的催化作用减弱，由此建立动力学光度法测定痕量乙配水杨酸的新方法。
仪器和试剂：721型分光光度计；PHS—3C酸度计；超级恒温水浴。0．01mol/lCe(SO4)2 0．013mol/L AS2O3，5mol/l H2S04 , 5mg/l KI用时稀释至0．25mg/l ;150mg/l乙酰水杨酸标准溶液用时稀释至所需浓度；5％醋酸马钱子碱；实验用水为二次蒸馏水。
实验方法:于一系列25m1比色管中准确加入0．25mg/lKI溶液1．0m1，5mol/l H2S04溶液1．25m1，0．013mol/L AS2O3溶液1.0ml，乙酸水杨酸标准溶液(或样品溶液)，加蒸馏水至25m1刻度线。摇匀并放人35土0．1度的水浴中，恒温后加入0.01mol/l Ce〔S04)2 1.0ml，立即摇匀，迅速放回水浴中。反应10min后，加入0.5mol/l,0.5％的醋酸马钱子碱终止反应并与Ce4+—显色，置于沸水浴中煮沸3min，取出冷却至室温。用1cm比色皿，在波长520nm处，以蒸馏水为参比，测定吸光度A。

2．以阿司匹林为主药的含量测定
虽然其成分组成有差异，但大多仍是根据阿司匹林的化学或色谱性质加以分离并测定其含量。
2．1反相高效法相色谱法测定阿司匹林可待因片中阿司匹林含量
仪器和试剂：Hp-1050液相色谱仪及UV检测器，HP3396积分仪。磷酸可待因对照品、阿司匹林对照品 。甲醇、醋酸钠、冰醋酸均为分析纯试剂，阿司匹林磷酸可待因复方制剂(试制品)。
液相色谱条件：色谱柱ODS C18(10mm，300mm×4mm) 流动相：甲醇—0．03mol/L—l醋酸钠(冰醋酸调pH＝3．5)(1：2．5)；检测波长：280nm；流速：1ml/min.
测定方法
混合对照品溶液配制 准确称取在105℃干燥至恒重的磷酸可待因对照品适量。用水溶解，配制成浓度为0.8mol/l的溶液。准确称取阿司匹林对照品约40ml置10mL容量瓶中。加入甲醇2—3mL，溶解，精密加入上述磷酸可待因溶液1.0mL，用水定容至刻度，摇匀即得。
供试品溶液配制 精确称取样品细粉适量(约相当磷酸可待因8mg阿司匹林400mg)置100mL容量瓶中，加入25％甲醇溶液50mL，超声溶解5min。用25％甲醇溶液稀释至刻度，格匀。经0.45um微孔滤膜滤过，取续滤液为供试品溶液.
测定 精密吸取混合对照品溶液和供试品溶液各10uL，分别注入液相色谱仪中。记录峰面积。根据混合对照品溶液中磷酸可待因和阿司匹林的峰面积，计算出供试品溶液中二者的含量.

2．2小儿退热灵片紫外折合光谱测定
原理：摺曲线分析法是一种数学变换方法(它的数学属性是一种新的复合导数变换)。它根据谐波分析原理，将光谱吸收曲线看作是多个数学分量加权而成。由于它提供的信息量大，可以显示吸收曲线的细微差异，以减少相似组分的数学相关性，所以在物质定性和混合物定量方面具有明显的优点。
仪器与试药：UV／VIS W型裙合光谱仪及裙合光谱软件；阿司匹林(1)对照品(含量99．89％)、苯巴比妥(2)对照品(含量99．92％)和辅料(佳木斯化学制药厂)；小儿退热灵片
方法与结果：对照品溶液的配制：分别精密称取1、2对照品适量，用0．1mol／LNaOH溶液(溶剂)溶解稀释制成1mg／m1的储备液。再用溶剂稀释制成适当浓度的溶液(约120ug／m1，22．0ug／m1，使1和2的吸收度在0.2—0．8)，备用。模拟样品的配制 按原黑龙江地方标准药品处方比例称取1、2与适量的辅料混匀后，精密称取0．2g置小烧杯中，用溶剂溶解并定容至100m1，静置10min，再取5m1稀释至250m1。分别吸取16、17、18、19和20m1置各25m1量瓶中，用溶剂定容，得1浓度为20—25ug／m1、2浓度为2．0—2．5ug／m1的模拟样品溶液(使1和2的吸收度在0．2—1．2)，共5份。
样品测定：取本品12片，精密称定，研细，精密称取细粉适量(约相当于10．110g，20．011g)，用少量溶剂溶解后定容至50m1。按“2．3”项下方法选定的最佳折合区间(245—295nm)，经折合光谱自动采集该区间的光谱信息，以两组分定量分析系统软件进行裙合运算，并计算得含量

2．3近红外漫反射技术测定精氨酸阿司匹林的含量
原理：近红外定量分析需要一个待测成分已知的标准样品集(简称标样集)，根据标样集中样品的近红外光谱运用化学计量学方法建立光谱特征值(如吸光度)与待测成分之间的数学关系(简称数学模型)。当测定未知样品时，只需测定该样品的近红外光谱，然后用已建好的数学模型预测出待测成分的含量。与常规的光谱定量分析不同之处是，近红外光谱分析时所用样品可以不经预处理，通过求解光谱矩阵与待测成分的浓度矩阵来建立数学模型，进行定量。检测固体样品一般采用漫反射技术，对于液体样品的检测用透射方法。建立数学模型的方法主要有：多元线性回归、主成分法、偏最小二乘法等。贴算法相对而言是一种较新的多元数据处理技术，它与逐步回归、主成分回归的显着差异在于考虑全谱区各波长是光谱参数的同时，还兼顾了被分析样品内部各成分之间的关系，因此在NIR分析中得到广泛应用。
仪器：Bruker公司VECTOR22/N近红外光谱仪,带漫反射光纤探头波长区间4000-11000cm-1
样品: 精氨酸阿司匹林固体粉末含阿司匹林48．0％-53．0％, 蔗糖酯(片剂辅料，作为润滑剂)
实验方法：用1／1000扭力天平准确称取不同比例的精氨酸阿司匹林与蔗糖酯，共10份，分别混合均匀，用压片机压片，得到精氨酸阿司匹林含量不同的片剂(以此含量做为精氨酸阿司匹林片的理论含量一真值)，每种各100片。从每种100片中随机选取10片，用仪器的漫反射光纤探头压住药片，每片正反面各测1次，取平均光谱做为样品光谱。扫描区间为4000-11000cm-1，分辨率为8cm-1。用Bruker公司Bruker公司quant/2软件分析，光谱数据采用加性散射校正预处理，以消除药片表面不同引起的误差，即可得到测量值。

2．4阿司匹林精氨酸盐注射液含量测定
仪器与试药： 仪器 79—l电磁搅拌仪；紫外—可见分光光度计。精氨酸，阿司匹林，其余试剂均为分析纯。
标准曲线的绘制：精密称取阿司匹林结晶250．0 mg，悬浮于250mL蒸馏水中，在40一50度水浴中不断搅拌至溶解，冷却后移入500 ml量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀。精密吸取l，2，3，4，5mL分别置于50 mL量瓶中，加25mL蒸馏水，用o．1mol/LNaOH溶液调节pH至9一10，在沸水浴中加热5min，冷却后，用0.1mol/l盐酸溶液调节pH至3.0一4.0，加5滴硫酸铁铵指示液，再加蒸馏水至刻度，摇匀。在530 nm波长处测定吸收度A。线性回归得方程.
测定含量：精密称取阿司匹林精氨酸盐400．0 mg置l00mL量瓶中，加蒸馏水溶解，稀释至刻度，摇匀，过滤。取续滤液5mL，置50 mL量瓶中，在沸水浴中加热数分钟，冷却，加25mL蒸馏水，以下同标准曲线项下处理，在530 nm波长处测定吸收度A，计算阿司匹林精氨酸盐的含量。阿司匹林精氨酸盐的含量＝(测定值／称量值)×loo％，代入数据求得阿司匹林精氨酸盐的含量.

3．阿司匹林体内药物分析：
3．1反相高效波相色谱法测定阿司匹林血药浓度
1 仪器与试药：Waters2690高效液相色谱仪，配置有996二极管阵列检测器及Millennium数据处理系统；旋涡混合器(上海青浦沪西仪器厂)；TGL—16高速离心机(上海医用仪器厂)。 水杨酸、苯甲酸对照品(中国药品生物制品检定所)；磷酸为分析纯，乙睛为色谱纯；水为超纯水。
色谱条件：色谱柱为Diamonsil C18柱(4．6mm×250mm，5um)，流动相为甲酵—乙睛—0．2％磷酸(18：32：50)，检测波长为237nm，流速为1.0ml／min。
溶液配制： 精密称取10．10mg水杨酸对照品，用甲酵溶解，并定容至10ml，得到1．010mg／L水杨酸的储备液，并用甲醇稀释成不同浓度的系列溶液。精密称取10．44mg苯甲酸，用甲酵溶解，并定容至10ml，得到1．044mg/l苯甲酸的储备液。取lml储备液，用甲醇稀释至loml，得到104．4ug／ml的内标工作液。
样品处理与测定：精密量取血清样品0．5nl，加入内标苯甲酸溶液(104．4ug／m1)50ul，乙睛2ml，旋涡振荡2min，15000r／min离心5min，取上清夜20ul，在上述色谱条件下进样，分别记录内标与样品的色谱图与峰面积。按外标法以峰面积计算，即得。

讨论
阿司匹林及其制剂有多种分析方法，但有其共同点。HPLC分析中，检测柱一般多采用C18柱，检测波长为280左右。滴定法都是根据药物中含游离羧酸的酸性进行滴定，或水解后用酸回滴。其他以数学模型等方法进行的测量，也都是基于阿司匹林的化学结构和性质。

参考文献：
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杨 军，动力学光度法测定痕量乙酰水杨酸，新乡师范高等专科学校学报，2001，15（2）：77
南 楠，反相高效法相色谱法测定阿司匹林可待因片中磷酸可待因和阿司匹林的含量，药物分析杂志，1999，19（1）：7
侯 巍，小儿退热灵片中两组分的紫外裙合光谱测定，中国医药工业杂志，2004，35（3）：162 乔 梁，应用近红外漫反射技术测定精氨酸阿司匹林的含量，药物分析杂志，1998，18（5）：297
张晓云，阿司匹林精氨酸盐注射液的制备及其稳定性研究，西北药学杂志，2004，19（2）：71
张 丽，反相高效波相色谱法测定阿司匹林血药浓度，中国药房，2003，14（5）：289

‘伍’ 阿司匹林的精致方法与重结晶方法在原理上有何不同

阿司匹林与对乙酰氨基酚的官能团区别是对乙酰氨基酚含有亚胺基，可以用胺类的特殊的生成颜色反应来鉴别（具体方法有机化学书上有，含氮化合物那章）。

阿司匹林与对乙酰氨基酚的官能团区别是对乙酰氨基酚含有亚胺基，可以用胺类的特殊的生成颜色反应来鉴别。也可以用阿司匹林含有羧基并与苯环直接相连，酸性比较明显，利用这个点也可以鉴别。

制备方法：

阿司匹林经水杨酸乙酰化而得：在反应罐中加乙酐（加料量为水杨酸总量的0.7889倍），再加入三分之二量的水杨酸，搅拌升温，在81～82℃反应40～60min。降温至81～82℃保温反应2h。

检查游离水杨酸合格后，降温至13℃，析出结晶，甩滤，水洗甩干，于65～70℃气流干燥，得乙酰水杨酸。

‘陆’ 阿司匹林含量的测定方法及适用对象

一，分光光度法测定阿司匹林肠溶片的含量

目的: 建立分光光度法阿司匹林含量的测定方法。方法: 在碱性条件下, 乙酰水杨酸与羟胺反应生成羟肟酸; 在酸性溶液中, 后者与三氯化铁形成红色的羟肟酸铁, 一定浓度范围内, 吸光度呈线性关系。结果: 在520nm 波长下, 采用标准曲线法, 测得阿司匹林肠溶片中乙酰水杨酸的含量为25mg/ 片。结论: 方法操作简便、快速、准确; 可用于阿司匹林含量的测定和产品质量控制。

阿司匹林( C9H8O4, 180.16) 又名: 2-(乙酰氧基) 苯甲酸,或乙酰水杨酸, 是常用的解热镇痛药, 临床上多用于治疗心脑血管方面的疾病, 也可用于消化道肿瘤和老年性痴呆症的预防。
阿司匹林药片中乙酰水杨酸的含量测定, 大多采用酸碱滴定法测定和高效液相色谱法分析测定。本方法采用可见分光光度法测定阿司匹药片中乙酰水杨酸的含量, 操作简便、快速、准确, 实验成本低, 可用于阿司匹林药品的分析和产品质量控制。
1.仪器和材料
仪器: 722 型分光光度计( 上海) , 容量瓶( 25mL) , 吸量管( 5mL , 1mL) 。材料: 2mo l/L NaOH , 4mol/L H Cl, 10%FeCl3 , 7%盐酸羟胺乙醇液; 0. 5 g / L乙酰水杨酸标准溶液; 阿司匹林样品溶液( 阿司匹林肠溶片, 配制成20 片/L 乙醇液) 。

2方法和结果
阿司匹林肠溶片的主要成分为乙酰水杨酸,分子中酯基在碱性溶液中可与羟胺反应生成羟肟酸;后者在酸性条件下与三氯化铁形成酒红色的羟肟酸铁,最大吸收波长为520nm,在一定浓度范围内,吸光度呈线性关系,可测出阿司匹林药片中乙酰水杨酸的含量。
2•1标准溶液系列和样品溶液的配制
分别取0.5g•L-1乙酰水杨酸标准溶液0.00mL(空白溶液),0.50mL,1.00mL,1.50mL,2.00mL和阿司匹林样品溶液1.00mL置于25mL容量瓶中,分别加入7%盐酸羟胺乙醇液1.00mL,2 mol•L-1NaOH 1.00mL,放置3分钟,再分别加入4 mol•L-1HCl和10%FeCl3各1.00mL,加水至刻度,摇匀。
2•2标准曲线的绘制
标准溶液系列和样品溶液放置10分钟后,用空白溶液做对照,在520nm处测定吸光度。以吸光度为纵坐标,标准溶液浓度为横坐标作图,绘制出标准曲线表1。
二，阿司匹林制剂的电极法测定
摘要以三苄基锡辛酸酯为活性物质, 制备具有良好的电位响应性能和选择性能的PVC 膜水杨酸根离子敏感电极。该电极应用于阿司匹林制剂的含量测定, 方法快速、方便、准确。标准曲线与样品加入两种电极测定法回收率分别为101. 1%和101. 3%。

1仪器与试剂
电极电位和溶液酸度测试均使用pHs-10C 型数字式酸度离子计( 浙江萧山市科学仪器厂) ; 参比电极为232 型饱和甘汞电极( 上海光电器件厂) ; 邻硝基苯基辛醚系本实验室自制, 其余试剂均为分析纯, 实验用水为去离子水经高锰酸钾处理后蒸馏而得。
2电极制备与性能测试
将载体物质三苄基锡辛酸酯( 按文献方法合成) 20 mg 、聚氯乙烯( PVC) 0. 33 g 和增塑剂邻硝基苯基辛醚0. 65 g 溶解于四氢呋喃( THF) 3 g 中, 搅拌澄清后将其倾倒于40 mm×40 mm 的水平玻璃板上。待THF挥发完后( 约需12 h) 即得到具有弹性的PVC 膜。用打孔器切下直径10 mm 的圆片并用含5%PVC 的THF 溶液粘于PVC 电极杆端, 放置数小时, 晾干后电极杆内充以0. 1mo l/ L 的水杨酸钠( NaSal) 溶液作为内参比溶液并以Ag/ AgCl 丝作为内参比电极导出至离子计。电极使用前需于10- 3 mol/ LNaSal 溶液中浸泡2 h 进行活化处理。电极及备用膜长期不使用时可洗净后, 置于氮气氛围下保存。在此条件保存, 电极的各项性能指标至少可于5 个月内维持稳定。在pH5. 5 的磷酸盐缓冲溶液中测试了电极的电位响应性能。结果表明, 该电极对于10-1～5×10-6 mo l/ L 浓度范围内的水杨酸根离子具有线性响应, 斜率值为- 57.6 mV,表现出良好的稳定性与重视性。电极具有较快的电位响应: 对于各种浓度的待测样品, 其稳态响应时间( t95%) 均小于30 s, 可以实现水杨酸根离子的快速测定。采用等活度分别溶液法测试了了电极的选择性能, 得到其相对于NO3- 、Cl-、AcO-和SO2-4 的选择性系数值分别为7.5×10-5、2.1×10-5、9. 0×10-4和< 10-5。该电极表现出对水杨酸根离子的高选择性。
3阿司匹林制剂的分析
3. 1待测样品的处理
阿司匹林易水解得到水杨酸根离子, 且反应定量。因此, 通过对水杨酸根离子的测定即可得出样品中的阿司匹林含量。阿司匹林片( A) 和复方阿司匹林片( B) 均处理如下: 将适量药品( 10 片) 研制成粉状, 精密称取1～1. 5 g , 在0. 5 mol/ L NaOH 溶液25 ml 中加热回流1 h 后过滤, 定容至250 ml。吸取10ml 滤液, 用稀硫酸调至pH 5. 5, 再用pH 5. 5的磷酸盐缓冲液定容至100 ml 作为待测液。
3. 2测定结果
使用该电极通过标准溶液法和样品加入法, 分别测定药品A 和B 经前述处理后所得试样中的水杨酸根离子浓度, 通过换算得出药剂中阿司匹林的含量, 所得结果见表1。表1 中的参照值系对样品采用药典推荐方法进行测定得到的结果( 3 次测定平均值) 。

三 酸碱滴定法
（1）直接滴定法
原理；阿司匹林与氢氧化钠反应生成乙酰水杨酸钠和水
pKa3～6都有游离羧基，显酸性。
• 方法：取本品0。4g，精密称定，加中性乙醇20ml，溶解，加酚酞指示液3d，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/l）滴定。每1ml滴定液相当于18.02mg 的C9H8O4。
• 优点：简便、快速。
• 缺点：酯键水解干扰（不断搅拌、快速滴定）。
• 酸性杂质干扰（如水杨酸 ）。
• 适用范围：不能用于含水杨酸过高或制剂分析，只能用于合格原料药的含量测定。
中性乙醇：取乙醇加入2滴酚酞指示液，用稀氢氧化钠溶液滴至溶液刚好呈粉红色，即可。PH值为8左右

（2）水解后剩余滴定
• 原理；利用阿司匹林酯结构在碱性溶液中易于水解的特性，加入过量的氢氧化钠滴定液。加热使酯键水解，剩余的氢氧化钠滴定液用硫酸滴定液回定
• 方法：取本品1.5g，精密称定加氢氧化钠滴（0.5mol/l） 50.0ml，混合，缓缓煮沸10min，放冷，加酚酞指示液，用硫酸滴定液（0.25mol/l）滴定剩余的氢氧化钠。
• 由反应式得知，硫酸标准液与阿司匹林的摩尔比为1∶1

•
• 优点：消除了酯键水解的干扰
• 缺点：酸性杂质干扰

四，高效液相色谱法
• 【仪器与试药】仪器：高效液相色谱仪；CLASS—LC工作站。色谱柱：ODS C18色谱柱(150mm x 4．6mm，填料：Kromasil，粒度：5um)。
• 试药: 阿司匹林对照品，甲醇(色谱纯试剂)，冰醋酸、盐酸(分析纯试剂)。
【方法】取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于阿司匹林10mg)，置100m1量瓶中，加0．1mol/l盐酸溶液适量，超声使阿司匹林溶解，放冷至室温，加0．1mol/l盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5m1，置25m1量瓶中，加0．1mol/l盐酸溶液稀释至刻度，格匀，取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图。另取阿司匹林对照品适量，加0．1mol/l盐酸溶液溶解并稀释制成每l m1中约含阿司林20ul的溶液，取20ul同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。

‘柒’ 通过什么样的简便方法可以鉴定出阿司匹林是否变质

取一部分阿司匹林样品，加入三氯化铁溶液，若出现紫堇色，则已经变质。看瓶子上的保质期是否超过，如果没有超过，要看药片的表面是否有裂痕，是否变色，是否颜色不均，是否潮湿等，另外，储存药剂的环境以及药剂是否密封也有关系。

阿司匹林为代表的药最怕就是潮湿，如果发现阿司匹林变软可以轻易用手捏开，代表药物已经变质，此时必须弃用。

(7)阿司匹林药典鉴别方法的原理扩展阅读：

阿司匹林经水杨酸乙酰化而得：在反应罐中加乙酐（加料量为水杨酸总量的0.7889倍），再加入三分之二量的水杨酸，搅拌升温，在81～82℃反应40～60min，降温至81～82℃保温反应2h。检查游离水杨酸合格后，降温至13℃，析出结晶，甩滤，水洗甩干，于65～70℃气流干燥，得乙酰水杨酸。

‘捌’ 阿司匹林得鉴别反应中水解反应得具体过程

阿司匹林遇水缓慢水解生成水杨酸和醋酸,对于固体阿司匹林检验方法如下：物理方法：1.若能闻到醋酸味,说明阿司匹林水解.2.如楼上所说,看颜色.化学方法：取少量样品加水溶解（由于阿司匹林水解速度不快,所以检验时允许加水溶解）,之后加入FeCl3溶液,若溶液变紫色,则说明阿司匹林水解（阿司匹林水解产物水杨酸中含有酚羟基,可与FeCl3发生显色反应）.

‘玖’ 阿司匹林片的分析

1 了解溶出度测定的方法与原理；

2 熟悉片剂分析的项目与方法;

3 掌握阿司匹林鉴定试验的原理及与药物结构的关系;

4 掌握本实验中药物特殊杂质的来源和检查原理；

5 掌握两步滴定法测定阿司匹林片含量的原理与操作，及容量分析法测定片剂含量的计算方法。

【实验原理】

1. 药物

本品为白色片；遇湿气易变质。本品含阿司匹林应为标示量的95.0%~105.0%。

2.原理：

⑴ 鉴别

1 三氯化铁反应：水杨酸及其盐在中性或弱酸性条件下，与三氯化铁试液反应，生成紫堇色配位化合物。阿司匹林加热水解生成水杨酸，可用三氯化铁反应鉴别。

2 水解反应：阿司匹林与碳酸钠试液加热，酯健水解，得水杨酸钠和醋酸钠，加过量稀硫酸酸化后，生成白色水杨酸沉淀，并发生醋酸的臭气，因此可用水解反应鉴别。

⑵ 检查

阿司匹林中游离水杨酸的检查

a. 杂质来源 游离水杨酸为阿司匹林生产中未反应的原料或贮存过程中的水解产物。

b. 检查方法 阿司匹林无游离酚羟基，不与高铁盐溶液作用，而水杨酸则可与之反应生成紫堇色，此种方法称之对照法，极为灵敏，可检出1ug的游离水杨酸。

⑵ 含量测定

阿司匹林分子结构中有酯健，易水解生成水杨酸和醋酸，片剂中为防止酯健水解加入少量酒石酸或枸橼酸做稳定剂，因此在片剂中有酸性杂质，含量测定时为消除酸性杂质干扰，采用两步滴定法。

第一步 中和，消除酸性杂质〔酸性附加剂和降解产物〕的干扰

第二步 水解后剩余滴定

【实验仪器与试剂】

一仪器

试管，纳氏比色管，溶出度测定仪，紫外-可见分光光度计，10~25ml注射器，0.8um微孔滤膜，酸式滴定管，容量瓶，移液管，漏斗。

二试剂

1. 酚酞指示液

取酚酞1g，加乙醇100ml使溶解，既得。变色范围：pH8.3~10.0〔无色红色〕。

2. 稀硫酸铁铵溶液

取盐酸溶液〔9100〕1ml，加硫酸铁铵指示液2ml后，再加水适量使成100ml，摇匀，既得。

3. 水杨酸标准溶液

精密称取水杨酸0.1g，加水溶解后，加冰醋酸1ml，摇匀，再加水使成1000ml，摇匀，既得。

4. 中性乙醇

中性乙醇的“中性”是对中和法所用指示剂而言的。中和法用酚酞为指示剂时，中性乙醇的制取方法为：取适量乙醇，加入酚酞指示液3滴，用氢氧化钠滴定液〔0.1mol/L〕滴定至淡红色，既得。

5. 三氯化铁试液

取三氯化铁9g，加水使溶解成100ml，既得。

6.碳酸钠试液

取一水合碳酸钠12.5g或无水碳酸钠10.5g，加水使溶解成100ml，既得。

7.稀硫酸

取硫酸57ml，加水稀释至1000ml，既得。本液含硫酸应为9.5%~10.5%。

阿司匹林、三氯甲烷、无水乙醇

三滴定液的配制与标定

1.氢氧化钠滴定液〔0.1mol/L〕

⑴配制 取氢氧化钠适量，加水振摇使溶解成饱和溶液，冷却后，置聚乙烯塑料瓶中，静置数日使澄清。取澄清的氢氧化钠饱和溶液5.6ml，加新沸过的冷水使成1000ml，摇匀。

⑵标定 取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约0.6g，精密陈定，加新沸过的冷水50ml，振摇，使其尽量溶解；加酚酞指示液2滴，用本液滴定；在接近终点时，应使邻苯二甲酸氢钾完全溶解，滴定至溶液显粉红色。每1ml氢氧化钠滴定液〔0.1mol/L〕相当于20.42mg的邻苯二甲酸氢钾。根据本液的消耗量与邻苯二甲酸氢钾的取用量，算出本液的浓度，既得。

2.硫酸滴定液〔0.05mol/L〕

⑴配制 取硫酸3.0ml，缓缓注入适量水中，冷却至室温，加水稀释至1000ml，摇匀。

⑵标定 取在270~300℃干燥至恒重的基准无水碳酸钠约0.15g，精密称定，加水50ml使溶解，加甲基-溴甲酚绿混合指示液10滴，用本液滴定至溶液由绿色转变为紫红色时，煮沸2min，冷却至室温，继续滴定至溶液由绿色变为暗紫色。每1ml硫酸滴定液〔0.05mol/L〕相当于5.30mg的无水碳酸钠。根据本液的消耗量与无水碳酸钠的取用量，算出本液的浓度，既得。