导航:首页 > 解决方法 > 水质检测方法酶底物

水质检测方法酶底物

发布时间:2022-12-30 20:23:01

㈠ 酶底物法总大肠菌群超过24小时结果有影响吗

mpn
为最大可能数(most
probable
number)的简称。这种方法,对样品进行连续系列进行稀释,加入培养基进行培养,从规定的反应呈阳性管数的出现率,用概率论来推算样品中菌数最近似的数值。

㈡ 利用水生生物监测和评价水体污染的两种方法!!!急,在线等!

2.3 水污染生物监测的方法

2.3.1利用指示生物在水体中的出现或消失、数量的多少来监测水质

许木启 [3]利用白洋淀水体中浮游动物群落优势种的变化来判断水体的污染程度和自净程度。结果表明,府河—白洋淀水体从上游至下游,浮游动物耐污种类逐渐减少,广布型种类逐渐出现较多,在下游许多正常水体出现的种类均有分布;同时,原生动物由上游的鞭毛虫至中游出现纤毛虫,在下游则发现很多一般分布在清洁型水体的种类,表明府河—白洋淀水体从上游到下游水体的污染程度不断减轻,水体具有明显而稳定的自净功能。

2.3.2利用水生生物群落结构的变化来监测水质

蒋昭凤等 [4]用底栖动物的变化趋势评价湘江水质污染,结果发现湘江干流底栖大型无脊椎动物种类数和物种的多样性指数从上游到下游呈减少趋势,表明毒杀生物的有毒物质对湘江的污染较为明显,并且可根据湘江干流各断面种类数的减少程度判断出各断面的污染程度;同时也观察到,随着时间的推移,底栖大型无脊椎动物种类数和多样性指数也呈减少趋势,说明这种有毒污染仍在发展之中。

2.3.3水污染的生物测试

水污染的生物测试是利用水生生物受到污染物质的毒害所产生的生理机能的变化,测试水质污染状况。

Belding [5]根据鱼的呼吸变化指示有毒环境,在有污染物存在的情况下,鱼腮呼吸加快且无规律。德国[6]从1977年开始研究利用鱼的正趋流性开展生物监测,在下游设强光区或适度电击,控制健康鱼向下游的活动;或间歇性提高水流速度,迫使鱼反应。如果鱼不能维持在上游的位置,则表明污染产生了危害。

3 国内外水污染生物监测的研究进展

近几年来,应用生物监测环境技术的研究广泛开展,出现了一些新方法、新材料和新的监测物,提高了生物检测的灵敏性。

3.1 水污染生物监测及其检测的新方法

3.1.1 利用遗传毒理学监测水体污染

环境污染物质对人类及其它生物危害最为严重的问题是对细胞遗传物质造成的损害。因此,近20年来环境生物检测技术的研究和应用,尤其是细胞微核技术和四分体微核技术在动植物以及人类染色体受外界理化因子的损伤等方面的分析、诱变剂的测试筛选,以及应用于环境监测的研究得到了广泛的发展[7]。微核在生物细胞内的形成途径以及与染色体畸变的相关性早已被人们所认识,用微核测定法替代染色体畸变方法来监测环境污染物对生物遗传物质的损伤具有简便、快速、灵敏度高等优点。最常用的蚕豆根尖细胞微核试验技术是一种以染色体损伤及纺锤丝毒性等为测试终点的植物微核监测方法,该技术自1982年由Degrassi等建立以来,在环境诱变和致癌因子的检测研究中,特别是在水质污染和致突变剂检测研究中得到了广泛应用[8]。

吴甘霖 [9]在利用水花生根尖微核技术(MCN)对马鞍山市废水的监测研究中,发现利用水花生根尖微核可作为监测水体污染的新材料。其根尖细胞微核率 MCN(‰),不仅可用于监测不同废水的污染程度,而且由于该植物长期生活在污染水体中,还能反映不同废水的污染物富集程度及现状。当外界环境中存在一定浓度的致突变物时,可使细胞发生损伤,从而使微核细胞率上升。另外微核细胞率的上升,提示环境中存在有致突变物,即受试水样中含有能打断DNA分子的诱变剂或能打断纺锤丝的纺锤丝毒剂,从而表现出遗传毒性。

单细胞凝胶电泳(SCGE),即彗星试验也是一种通过检测DNA链损伤来判别遗传毒性的技术。它比微核试验更有益,因为环境中的遗传毒物浓度一般很低,而彗星试验检测低浓度遗传毒物具有高度灵敏性,所研究的细胞不需要处于有丝分裂期。同时,这种技术只需要少量细胞。目前它已经被用于检测哺乳动物、蚯蚓、一些高等植物、鱼类、两栖动物以及海洋无脊椎动物的细胞[11]。Mirjana Pavlica等 [10]用暴露在五氯苯酚(PCP)中的淡水蚌类(Dreissena polymorpha Pallas)血细胞进行彗星试验,观察血细胞中DNA损伤程度。在进行实验室实验和原位实验后,发现高浓度的PCP(80g/L)会引起血细胞中DNA断裂,表明用彗星试验检测DNA损伤能够监测水体中PCP污染。

SOS显色法[12]是国内在20世纪80年代发展起来的一种遗传毒性检测新方法,具有快速、准确、灵敏及假阳性率低的特点,被广泛用于遗传毒性的测定中。其原理是:在DNA分子受到外因引起的大范围损伤、其复制又受到抑制的情况下,会导致一种容易发生错误的修复。所有这些在遗传毒物处理后大肠杆菌中出现的一系列反应统称为SOS应答。SOS显色法有许多优于Ames的特点:(1)快速、简便,测定过程只需7h;(2)灵敏,被处理的细胞全产生或不产生SOS反应,用分光光度法测定β-ONPG(邻硝基苯β-D-半乳糖苷)分解产物非常灵敏;(3)准确,SOS显色法测定的是遗传毒物对细胞原发的直接反应,其阳性结果十分可信,而Ames试验的假阳性率较高。因此,SOS显色法已引起人们的密切关注,成为一种值得推广的水质监测评价方法。

3.1.2 微型生物监测(PFU法)

以前生物监测的研究重点多放在分类和结构方面。然而,生物系统的结构变化并非总与生物系统的其它变化相关联,仅以某个种类、某个种群构成的生物反应系统的变化来评价一个水生生态系统,其偏差较大。因此,为掌握水生生态系统对环境污染的完整反应,要求我们在生物系统(细胞、组织、个体、种群、群落、生态系统)中选择超出单一种类水平即群落或生态系统来作为生物监测的生物反应系统,并对该系统的结构和功能变化均进行研究。美国Cains创建了用聚氨酯泡沫塑料块(简写为PFU)测定微型生物群落的结构和功能参数,进而进行监测预报的新方法。中科院水生所沈韫芬研究员把PFU应用到生物监测中,并使PFU法成为我国生物监测的一种标准方法[13]。PFU法适用于原生动物、藻类对水质的检测。此方法可以鉴别水体是有机污染还是毒性污染。
尹福祥、杨立辉 [13]应用PFU法对某印染厂印染废水处理设施的净化效能进行了监测。结果表明,微型生物群落的结构参数和功能参数均较好地反映了印染废水的净化效果。与经典的生物监测方法相比,PFU法由单一监测结构(或功能 )参数转变为结构参数(种类组成、优势种)和功能参数(群集参数)同时监测,提高了生物监测的信息捕获能力,并使监测信息能更完整、准确、精密地评价环境状况。PFU法可快速、准确地监测水质的突变,通过1d的试验结果就能预测、预报受纳系统环境质量的状态及其变化过程。某样点的群集曲线突然大幅下降,说明该点的水质发生了突变,应调查有无事故性排放。

由于潮汐流和环流的影响,PFU法用于海水水质监测的有效性不如在淡水中监测。Kuidong Xu等 [14]用一种改良的PFU法—瓶装聚氨酯泡沫塑料块(BPFU)法进行海水的生物监测。BPFU法是将2块聚氨酯泡沫塑料块装入1个圆柱形塑料瓶中,塑料瓶有4道裂缝,用于保护聚氨酯泡沫塑料块不受粗糙条件的干扰,同时便于微生物群落进入聚氨酯泡沫塑料块,达到平衡。BPFU法比传统的PFU法在海水生物监测中的优越性体现在:⑴取样稳定;⑵海水生物评价结构和功能的精确性;⑶定量比较时可以保持水体积的稳定性。实验结果表明,用BPFU法进行海水生物监测比PFU法更加有效。通过BPFU法聚集的物种数量随污染物强度的增大而减少,减少程度大于PFU法。由BPFU法计算出的多样性指数同样也高于PFU法。

3.1.3 应用分子生态毒理学方法监测水体污染

随着社会的进步,生物技术也在不断地发展,在此基础上逐步形成了分子生态毒理学。分子生态毒理学采用现代分子生物学方法与技术,研究污染物及代谢产物与细胞内大分子,包括蛋白质、核酸、酶的相互作用,找出作用的靶位或靶分子,并揭示其作用机理,从而能对在个体、种群、群落或生态系统水平上的影响作出预报,具有很大的预测价值。目前最常用的是把腺三磷酶作为生物学标志,方法是测定体内三磷酸腺苷酶ATPase的活性,并以其活性强弱作为多种污染物胁迫的指标[15]。

Petrovi S等 [16]通过测定贻贝 (Mytilus galloprovincialis Lam.)消化腺上皮细胞中的溶酶体(Lysosome)膜的稳定性和金属硫蛋白(Metallothionein,MT)的含量来监测水体中有毒物质。贻贝消化腺上皮细胞中的溶酶体是有毒物质积累滞留的主要场所,同时它在排泄有毒污染物质的过程中起着关键作用。溶酶体中的有毒物质会削弱膜的稳定性,减少产生水解作用的溶酶体酶向细胞溶质中扩散。MT是动物对周围环境中过量金属的一种防御机制,能够阻止有毒物质及其代谢产物产生的细胞毒素对有机体产生影响。一般来说,监测MT的方法比监测组织中金属总量更可行,因为这种方法可以将胞内具有显着毒理效应的金属结合片段与不可利用的金属络合物区分出来[17]。因此贻贝消化腺上皮细胞中的溶酶体膜的稳定性和金属硫蛋白的含量的测定可以作为水体环境有毒物质变化的早期警报。

近年来,生物体内胆碱脂酶活性的测定已经成为海水和淡水水体污染的一种监测工具。由于环境中的有机磷农药和氨基甲酸盐杀虫剂与底物乙酰胆碱的分子形状类似,能与酶酯基的活性中心发生不可逆的键合从而抑制酶活性,因此它可以用来评价有机体在杀虫剂和毒害神经的污染物质(如重金属)中的暴露程度。Mohamed Dellali等 [18]用蛤和贻贝监测泻湖的水体污染,结果表明,蛤和贻贝体内乙酰胆碱脂酶的活性能很好地反映当地水体的污染状况。

3.1.4水生生物环境诊断技术

用常规的毒性测试可以检测污染严重水体的毒性,但对于低毒性水体,用常规的毒性试验难以检测到其毒性水平。为此,日本NUS株式会社开发出一种低毒性水体的新的生物测试方法——水生生物环境诊断技术(Aquatic Organisms Environment Diagnostics,简称AOD)[19]。该方法采用冷冻浓缩技术 ,将低毒性水体样品中的部分水分脱出,使水样中的毒理成分合理地浓缩,再进行生物毒性试验,进而判定水体的毒性水平。AOD技术所选用的测试鱼要求体积较小,同时要满足测试生物所必备的高敏感性、取材方便、便于饲养或繁殖、品系纯等条件。目前,AOD主要采用红鳍鱼(T.albnubes)和淡水虾(P.compressa)作测试生物。

3.1.5 幼虫变态实验

近年来,对于以海洋无脊椎动物的胚胎和幼虫期毒性实验研究较为广泛。然而研究表明[20],浮游幼虫变态比现有的生物个体水平的毒性实验指标更为敏感。海洋底栖无脊椎动物幼虫的变态期是其生活史的关键阶段,变态期的幼体对污染物的敏感性要高于其它阶段,胚胎发生和幼虫发育不受影响的污染物浓度会阻碍其变态。幼虫的变态过程易于观察(受到外来信息物质的调控),易受环境污染的干扰。与死亡率比较,能否在附着基表面顺利变态是监测污染物毒性的更敏感的指标。

3.1.6 四膜虫 (Tetrahymena pyriformis) 刺泡发射法

四膜虫是一种淡水单细胞生物,生长速度快、繁殖量大,实验室内易无菌培养和控制,适用于水质监测。以前应用四膜虫监测水质都是通过测试四膜虫的生长曲线和繁殖曲线等生物学特征来反映水质变化情况。然而四膜虫个体差异小、对化学毒物敏感,在诱变实验中无须添加活化酶、自发突变率低,也是一种理想的致突变试验材料。四膜虫的刺泡是附着在细胞质表面,由基粒分化而来,垂直胞质排列,当外界环境因子触发可诱导刺泡发射,形成显微镜下可见的分泌泡。吴伟等[21]用阳性致突变物诱发四膜虫刺泡发射,试验结果表明,四膜虫对致突变阳性物质相当敏感,且有剂量效应关系。因此利用四膜虫刺泡发射是评价水体中化学物质致突变的一种快速、简便、良好的方法。

3.2 水污染生物监测的新材料和新的监测物

近年来,水污染生物监测不仅出现了一些新的方法,同时也出现了一些新材料、新的监测物。席玉英、韩凤英等 [22]对长叶异痣蟌〔Ischnura elegans(VanderLinden)〕体内汞含量及与水体汞污染的关系进行了研究,结果发现,长叶异痣蟌对水体汞具有富集性,富集倍数高达5448~7600倍,可作为水体汞污染的监测生物。其中雌性长叶异痣蟌体内汞含量样体(同时、同地采集的)间存在很大差异,因此可作为水体汞污染的定性研究,不宜作为水体汞污染的定量监测。而雄性长叶异痣蟌体内汞含量样本间的差异则不显着,并且雄性长叶异痣蟌体内汞含量随水体汞含量的增加及时间的延长而增加,可作为水体汞污染的指示生物。

Flammarion P等 [23]通过测定白鲑(Leuciscus cephalus)体内胆碱脂酶的活性来监测水体污染,发现白鲑可以成为很好的水体污染监测工具。而Khan R A等 [24]用比目鱼(Pleuronectes americanus)体内乙氧基-异吩恶唑酮-脱乙基酶(EthoxyresorufinO-Deethylase,EROD)活性的强弱来判断纽芬兰岛水体的污染状况,发现它也有很好的监测效果。

Kahle J等[25]测定一种桡脚类动物Metridia gerlachei对威德尔海中痕量金属的生物累积率,发现Metridia gerlachei对Co、Cu、Ni、 Pb 、 Zn等金属元素的敏感度较高,可以作为海水中金属元素的监测物。而Rainbow P S 等[26]利用藤壶监测香港海域中痕量金属,同样也得到很好的效果。

刘绮 [27]进行了一种新的生物监测方法研究。他以孵化好的Ⅱ~Ⅲ期卤虫为受试生物,实验研究了K2Cr2O7、HgCl2、As2O3、KCN、六六六、苯酚、苯7种物质对卤虫的中毒阈值和 LC50 -24h(Leathal Concentration 50-24h, 24 h半致死浓度)的测定,阐明了该方法具有操作简便、快速、覆盖面宽、技术易掌握、所需设备不复杂等特点。此生物监测方法在环境科学与工程中的研究和应用可进一步扩展到对入江、河、海的工业排放物的检毒、农药残留量分析、真菌毒素分析等广泛领域。

㈢ 水中粪大肠菌群的测定

化妆品检测项目中粪大肠菌群的检测流程:
10g/mL样品+90mL灭菌生理盐水 →10mL+10mL双倍乳糖胆(含中和剂)培养基→粪大肠菌群 44.5℃,48h培养
注:在化妆品检测项目中,如果样品含有油脂性的成分,如精油,在样品前处理中需加入液体石蜡、吐温80、生理盐水进行均质,使样品能够均匀分散开来。
粪大肠菌群又是一个什么样的微生物呢?下面我们来详细介绍下:
大肠菌群:大肠菌群并非细菌学分类命名,而是卫生细菌领域的用语,它不代表某一个或某一属细菌,而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌,这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。
定义(GB2010):在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。
粪大肠菌群:大肠菌群的一种,又称耐热大肠菌群,培养温度:44.5±0.5℃,粪大肠菌群是化妆品检测项目中必检的微生物项目。
大肠埃希氏菌:((Escherichia. coli )通常称为大肠杆菌。根据不同的生物学特性将致病性大肠杆菌分为5类:
致病性大肠杆菌(EPEC)、
肠产毒性大肠杆菌(ETEC)、
肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)、
肠出血性大肠杆菌(EHEC)、
肠黏附性大肠杆菌(EAEC)。
您可能感兴趣的检测服务:

㈣ 50克需酶解的底物,200mL的水,加酶量为底物的1%。酶活是10U/g,那加酶量是多少U/g

加酶量为底物的1%
那就应该是加0.5g也就是500mg的酶啊

U/g是酶活的单位。酶量的单位可以是质量mg,体积ml或者就是活性单位U。不会是U/g

㈤ 底物浓度与酶的浓度对水解有什么影响添加酶的量与底物浓度有什么关系,底物浓度是怎么设定的

如果底物浓度低,随着底物浓度升高,水解速度先升高后不变。当底物浓度不变时,若浓度低,随着酶浓度增加,速度先升后降,若底物浓度足够多,速度升高,意思就是这两个相互影响,你意会一下

㈥ 是否可以利用蒸馏水 酶和底物证明酶具有催化作用

当然可以利用蒸馏水,酶和底物证明酶具有催化作用。
酶催化都是在水中进行的,水不可缺少,底物是反应物,酶是催化剂。将底物溶于水中,加入酶,常温下反应即开始。只要底物浓度减少,有产物出现,即可证明酶具有催化作用。

如何检测水产品中含有孔雀石绿

检测方法
孔雀石绿在水生动物体内迅速代谢成无色孔雀石绿,而无色孔雀石绿的毒性甚至超过孔雀石绿,所以通常将孔雀石绿和无色孔雀石绿的总量作为动物源性食品中孔雀石绿残留的限量指标。孔雀石绿的检测方法以理化检测法和免疫学检测法为主。其中理化检测法包括:薄层层析法、分光光度法、 高压液相色谱法、液相色谱质谱联用法、气相色谱质谱联用法等,相较之下免疫学检测方法更为常用。
酶联免疫检测法(ELISA):酶联免疫法的基本原理是将酶分子与抗体分子共价结合,结合产物不会改变抗体的免疫学特性,也不影响酶的生物学活性。此种酶标抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。底物可在酶的作用下使其所含的供氢体由无色的还原型转变成有色的氧化型,出现颜色反应,颜色反应的深浅与样品中相应抗体或抗原的量呈一定的比例,显色反应可通过酶标仪进行定量测定。ELISA方法是一种特异、敏感的检测方法,可分为: 间接竞争抑制法、抗体/抗原包被直接竞争法和夹心法。
其中间接竞争抑制法,是用人工抗原包被酶反应板后加入抗血清和待测药物进行竞争性结合反应,洗涤后板上只留有与包被抗原结合的抗体(一抗) ,再加酶标记物的二抗与一抗结合,洗涤后加入酶的底物。酶催化反应的产物量与被结合的一抗和二抗量呈正比,与待测样品中相应的药物量呈反比。其特点在于一个一抗可结合多个二抗,放大待测物的量,提高了方法的灵敏度。截至2013年的商品ELISA孔雀石绿试剂盒,都只能检测孔雀石绿总量,不能同时检测孔雀石绿和无色孔雀石绿各自的含量,在样品前处理过程中应注意根据抗原和抗体的类型,将目标化合物全部转化成相对应的形态。

㈧ 怎样快速检测水中的重金属含量

快速检测方法很多方法一,使用便携式仪器检测方法二,使用试纸法快速检测水中重金属方法三,检测重金属污染程度的可能性.在CA培养基内分别加入不同浓度的锌、铜、铅等重金属,再将水霉菌菌株移至此些培养基上培养.由实验结果得知,培养基内含500 ppm硫酸锌、40 ppm硫酸铜与500ppm硝酸铅时,皆会使水霉无法生长;而含有450 ppm硫酸锌、30 ppm硫酸铜与450ppm硝酸铅时,水霉虽生长不佳,但仍可生长、繁殖. 由于水霉菌在适当湿度、温度并提供适量光照的环境下生长十分快速,约1~2日,所以可以十分快速检验水中重金属的含量,加上菌株容易取得、培养材料十分便宜,因此,利用水霉或检测水中水霉含量即可作为检测重金属污染程度一项十分经济、快速、简便且准确的参考指标之一.至于有关水霉菌对各种重金属的灵敏度与如何推广应用水霉来检测水中,甚至土壤中重金属污染程度则有待进一步试验和改善.

㈨ 酶底物法测定水质粪大肠菌群是国标方法吗

目前酶底物法检测粪大肠菌群已经被列入城镇污水水质标准检验方法,且只有酶底物法。有标可询!

㈩ 生活饮用水中大肠埃希氏菌检验探讨

          水样中的细菌包括很多“属”和很多“种", 我国《生活饮用水卫生标准》2006版[ 1] 的卫生学评价标准是以菌落总数、总大肠菌群、耐热大肠菌群和大肠埃希氏菌4项作为微生物指标。

        总大肠菌群可来自人类和温血动物的肠道及自然环境, 包含有埃希氏菌属、柠檬酸菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属等一大群在37℃经24小时培养能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。他们在伊红美蓝平板生长特征是:(1)深紫黑色、具有金属光泽;(2)紫黑色、不带或略带金属光泽;(3)淡紫红色菌落。

        耐热大肠菌群,又称粪大肠菌群,主要包括埃希氏菌属和耐热克雷伯菌属[6],是利用提高温度的方法将大自然的大肠菌群和粪便中的大肠菌群区分开的,它是一群能在44.5 ℃下生长的大肠菌群,只有来源于动物和人类粪便的大肠菌群能生长,而来自大自然的大肠菌群不能耐热生长[8-9]。

        大肠埃希氏菌(Escherichiacoli),以前常称大肠杆菌, 广泛存在于人类和温血动物的肠道中, 是人类和动物肠道中需氧性共生菌的优势菌群, 维持宿主健康部分生理功能必需的肠道菌.虽然大多数的大肠埃希氏菌为非致病菌, 但是当宿主免疫力降低或细菌侵入肠道的外组织或器官时, 可引起肠外感染。某些血清型可产生毒素, 为致病性大肠埃希氏菌, 可引起人类腹泻。所以生活饮用水中大肠埃希氏菌成为肠道疾病的重要致病菌之一。[2]

他们从属范围逻辑关系如下

      《生活饮用水卫生标准》2006版标准, 增加了生活饮用水中大肠埃希氏菌的检验。

        为了提高实验室检测能力,近日,本实验室开展了生活饮用水中大肠埃希氏菌检测的质控活动,质控活动达到如下目标:

一、使用工作中分离的耐热大肠菌群、标准菌株产气肠杆菌、标准菌株大肠埃希氏菌三种菌进行试验,观察不同大肠菌群在EC-MUG培养基荧光实况,取得阳性标本荧光视觉效果。

二、使用的试管进行酸浸泡、蒸馏水处理和水龙水直接清洗处理,寻找大肠埃希菌荧光效果影响因素。

三、使用北京陆桥EC-MUG培养基试剂及青岛海博EC-MUG培养基试剂进行比较试验,评价实验室常规使用的试剂是否优良。

1材料与仪器

1.1 EC-MUG培养基, 购自北京陆桥有限责任公司、青岛海博

1.2伊红美兰培养基, 购自北京陆桥有限责任公司。

1.3营养肉汤,购自北京陆桥有限责任公司。

1.4培养箱, 36℃ ±1℃;44.5±0.5℃;波长366nm紫外灯

2方法与结果

2.1方法原理

        大肠埃希氏菌能特异性产生产生β -葡萄糖醛酸酶(β -glucuronidase), 此酶能分解培养基上的EC-MUG荧光底物释放出荧光产物, 使培养基在366 nm紫外光下产生特征性荧光, 以此技术来检测大肠埃希氏菌。

2.2操作步骤与结果

        上图是产气肠杆菌与大肠埃希氏菌在EC-MUG培养基经44.5℃培养后,在日光灯背景下,产气肠杆菌液体清亮,说明产气肠杆菌在44.5℃中不能生长繁殖;大肠埃希氏菌液体混浊,说明大肠埃希氏菌在44.5℃中能生长繁殖。

        对上述经培养过的EC-MUG培养基,在日光灯观察背景下,使用366nm紫外线灯进行观察。产气肠杆菌依然清亮,无蓝光;不同稀释度的大肠埃希氏菌菌液有明显的蓝光,蓝光间无明显差别。因此,在观察大肠埃希氏菌发酵效果时,可以在普通光线下,使用366nm紫外线灯进行观察,结果显着。

        上图为在暗室下对前述经培养过的EC-MUG培养基观察实验效果。大肠埃希氏菌发酵后产生荧光,并且不同稀释度的菌液,目视无显着差别;与产气肠杆菌效果阴性效果有非常明显的差别。产气肠杆菌培养管有微弱荧光,可能存在EC-MUG培养基自身有荧光事实!

        该图是灭菌蒸馏水与EC-MUG培养基效果比对。1、2试管是泡酸清洗的试管,5、6为未泡酸清洗的试管。

        在暗室下观察,产气肠杆菌在EC-MUG培养管相对于蒸馏水,用手机拍照有明显荧光,实际观察中,这种荧光相对弱些,但依然是有荧光产生。所以,普通试管及蒸馏水可能产生的荧光可以忽略不计,但试剂本身产生有一定量的荧光是实验事实。

        因此,为了减少个人观察经验不足,建议,在实验过程中,应该带标进行比对观察,这样头脑中才有荧光阴阳直观效果。

        上图中的耐热大肠菌群,是日常工作中检出的工作株,实验室证实他们在伊红美兰平板上能产生铁锈色样金属光泽的大肠菌群,属于耐热大肠菌群。目前该菌在EC-MUG培养基经44.5℃培养后中也能混浊生长。

        在日光灯背景下用三用紫外灯366nm紫外线波观察,各个试管有微许蓝光,实际目视观察没有很强。手机拍照显示都有微量荧光效果,产气肠杆菌颜色似乎还更深点。可以判断全部10管试验管均为大肠埃希氏菌阴性。

        上图为暗室下对产气肠杆菌和工作株的耐热大肠菌群在EC-MUG荧光效果图。手机拍照显示有较强荧光,实际目视效果较弱,如没有阳性对照比较,易误以为大肠埃希氏菌阳性结果。但在暗室下观察,该耐热大肠菌群、产气肠杆菌没有差别,也可以判断为结果阴性。

        通过产气肠杆菌与实验室耐热大肠菌群在EC-MUG高温培养后的荧光效果比较。产气肠杆菌在高温中不能生长,液体清亮,也不能分解荧光底物。本实验室工作株耐热大肠菌群能在高温中生长,所以液体混浊,但本次工作菌株不分解分解培养基上的MUG荧光底物释放出荧光产物,通过与产气肠杆菌(商品标准菌株)比较,判定为荧光阴性,因此可能本实验室该耐热大肠菌群工作株是耐热克雷伯菌属。(耐热大肠菌群,又称粪大肠菌群,它由埃希氏菌属和耐热克雷伯菌属组成。非细菌学分类命名,而是卫生细菌领域的用语。)

      以下图片为两种不同试剂用相同处理的试管进行EC-MUG培养观察效果:

        暗室下观察荧光效果图,北京陆桥产品阴阳对照明显。

        日光灯下,用紫外线灯观察荧光效果图,北京陆桥产品阴阳对照明显。

        暗室下观察荧光效果图,青岛海博产品阴阳对照明显。

       

        日光灯下,用紫外线灯观察荧光效果图,青岛海博产品阴阳对照明显。

    上图为正常光线下的实验培养结果照片。

        通过北京陆桥、青岛海博两种试剂的比较,两种试剂在不同方式处置的试管内培养大肠埃希氏菌,稀释倍数不同,产生的荧光效果是一样的。

3.讨论

3.1、有关文献及实验结果中,试管本身会产生微量荧光[3]。本次实验使用的试管分两部分,一部分是用酸浸泡试管七天以上,然后进行蒸馏水清洗;另一部分是直接用水龙头水直接清洗,两类试管均165℃2小时以上高温灭菌。两类试管分别均分装有蒸馏水对照、产气肠杆菌(标准菌株)、耐热大肠菌群(工作菌株)、大肠埃希氏菌株(标准菌株)。同一菌株在不同方法处置的试管,实验效果无差别,说明一般试管可能产生的荧光对实验没有影响。

3.2、EC-MUG培养基试剂本身经培养后会溢出一定的荧光物质,如果没有阳性对照作比较,可能会误以为是真阳性,造成假阳性结果。因此,初级实验者或日常工作中,应带标准菌株同步实验并观察实验结果。

3.3、两家试剂厂家生产的EC-MUG培养基,阳性结果产生荧光效果均显着,实际操作中,日常生活饮用水中的大肠埃希氏菌试验结果与阴性对照相差无异时,可以按未检出大肠埃希氏菌结果进行报告。

3.4、GB/T5750.12-2006检测大肠埃希氏菌有多管发酵法、滤膜法,大肠埃希氏菌酶底法。推荐的第一法为多管发酵法,是在检测总大肠菌发酵乳糖蛋白胨基础上,有选择地进行EC-MUG培养,从批量工作中,减少了工作量及工作经费。在日常生活饮用水监测中,第一法相对第二法过滤法更简便易行;相对第三法酶底法来讲,更经济实惠。因此,第一法多管发酵法,在常规检测工作中仍是值得推广的方法。

3.5、不同稀释度的大肠埃希氏菌液在EC-MUG培养液中,产生荧光效果无显着区别。因此,总大肠菌发酵后,在下步实验操作中,移液管要一管一用,不同发酵管不能出现交叉污染,防止阳性值偏高。

参考文献

[ 1] GB5749-2006,生活饮用水标卫生标准 [S]。北京:中国标准出版社,2007

[2] , zzzzzz。水中,mmm mmm mmmJ]. 河南预防医学杂志2009年20(3):185-216.

[8] GGkkk.生活饮[J].预防医学论坛, 2008,14(12):1163-1164.

[9]hhhhhhhhh等.南方地区农查[J]. 公共卫生与预防医学,2014,25(4):11-13.

[gggg[J]。环境科技,2010,23(1):67-70

[3]

阅读全文

与水质检测方法酶底物相关的资料

热点内容
PPK参数的测算方法及步骤 浏览:302
佩兰的中药功效与作用及食用方法 浏览:13
腰椎管狭窄手术后最佳锻炼方法 浏览:162
解决肥胖方法 浏览:823
快速辨别蜂蜜的方法 浏览:695
如何让身体美白的方法 浏览:907
永诺560使用方法 浏览:223
吊带裤扣子的安装方法 浏览:72
ipad里的悬浮球在哪里设置方法 浏览:392
挽回感情方法的书单图片 浏览:437
菠萝挂件编织方法图解步骤桃胡 浏览:265
可以给手机自己跳电的方法 浏览:973
保护湿疹的最佳食疗方法 浏览:28
687的简便计算方法 浏览:365
有斜顶的模具要怎么上注塑机方法 浏览:536
学英语方法及技巧 浏览:503
8米通信撑杆安装方法图片 浏览:281
腱鞘炎最快的方法怎么治疗 浏览:734
铸铁平底锅如何开锅正确方法视频 浏览:231
糖尿病人可吃豆类藜麦的食用方法 浏览:438