㈠ bca法测蛋白浓度为什么稀释蛋白质浓度
BCA法测定蛋白质浓度原理：
BCA与二价铜离子的硫酸铜等其他试剂组成的试剂混合一起即成为苹果绿，即 BCA 工作试剂。在碱性条件下，BCA 与蛋白质结合时，蛋白质将 Cu2+ 还原为 Cu+，工作试剂由原来的苹果绿色变为紫色复合物。562 nm 下其光吸收强度与蛋白质浓度成正比。
BCA 蛋白浓度测定试剂盒，Abbkine的蛋白质定量试剂盒(BCA法)提供一个简单，快捷，兼容去污剂的方法，准确定量总蛋白。
成分：
试剂 A，100 mL
试剂 B，2 mL
标准蛋白(BSA)1 mL×2，1 mg/mL
保存条件运输温度:室温(标准蛋白 4~8 ℃ 运输)
保存温度:室温(标准蛋白 -20 ℃ 保存)
有效日期:12 个月
使用方法：
方法一:96 孔板
1.配制 BCA 工作液:根据标准品和样品数量，按 50 体积试剂 A，1 体积试剂 B 配制适量 BCA 工作液。充分混匀。
2.将蛋白标准品按 0 μL，1 μL，2 μL，4 μL，6 μL，8 μL，10 μL 加入 96 孔板的蛋白标准品孔中。加灭菌双蒸水补足到 10 μL。取 10 μL 待测样品加入 96 孔板的待测样品孔中。每个测定要做 2~3 个平行。
3.向待测样品孔和蛋白标准品孔中各加入 200 μL BCA 工作液(即样品与工作液的体积比为 1:20)，混匀。
4.37 ℃ 温浴 30 min。冷却至室温。
5.酶标仪 562 nm 波长下测定吸光度。
6.制作标准曲线。从标准曲线中求出样品浓度。
㈡ BCA蛋白浓度检测的实验操作
绘制标准曲线：
取96孔酶标板，按下表加入试剂。
管号
1
2
3
4
5
6
7
8
标准蛋白溶液（μl）蒸馏水（μl）
BCA试剂（μl）
蛋白质浓度（mg/ml）
0
20
200
0
1
19
200
0.025
2
18
200
0.05
4
16
200
0.1
8
12
200
0.2
12
8
200
0.3
16
4
200
0.4
20
0
200
0.5
上述试剂加完后，准确吸取20μl样品溶液于酶标孔中，加入BCA试剂200μl，轻摇，于37℃保温30-60min，冷却至室温后，以空白为对照，在酶标仪上590nm处比色，以牛血清白蛋白含量为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。以标准曲线空白为对照，根据样品的吸光值从标准曲线上查出样品的蛋白质含量。
㈢ BCA蛋白检测方法的原理是什么
原理简介
BCA(bicinchoninic acid)法蛋白浓度定量试剂盒是在世界上常用的蛋白浓度检测方法之一BCA法基础上改进而成。众所周知，二价铜离子在碱性的条件下，可以被蛋白质还原成一价铜离子（biuret reaction），一价铜离子和独特的BCA Solution A（含有BCA）相互作用产生敏感的颜色反应。两分子的BCA螯合一个铜离子，形成紫色的反应复合物。该水溶性的复合物在562nm处显示强烈的吸光性，吸光度和蛋白浓度在广泛范围内有良好的线性关系，因此根据吸光值可以推算出蛋白浓度。
产品特点
1．步骤简单，45分钟内完成测定，比经典的Lowry法快4倍而且更加方便。
2．灵敏度高，检测浓度下限达到25μg/ml，最小检测蛋白量达到0.5μg，待测样品体积为1-20μl 。
3．BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的去污剂等化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20, 60, 80。
4．在20-2000μg/ml浓度范围内有良好的线性关系。
5. 检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。
BCA蛋白质定量检测试剂
在蛋白质的表达纯化，结构和功能的研究工作中，蛋白质的定量随处可见。但是，什么是理想的蛋白质定量方法？如何准确、快速的对蛋白质进行定量，对于不同的样本，如何选取相应的蛋白质定量试剂和方案？如何避免实验中引入的其它物质对蛋白质定量的干扰，PIERCE为这一切提供了可以信赖的解决方案。
PIERCE的BCA(bicinchoninic acid)蛋白质检测试剂是当前比Lowry法更优越的专用于检测总蛋白质含量的产品。该方法以快速灵敏、稳定可靠且对不同种类蛋白质变异系数甚小而深受专业人士的青睐。其中MicroBCA产品可检测到0.5μg/ml的微量蛋白，是目前已知的最灵敏的蛋白质检测试剂之一。
主要特点：
· 准确灵敏：BCA试剂的蛋白质测定范围是20－2000μg/ml,采用加强方法可检测到
5μg/ml；MicroBCA试剂测定范围是0.5-20μg/ml。
· 快速：45分钟内完成测定，比经典的Lowry法快4倍而且更加方便。
· 经济实用：除试管外，测定可在微孔板中进行，大大节约样品和试剂用量。
· 不受样品中离子型和非离子型去污剂影响。
· 检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考玛斯亮蓝。
基本原理：
碱性条件下，蛋白将Cu++还原为Cu+， Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。
BCA分子式：
原理图：
用PIERCE的BCA试剂盒所得的标准曲线：
MicroBCA蛋白标准曲线
BCA蛋白标准曲线
BCA蛋白质检测流程：
图片点击：
http://www.perbio.com.cn/PIERCE/Protein%20Chemistry/bca.htm
㈣ BCA蛋白浓度检测的实验试剂
Bicinchoninic acid (BCA )法是在世界上常用的蛋白浓度检验方法之一BCA法基础上改进而成。其原理与Lowery法蛋白定量相似，即在碱性环境下蛋白质与Cu 2+ 络合并将Cu 2+ 还原成Cu + 。两分子BCA与一个Cu + 螯合形成稳定的紫蓝色复合物，在562 nm处有高的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，据此可测定蛋白质浓度。
组成与储存：
组分名称 规格 保存
BCA Reagent 100ml 2-8℃
Cu Reagent 3.0ml 2-8℃
BSA标准液5 mg/ml 1ml -20ºC冻存
可进行500T微板(microplate)测定或50T2ml比色杯测定。