食品大肠菌群检测方法

㈠ 什么是类大肠杆菌和它在食品中的检测方法

一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧或兼性厌氧的革兰氏染色阴性无芽孢杆菌，统称为大肠菌群。主要来源于动物和人的粪便，一般作为食品被粪便污染指标。
检测方法可见GB/T4789.3-2003《食品卫生微生物检验》
一般用9管发酵发。

㈡ 食品中大肠杆菌的检测

用大肠杆菌显色培养基，检测原理：蛋白胨和酵母膏粉提供碳氮源和微量元素;氯化钠可维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂;十二烷基硫酸钠抑制革兰氏阳性菌;混合显色底物分别与大肠菌群和大肠杆菌所对应的酶发生特异性反应，水解底物，释放出显色基团，在淡黄色平板上大肠菌群产生橙红色的菌落，大肠杆菌产生蓝绿色的菌落。
资料出自环凯官网。

㈢ 食品中的大肠杆菌的检测方法

培养基配置
检样、稀释
乳糖胆盐发酵管观察：（36摄氏度24小时）
3.1不产气 大肠杆菌阴性
3.2产气伊红美蓝琼脂倒平板
3.2.1G染色,G阳性,说明大肠杆菌阴性
3.2.2乳糖发酵管（36摄氏度24小时）,同样不产气,大肠杆菌阴性

㈣ 大肠菌群有两种检测方法它们优点缺点分别是什么

滤膜检验法的优点是比发酵法的检验时间短，缺点在于不能及时指导生产。

㈤ 食品中大肠菌群的测定程序

大肠菌群测定
大肠菌群是指一群能发酵乳糖、产酸(培养基原来的颜色是红色的，如果产酸会变成黄色)、产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。食品检出大肠菌群，则表示该食品曾受粪便污染。结果报告为每100ml（g）样品中大肠菌群的最近似数（MPN）
设备和材料：
1. 温箱：36±1度
2. 冰箱：0-4度
3. 恒温水浴：44.5±0.5度
4. 天平
5. 显微镜
6. 均质器或乳苯
7. 平皿：直径为90mm
8. 试管
9. 吸管
10. 广口瓶或三角烧瓶：容量为500ml
11. 玻璃珠：直径为5mm左右
12. 酒精灯
13. 试管架
培养基和试剂：
1. 乳糖胆盐发酵管
2. 伊红美蓝琼脂平板
3. 乳糖发酵管
4. EC肉汤
5. 磷酸盐缓冲稀释液
6. 生理盐水
7. 革兰氏染色液
操作步骤：
7.1）.检样稀释
7.1.1 以无菌操作将检样25ml(或g)放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释玻璃瓶内（瓶内予置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳苯内，经充分振摇或研磨作成1：10的均匀稀释液。固体检样最好用均质器，以8000-10000r/min 的速度处理min,作成1：10的均匀稀释液。
7.1.2 用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混均，作成1：100的稀释液
7.1.3 另取1ml灭菌吸管，按上条操作依次做成10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1ml灭菌吸管。
7.1.4 根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种3管。
7.2 乳糖发酵试验
将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1ml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管，置36±1度温箱内，培养24±2小时，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，则按下列程序进行。
7.3 分离培养
将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36±1度温箱内,培养18-24小时，然后取出，观察菌落形态，并做革兰色染色和验实试验。
7.4 证实试验
在上述平板上，挑取可疑的大肠菌群1-2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36±1度温箱内培养24±2小时，观察产气情况凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无蚜苞杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。
7.5 报告
根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每10ml(g)大肠菌群的mpn值。
8 粪大肠菌群
8.1用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物（见7.2条）转种于EC肉汤管内，置44.5±0.2度水浴箱内（水浴箱内的水面应高于EC肉汤液面），培养24±2小时，经培养后，如所有EC肉汤管均不产气，则可报告为阴性；如有产气者，则将所有产气的EC肉汤分别转种于伊红美蓝琼脂平板上，置36±1度培养18-24小时，凡平板上有典型菌落者，则证实为粪大肠菌群阳性。
8.2 结果报告
根据证实为粪大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，报告每100ml（g）粪大肠菌群的MPN值
附加说明：
本标准由卫生部卫生监督司提出。
本标准由卫生部食品卫生监督检验所负责起草。
本标准主要起草人刘宏道。
本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。

㈥ 大肠杆菌检测方法国标是用什么方法检测的

大肠杆菌检测方法分为三种：

1、细菌分离鉴定法

分离培养与鉴定：粪便标本直接接种肠道杆菌选择性培养基。血液先经肉汤增菌，然后转种血琼脂平板。其他标本同时接种血琼脂平板和肠道杆菌选择性培养基。

37℃孵育18～24小时后，观察菌落涂片染色镜检。肠致病性大肠杆菌须先作血清学定型试验。必要的时候检定肠霉毒素。

2、卫生细菌学检查法

大肠杆菌会不断随粪便排出体外，污染周围环境水源、食品等。取样检查时，样品中大肠杆菌越多，则表示样品被粪便污染的越严重，表明样品中存在肠道致病菌的可能性也就越大。

大肠菌数指数：指每立升中大肠菌群数，采用乳糖发酵法检测。中国卫生标准是每1000ml饮水中不得超过3个大肠菌群，瓶装汽水和果汁中每100ml大肠菌群不能超过5个。

3、全自动微生物定量分析仪（TEMPO）检测法

全自动微生物定量分析（TEMPO）仪大肠杆菌群计数检测有TEMPOTC和TEMPOCC两种方法。

TEMPOTC的开发是为获得NF ISO4832标准相当性能水平。

TEMPOCC法是TEMPO仪器上根据BAM方法专门用于24h计数食品中大肠杆菌群方法。

(6)食品大肠菌群检测方法扩展阅读：

大肠杆菌在生物技术中的应用

这些菌株由于失去了细胞壁等重要组分，所以在自然条件下已无法生长。甚至普通的清洁剂都可以轻易地杀灭这类菌株。即便由于操作不慎导致活菌从实验室流出，也不易导致生化危机。

生物工程用的菌株基因组都被优化过，使之带有不同基因型（例如β半乳糖苷酶缺陷型），可以更好的用于分子克隆实验。

真核基因在大肠杆菌中表达，必须有合适的表达载体(Vector),常用载体：pBV220,pET系统。

目的基因在大肠杆菌中表达的情况：

大肠杆菌更适合原核基因的表达，外源基因表达产量与单位体积产量是正相相关的，外源基因拷贝数和表达 产物产量之间存在动态平衡，单个细胞的产量又与外源基因拷贝数，基因表达效率，表达产物的稳定性和细胞代谢负荷等因素有关。

㈦ 食品微生物的检测 大肠菌群的测定最好采用什么方法啊

请问什么企业的大肠菌群？通常我们都采用多管发酵法，执行标准是HJ/T347-2007。这个方法是B类，还有纸片法，也有不少环保部门采用，但这个方法是C类方法。首选的还是多管发酵法，它属于经典方法。
我在环保部门从事细菌学项目的测定工作，就采用这种经典方法。对于河流等地表水，或是地表水饮用水源地、城市污水处理厂及肉禽场等企业，都进行水样中粪大肠菌群的分析。对于地下水及地下水饮用水源地，都进行总大肠菌群的测定。
希望这些对你有帮助。

㈧ 食品包装塑料袋大肠菌群检测方法

可以参照国家标准中的实验方法

㈨ 食品中大肠菌群的检验，有哪些需要注意的实验步骤

食品微生物学检验 大肠菌群计数：大肠菌群平板计数法（GB 4789.3-2010）
一 试剂和仪器
煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB肉汤）
结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）
恒温培养箱
自动稀释仪
均质器
振荡器
二 样品处理
固体样品应在无菌条件下充分粉碎。本次演示以乳粉为例，取密封状态良好的试样，备用待测。
三 检测过程
实验前准备
进入无菌操作室前应更换无菌实验服，戴帽子、口罩、无菌手套。进入无菌操作室后，首先用镊子夹取适量酒精棉全面擦拭双手，然后才能进行实验操作。
酒精易燃，因此在擦拭双手的过程中应离开酒精灯火焰一定距离，防止出现危险，待手上的酒精挥发完全后，再进行实验操作。
样品的稀释
取一洁净无菌均质袋于自动稀释仪上，用酒精棉充分擦拭样品袋，将剪刀置于酒精灯外焰上充分灼烧，小心剪开样品袋。将称样勺于酒精灯外焰灼烧片刻，准确称取25g样品于无菌均质袋中。用酒精灯外焰灼烧注水口片刻，在盛有样品的均质袋中注入225mL无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液。取下均质袋，将均质袋放入拍击式均质器中，用均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。
注意：样品匀液的pH值应在6.5～7.5之间，必要时可用1 mol/L无菌氢氧化钠或1mol/L无菌盐酸溶液调节。
均质完毕后，做好标记，将均质袋置于样品框中。
在装有9mL生理盐水的无菌试管上做好标记，用1mL无菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓缓注入装有9mL生理盐水的无菌试管中，稀释前后试管口都应在酒精灯上灼烧片刻。加塞后于振荡器上混合均匀，制成1:100的样品匀液。同理，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。稀释样品时，注意吸管或吸头尖端不得触及稀释液面；每递增稀释1次，换用1支1mL无菌吸管或吸头。
接种及培养
在事先经灭菌处理的培养皿底部做好标记。根据对样品污染状况的估计，选取2～3个适宜的连续稀释度。本次演示只做1:10和1:100的样品稀释液。
用无菌吸管吸取1:10样品稀释液1mL，加入到培养皿中，备用。同理，加入1:100稀释液和空白液。注意，每个稀释度应接种2个无菌培养皿，空白液即为以1mL生理盐水代替1mL样品稀释液。
加完样品梯度稀释液后，即可倾倒培养基。倾倒前应将锥形瓶的瓶口在酒精灯上充分灼烧。灼烧后及时倾注15mL～20mL结晶紫中性红胆盐琼脂于每个培养皿中，小心旋转培养皿，将培养基与样液充分混匀。倾注培养基时应将锥形瓶口尽量伸入培养皿内，防止倾倒时培养基挂在培养皿的内壁或外壁上，且倾倒过程应果断，防止培养基沿锥形瓶外壁流出、滴落。培养基的温度以46℃为宜，不能过高或过低，温度过高不利于操作且对菌体有害，温度过低培养基迅速凝固，菌体不能在培养皿内均匀的分布，导致菌落计数困难。转动培养基时用力须均匀，防止培养基沾到培养皿上盖或洒出。
倒完培养基后，静置培养皿，等待培养基冷却凝固。
待培养基凝固后，再加3mL～4mL 结晶紫中性红胆盐琼脂覆盖平板表层。加两次培养基的主要目的是：使菌体均在培养基内部生长，以便于观察典型菌落形态。等待培养基冷却凝固。待培养基凝固后，翻转平板，置于培养箱中于36℃±1℃条件下培养18h～24h。
平板菌落计数
选取菌落数在15CFU～150CFU之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落，其中典型菌落的特征为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5mm或更大。
证实实验
先在煌绿乳糖胆盐肉汤管上做好标注。将接种环置于红外灭菌器中灭菌，再用接种环从结晶紫中性红胆盐琼脂平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于煌绿乳糖胆盐肉汤管内，振摇均匀。每次接种后都应及时将接种环在灭菌器中灭菌。将接种完的煌绿乳糖胆盐肉汤管置于培养箱中，于36℃±1℃条件下培养24h～48h。培养完毕后，观察煌绿乳糖胆盐肉汤管中产气情况。凡管内倒管有气泡者，即可报告为大肠菌群阳性。