突变检测方法

㈠ 基因突变检测方法

基因突变检测方法：
PCR-SSCP法是在非这性聚丙烯酰胺凝胶上，短的单链DNA和RNA分子依其大街基序列不同而形成不同构象，一个碱基的改变将影响其构象而导致其在凝胶上的移动速度改变。其基本原理为单链DNA在中性条件下会形成二级结构，这种二级结构依赖于其碱基组成，即使一个碱基的不同，也会形成不同的二级结构而出刺同的迁移率。由于该法简单快速，因而被广泛用于未知基因突变的检测。
异源双链分析法（HA）
HA法直接在变性凝胶上分离杂交的突变型一野生型DNA双链。由于突变和野生型DNA形成的异源杂合双链DNA在其错配处会形成一突起，在非变性凝胶中电泳时，会产生与相应的同源双DNA不同的迁移率。该法与SSCP相似，所不同的是SSCP分离的是单链DNA，HA法分离的是双链DNA，也只适合于小片段的分析。
突变体富集PCR法（mutant-enriched
PCR）本法的基本原理是利用ras基因家族某个密码子部位存在已知的限制性内切酶位点，如K-ras基因第12密码子的BstNI位点，第13密古巴子有BgⅠⅡ位点。用链续二次的巢式PCR来扩增包括K-ras第12、13密码子的DNA片段，在两次扩增反应之间用相应的内切酶消化扩增的DNA片段，野生型因被酶切而不能进入第二次PCR扩增，而突变型则能完整进入第二次PCR扩增并得到产物的富集。

㈡ 6，dna点突变常用的检测方法有哪些

1．限制性片段长度多态性（Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP）：由DNA 的多态性,致使DNA 分子的限制酶切位点及数目发生改变,用限制酶切割基因组时,所产生的片段数目和每个片段的长度就不同,即所谓的限制性片段长度多态性,导致限制片段长度发生改变的酶切位点,又称为多态性位点.最早是用Southern Blot/RFLP方法检测,后来采用聚合酶链反应（PCR）与限制酶酶切相结合的方法.现在多采用PCR-RFLP法进行研究基因的限制性片段长度多态性.\x0d2．单链构象多态性（SSCP）：是一种基于单链DNA构象差别的点突变检测方法.相同长度的单链DNA如果顺序不同,甚至单个碱基不同,就会形成不同的构象.在电泳时泳动的速度不同.将PCR产物经变性后,进行单链DNA凝胶电泳时,靶DNA中若发生单个碱基替换等改变时,就会出现泳动变位（mobility shift）,多用于鉴定是否存在突变及诊断未知突变.

㈢ 对气温均值做突变检验有哪些方法

海洋上等温线的突变是洋流的影响、从低纬向高纬递减。 （2）、低地的气温低，偏离的程度和方向不一，下垫面性质差异大。 北半球比较曲折。因海陆热力性质的差异所致。而南半球主要是海洋、山地的气温比平原。因太阳辐射的分布是从低纬向高纬递减，海洋气温低、等温线的突变、同纬度海陆气温不同。 2。影响的因素不同，既偏离纬线，陆地上等温线的突变是由地形因素所致。冬季陆地气温低。夏季陆地气温高，等温线大致与纬线平行，海洋气温高，等温线偏离纬线。 3。这是地形因素的影响。 （3），太阳辐射是影响气温的主导因素。一般情况下、同纬度高原、等温线形状的南北差异。因北半球海陆相间，南半球比较平直。 等温线的突变，下垫面性质单一1、全球气温分布的一般规律。（1）

㈣ 基因突变的检查方法有哪些

基因突变检测方法： PCR-SSCP法是在非这性聚丙烯酰胺凝胶上，短的单链DNA和RNA分子依其大街基序列不同而形成不同构象，一个碱基的改变将影响其构象而导致其在凝胶上的移动速度改变。其基本原理为单链DNA在中性条件下会形成二级结构

㈤ 常用的基因突变检测方法有哪些

1、焦磷酸测序法

测序法的基本原理是双脱氧终止法，是进行基因突变检测的可靠方法，也是使用最多的方法。但其过程繁琐、耗时长，灵敏度不高，对环境和操作者有危害，故在临床应用中存在一定的限制。

焦磷酸测序法适于对已知的短序列的测序分析，其可重复性和精确性能与SangerDNA测序法相媲美，而速度却大大的提高。

焦磷酸测序技术产品具备同时对大量样品进行测序分析的能力。为大通量、低成本、适时、快速、直观地进行单核苷酸多态性研究和临床检验提供了非常理想的技术操作平台。

2、微数字聚合酶链反应

该方法为将样品作大倍数稀释和细分，直至每个细分试样中所含有的待测分子数不超过1个，再将每个细分试样同时在相同条件下聚合酶链反应后，通过基因芯片逐个计数。该方法为绝对定量的方法。

3、聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析技术

聚合酶链式反应（PCR）是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅增加。该法一般用于检测已知的突变位点。

因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中兇手所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁点的DNA，就能用PCR加以放大，进行比对。这也是“微量证据”的威力之所在。

由1983年美国Mullis首先提出设想，1985年由其发明了聚合酶链反应，即简易DNA扩增法，意味着PCR技术的真正诞生。到如今2013年，PCR已发展到第三代技术。1976年，台湾科学家钱嘉韵，发现了稳定的Taq DNA聚合酶，为PCR技术发展也做出了基础性贡献。

PCR是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右）。

DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。

4、高效液相色谱法

该方法是基于发生错配的杂合双链DNA与完全匹配的纯合双链DNA解链特征的差异而进行检测的，可检测出含有单个碱基的置换、插入或缺失的异源双链片段。

与测序法相比，该法简单、快速，不仅可用于已知突变的检测，还可用于未知突变的扫描。但只能检查有无突变，不能检测出突变类型，结果判断容易出错。

5、单链构象异构多态分析技术

依据单链DNA在某一种非变性环境中具有其特定的第二构象，构象不同导致电泳的迁移率不同，从而将正常链与突变链分离出来。与测序法相比，灵敏性更高。

㈥ APC的APC基因突变检测方法

通过检测APC基因突变,可筛选出FAP家族成员高危患者,也可用于评估结直肠癌的疗效和预后,所以检测APC基因变化对预防、早期诊断及早期治疗结直肠癌具有重大意义[13]. 检测APC基因突变的方法报道较多,大致分为3类.
第1类,直接序列分析,PCRSSCP法. 检测APC基因高度多态性DNA标记,不必对整个庞大的APC基因所有外显子进行检测[14]. 应用微卫星多态性标记进行LOH分析是目前抑癌基因定位和等位基因丢失研究中最经常采用的方法. APC基因等位丢失亦常出现在散发性结直肠癌中,LOH发生率为35%～45%[15]. 此类方法适合于较小片段基因(100～500 bp)突变的检测,对APC基因需分成40个相互重叠的片段来检测,费时,费力.
第2类,包括异源脱氧核糖核酸分子(DNA)分析法(Hdxa)和错配化学清除/羟胺锇酸酐(CCM/HOT)等. 一次可检测较大片段的DNA,减少受检片段,如CCM/HOT法使之降到25个片段. 然而,仍要对外显子进行突变检测,需较大片段的序列分析来确定,对APC基因检测也非简便的方法.
第3类,是针对基因突变产生终止密码而表达不全蛋白质(截短蛋白质)来设计的. 如体外合成蛋白质试验(IVSP法)和蓝/白选择试验,可以检测大片段的DNA或RNA,又能选择性发现产生终止密码的突变,与蓝/白选择试验不同的是,IVSP法还可根据不全蛋白大小来确定突变的位点. 通过对APC基因进行体外合成蛋白质及等位基因特异性表达的测定,可以更有效地检测到不能被PCRSSCP法所检测到的APC基因突变.总之，由于APC基因突变与FAP早期发生密切相关，且FAP具有较高的遗传倾向，这种疾病如果不加治疗，其恶变率几乎达到100%，所以对APC基因的定位及其功能的研究对于FAP的早期诊断和治疗显得尤为迫切和重要[16]. 如果说最初APC基因的发现为FAP的分子诊断学提供了理论基础，现APC基因的研究进展正使针对这种疾病的分子诊断方法成为可能. 相信通过对APC基因的进一步研究，不仅会有更实用的基因检测诊断方法问世，而且可能得到针对肿瘤发生机制的特异性基因治疗方法
APC启动子有两个区，1A和1B。启动子1A区最为活跃。APC启动子高甲基化也可能是导致结直肠癌的原因。有研究表明APC启动子1A区在结直肠癌中高甲基化，二在腺瘤中不甲基化。APC启动子高甲基化抑制了APC的转录。据报道APC的1A启动子区高甲基化也发生在胃肠癌症中，比如食管癌，胃癌，胰腺癌，肝癌，结直肠癌。

㈦ 基因突变的检测方法有哪些

基因突变的检测方法可以用放射性标记的基因探针进行检测

㈧ germline 突变怎么检测

如何检测超低频突变？

肿瘤是高度异质性的，其中致病突变可能以极低比例存在，比如allel frequency< 0.1%~0.01%，甚至更低。而目前最准的Hiseq测序本身的单个碱基的错误率就在0.2%左右，再加上众所周知的DNA聚合酶的固有错误率（10-7~10-5），那如何能测出0.1%的超低比例的突变？

MichaelW. Schmitta等人提出了极富创造力的方法，该方法的检测灵敏度达到0.01%，甚至更好。具体原理如下图：

(A) Adapter synthesis. A double-stranded, randomized Duplex Tag sequence is appended to a sequencing adapter by ing a degenerate sequence in one strand of the adapter with DNA polymerase. Complete adapter A-tailing is ensured by extended incubation with polymerase and dATP.

在Illumina的标准建库接头中的一条上加上12个简并碱基和4个固定序列碱基作为分子标签。

并通过复制把互补链也补上16个简并碱基。

(B) Duplex Sequencing workflow. Sheared, T-tailed double-stranded DNA is ligated to A-tailed adapters. Because every adapter contains a Duplex Tag on each end, every DNA fragment becomes labeled with two distinct tag sequences (arbitrarily designated α and β in the single fragment shown). PCR amplification with primers containing Illumina flow-cell–compatible tails is carried out to generate families of PCR plicates. Two types of PCR procts are proced from each DNA fragment. Those derived from one strand will have the α tag sequence adjacent to flow cell sequence 1 and the β tag sequence adjacent to flow cell sequence 2. PCR procts originating from the complementary strand are labeled reciprocally.

用改造好的接头与样本DNA进行连接，虽然接头总体上是简并的，但是具体到每个分子，还是有其特定的序列。

样本DNA加好接头后，得到的原始测序模板，而每个模板的每一头都被加上了12个碱基的分子标签，那每个模板的左、右两头加起来就有24个碱基的分子标签。

每个碱基是4种选择，24个碱基就是4的24次方，等于281T种可能性。这保证了每个原始模板在原始文库里都是独一无二的。

PCR扩增原始文库，每个模板会形成基于原始模板的2个中间序列互补的分子家族：正向和反向

(C) Error correction. (i–iii) Sequence reads sharing a unique set of tags are grouped into paired families with members having strand identifiers in either the αβ or βα orientation. Each family pair reflects the amplification of one double-stranded DNA fragment. (i) Mutations (colored spots) present in only one or a few family members represent sequencing mistakes or PCR-introced errors occurring

㈨ 在医学遗传学中常用什么方法检测基因突变

SNP检测，
楼上答的挺多一看就是网上摘的，但有点错误，我更正和补充一下。 主观填空题 1.干系 2.基因组DNA 3.遗传物质 4.染色体（或DNA）复制一次 5.交叉遗传 6.细胞癌基因 7.点突变 8.完全显性遗传 9.罗伯逊易位 10.重排 四、名词解释 聚合酶链式反应(PC...
11多重PCR 12正确 13正确 14正确 15正确 16正确 17错误 18正确 19正确 20错误
1.减数分裂是指生殖细胞成熟过程中(DNA复制一次 )后，细胞连续分裂二次。 2.发生于近端着丝粒染色体间的易位称为(着丝粒融合 )。 3.在一个肿瘤细胞群体中，占主导地位的克隆就构成其(干系 ) 4.结构异常是指由于染色体断裂、重接后，形成结构改变...
医学遗传学英文名称：medical genetics定义：应用遗传学的理论与方法研究遗传因素在疾病的发生、流行、诊断、预防、治疗和遗传咨询等中的作用机制及其规律的遗传学分支学科。 遗传学在医学中的应用，包括，生理、病理和药理的遗传学分析。遗传学...
遗传学是研究生物的遗传和变异，即研究亲子间的异同的生物学分支学科。 遗传学的研究范围包括遗传物质的本质、遗传物质的传递和遗传信息的实现三个方面。遗传物质的本质包括它的化学本质、它所包含的遗传信息、它的结构、组织和变化等；遗传物质...

㈩ 如何用PCR的方法检测已知点突变

我接触国的点突变检测方法包括：1、KASP、TaqMAN标记都是可以通过PCR区分点突变的。2，PCR产物测序。3，CEL I酶切，最早的突变筛选就是用的这酶。