A. 如何建立好药物含量的高效液相色谱分析方法
1，首先必须去进行配制药物溶液前处理的工作。找出该药物的溶解性，探索出该药物的有效溶剂，使该药物能在该溶剂中充分溶解，这是药物溶液配制的前处理必然途径，也是进行高效液相色谱含量分析的首要条件。
2，然后就是根据该药物配制溶液的前处理方法，配制好适当浓度的药物溶液，利用该药物溶液，在紫外-可见分光光度计上进行紫外扫描，找到该药物的最大吸收波长，确立适合的高效液相色谱分析的检测波长。因为它是进行高效液相色谱含量分析的基本条件
3，再是色谱柱的选择：根据药物的极性来选择合适极性的色谱柱类型
4，再是流动相的确立。配制一系列的流动相，考察合适的流动相。
5，再是准确度考察。通过精密度、重复性和重现性的考察来衡量仪器的准确度
6，接着是线性关系考察。配制不同浓度的一系列溶液，进行其溶液的色谱扫描。根据所得的不同浓度下的药物峰面积作为纵坐标（Y轴）、以溶液浓度为横坐标（X轴）进行线性回归，得到其线性图，考察其线性程度，即线性相关系数R=？。考察的目的就是：为了我们在做含量分析时，选择一个合适的浓度进行检测，不至于你配制的待测溶液浓度范围不在线性范围之内，造成测量结果的错误。
7，再是最低检测浓度和检测限的考察。目的是为了考察这种方法的实用性，是否符合痕量分析的要求。
8，再是回收率考察。目的是考察方法的准确性。
9，再是稳定性考察。目的是考察试验方法的时间性，指导我们在分析检测时，建立合适的溶液配制到进样的时间段，保证实验结果的准确性。
10，最后是专属性考察。
B. 丙酸氯倍他索的制备
方法名称： 丙酸氯倍他索原料药－丙酸氯倍他索－高效液相色谱法
应用范围： 本方法采用高效液相色谱法测定丙酸氯倍他索原料药中丙酸氯倍他索的含量。
本方法适用于丙酸氯倍他索原料药。
方法原理： 供试品经甲醇定量稀释并加入内标后，进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长240nm处检测丙酸氯倍他索的峰面积，计算出其含量。
试剂： 1. 甲醇
2. 0.05mol/L磷酸二氢钠溶液
3. 乙腈
仪器设备： 1. 仪器
1.1 高效液相色谱仪
1.2 色谱柱
十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论塔板数按丙酸氯倍他索峰计算应不低于5000。
1.3 紫外吸收检测器
2. 色谱条件
2.1 流动相：0.05mol/L磷酸二氢钠溶液（用85%磷酸调节pH值至2.5） 乙腈 甲醇=425 475 100
2.2 检测波长：240nm
2.3 柱温：室温
试样制备： 1. 内标溶液的制备
精密称取丙酸倍氯米松适量，加甲醇制成每1mL中约含0.40mg的溶液，即为内标溶液。
2. 对照品溶液的制备
精密称取丙酸氯倍他索对照品适量，加甲醇溶解并定量稀释制成每1mL中约含0.20mg的溶液，精密量取该溶液与内标溶液各5mL，置25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即为对照品溶液。
注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。
操作步骤： 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10mL，注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器于波长240nm处测定丙酸氯倍他索（C25H32ClFO5）的峰面积，计算出其含量。
C. 求2-氯丙酸用液相色谱检测的具体方法
用反相HPLC方法分析2－氯丙酸，下面的操作条件：
色谱仪: LC-6 A chromatography with SPD-6AV U－vis detector
柱子: Shim-pack CLC-ODS 4.6mm×250mm
流动相: 乙腈 : 水= 50: 50
柱温: 30 ℃
流速: 1.0 ml/min
进样体积: 20ml
检测波长: 224nm
外标法
D. 丙酸倍氯米松的药物分析
方法名称： 丙酸倍氯米松原料药－丙酸倍氯米松－高效液相色谱法
应用范围： 本方法采用高效液相色谱法测定丙酸倍氯米松原料药中丙酸倍氯米松的含量。
本方法适用于丙酸倍氯米松原料药。
方法原理： 供试品经流动相稀释并加入内标后，进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长240nm处检测丙酸倍氯米松的峰面积，计算出其含量。
试剂： 1. 甲醇
2. 甲睾酮
仪器设备： 1. 仪器
1.1 高效液相色谱仪
1.2 色谱柱
十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论塔板数按丙酸倍氯米松峰计算应不低于2500。
1.3 紫外吸收检测器
2. 色谱条件
2.1 流动相：甲醇 水=74 26
2.2 检测波长：240nm
2.3 柱温：室温
试样制备： 1. 称取供试品
精密称取本品约12.5mg为供试品。
2. 内标溶液的制备
精密称取甲睾酮适量，加流动相制成每1mL中约含0.12mg的溶液，即为内标溶液。
3. 对照品溶液的制备
精密称取丙酸倍氯米松对照品约12.5mg，置100mL量瓶中，加甲醇74mL使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取该溶液10mL与内标溶液5mL，置50mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即为对照品溶液。
4. 供试品溶液的制备
取供试品置100mL量瓶中，加甲醇74mL使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取该溶液10mL与内标溶液5mL，置50mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即为供试品溶液。
注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。
操作步骤： 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20mL，注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器于波长240nm处测定丙酸倍氯米松（C28H37ClO7）的峰面积，计算出其含量。
参考文献： 中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005版，一部，p.79。
E. 丙酸睾丸素的测定法
取本品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，以甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取该溶液与内标溶液各5ml，置25ml量瓶中，以甲醇稀释至刻度，摇匀，取5μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取黄体酮对照品适量，同法测定。按内标法以峰面积计算，即得。
本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集434图）一致。取本品约5mg，置小试管中，加甲醇0.2ml溶解后，加亚硝基铁氰化钠的细粉约3mg、碳酸钠及醋酸铵各约50mg，摇匀，放置10～30分钟，应显蓝紫色。取本品约0.5mg，置小试管中，加异烟肼约1mg与甲醇1ml溶解后，加稀盐酸1滴，即显黄色。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇－水(65:35)为流动相；检测波长为254nm。
理论板数按黄体酮峰计算应不低于1000，黄体酮峰和内标物质峰的分离度应符合要求。内标溶液的制备取己烯雌酚约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，以甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
方法名称： 丙酸睾酮原料药－丙酸睾酮－高效液相色谱法
应用范围： 本方法采用高效液相色谱法测定丙酸睾酮原料药中丙酸睾酮的含量。
本方法适用于丙酸睾酮原料药。
方法原理： 供试品经甲醇定量稀释并加入内标后，进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长241nm处检测丙酸睾酮的峰面积，计算出其含量。
试剂： 甲醇
仪器设备： 1. 仪器
1.1 高效液相色谱仪
1.2 色谱柱
十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论塔板数按丙酸睾酮峰计算应不低于1000。
1.3 紫外吸收检测器
2. 色谱条件
2.1 流动相：甲醇 水=80 20
2.2 检测波长：241nm
2.3 柱温：室温
试样制备： 1. 内标溶液的制备
精密称取苯丙酸诺龙，用甲醇制成每1mL中含1.6mg的溶液，即为内标溶液。
2. 对照品溶液的制备
精密称取丙酸睾酮对照品约25mg，置25mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取该溶液与内标溶液各5mL，置25mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即为对照品溶液。
3. 供试品溶液的制备
精密称取供试品约25mg，置25mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取该溶液与内标溶液各5mL，置25mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即为供试品溶液。
注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。
操作步骤： 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5mL，注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器于波长240nm处测定丙酸睾酮（C22H32O3）的峰面积，计算出其含量。
参考文献： 中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005版，一部，p.81。
F. 3-硝基丙酸的3-硝基丙酸的化学结构式
目前国外测定3-硝基丙酸的方法有薄层色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法等。我国建立了测定3-硝基丙酸的薄层色谱法。 以下试剂均为分析纯。
（一）乙酸乙酯、三氯甲烷、苯、冰乙酸。
（二）无水硫酸钠、2%碳酸氢钠、85%磷酸，6mol/L盐酸。
（三）硅胶G。
（四）显色剂：0.5%MBTH水溶液，置于4℃冰箱保存，每3d重新配制；
（五）展开剂：苯：冰乙酸（9+1，V/V）；确证用展开剂为石油醚：冰乙酸（9+1，V/V）。
（六）3-硝基丙酸标准溶液：精确称取3-硝基丙酸标准品，用乙酸乙酯制成储备液，再将此液用乙酸乙酯稀释成使用液，此标准溶液含3-硝基丙酸20μg/mL，置4℃保存。 （一）岛津CS-910双波长扫描仪及C-EIB微处理机。
（二）减压吹气浓缩装置。
（三）层析槽：内径25cm，宽6cm，高4cm。
（四）喷雾装置：日本岛津公司产。 （一）提取和净化
1. 甘蔗样品：取经去皮后切碎挤压得到的甘蔗汁10mL，置于100mL分液漏斗中，用6mol/L盐酸调节pH至2~3，用乙酸乙酯等体积提取三次，合并乙酸乙酯层于另一100mL分液漏斗中，用2%碳酸氢钠溶液30mL和10mL分别提取，振摇2min，静置分层，将水相置于另一100mL分液漏斗中，弃去乙酸乙酯层。用三氯甲烷20mL提取碳酸氢钠层，弃去三氯甲烷层，用6mol/L盐酸调节pH至2～3，用乙酸乙酯40mL、30mL、20mL分别提取，将乙酸乙酯吸出于150mL梨形瓶中，浓缩至干，用少量乙酸乙酯洗瓶壁数次，分别在40～45℃水浴中减压浓缩至干，加1mL乙酸乙酯定容，待测定。
2.甘蔗样品：将市售经冰冻的样品去皮后切碎，取20g置具塞200mL锥形瓶中，加无水硫酸钠20g，混匀，加乙酸乙酯60mL，85%磷酸0.12mL，浸泡30min后，振荡30min，且粗滤纸过滤，取滤液30mL于100mL分液漏斗中。以下按五（一）1“用2%碳酸氢钠溶液”方法操作。
（二）薄层色谱测定
1. 制板：取硅胶G3g，加水10mL，搅成匀浆，涂布于三块5cm×20cm玻璃板上，薄层厚度为0.3mm，干燥后于110℃烘烤3h后，置干燥器中备用。
2. 点板：以薄层板的短边为底边，距底边3cm的基线上用微量注射器滴加10μL标准液（20μg/mL）一个点，10μL样液两个点，在其中一个10μL样液点上再滴加10μL标准液（20μg/mL）。
3. 展开：上行展开16cm，展开剂为苯：冰乙酸（9+1，V/V）。
4. 显色：展开后的薄层板经挥干后，喷以显色剂至刚刚潮湿，置145~150℃烤箱中烘烤15min，冷却后，在波长365nm紫外光灯下目视定量或用薄层扫描仪定量。3-硝基丙酸的Rf值约为0.39。
5. 扫描条件：岛津CS-910双波长薄层扫描仪，用氙灯作光源，在380nm激发波长，500nm发射波长条件下，测量标准与样液斑点的荧光。
6. 目测条件：在波长365nm紫外光灯下观察，结果判定如下：
（1）标准点应出现黄色荧光；
（2）如样液点在标准点相应处未出现黄色荧光，则样品中3-硝基丙酸的含量在测定方法灵敏度以下。如在相应位置上有黄色荧光点，而另一点中样液点与标准点重叠，则为阳性。根据样液点的荧光强度估计减少滴加微升数，或稀释后滴加不同微升数，直至样液点与标准点的荧光强度一致为止。
7. 确证试验：用石油醚：冰乙酸（9+1，V/V）展开至16cm，挥干后显色，再测定，Rf值约为0.23。 式中：M——样品中3-硝基丙酸的量，μg/g或μg/mL；
0.2——3-硝基丙酸的最低检出量，μg；
V1——加入乙酸乙酯的体积，mL；
V2——出现最低检出量时滴加样液的体积，mL；
D——样液的总稀释倍数。
W——甘蔗取样质量，g；或甘蔗汁取样质量，mL。
本方法的灵敏度为2mg/kg。
G. 苯丙酸诺龙的检查与含量测定
其他甾体取本品适量，精密称定，以甲醇为溶剂，配制成每1ml含2mg的溶液(1)与每1ml含0.04mg的溶液(2)。用含量测定项下的方法和溶液，取8μl注入液相色谱仪，调整仪器灵敏度，使主成分峰高度达记录仪的满标度。再分别取溶液(1)和(2)各8μl，进样。记录色谱图至主成分峰保留时间的1.5倍。溶液(1)显示的杂质峰数不得超过3个，各杂质峰面积及其总和分别不得大于溶液(2)主峰面积的1/2和3/4。干燥失重取本品，置五氧化二磷干燥器中，减压干燥至恒重，减失重量不得过0.5%（附录ⅧL）。
含量测定：照高效液相色谱法（附录ⅤD）测定。色谱条件与系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇－水(82:18)为流动相；检测波长为241nm。理论板数按苯丙酸诺龙峰计算应不低于2300，苯丙酸诺龙峰与内标物质峰的分离度应符合要求。内标溶液的制备取丙酸睾酮约50mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法：取苯丙酸诺龙对照品约50mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取该溶液与内标溶液各5ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀；取8μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取本品适量，同法测定，按内标法以峰面积计算，即得。
测定法
方法名称： 苯丙酸诺龙原料药－苯丙酸诺龙－高效液相色谱法
应用范围： 本方法采用高效液相色谱法测定苯丙酸诺龙原料药中苯丙酸诺龙的含量。
本方法适用于苯丙酸诺龙原料药。
方法原理： 供试品经甲醇溶解并定量稀释，加入内标后再经甲醇定量稀释，进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长241nm处检测苯丙酸诺龙的峰面积，计算出其含量。
试剂： 1. 甲醇
2. 丙酸睾酮
仪器设备： 1. 仪器
1.1 高效液相色谱仪
1.2 色谱柱
十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论塔板数按苯丙酸诺龙峰计算应不低于2300。
1.3 紫外吸收检测器
2. 色谱条件
2.1 流动相：甲醇 水=82 18
2.2 检测波长：241nm
2.3 柱温：室温
试样制备： 1. 内标溶液的制备
精密称取丙酸睾酮50mg，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即为内标溶液。
2. 对照品溶液的制备
精密称取苯丙酸诺龙对照品50mg，置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取该溶液与内标溶液各5mL，置25mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即为对照品溶液。
3. 供试品溶液的制备
精密称取供试品50mg，同对照品溶液的制备，即为供试品溶液。
注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。
操作步骤： 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10mL，注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器于波长241nm处测定苯丙酸诺龙（C27H34O3）的峰面积，计算出其含量。
参考文献： 中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005版，二部，p.319。
H. 高效液相色谱有几种定量方法其中那种是比较精确的定量方法并简述
峰面积法、峰高法、归一法、外标法。峰面积法是比较精确的定量方法
I. 高效液相检测食品中丙酸钙的用什么色谱柱
高效液相检测食品中丙酸钙的用什么色谱柱
使用高效液相色谱时,液体待检测物被注入色谱柱,通过压力在固定相中移动,由于被测物种不同物质与固定相的相互作用不同,不同的物质顺序离开色谱柱,通过检测器得到不同的峰信号,最后通过分析比对这些信号来判断待侧物所含有的物质.高效液相色谱作为一种重要的分析方法,广泛的应用于化学和生化分析中.高效液相色谱从原理上与经典的液相色谱没有本质的差别,它的特点是采用了高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相,适于分析高沸点不易挥发、分子量大、不同极性的有机化合物.高效液相色谱使用粒径更细的固定相填充色谱柱,提高色谱柱的塔板数,以高压驱动流动相,使得经典液相色谱需要数日乃至数月完成的分离工作得以在几个小时甚至几十分钟内完成.
