李斯特菌检测方法

⑴ 病原微生物中细菌常见检测方法有哪些

病原微生物中细菌常见检测方法有哪些

病原微生物种类繁多，变异迅速，快速鉴定病原微生物的检验技术也在不断发展前进着。目前，应用比较广泛的病原微生物检测方法主要有直接涂片镜检、分离培养、生化反应、血清学反应、核酸分子杂交、基因晶片、多聚酶链反应等，该文对这些检测技术进展做一综述。 对人和动物具有致病性的微生物称为病原微生物，又称病原体，有病毒、细菌、立克次体、支原体、衣原体、螺旋体、真菌、放线菌、朊粒等。这些病原微生物可引起感染、过敏、肿瘤、痴呆等疾病，也是危害食品安全的主要因素之一。近年来出现的SARS、高致病性禽流感、西尼罗病毒感染等疾病的传染性极强，往往造成世界性大流行，因此对病原体的检测必须做到快速、准确。常规病原学检测方法操作繁琐，检测周期长，而且对操作人员技术水平要求比较高。随着医学微生物学研究技术的不断发展，病原学诊断已不再局限于病原体水平，深入到分子水平、基因水平的检测手段不断出现并被应用于临床和实验室 J。核酸分子杂交技术、PCR技术、基因晶片技术等检测方法，自动化程度高，快速省时、无污染、结果精确，可以准确灵敏地鉴定病原微生物。1 传统的病原微生物的检测方法传统的病原微生物学实验室检查以染色、培养、生化鉴定等为主，将标本直接涂片染色镜检和接种在培养基上进行分离培养是对细菌或真菌感染性疾病进行病原学诊断的常用方法。1．1 直接涂片镜检病原微生物体形体积微小，大多无色半透明状，将其染色后可借助显微镜观察其大小、形态、排列等。直接涂片染色镜检简便快速，对那些具有特殊形态的病原微生物感染仍然适用，例如淋球菌感染、结核分枝杆菌、螺旋体感染等的早期初步诊断。直接涂片镜检不需要特殊的仪器和装置，在基层实验室里仍然是十分重要的病原微生物检测手段。1．2 分离培养与生化反应 分离培养主要用于临床标本(如血液、痰、粪便等)或培养物中有多种细菌时对某一种细菌的分离。细菌的生长繁殖需要一定时间，检测周期较长，不能同时处理批量样本。为解决这一问题，各种自动化培养和鉴定系统不断产生，传统鉴定方法也在逐步改进，大大加快了检验速度。例如Microscan WalLCAway全自动微生物分析仪，可同时做细菌鉴定和药敏试验，检验500多个菌种。苛养菌如肺炎链球菌、淋病奈瑟菌、流感嗜血杆菌等对营养要求比较高，常规培养阳性率低。雍刚 等将不要同比例的葡萄糖、玉米淀粉、生长因子、酵母粉、氨基酸等特殊增菌剂加入到巧克力培养基中制成了新型淋病奈瑟菌培养基，大大提高了淋病奈瑟菌的分离培养率。苏盛通等在营养琼脂中加人了中药红枣、赤小豆培养甲型链球菌、乙型链球菌、肺炎链球菌等细菌，生长指数明显高于血平板。1．3 组织细胞培养 活组织细胞培养适于专营活组织细胞内生存的病原体，包括病毒、立克次体、衣原体等。不同病原体敏感的组织细胞是不一样的，将活细胞从病原体敏感的动物组织中取出在体外进行原代培养或用病原体敏感细胞系进行传代培养，再将病原体接种于相应的组织细胞中后，病原体可在其中繁殖增长，引起特异性的细胞病变效应。也可以将病原体直接接种于敏感动物体内，引起相应组织器官出现特异的病理学改变。往往可以根据这些特异的病变对病原体进行鉴定。2 血清学与免疫学检测血清学检测是通过已知的抗体或抗原来检测病原体的抗原或抗体从而对病原体进行快速鉴定的技术，简化了鉴定步骤，常用的方法包括血清凝集技术、乳胶凝集实验、荧光抗体检测技术、协同凝集试验、酶联免疫测试技术等。酶联免疫技术的应用大大提高了血清学检测的敏感性和特异性，不仅可检测样本中病原体抗原，也可检测机体的抗体成分。幽门螺奸菌在我国人群感染率高达50％ ～80％ ，应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测唾液中抗HP抗体来诊断HP感染，其结果满意。乙型肝炎病毒(HBV)在我国人群中感染率极高，ELISA应用于乙型肝炎病人早期血清学诊断的效果最为明显。临床上致病菌往往和非致病菌混合在一起，如何从这些细菌中分离出目标菌是关键。免疫磁珠分离技术(IMBS)是近年来发展起来的在微生物检测领域中一种新技术。其基本原理是将特定病原体的单抗或多抗或二抗偶联到磁珠微球上，通过抗原抗体反应形成磁珠一目标病原体复合物或磁珠一一抗一目标病原体复合物，在外部磁场磁力的作用下，将目标病原体分离出来。目前已经开发出了针对各种病原体的免疫磁珠，如大肠埃希菌、李斯特菌、白色念珠菌、军团菌等，广泛应用到各级科研和实验室 。经IMBS分离出的白色念珠菌可直接在显微镜下检测，检测时间缩短至4 h。IM—Bs还可以和其它检测技术联合来检测病原菌，免疫磁珠分离得到的目标菌可继续用于分离培养使大肠埃希菌0157最低检测限由200 cfu·g 提高到2 cfu·g～；IMBS结合聚合酶链反应(IMBS—PCR)可对培养条件比较特殊的细菌如苛养菌、厌氧菌进行快速检测，肉类中的产毒素型产气荚膜梭菌经IMBS．PCR检测

微生物的快速检测方法有哪些

目前主要普通培养（简称标）般报告要用仪器、核酸检测（PCR）、目前快速检测（主要包括：免疫磁珠、酶联免疫试剂盒、金标检测卡等根据自需求选择

食品微生物的检测方法有哪些？

目前主要有普通培养法（简称国标方法）一般出报告的要用，仪器法、核酸检测法（PCR）、还有目前的快速检测法（主要包括：免疫磁珠、酶联免疫试剂盒、金标检测卡等。这个根据自己的需求来选择吧。

简述hiv的微生物学检测方法有哪些

简述hiv的微生物学检测方法有哪些
梅毒是由苍白螺旋体感染引起的一种性传播性疾病 。梅毒螺旋体感染人体后出现两种抗体：一种是特异性抗体(TPHA)，为lgM。当有补体存在和厌氧条件下，对活螺旋体的动力有抑制作用，并可将螺旋体杀死或溶解，对机体的再感染有保护作用。另一类是非特异性抗体（快速血浆反应素 RPR）。为lgA与lgM的混合物，可与正常生物组织中的类脂抗原发生非特异性结合，对人体无保护作用

微生物的传统检测方法有哪些？

传统检测有三种方法
1、直接显微镜观察，正常情况，在一定的培养条件下（相同的培养基、温度以及培养时间），同种微生物表现出稳定的菌落特征。可以通过显微镜观察菌落特征对微生物种类进行判断。

2、选择培养基培养微生物或人为提供有利于目的菌株生长的条件，选择培养基，其作用是允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他微生物生长。选择培养一般是通过观察微生物的同化作用型别或某一特征进行间接判断，得到的微生物往往并不只有一种，但是能够大致确定这些微生物存在的共有特征从而对其分类。

3、鉴别培养基，根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品。与选择培养相比，鉴别培养基的鉴别所得结果的范围比较小，一般可直接测定某微生物的种类。

现代定义

微生物：个体难以用肉眼观察的一切微小生物之统称。
微生物包括细菌、病毒、真菌、和少数藻类等。（但有些微生物是肉眼可以看见的，像属于真菌的蘑菇、灵芝等。）病毒是一类由核酸和蛋白质等少数几种成分组成的“非细胞生物”，但是它的生存必须依赖于活细胞。
根据存在的不同环境分为空间微生物、海洋微生物等，按照细胞机构分类分为原核微生物和真核微生物。

主要特征

1、体小面大
2、吸多转快
3、生长繁殖快

微生物的这一特性使其在工业上有广泛的应用，如发酵、单细胞蛋白等。微生物是人类不可或缺的好朋友。

水产品致病微生物检测方法有哪些

这个是我在网上找到的的微生物的检测试纸片，也不知道方法咋样，你要也可以去网站上看看的
像大肠杆菌测试纸片 肠出血性大肠杆菌O157:H7是一种新出现的食物传播性疾病的病因。它除了引起腹泻、出血性肠炎外，还可发生溶血性尿毒综合症、血栓性血小板减少性紫癜等严重的并发症。自1982年美国首次发现因该致病菌引起的食物中毒以来，肠出血性大肠杆菌O157:H7疫情开始逐渐扩散和蔓延，相继在英国、加拿大、日本等多个国家引起腹泻爆发和流行。我国已陆续有十余个省份在市售食品、进口食品、腹泻病患者、家畜家禽等分离到大肠杆菌O157:H7。大肠杆菌O157测试片（FilmplateTM E.coli O157BO204）3方元方圆生物的采用进口高选择性显色培养基作为主要原料，运用专有技术，做成一次性快速检验产品，一步培养15～24h就可确认，大大地简化了检测程式，非常适合各级检验部门和食品企业使用。本品适用于海产品、水产品、各类熟肉制品和冷荤、蛋及蛋制品等的快速检测。参照标准：食品卫生微生物学检验大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验（GB/T4789.36）。

物体表面的微生物检测方法有哪些

; 用浸有灭菌生理盐水的棉签在被检物体表面取25cm2的面积，在其内涂抹10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的取样管内送检。擦拭时棉签要随时转动，保证擦拭的准确性。对每个擦拭点应详细记录所在分场的具 *** 置、擦拭时间及所擦拭环节的消毒时间

牛奶中细菌检测方法有哪些

先配制固体培养基，再划线培养1天，之后挑每一种菌落的细菌制片，显微镜下观察细菌的种类

⑵ 食品微生物学检验标准

食品微生物学检验标准汇总

食品微生物学检验标准众多，其中有较为通用的也有与具体产品相关联的。下面是我为大家带来的关于食品微生物学检验标准汇总的知识，欢迎阅读。

1GB类

GB 4789.1-2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验 总则

GB 4789.2-2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定

GB 4789.3-2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数

GB 4789.4-2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验沙门氏菌检验

GB 4789.5-2012 食品安全国家标准 食品微生物学检验 志贺氏菌检验

GB 4789.7-2013 食品安全国家标准 食品微生物学检验 副溶血性弧菌检验

GB 4789.9-2014 食品安全国家标准 食品微生物学检验 空肠弯曲菌检验

GB 4789.10-2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验

GB 4789.11-2014 食品安全国家标准 食品微生物学检验 β型溶血性链球菌检验

GB 4789.13-2012 食品安全国家标准 食品微生物学检验 产气荚膜梭菌检验

GB 4789.14-2014 食品安全国家标准 食品微生物学检验 蜡样芽胞杆菌检验

GB 4789.15-2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验 霉菌和酵母计数

GB 4789.26-2013 食品安全国家标准 食品微生物学检验 商业无菌检验

GB 4789.28-2013 食品微生物学检验 培养基和试剂的`质量要求

GB 4789.30-2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验

GB 4789.31-2013 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的肠杆菌科噬菌体诊断检验

GB 4789.34-2012 食品安全国家标准 食品微生物学检验 双歧杆菌的鉴定

GB 4789.35-2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验 乳酸菌检验

GB 4789.38-2012 食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠埃希氏菌计数

GB 4789.39-2013 食品安全国家标准 食品微生物学检验 粪大肠菌群计数

GB 4789.40-2010 食品安全国家标准 食品微生物学检验 阪崎肠杆菌检验

2GBT类

GBT 22429-2008 食品中沙门氏菌、肠出血性大肠埃希氏菌O157及单核细胞增生李斯特氏菌的快速筛选检验 酶联免疫法

GBT 27635-2011 斑点叉尾𫚔嗜麦芽寡养单胞菌检测操作方法

GBT 4789.6-2003 食品卫生微生物学检验 致泻大肠埃希氏菌检验

GBT 4789.8-2008 食品卫生微生物学检验 小肠结肠炎耶尔森氏菌检验

GBT 4789.12-2003 食品卫生微生物学检验 肉毒梭菌及肉毒毒素检验

GBT 4789.16-2003 食品卫生微生物学检验 常见产毒霉菌的鉴定

GBT 4789.29-2003 食品卫生微生物学检验 椰毒假单胞菌酵米面亚种检验

GBT 4789.32-2002 食品卫生微生物学检验 大肠菌群的快速检测

GBT 4789.36-2008 食品卫生微生物学检验 大肠埃希氏菌O157:H7NM检验

2SBT类

SBT 10315-1999 孢子数测定法

SBT 10316-1999 孢子发芽率测定法

3SN类

SN 0170-1992 出口食品沙门氏菌属(包括亚利桑那菌)检验方法

SNT 0040-1992 出口食品沙门氏菌属(包括亚利桑那菌)计数检验方法

SNT 0168-2015 进出口食品中菌落总数计数方法

SNT 0169-2010 进出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检测方法

SNT 0172-2010 进出口食品中金黄色葡萄球菌检验方法

SNT 0173-2010 进出口食品中副溶血性弧菌检验方法

SNT 0174-2011 出口食品小肠结肠炎耶尔森氏菌检验方法

SNT 0175-2010 进出口食品中弯曲菌的检测方法

SNT 0176-2013 出口食品中蜡样芽胞杆菌检测方法

SNT 0177-2011 出口食品中产气荚膜梭状芽孢杆菌计数方法

SNT 0178-2011 出口食品嗜热菌芽胞(需氧芽胞总数、平酸芽胞和厌氧芽胞)计数方法

SNT 0184.3-2008 进出口食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测方法 免疫磁珠法

SNT 0184.4-2010 食品中李斯特氏菌检测 第4部分:胶体金法

SNT 0330-2012 出口食品微生物学检验通则

SNT 0475-1995 出口商品中粪链球菌群检验方法

SNT 0477-1995 出口食品中B群链球菌检验方法

SNT 0738-1997 出口食品中肠杆菌科检验方法

SNT 0751-2010 进出口食品中嗜水气单胞菌检验方法

SNT 0865-2000 进出口食品中肉毒梭菌及其肉毒毒素检验方法

SNT 1022-2010 进出口食品中霍乱弧菌检验方法

SNT 1035-2011 进出口食品中产毒青霉属、曲霉属及其毒素的检测方法

SNT 1059.1-2002 进出口食品中沙门氏菌 滤膜筛选法

SNT 1059.4-2005 进出口食品中大肠杆菌检验方法 谷氨酸脱羧酶法

SNT 1059.5-2006 食品和动物饲料大肠杆菌O157的检测方法 免疫磁珠法

SNT 1059.6-2008 进出口食品中沙门氏菌属检测方法 垂直膜过滤法

SNT 1059.7-2010 进出口食品中沙门氏菌检测方法 实时荧光PCR法

SNT 1071-2014 出口食品中厌氧亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌检测方法

SNT 1538.1-2005 培养基制备指南 第1部分 实验室培养基制备质量保证通则

SNT 1538.2-2007 培养基制备指南 第2部分 培养基性能测试实用指南

SNT 1615-2005 食品和动物饲料中嗜冷微生物计数方法

SNT 1748-2006 进出口食品中寄生虫的检验方法

SNT 1800-2006 食品和动物饲料微生物学30℃菌落计数方法

SNT 1827-2006 进出口食品中产志贺毒素大肠杆菌检验方法

SNT 1869-2007 食品中多种致病菌快速检测方法 PCR法

SNT 1870-2007 食品中致病菌检测方法 实时PCR法

SNT 1895-2007 食品中金黄色葡萄球菌的快速计数法 PetrifilmTM 测试片法

SNT 1896-2007 食品中大肠菌群和大肠杆菌快速计数法 PetrifilmTM 测试片法

SNT 1897-2007 食品中菌落总数的测定 PetrifilmTM测试片法

SNT 1933.1-2007 食品和水中肠球菌检验方法 第1部分 平板计数法和最近似值测定法

SNT 1933.2-2007 食品和水中肠球菌检验方法 第2部分 滤膜法

SNT 1941.1-2007 进出口食品中乳酸菌检验方法 第1部分 分离与计数方法

SNT 1941.2-2007 进出口食品中乳酸菌检验方法 第2部分 PetrifilmTM测试片法

SNT 1941.3-2007 进出口食品中乳酸菌检验方法 第3部分 乳酸杆菌的PCR法

SNT 1962-2007 食品中克雷伯氏菌检测方法

SNT 2098-2008 食品和化妆品中的菌落计数检测方法 螺旋平板法

SNT 2099-2008 进出口食品中绿脓杆菌检测方法

SNT 2416-2010 进出口食品中金黄色葡萄球菌肠毒素A检测方法 电泳和免疫印迹法

SNT 2522.1-2010 进出口辐照食品检测方法 微生物学筛选法

SNT 2524.1-2010 进出口食品中变形杆菌检测方法 第1部分 定性检测方法

SNT 2524.2-2010 进出口食品中变形杆菌检测方法 第2部分 MPN法

SNT 2525-2010 食品中肉毒梭菌的PCR检测方法

SNT 2562-2010 食品中霍乱弧菌分群检测 MPCR-DHPLC法

SNT 2565-2010 食品中志贺氏菌分群检测 MPCR-DHPLC法

SNT 2566-2010 食品中霉菌和酵母菌的计数 Petrifilm 测试片法

SNT 2567-2010 食品及包装品无菌检验

SNT 2582-2010 产黄曲霉毒素真菌PCR检测方法

SNT 2632-2010 微生物菌种常规保藏技术规程

SNT 2641-2010 食品中常见致病菌检测 PCR-DHPLC法

SNT 2660-2010 食品微生物实验室菌种保藏方法

SNT 2754.1-2011 出口食品中致病菌环介导恒温扩增(LAMP)检测方法 金黄色葡萄球菌

SNT 2754.2-2011 出口食品中致病菌环介导恒温扩增(LAMP)检测方法 大肠杆菌O157

SNT 2754.3-2011 出口食品中致病菌环介导恒温扩增(LAMP)检测方法 志贺氏菌

SNT 2754.4-2011 出口食品中致病菌环介导恒温扩增(LAMP)检测方法 单核细胞增生李斯特菌

SNT 2754.5-2011 出口食品中致病菌环介导恒温扩增(LAMP)检测方法 副溶血性弧菌

SNT 2754.6-2011 出口食品中致病菌环介导恒温扩增(LAMP)检测方法 小肠结肠炎耶尔森氏菌

SNT 2754.7-2011 出口食品中致病菌环介导恒温扩增(LAMP)检测方法 空肠弯曲菌

SNT 2754.8-2011 出口食品中致病菌环介导恒温扩增(LAMP)检测方法 肺炎克雷伯氏菌

SNT 2754.9-2011 出口食品中致病菌环介导恒温扩增(LAMP)检测方法 溶血性链球菌

SNT 2754.10-2011 出口食品中致病菌环介导恒温扩增(LAMP)检测方法 产气荚膜梭菌

SNT 2754.11-2011 出口食品中致病菌环介导恒温扩增(LAMP)检测方法 产霍乱毒素的霍乱弧菌

SNT 2754.12-2011 出口食品中致病菌环介导恒温扩增(LAMP)检测方法 溶藻弧菌

SNT 2754.13-2011 出口食品中致病菌环介导恒温扩增(LAMP)检测方法 创伤弧菌

SNT 2754.14-2011 出口食品中致病菌环介导恒温扩增(LAMP)检测方法 假结核耶尔森氏菌

SNT 2754.15-2011 出口食品中致病菌环介导恒温扩增(LAMP)检测方法 阪琦肠杆菌

SNT 2775-2011 商品化食品检测试剂盒评价方法

SNT 2797-2011 食品中致泻大肠埃希氏菌检测 MPCR-DHPLC法

SNT 3063.1-2011 航空食品 第1部分:冷加工车间环境微生物检验方法

SNT 3141-2012 出口食品包装物微生物检测指南

SNT 3152-2012 出口食品中致泻大肠埃希氏菌检测方法 基因芯片法

SNT 3263-2012 出口食品中黄曲霉毒素残留量的测定

SNT 3266-2012 食品微生物检验方法确认技术规范

SNT 3306.5-2013 国境口岸环介导恒温扩增(LAMP)检测方法 第5部分 布鲁氏菌

SNT 3384-2012 出口食品中空肠弯曲菌药物敏感性的测定 微量稀释法

SNT 3567.1-2013 交叉引物恒温扩增检测方法 第1部分 通用技术规程

SNT 3724-2013 进出口食品中幽门螺杆菌的检验方法

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⑶ 病原微生物中细菌常见检测方法有哪些

1、快速测试片技术法

快速测试片是指以纸片、纸膜、胶片等作为培养基载体，将特定的培养基和显色物质附着在上面，通过微生物在上面的生长、显色来测定食品中微生物的方法。

细菌总数检测纸片的研制始于 20 世纪 80 年代，其主要优点是简便、实用、经济、操作性强。近年来以滤纸和美国某公司的 Petrifilm 为载体的测试片已开始被广泛应用。

2、生物电化学方法

生物电化学方法是指通过电极测定微生物产生或消耗的电荷，从而提供分析信号的方法。微生物在滋生代谢过程中，培养基的电化学性质如电流、电位、电阻和电导等会发生变化，所以可以通过检测分析这些电化学参量的变化来实现对微生物的快速测定。

常见的有：阻抗分析法、电位分析法、电流分析法等。生物电化学方法具有测量快速、直观、操作简单、测量设备成本低和信号的可控性等特点。

3、微菌落技术

微菌落是指细菌生长繁殖早期在固相载体上所形成的只能借助于显微镜观察的微小菌落。微菌落技术具有快速、经济、实用的特点，其研究始于 20 世纪50年代，定量测定技术从 20 世纪 70 年代开始，国外已有报道将该法应用于水、食品中细菌总数的快速检测。

4、气相色谱法

气相色谱应用到微生物的检测中，主要是依据不同微生物的化学组成或其产生的代谢产物各异，利用上述色谱检测可直接分析各种体液中的细菌代谢产物、细胞中的脂肪酸、蛋白质、氨基酸、多肽、多糖等，以确定病原微生物的特异性化学标志成分，协助病原诊断和检测。

5、高效液相色谱法

利用高效液相色谱检测可分析各种体液中的细菌代谢产物、病原微生物等，以确定病原微生物的特异性化学标志成分，协助病原诊断和检测。

⑷ 关于国标中单增李斯特菌检测的问题

iQ-Check系统采用了所有的实时荧光PCR方法的优点为食品中病原微生物提供快速和可靠地检测解决方案。iQ-Check试剂盒为食品和环境样品中的单增李斯特菌(Listeria
monocytogenes)定性检测试剂盒。
iQ-Check系统是以单核细胞增生性李斯特菌的毒力基因(hlyA)为靶序列的DNA片段来检测单增李斯特菌。通过测定被扩增DNA序列的萤光信号来检测被测样品中病原微生物的存在。在所有的反应系统中，通过在每支PCR管中加入的内标DNA(阴性和阳性对照)与目标DNA同时进行扩增，由不同的探针和荧光产物来检测。
自动检测目标病原微生物的特定基因探针、内标DNA、扩增后的PCR复合物，从而得到实时快速的解决方案。

⑸ 李斯特氏菌属的生化反应

该菌触酶阳性，氧化酶阴性，能发酵多种糖类，产酸不产气，如发酵葡萄糖、乳糖、水杨素、麦芽糖、鼠李糖、七叶苷、蔗糖（迟发酵）、山梨醇、海藻糖、果糖，不发酵木糖、甘露醇、肌醇、阿拉伯糖、侧金盏花醇、棉子糖、卫矛醇和纤维二糖，不利用枸橼酸盐，40%胆汁不溶解，吲哚、硫化氢、尿素、明胶液化、硝酸盐还原、赖氨酸、鸟氨酸均阴性，VP、甲基红试验和精氨酸水解阳性。
（四）血清型
根据菌体（O）抗原和鞭毛(H)抗原，将单增李氏菌分成13个血清型，分别是1/2a、1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、4b、4ab、4c、4d、4e 和“7”13 个血清型。致病菌株的血清型一般为1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、1/2a和4b,后两型尤多。
（五）抵抗力
该菌对理化因素抵抗力较强，在土壤、粪便、青储饲料和干草内能长期存活，对碱和盐抵抗力强，60-70℃经5-20min可杀死，70%酒精5min、2.5%石炭酸、2.5%氢氧化钠、2.5%福尔马林20min 可杀死此菌。该菌对青霉素、氨苄青霉素、四环素、磺胺均敏感。
（六）来源与分布及感染途径
单增李斯特氏菌广泛存在于自然界中，不易被冻融，能耐受较高的渗透压，在土壤、地表水、污水、废水、植物、青储饲料、烂菜中均有该菌存在，所以动物很容易食入该菌，并通过口腔-粪便的途径进行传播。据报道，健康人粪便中单增李氏菌的携带率为0.6-16%,有70%的人可短期带菌，4-8%的水产品、5-10%的奶及其产品、30%以上的肉制品及15%以上的家禽均被该菌污染。人主要通过食入软奶酪、未充分加热的鸡肉、未再次加热的热狗、鲜牛奶、巴氏消毒奶、冰激凌、生牛排、羊排、卷心菜色拉、芹菜、西红柿、法式馅饼、冻猪舌等而感染，约占85-90%的病例是由被污染的食品引起的。
该菌可通过眼及破损皮肤、粘膜进入体内而造成感染，孕妇感染后通过胎盘或产道感染胎儿或新生儿,栖居于阴道、子宫颈的该菌也引起感染，性接触也是本病传播的可能途径，且有上升趋势。
（七）临床症状
健康成人个体出现轻微类似流感症状，新生儿、孕妇、免疫缺陷患者表现为呼吸急促、呕吐、出血性皮疹、化脓性结膜炎、发热、抽搐、昏迷、自然流产、脑膜炎、败血症直至死亡。
（八）控制
单增李斯特氏菌在一般热加工处理中能存活，热处理已杀灭了竞争性细菌群，使单增李斯特氏菌在没有竞争的环境条件下易于存活，所以在食品加工中，中心温度必须达到70℃持续2分钟以上。
由于单增李斯特氏菌在4℃下仍然能生长繁殖，所以未加热的冰箱食品增加了食物中毒的危险。冰箱食品需加热后再食用。
（九）检测
（1）传统分离鉴定方法
增菌培养→生化反应 →动物实验→协同溶血试验→血清型分析样品：
冷冻样品，2－5℃解冻，不超过18h
若不能及时检验，应置于－15 ℃保存。
非冷冻易腐样品应尽可能及时检验。
若不能及时检验，应置于4 ℃冰箱保存，在24h之内检验。
增菌方法：
冷增菌法 ：将样品置于胰蛋胨水中4~5℃增菌一个月，再划线分离
缺点：时间太长，不适于食品卫生的常规检验。
快速增菌法 常用选择性增菌法，分步增菌，增加病原检出率
总之，传统的单核细胞增生李斯特氏菌的检测方法全过程需4~7D，而且没有一种培养基可以全面的保持所有食品基质或各种李斯特氏菌血清型
（2）免疫学检测方法
免疫学检测方法就是利用抗原抗体反应的显着特异性，而建立的一种快速检测食品中病原菌的方法。
目前主要利用ELISA技术
特点：操作简便，快速，可在同一时间内检测大量样品，可将纯肉汤培养物中的分离物进行术水平的鉴定，但难以进行菌种间的特异分析。
ELISA法的检测极限为105~106cfu/mL
（3）核酸检测方法
该方法以李斯特氏菌属或种特异核酸序列的互补序列为探针进行李斯特氏菌属或种水平的鉴定
目前多利用PCR技术
特点：敏感性好，但必须经过选择性增菌以稀释可能干扰检测反应的某些成分。
探针杂交技术检测极限为105~106cfu/mL

⑹ 食品车间设备菌落总数怎么测定 标准是什么

SN/T 1897-2007食品中菌落总数的测定也可以用于与食品接触的设备表面的。附录A。
另有自定的
例一：
物体表面采样及检查方法
采样面积
被采表面＜100cm2，取全部表面；被采表面≥100cm2，取100cm2。
采样方法
用5×5cm2的标准灭菌规格板；放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次；并随之转动棉拭于。连续采样1～4个规格板面积；剪去手接触部分，将棉拭于放入装10ml采样液的试管中送检。门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样。
培养（略）
例二：
空气及与食品接触面微生物检验方法、检验标准
1、 目的：
检测生产车间空气、操作人员手部、与食品有直接接触面的机械设备的微生物指标，生产区域环境当中病原微生物的监控，达到规定标准，以控制食品成品的质量。
2、 参照标准：
中华人民共和国国家标准《一次性使用卫生用品卫生标准》GB15979－1995、《HACCP原理与实施》、中华人民共和国国家标准《公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定》GB/T 18204.1－2000、中华人民共和国进出口商品检验行业标准SN 0169-92/SN 0172-92/ SN 0170-92、 出入境检验检疫局二000四年《出入食品微生物检验培训教材》中《出入食品生产厂卫生细菌检验方法》、日本东京冷冻食品检验方法。
3、 采样与检测方法：
3.1空气的采样与测试方法
3.1.1样品采集：
(1)取样频率：
a)车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行采样，以便了解车间卫生清扫消毒情况。
b)全厂统一放长假后，车间生产前，进行采样。
c)产品检验结果超内控标准时，应及时对车间进行采样，如有检验不合格点，整改后再进行采样检验。
d)实验性新产品，按客户规定频率采样检验。
e)正常生产状态的采样，每周一次。
（2）采样方法
在动态下进行，室内面积不超过30 m2，在对角线上设里、中、外三点，里、外点位置距墙1 m；室内面积超过30 m2，设东、西、南、北、中五点，周围4点距墙1 m。采样时，将含平板计数琼脂培养基的平板(直径9 cm)置采样点(约桌面高度)，并避开空调、门窗等空气流通处，打开平皿盖，使平板在空气中暴露5 min。采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过6h，若样品保存于0～4℃条件时，送检时间不得超过24h。
3.1.2菌落培养：
（1）在采样前将准备好的平板计数琼脂培养基平板置37℃±1℃ 培养24 h，取出检查有无污染，将污染培养基剔除。
（2）将已采集样品的培养基在6 h内送实验室，细菌总数于37℃±1℃培养48h观察结果，计数平板上细菌菌落数。
（3）菌落计算：
a) 记录平均菌落数，用“个/皿”来报告结果。用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查，不可遗漏。
b) 若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2 个或2个以上菌落计数。
3.2工作台（机械器具）表面与工人手表面采样与测试方法：
3.2.1样品采集：
(1)取样频率：
a)车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行擦拭检验，以便了解车间卫生清扫消毒情况。
b)全厂统一放长假后，车间生产前，进行全面擦拭检验。
c)产品检验结果超内控标准时，应及时对车间可疑处进行擦拭，如有检验不合格点，整改后再进行擦拭检验。
d)实验新产品，按客户规定擦拭频率擦拭检验。
e)对工作表面消毒产生怀疑时，进行擦拭检验。
f)正常生产状态的擦拭，每周一次。
（2） 采样方法：
a) 工作台（机械器具）：用浸有灭菌生理盐水的棉签在被检物体表面（取与食品直接接触或有一定影响的表面）取25cm2 的面积，在其内涂抹10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内送检。
b) 工人手：被检人五指并拢，用浸湿生理盐水的棉签在右手指曲面，从指尖到指端来回涂擦10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内送检。
（3）采样注意事项：
擦拭时棉签要随时转动，保证擦拭的准确性。对每个擦拭点应详细记录所在分场的具体位置、擦拭时间及所擦拭环节的消毒时间
3.2.2 细菌•大肠菌群的检测培养:
样液稀释：将放有棉棒的试管充分振摇。此液为1：10稀释液。如污染严重，可十倍递增稀释，吸取1ml 1：10样液加9ml无菌生理盐水中，混匀，此液为1：100稀释液。
3.2.2.1 细菌总数：
（1）以无菌操作，选择1～2个稀释度各取1ml样液分别注入到无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿（平行样），将已融化冷至45℃左右的平板计数琼脂培养基倾入平皿，每皿约15ml，充分混合。
（2）待琼脂凝固后，将平皿翻转，置36℃±1℃ 培养48 h后计数。
（3）结果报告：报告每25cm2食品接触面中或每只手的菌落数
3.2.2.2大肠菌群：
（1）平板法:
a) 以无菌操作，选择1～2个稀释度各取1ml样液分别注入到无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿（平行样），将已融化冷至45℃左右的去氧胆酸盐琼脂培养基倾入平皿，每皿约15ml，充分混合。待琼脂凝固后,再覆盖一层培养基，约3-5 ml。
b) 待琼脂凝固后，将平皿翻转，置36℃±1℃ 培养24h后计数。
c) 结果计算： 以平板上出现紫红色菌落的个数乘以稀释倍数得出。
d) 结果报告：报告每25cm2食品接触面中或每只手的菌落数
（2）试管法:
a) 以无菌操作，选择3个稀释度各取1ml样液分别接种到BGLB肉汤培养基中，每个稀释度接种三管。
b) 置BGLB肉汤管于36℃±1℃培养48±2h。记录所有BGLB肉汤管的产气管数。
c) 结果报告：按BGLB肉汤管产气管数，查MPN表报告每25cm2食品接触面中或每只手的大肠菌群值。
3.2.3 金黄色葡萄球菌检测
（1）定性检测
a) 取1ml 稀释液注入灭菌的平皿内，倾注15-20ml的B-P培养基，（或是吸取0.1稀释液，用L棒涂布于表面干燥的B-P琼脂平板），放进36±1℃的恒温箱内培养48±2小时。
b) 从每个平板上至少挑取1个可疑金黄色葡萄球菌的菌落作血浆凝固酶实验。
c) 结果报告：B-P琼脂平板的可疑菌落作血浆凝固酶实验为阳性，即报告手（工器具）上有金黄色葡萄球菌存在。
（2）定量检测
a) 以无菌操作，选择3个稀释度各取1ml样液分别接种到含10％氯化钠胰蛋白胨大豆肉汤培养基中，每个稀释度接种三管。
b) 置肉汤管于36±1℃的恒温箱内培养48小时。划线接种于表面干燥的B-P琼脂平板，置36℃±1℃ 培养45～48小时。
c) 从B-P琼脂平板上，挑取典型或可疑金黄色葡萄球菌菌落接种肉汤培养基，36℃±1℃培养20～24小时。
d) 取肉汤培养物做血浆凝固酶试验，记录试验结果。
e) 报告结果：根据凝固酶试验结果，查MPN表报告每25 cm2食品接触面中或每只手的金黄色葡萄球菌值。
3.3工厂环境中病原体的检测计划与方法
检测计划：为了保证食品安全，工厂应该对生产环境中的病原微生物进行检测和评估，检测项目包括李斯特菌，沙门氏菌等病原体微生物，化验室应该按照一定的计划对生产场所环境中的病原体进行检测，其中包括地面、下水道、 排水沟、墙壁、天花板、设备框架、运输的支架，冷藏装置、速冻机、传送带、设备的螺丝、维修工具等部位。当某个点检测到病员微生物时，应该对环境中的相似点加大检测频率；在把所有的预定点检测完后，应该对环境中的病原微生物的存在状况进行全面评估，在下一次环境检测循环过程中加强检测容易出现病原体的环境点，达到持续改进的目的。
检测频率: 每月两次,每次每个区域至少选取5个检测点,分别进行检测。
3.3.1 环境李斯特菌的检测方法（3MTM PetrifilmTM 环境李斯特菌的测试片）
3.3.1.1 用涂抹棒，海绵或者其他采样设备收集环境样本。
3.3.1.2 将收集的样本添加10毫升灭菌的缓冲蛋白胨水，将样本与缓冲蛋白胨混合1分钟，将样品置于室温（20-30℃）1小时，最久不超过1.5小时，以修复损伤的李斯特菌。
3.3.1.3 将测试片放在平坦处，掀起上层膜。
3.3.1.4 用移液器垂直滴加3毫升样品到下层膜中央，将上层膜缓慢盖下，以免产生气泡。
3.3.1.5 轻轻将塑料压板放在位于接种区上层膜上，不要压，扭转或者滑动压板。提起压板等至少十分钟，以使胶体凝固。
3.3.1.6 将测试片透明面朝上，可叠放至十片，在37℃±1℃培养26-30小时，可以用标准菌落记数器或者其他光学放大器判读，不要记数圆形轮廓上的菌落，因为他们不受选择性培养基的影响。
3.3.1.7 对于定性检测，根据紫红色菌落是否存在，结果记为检出或者未检出。
3.3.2 环境中沙门氏菌的检测方法
3.3.2.1采样地点: 选取采样点时因尽量选取微生物容易滋生的地方
3.3.2.2 操作步骤
3.3.2.2.1采样应在生产开始后进行，用已浸润过的棉拭在选定的被测表面旋转涂抹约100cm2的面积，然后将棉拭放回涂抹试管并盖紧。
3.3.2.2.2将样品带回实验室，每5个点混合成一个样品, 登记编号,按照SN0170-92标准及时检测，若有阳性结果出现，应逐步对所混合的每个点分别检测。

⑺ 李斯特氏族显色培养基能分离出伊氏李斯特氏菌吗

李斯特氏族显色培养基能分离出伊氏李斯特氏菌，李斯特氏菌显色培养基可快速检测食品和药品中单增李斯特氏菌。阴性结果可在3天内检测完成。单增李斯特氏菌显蓝色，菌落周围有一不透明环。蛋白胨提供氮源和氨基酸，氯化钠维持渗透压，琼脂是凝固剂，氯化锂抑制革兰氏阴性菌生长，抑菌剂抑制除李氏菌外的革兰氏阳性菌生长李斯特菌显色培养基是根据李斯特菌的β-葡萄糖苷酶活性、鼠李糖发酵特性和磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C（PIPLC）活性进行的特异显色。有β-葡萄糖苷酶活性则菌落为蓝绿色，有鼠李糖发酵特性则菌落背景为黄色，有PIPLC活性则菌落周围有不透明光晕。

李斯特菌显色培养基的工作原理：不同微生物内，含有不同胞内酶。显色培养基在分离培养基中，加入了人工合成的微生物特异性酶的底物。（该底物由显色基团和微生物可代谢物质组成，通常无色。）当显色培养基里的目标菌大量繁殖时，在细菌特异性酶作用下，培养基中的底物游离出显色基团，使目标菌落呈现出特定的颜色。实验者可通过观察菌落的颜色，直接对菌种做出鉴定。

⑻ 李斯特菌病的检查

1.血常规
患者血白细胞总数常增高，分类中以中性粒细胞增多明显，单核细胞并不增多。
2.脑脊液常规
脑膜炎患者脑脊液大多外观混浊，白细胞数为（100～10000）×106/L，其中2/3为多核细胞，蛋白质含量增高达0.5～3.0g/L，而糖量降低者仅占40%，未合并脑膜炎的患者脑脊液常规多为正常，或仅有轻度蛋白质含量增高及淋巴细胞增多。
3.细菌学检查
是诊断本病的关键。
（1）细菌涂片取脓性分泌物，穿刺液，脑脊液，活组织细胞，胎儿粪便等涂片，行革兰染色检查，但据报道脑脊液镜检有2/3的患者标本为阴性。
（2）细菌培养在疾病早期取血，脑脊液，骨髓，羊水，胎粪，胎盘，新生儿脐带残端，受损皮肤或黏膜，孕妇阴道排泄物等作细菌培养，可分离到致病菌。
4.血清学检查
对该菌的抗体反应主要是免疫球蛋白M（IgM）抗体升高，双份血清抗体效价递升有助于诊断，但血清抗体检查对本病诊断价值有限，只用于流行病学研究，主要原因是由于：①该菌与葡萄球菌，链球菌，肺炎链球菌等其他革兰阳性菌具有共同抗原，常呈交叉反应，出现假阳性。②血清抗体检测的灵敏度差。③新生儿及免疫缺陷患者血清中的特异性抗体常不升高。
5.分子生物学检测
近年来应用核酸分子杂交技术及聚合酶链反应（PCR）方法来进行临床诊断，应用PCR方法可在250µl血液中测出1×104cfu的李斯特菌，敏感性强。
6.常规检查
做X线胸片，心电图，B超和脑CT等检查。

⑼ 关于国标中单增李斯特菌检测的问题

实验室验证食品中李斯特菌新国家标准检验方法可操作性及可行性.方法:按照国家CDC"食品卫生微生物学检验李斯特菌检验标准"验证方案进行.结果:用不同浓度的沙门菌菌悬液人工染菌二类食品各加份,用增菌液两步增菌,两种分离培养基分离,对比检出率及分离效果.检出率62.5％,最低检出限为0.5 cfu/25 g～13 cfu/25 g.结论:该方法使用了选择性强、特异性高的分离培养基及快速筛选方法,如Vitek GNI、API10300、显色培养基等,克服了传统李斯特菌检测方法检测周期较长、所需试剂繁多、菌落生长慢等缺点,使李斯特菌的检测更加快速、简便、特异、敏感.该方法使李斯特菌检测具有更好的适用性和可操作性.