A. 实验室中常用的DNA分子量的测定方法有哪些
第一种方法最常用
1)紫外吸收法也就是测量OD(260)和OD(280)的吸收值,这样的方法其它的杂质对测量结果影响大一点,因为其它杂质在这两个吸收波长也有吸收.
(2)荧光法,用PicoGreen荧光染料,测定DNA,RNA浓度比较灵敏,并且适合测量低浓度和微量DNA和RNA,并且受其它杂质的影响不大,缺点要有专门的荧光检测仪器,试剂比较昂贵.
纯化DNA可以买试剂盒,主要有膜吸附法,磁珠分离法,都很方便.
RNA与DNA最重要的区别一是RNA只有一条链,二是它的碱基组成与DNA的不同,RNA没有碱基T(胸腺嘧啶),而有碱基U(尿嘧啶).所以导致他们有以下性质上的不同.
1.两性解离:DNA无,只有酸解离,碱基被屏蔽(在分子内部形成了H键).RNA有,有PI.
2.粘度大:DNA;RNA,粘度由分子长度/直径决定,DNA为线状分子,RNA为线团.
3.碱的作用:DNA耐碱RNA易被碱水解.
4.显色反应:
鉴别DNA和RNA+浓HCl RNA ------→ 绿色化合物
DNA ------→ 蓝紫色化合物苔黑酚
二苯胺啡啶溴红(荧光染料)和溴嘧啶都可对DNA染色,原理是卡在分子中,DNA的离心和电泳显色可用它们.
DNA和RNA的鉴别染色
利用吖啶橙的变色特性可鉴别DNA和RNA.吖啶橙作为一种荧光染料已被用于染色固定,非固定细胞核酸,或作溶酶体的一种标记.观察死亡细胞荧光变色性变化以及区别分裂细胞和静止细胞群体.虽然测定DNA和RNA含量时较难获得好的重复性结果,但该方法已被许多实验室广泛采用.
5.溶解性:都溶于水而不溶于乙醇,因此,常用乙醇来沉淀溶液中的DNA和RNA.DNA溶于苯酚而RNA不溶,故可用苯酚来沉淀RNA.
6.紫外吸收:核酸的λm=260nm,碱基展开程度越大,紫外吸收就越厉害.当A=1时,DNA:50ug/ml,RNA和单链DNA:40ug/ml,寡核苷酸:20ug/ml.用A260/A280还可来表示核酸的纯度.
7.沉降速度:对于拓扑异构体(核苷酸数目相同的核酸),其沉降速度从达到小依次为:RNA ; 超螺旋DNA > 解链环状DNA ; 松弛环状DNA ; 线形DNA也就是在离心管中最上层是线形DNA,最下面是RNA.
8.电泳:核苷酸、核酸均可以进行电泳,泳动速度主要由分子大小来决定,因此,电泳是测定核酸分子量的好方法.
9.DNA分子量测定最直接的方法:用适当浓度的EB(溴嘧啶)染色DNA,可以将其他形式的DNA变成线形DNA,用电镜测出其长度,按B-DNA模型算出bp数,根据核苷酸的平均分子量就可计算出DNA的分子量.
B. 高分子测分子量的方法都有哪些
分子测分子量的方法:
高聚物的分子量及分子量分布,是研究聚合物及高分子材料性能的最基本数据之一。它涉及到高分子材料及其制品的力学性能,高聚物的流变性质,聚合物加工性能和加工条件的选择。也是在高分子化学、高分子物理领域对具体聚合反应,具体聚合物的结构研究所需的基本数据之一。
分子量检测方法:GPC 凝胶渗透色谱,飞行质谱法(Maldi-tof)
分子量测定仪器参数
GPC 流动相 :THF(四氢呋喃),H2O(水相),DMF( N,N-二甲基甲酰胺), 二氯甲烷,TCB(三氯苯)
检测方法:端基滴定法 冰点降低法 蒸汽压下降法(VPO) 膜渗透压法 。
检测仪器:核磁共振 流动分析仪/流动注射分析仪(FIA SFA CFA)
电容水分测定仪 电阻水分测定仪
红外水分测定仪 紫外可见分光光度计
红外光谱(IR、傅立叶) 气相分子吸收光谱仪(GMA)
C. 分子病理检测包括哪些
分子病理检测主要包括费氏检测以及荧光定量PCR检测、一代基因测序、二代基因测序检测。病理检测由原先的形态学为基础的检测,现在逐步进入到细胞和分子水平,即分子病理检测。分子病理检测主要包括费氏检测以及荧光定量PCR检测、一代基因测序、二代基因测序检测。荧光定量PCR检测主要为AM式方法,主要用于肺癌的EGFR和KRAS检测,用于指导肺癌病人的靶向治疗。
D. 气体检测的方法都有哪些
气体检测的方法很多,目前在工业领域都是通过气体传感器进行气体检测,通常基于以下几种原理:
1. 催化燃烧传感器:一般针对可燃性气体,如烷类、醇类等,传感器消耗电流较大,其内部需要保持高温,气体在高温下被催化燃烧,从而使传感部件的电阻发生变化。测量精度可以达到1%LEL(爆炸下限)
2 电化学原理:通过气体与电解液的反应,在电极上产生微弱电流,一般针对CO\H2S\SO2\CL2\NH3\NO\NO2\COCL2\HCN等毒性气体,电化学传感器的气体选择性不是很强,一般都会有交叉反应。常用的CO/H2S传感器价格比较便宜(价格为几十元到上百元)。普通电化学传感器测量精度可以达到ppm级别,四电极电化学传感器测量精度可以达到ppb级别(价格为数千元,较昂贵)
3 红外光学:CH4\CO2等对某一波段的红外光有吸收能力,通过吸收程度的不同计算气体的浓度(民品价格为100元左右,工业品价格为数百到数千元)
4. PID法:PID是采用一个紫外灯来离子化样品气体,从而检测VOC气体的浓度。当样品分子吸收到高紫外线能量时,分子被电离成带正负电荷的离子,这些离子被电荷传感器感受到,形成电流信号。(工业品价格为数百到数千元)
5. 气相色谱/质谱(GC/MS):具有较好的气体选择性,价格较为昂贵,一般为数万到数十万元。
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E. 分子互作检测方法有哪些
生物分子的相互作用可通过多种检测手段进行检测,如荧光能量共振转移(FRET),荧光偏振(FP),时间分辨荧光(TRF)均相时间分辨荧光(HTRF),Western-Blot等, 而这些检测技术均可在酶标仪中实现。
F. 高分子材料的检测方法
各种方法,热分析,核磁,红外·······LZ这个太多了
G. 细菌分子鉴定的方法有哪些
一般从DNA、RNA和蛋白质这三个方面鉴定。将三种物质分别提取出来,各自进行鉴定。鉴定的方法可以用你提到的这些。
1.核酸杂交:简单的说,就是将需检测的核酸与标记的分子结合使得未知核酸可以被检测到。
2.脉冲场凝胶电泳:利用电场让不同大小的带电DNA分子以不同的速度移动,从而将不同大小的分子分开。可分离10kb--10mb的DNA分子。
3.16S rRNA :16S rRNA所对应的 16S rDNA基因在微生物基因组中具有高度保守性;对16S rDNA而言,如果出现3个碱基以上的差异就可以断定细菌不属于同一种属。它具有高度的灵敏性,而且不需要培养,检测指标也很单一。可以快速检测未知微生物或致病微生物。
4.RAPD:对整个未知序列的基因组进行多态性分析的分子技术。先进行PCR扩增,然后电泳分离染色,在紫外透视仪上检测多态性。
5.质粒质谱分析法:我只了解过蛋白质的质谱分析技术,质粒的没有了解过。
蛋白质:将蛋白质酶解成小肽段并混合基质,用激光将呈离子化气体状态的待测物喷射,经电场到达检测器,根据到达的时间分析肽段的分子质量。
H. 可以用什么方法测无机高分子的分子量
1.粘度法测相对分子量(粘均分子量Mη)
用乌式粘度计,测高分子稀释溶液的特性粘数[η],根据Mark-Houwink公式[η]=kMα,从文献或有关手册查出k、α值,计算出高分子的分子量。其中,k、α值因所用溶剂的不同及实验温度的不同而具有不同数值。
2.小角激光光散射法测重均分子量(Mw)
当入射光电磁波通过介质时,使介质中的小粒子(如高分子)中的电子产生强迫振动,从而产生二次波源向各方向发射与振荡电场(入射光电磁波)同样频率的 散射光波。这种散射波的强弱和小粒子(高分子)中的偶极子数量相关,即和该高分子的质量或摩尔质量有关。根据上述原理,使用激光光散射仪对高分子稀溶液测 定和入射光呈小角度(2℃-7℃)时的散射光强度,从而计算出稀溶液中高分子的绝对重均分子量(MW) 值。采用动态光散射的测定可以测定粒子(高分子)的流体力学半径的分布,进而计算得到高分子分子量的分布曲线。
3.体积排除色谱法(SES)(也称凝胶渗透色谱法(GPC))
当高分子溶液通过填充有特种多孔性填料的柱子时,溶液中高分子因其分子量的不同,而呈现不同大小的流体力学体积。柱子的填充料表面和内部存在着各种大 小不同的孔洞和通道,当被检测的高分子溶液随着淋洗液引入柱子后,高分子溶质即向填料内部孔洞渗透,渗透的程度和高分子体积的大小有关。大于填料孔洞直径 的高分子只能穿行于填料的颗粒之间,因此将首先被淋洗液带出柱子,而其他分子体积小于填料孔洞的高分子,则可以在填料孔洞内滞留,分子体积越小,则在填料 内可滞留的孔洞越多,因此被淋洗出来的时间越长。按此原理,用相关凝胶渗透色谱仪,可以得到聚合物中分子量分布曲线。配合不同组分高分子的质谱分析,可得 到不同组分高分子的绝对分子量。用已知分子量的高分子对上述分子量分布曲线进行分子量标定,可得到各组分的相对分子量。由于不同高分子在溶剂中的溶解温度 不同,有时需在较高温度下才能制成高分子溶液,这时GPC柱子需在较高温度下工作。
4.质谱法
质谱法是精确测定物质分子量的一种方法,质谱测定的分子量给出的是分子质量m对电荷数Z之比,即质荷比(m/Z)过去的质谱难于测定高分子的分子量, 但近20余年由于我的离子化技术的发展,使得质谱可用于测定分子量高达百万的高分子化合物。这些新的离子化1.粘度法测相对分子量(粘均分子量Mη)
用乌式粘度计,测高分子稀释溶液的特性粘数[η],根据Mark-Houwink公式[η]=kMα,从文献或有关手册查出k、α值,计算出高分子的分子量。其中,k、α值因所用溶剂的不同及实验温度的不同而具有不同数值。
2.小角激光光散射法测重均分子量(Mw)
当入射光电磁波通过介质时,使介质中的小粒子(如高分子)中的电子产生强迫振动,从而产生二次波源向各方向发射与振荡电场(入射光电磁波)同样频率的 散射光波。这种散射波的强弱和小粒子(高分子)中的偶极子数量相关,即和该高分子的质量或摩尔质量有关。根据上述原理,使用激光光散射仪对高分子稀溶液测 定和入射光呈小角度(2℃-7℃)时的散射光强度,从而计算出稀溶液中高分子的绝对重均分子量(MW) 值。采用动态光散射的测定可以测定粒子(高分子)的流体力学半径的分布,进而计算得到高分子分子量的分布曲线。
3.体积排除色谱法(SES)(也称凝胶渗透色谱法(GPC))
当高分子溶液通过填充有特种多孔性填料的柱子时,溶液中高分子因其分子量的不同,而呈现不同大小的流体力学体积。柱子的填充料表面和内部存在着各种大 小不同的孔洞和通道,当被检测的高分子溶液随着淋洗液引入柱子后,高分子溶质即向填料内部孔洞渗透,渗透的程度和高分子体积的大小有关。大于填料孔洞直径 的高分子只能穿行于填料的颗粒之间,因此将首先被淋洗液带出柱子,而其他分子体积小于填料孔洞的高分子,则可以在填料孔洞内滞留,分子体积越小,则在填料 内可滞留的孔洞越多,因此被淋洗出来的时间越长。按此原理,用相关凝胶渗透色谱仪,可以得到聚合物中分子量分布曲线。配合不同组分高分子的质谱分析,可得 到不同组分高分子的绝对分子量。用已知分子量的高分子对上述分子量分布曲线进行分子量标定,可得到各组分的相对分子量。由于不同高分子在溶剂中的溶解温度 不同,有时需在较高温度下才能制成高分子溶液,这时GPC柱子需在较高温度下工作。
4.质谱法
质谱法是精确测定物质分子量的一种方法,质谱测定的分子量给出的是分子质量m对电荷数Z之比,即质荷比(m/Z)过去的质谱难于测定高分子的分子量, 但近20余年由于我的离子化技术的发展,使得质谱可用于测定分子量高达百万的高分子化合物。这些新的离子化技术包括场解吸技术(FD),快离子或原子轰击 技术(FIB或FAB),基质辅助激光解吸技术(MALDI-TOF MS)和电喷雾离子化技术(ESI-MS)。由激光解吸电离技术和离子化飞行时间质谱相结合而构成的仪器称为“基质辅助激光解吸-离子化飞行时间质谱” (MALDI-TOF MS 激光质谱)可测量分子量分布比较窄的高分子的重均分子量(Mw)。由电喷雾电离技术和离子阱质谱相结合而构成的仪器称为“电喷雾离子阱质谱”(ESI- ITMS 电喷雾质谱)。可测量高分子的重均分子量(Mw)。
5.其他方法
测定高分子分子量的其他方法还有:端基测定法,沸点升高法,冰点降低法,膜渗透压法,蒸汽压渗透法,小角X-光散射法,小角中子散射法,超速离心沉降法等。
I. 高分子材料性能测试的具体方法有哪些
高分子材料的性能有很多
力学性能可以用拉伸机,热学性能用DSC,DTA,TGA,DMA,结晶性能用XRD,NMR
含水可以用压差仪,粘度用流变仪或者乌氏,分子结构图谱用IR,拉曼,UV等
J. 高分子材料性能测试的具体方法有哪些有没有好点的检测机构推荐
高分子材料性能测试的具体方法:
高分子材料剖析是利用现有的仪器分析手段,对高分子材料的主成分以及其填料、增塑剂等成分进行定性定量的一种分析方法。
主要包括:
高分子材料主成分鉴定、橡胶种类鉴定、高分子材料成分剖析、无机填料测试等。
常见的需要测试的产品有:
塑料:聚乙烯(PE)、聚丙烯(PP)、聚(PVC)、聚苯乙烯(PS)、聚氨酯(PU)、聚酰胺(PA)、聚甲醛(POM)、聚苯醚(PPS)、聚碳酸酯(PC)、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)、聚对苯二乙二醇酯(PET)等。
橡胶:氯丁橡胶(CR)、天然橡胶(NR)、丁苯橡胶(SBR)、丁基橡胶(IIR)、丁腈橡胶(NBR)、乙丙橡胶(EPM)等。
纤维:棉、麻、毛天然纤维,黏胶纤维等合成纤维。
涂料剖析:油脂漆、天然树脂漆、酚醛漆、沥青漆、醇酸漆、氨基漆、硝基漆、过氧乙烯漆、环氧漆等。
有机溶剂剖析:油漆稀释剂,脱漆剂,电子电器行业使用的清洗剂和溶剂等。
其他材料剖析:助焊剂、表面活性剂等
案例1
高分子材料主成分定性
主成分定性主要是利用傅里叶变换红外光谱仪(FTIR)对材料进行测试,获取其红外光谱,通过分析其出峰位置的所属的官能团,并对照其标准谱图,判断样品所属的高分子类型。例如:
由红外光谱结果可知,3392.01cm-1 处的强吸收峰谱带为-OH 的伸缩振动吸收,C=O伸缩振动的吸收在1732.68cm-1 ,1267.63cm-1处是包含苯环碳的C-C-O不对称伸缩振动,1124.32cm-1和1069.29cm-1处的双峰为O-CH2-CH2的伸缩振动吸收。3000~2800cm-1为饱和C-H的伸缩振动区域,>3000cm-1处的小峰为饱和C-H伸缩振动。1500~1300cm-1之间为CH3和CH2 的弯曲变形振动区域。742.71cm-1处的吸收峰为苯环的邻位双取代吸收。通过比较样品图谱与标准图谱可知,样品的主成分为醇酸树脂。
案例2
橡胶种类鉴定
橡胶鉴定主要是依据《GBT 7764-2001 橡胶鉴定 红外光谱法》标准方法,通过热解法对样品进行前处理,利用傅里叶变换红外光谱仪(FTIR)对样品进行进行测试,获取目标样品的红外光谱图,通过分析其出峰位置的所属的官能团,并对照其标准谱图,判断样品所属的橡胶种类。