目前，细胞因子已广泛应用于临床的已有EPO、IFN-α、G-CSF、GM-CSF以及试用于临床的白细胞介素等。为了研究细胞因子在生理系统的作用以及了解细胞因子产品用于临床治疗的效果，进行细胞因子的检测就必不可少，而且用于临床诊断的细胞因子分析方法必须适用于常规操作。细胞因子的检测尚未在临床诊断上广泛开展，已知目前采用的细胞因子检测方法均不完善，且不同的检测方法所得的结果差异较大，给临床治疗带来一定的困难。因此，有必要了解各种检测方法的特性及影响细胞因子浓度的因素。 1 原理和方法细胞因子的发现依赖于其生物学活性，因此，建立了生物分析法用于细胞因子的检测。随后，用于检测实验溶液(如组织培养上清液)中细胞因子的免疫分析法被建立，并不断用于实验室研究。但准确地、可重复地测定细胞因子具有一定困难，主要原因是众所周知的细胞因子的含量极低(大部分都是以pmol/L计)，同时存在着源于异嗜性抗体，类风湿因子以及特异的和非特异的细胞因子结合蛋白等的显着干扰。在生物帮那里可以详细的了解一下，那里有很多实验领域的精品技术文件，并且图文并茂，提供生物领域的学科知识、实验技术方法与技巧等please click to connect www.bio1000.com/zt/cell/46213.html .that can help you细胞因子生物学活性检测和浓度测定的分析方法主要有以下几类。1.1 生物分析法 生物分析法方便，敏感性高，但所有细胞系有可能受几种细胞因子的影响，特异性则较差。又由于可溶性细胞因子受体等抑制剂的存在，使生物分析法可能低估细胞因子的活性。常用的方法有2种:(1)依赖性细胞株增敏实验。一些肿瘤细胞株依赖于细胞因子方能在体外增殖，如TF-1细胞株依赖于GM-CSF和IL-3，CTLL细胞株依赖于IL-2，TTD-1细胞株依赖于IL-6等 。可利用这些依赖株检测相应的细胞因子。但是，并非所有细胞因子均有相应的依赖株，因此限制了此法的应用。(2)功能检测实验。利用一些细胞因子的功能特性而建立相应的活性测定方法。如IFN抗病毒实验和TNF对L 929 细胞的杀伤作用等 。此外，生物分析法还有骨髓集落形成实验，细胞毒或细胞抑制实验，次级分子分泌的诱导，化学趋化和细胞因子分泌性的抑制实验等。1.2 免疫分析法 利用抗原机体反应的原理，制备出抗细胞因子的单抗或多抗，可进行细胞因子的免疫检测，它包括放免实验(RIA)和酶联免疫吸附实验(ELISA)等。其优点是高特异性、高灵敏度、操作简便。缺点是不能证明被测细胞因子是否为具有完整生物活性结构的蛋白质而非变性蛋白质。1.3 CKmRNA的测定 (1)分子杂交实验:首先制备出细胞因子的基因探针，通过分子杂交检测细胞内CKmRNA的表达。(2)逆转录PCR(RT-PCR)法技术:可快速、灵敏地检测表达很低的CKmRNA，并可同时测定同一样本中多种CKmRNA，操作过程包括细胞因子产生细胞的RNA提取，mRNA经逆转录合成cDNA，以cDNA为模板，在细胞因子引物的引导下，即可进行PCR扩增。根据定量CKmRNA方法和原理的不同，可分为半定量PCR法，竞争性定量PCR法，内参标定量PCR法，HPLC-PCR法和酶联免疫定量PCR法。目前市售的商品试剂盒已能用于大多数细胞因子的检测，但因其价格昂贵而阻碍了其广泛使用。同时，人细胞因子的测定仍存在许多问题，检测方法选择不当可能得到不一致的结果，有时有必要选择一个以上的检测方法测定细胞因子。 2 灵敏度细胞因子具有很强的生物学活性，其生物分析法的灵敏度极高。然而，在测定血浆中细胞因子正常浓度时，难以确定免疫分析法令人满意的灵敏度。不同细胞因子的参考值变化很大，难以定义其参考值范围。如Damas等[7] 在研 究细胞因子与败血症时，使用两步免疫放射测定实验(IRˉMA)测定IL-6(灵敏度:5ng/ml)一步IRMA法测定TNF-α(灵敏度:5ng/L)和IL-1β(灵敏度:4ng/L)，在正常血清中未测得上述细胞因子。而Riikonen等使用具有相似检测限的RIA法，在20例健康儿童中，IL-1β的平均浓度为12.1ng/L，IL-6的平均浓度为83ng/L;在71例健康儿童中，TNF-α的平均浓度为40±2ng/L。由此可见，不同的免疫分析方法之间存在极大的差异，其灵敏度变化可能是由于其准确度和特异性的不同而引起。3 准确度和特异性影响细胞因子检测准确度和特异性的因素有:(1)抗体:单抗的表位识别;(2)细胞因子:多种分子形式，结合蛋白复合物、抑制剂和可溶性受体复合物;(3)血浆基质:干扰抗体，异嗜性抗体和类风湿因子;(4)标准:重组参考物质可能不显示与样品平行的剂量———反应曲线。3.1 细胞因子结合蛋白 已知IL-1β、TNF-α和IL-6能结合从细胞进入血浆的可溶性受体或特异的拮抗剂。免疫分析法是否能识别这样的结合形式几乎是未知的，但是对TNF的研究得出了一些重要结论。20世纪80年代后期，《Lancet》上发表了大量关于癌症病人TNF-α测定缺乏可靠性和生物分析法与免疫分析法关系的文章。但使用竞争性免疫分析法时，癌症病人与败血症病人的TNF-α是可被检测的。而ELISA法由于不能测定TNF-α与P 55 TNF受体的结合物而无法测定癌症病人血浆中的TNF-α。3.2 血浆中包含几种形式的IL-6分子，它们与一些抗血清的作用较弱，缺乏生物学活性并与其它血浆蛋白质以及IL-6的可溶性受体组成复合物。已知IL-6免疫分析法和生物分析测定其在正常血清中的浓度为0或在10～75ng/L范围，败血症病人的IL-6浓度升高到1～2μg/L，脑膜炎病人的IL-6浓度升到200μg/L。然而，May等说明大多数的检测方法仅仅测定了低分子量的IL-6，他们采用能识别IL-6高分子量的单抗，测得在正常血清中IL-6的浓度为1～10μg/L，并且在1例骨髓移植后病人的血清样品中，测得IL-6的浓度为5～10mg/L。3.3 多种分子的形式 一些细胞因子的多种分子形式已被充分认识，但是其对细胞因子测定影响的重要性并未得到彻底的研究。IL-6是一个最好的例子，它由一个位于第7染色体上，包含5个外显子的单一多杰基因编码。其氨基酸序列包括几个潜在的O-糖基位点，2个N-糖基位点和几个丝氨酸磷酸化位点。由细菌产生的重组IL-6的相对分子量为21Kd。人成纤维细胞至少分泌6种形式，相对分子量为23～30Kd的IL-6，它们均是糖蛋白，能在败血症病人的血浆中被检测。人内皮细胞分泌一种分子量为45Kd的IL-6，它似乎是血浆中的IL-6的主要存在形式。3.4 人血浆中的干扰物质 血浆中通常包含有与IgG反应的抗体。这些异嗜性的抗体可影响夹心免疫分析法，它们在俘获抗体和被标记的抗体间形成桥梁，而错误地导致高分析值。研究表明，15%～40%的病人样本中含有能够干扰检测的抗体。异嗜性抗体能与鼠、兔和牛血清免疫球蛋白发生反应，在大多数情况下，它们与牛IgG的结合最强。在检测中，加入正常的非免疫动物血清吸附异嗜性抗体，常能够消除这种形式的干扰。3.5 类风湿因子是IgM的自身抗体 Hamilton等的研究说明，IgM类风湿因子与鼠IgG的结合发生于1%的健康献血者和31%的类风湿关节炎病人。然而，也有研究表明，在9.1%的正常献血者中发生了这类结合。这些抗体可造成与异嗜性抗体完全相同的影响，并且他们在对细胞因子检测具有特别意义的类风湿病患者中的浓度极高。
❷ 测细胞因子含量常用的 elisa 方法为
有一个朋友来找我咨询用流式检测细胞因子的问题，他之前用ELISA 检测细胞因子的话，发现样本量需求很多，然而有些样本量又比较少怎么办呢，那么接下来我来对比几种检测细胞因子的优缺点，供各位大大们阅读参考啦~
细胞因子（cytokine，CK）：是由免疫细胞（如单核、巨噬细胞、T细胞、B细胞、NK细胞等）和某些非免疫细胞（内皮细胞、表皮细胞、纤维母细胞等）经刺激而合成（一般是免疫细胞）、分泌的一类生物活性物质分泌的蛋白质，在体内广泛参与免疫调节及炎症反应、组织修复、刺激造血系统、刺激细胞的增殖与凋亡等重要生理活动，在抵抗外来病原及维持机体内环境平衡中均起重要作用。
细胞因子的作用方式：自分泌作用、旁分泌作用、内分泌作用。
细胞因子的作用特点：多效性、重叠性、协同性、拮抗性和双重性。
根据产生细胞因子的细胞种类不同分类：白细胞介素（interleukin, IL)、干扰素（interferon, IFN)、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor, TNF)、转化生长因子-β家族（transforming growth factor-β family, TGF-β family)、集落刺激因子（colony stimulating factor, CSF)、趋化因子（chemokinefamily)、生长因子（growth factor,GF）等。
细胞因子的检测方法一般分为生物学、分子生物学测定法及免疫学（重点介绍）
1、生物学测定法 其原理是根据细胞因子对特定的依赖性细胞株(即靶细胞)的促增殖作用,以增殖细胞中的DNA的合成或酶活性为指标,间接推算出细胞因子的活性单位,如对IL-1、IL-2等细胞因子活性的检测。亦可根据某些细胞因子对特定靶细胞的杀伤效应或对病毒的抑制作用进行测定,如对肿瘤坏死因子及干扰素的生物活性测定。
2、分子生物学测定法 目前采用的技术有各种印迹法、斑点杂交、原位杂交和PCR等。通过检测细胞内细胞因子的基因组成或mRNA量,推算出细胞因子的合成量。
3、免疫学检测法 其基本原理是将细胞因子作为抗原进行定量检测。如免疫斑点法、ELISA法、免疫印迹法和流式细胞仪等均已用于细胞因子的检测。
细胞因子的检测方法对比
1、酶联免疫吸附实验（ELISA）
原理：使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。由于酶的催化频率很高，故可放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。
优点：避免特异性抗体直接标记，便宜。
缺点：所需样本量多、每次仅能测定一项细胞因子、操作步骤和测定时间过长、酶联反应所致的人工假象
2、流式细胞仪（CBA）
原理：利用微小、分散的颗粒捕获液体待测物，并利用流式细胞仪检测类似“三明治”的颗粒——待测物复合体所散发的荧光，从而测定待测物的数量。
优点：所需样本量少、快速（实验6-8h可以完成）操作简便、灵敏度高、重复性好、高效（同一个样品可以同时检测多个因子）、安全、接近生物体的分析条件（全血检测保留细胞及生化微环境更准确反应了体内状况）。
❸ 细胞免疫功能检测常用有哪几种方法
细胞免疫（CMⅠ）是由多种细胞相互作用的结果。免疫细胞间相互作用导致多种细胞因子的释放。因此细胞功能测定不仅涉及T细胞的数量和功能与包括各类因子活性测定，因此评价机体的细胞免疫功能不仅程序复杂，且很难标准化。
一、迟发型过敏反应的体外检测方法
皮肤试验和接触性过敏的诱发是检测迟发型过敏反应（DTH）的两种常用方法。皮肤试验中诱发对曾经使病人致敏的抗原的再次应答，而接触性过敏是测试受者对从未接触过的物质发生致敏的能力。
1．皮肤试验 用皮肤试验诊断DTH，常用的抗原有结核菌纯蛋白衍生物（PPD）、腮腺炎病毒、念珠菌素等，在人类试验时在前臂皮内注射少量可溶性抗原，24～48小后，测量红肿硬结的大小，硬结直径大于10mm即被看作为阳性。表明受试者对该病原菌有了一定的细胞免疫能力，若皮试无反应，可用更高浓度的抗原重复试验，若仍无反应即为阴性，需排除皮试技术误差，也可能受试者从未接触过此抗原，也可能由于细胞免疫功能缺损，或由于细胞免疫功能缺损，或由于严重感染（麻疹、慢性播散性结核）造成的无反应性。
2．接触性过敏常应用低分子量化合物如二硝基氯苯（DNCB）诱生接触性过敏。化合物与皮肤蛋白质结合而导至DTH反应。在动物试验时，初次皮肤上涂抹DNCB后间隔7～10天再激发刺激，则皮肤出现即为阳性。此试验人类已不使用。
二、细胞免疫的体外检测方法
体外检测淋巴细胞的数量和功能，最易采集的是血标本，首先需分离或纯化淋巴细胞，一般使用萄聚糖-泛影葡胺配成比重为1.077的淋巴细胞分层液，当将血液重叠于淋巴细胞分层液之上离心时，由于红细胞（1.092）、多形核白细胞（1.090）、淋巴细胞（1.070）的比重不同而相互分开。淋巴细胞和单核细胞在血浆和分层液交界处形成一薄层。仔细分出这一薄层的细胞，其中淋巴细胞占80%，单核细胞占20%，淋巴细胞中T细胞占80%，B细胞占4%～10%，其作为非DT、非B细胞。
1．T细胞计数
（1）E花环法：人类T细胞表面有SRBC受体（CD2）能与SRBC结合形成玫瑰花环样结构，将经分层液分离现的RBM悬液与SRBC在含有血清的平衡盐水中混合，经37℃培养5～10分钟放4℃过夜，取细胞悬计数，外周血淋巴细胞中约70%～80%淋巴细胞结成花环即为T细胞。目前此方法已用来分离T细胞，而不用做T细胞计数。
（2）用单克隆抗体计数T细胞：将人的PBM分成三等份，分别用小鼠抗人CD3、CD4和CD8的单克隆抗体作第一抗体与细胞结合，再用FITC标记的兔抗小鼠IgG抗体作第二抗体进行间接免疫荧光染色，在荧光显微镜下或流式细胞仪检测结果，在PBM中被CD3抗体染上荧光的细胞称为CD3 细胞即总T细胞。正常人在PBM中T细胞占70%～80%。正常人的CD4 细胞和CD8 细胞之和应与CD3 细胞数一致。CD4 细胞与CD8 细胞的比值正常人约为2/1而艾滋病患者则比值小于1.7。
2．T细胞活化试验 T细胞能被非特异的物质称为有丝分裂原所激活而向淋巴母细胞转化。T细胞转化过程可伴随有DNA、RNA、蛋白质的合成增加，最图导致细胞分裂。在光学显微镜下可计数转化后的淋巴细胞数，也可用氚标记的胸腺嘧啶核苷（3HTdR）掺入正在分裂的淋巴细胞，用液闪测定仪检查掺入正在分裂的淋巴细胞，用液测量仪检查掺入的3H-TdR的多少确定淋巴细胞转化率。最近有一种不用同位素，又可用仪器测量的淋巴细胞增殖反应的检查法，称为MTT检测法，MTT是一种甲氮唑盐，它是细胞线粒体脱氢酶的底物，细胞内的酶可将MTT分解产生蓝黑色甲（fromazan）产物。该产物的多少与活性细胞数正相关。结果可用酶标检测仪（595mm）测量汇丰银行密度，做为MTT法的检查指标。此法的结果与3H-TdR掺入法平行，并能反应试验中的活细胞数。
3．细胞毒试验 TC细胞、NK细胞、LAK细胞、TIL细胞对其靶细胞有直接的细胞毒（杀伤）作用。常用的栓测细胞毒效应的方法是51Cr-Na2Cro4盐水溶液与靶细胞胞混合，于37℃培养1小时左右，51Cr即可进入靶细胞，与胞浆蛋白结合，洗去游离的51Cr后，即可得到51Cr标记的靶细胞，将待检细胞毒性的细胞与51Cr标记的靶细胞混合（比例约为50：1或100：1）靶细胞被杀伤越多，释放到上清液中的液游离的51Cr越多，且不能被其他细胞吸收。用γ射线测量仪检测上清液中的cpm值，即可计算出待检细胞杀伤活性的高低。
细胞毒试验检测Tc细胞效应功能是否健全，及经IgG介导的ADCC效应，或NK细胞在抗肿瘤免疫中的作用是有意义的。
4．混合淋巴细胞的反应（MIR） 是体外研究T细胞的较好的方法，双向MLR常被用来筛选骨髓移植的供体。来自不同供体的淋巴细胞分别与病人的淋巴细胞混合培养4～5天，在最后8小时掺入51TdR掺入法测T细胞的反应性。或用细胞毒法观察受刺激的T细胞与活的靶细胞混合（靶细胞来自与刺激细胞相同的个体）如果T细胞受刺激后产生了细胞毒T细胞，可杀死活的细胞，根据靶细胞释放51Cr的多少算出T细胞移动抑制因子）和LIF（白细胞移动抑制因子）来评估细胞免疫功能。近年来应用测定IL-2的免疫酶技术，操作简单，并能定量以取代了MIF和LIF的测定。单个核细胞与分裂原一起培养24小时，然后测定清液中的IL-2活性。在细胞免疫功能缺损时，特别是AIDS病人，IL-2分泌明显降低。而有些疾病，如多发性硬化、类风湿关节炎、移植排斥反应等病人体内血清中IL-2水平升高，表明病人T细胞活性增高。发生移植排斥反应的病人尿中IL-2也可升高。
也可用酶联免疫吸附试验测定各种体液中活化的T细胞脱落的IL-2受体（CD25），一般来说IL-2的水平和IL-2受体水平是平行的，IL-2和IL-2受体的检测可用于对某些疾病的监测，如移杆排斥、自身免疫病以及接受免疫抑制治疗的病人。
对体外培养的细胞进行细胞因子产生能力检测是检查细胞培养上清液中细胞因子的生物活性或抗原性。现已可用核酸杂交技术，即从组织中或细胞中提取RNA，与同位素或酶标记的该种细胞因子的cDNA探针作分子杂交试验，即印迹（dot blotting）或Northern印迹，若查出有某种因子的mRNA存在，即说明该细胞在所处培养条件下有产生某种细胞因子的能力。
❹ 细胞因子检测可以用哪些方法，简述其原理
细胞因子主要是指由内分泌细胞分泌的一类可以参与免疫应答的蛋白多肽。对于细胞因子的检测方法主要有三种：细胞生物学检测、免疫学检测和分子生物学检测。细胞因子的发现依赖于其生物学活性，因此，建立了生物分析法用于细胞因子的检测。随后，用于检测实验溶液(如组织培养上清液)中细胞因子的免疫分析法被建立，并不断用于实验室研究。但准确地、可重复地测定细胞因子具有一定困难，主要原因是众所周知的细胞因子的含量极低(大部分都是以pmol/L计)，同时存在着源于异嗜性抗体，类风湿因子以及特异的和非特异的细胞因子结合蛋白等[1，2] 的显着干扰。
❺ 如何用ELISA方法检测组织细胞因子
因为elisa方法是比较常见，也是比较成熟的检测组织细胞因子的方法哈
❻ 细胞内细胞因子的流式细胞怎样检测
胞内流式分析法是用抗细胞因子抗体与细胞表面或胞内特定亚群标志组合，即可检测不同细胞亚群细胞因子的分泌，同时采用特殊的化学与抗体选择，确保静止与无细胞因子分泌细胞的最小荧光背景。具有其它方法难以比拟的优点： 快速：流式定量检测细胞内细胞因子可在一天内完成，实验流程需6-8小时，实际操作时间为1-2小时，快速简便; 简便：无需组织培养，可以全血分析，无需分离PBMCs; 灵敏度高：高度灵敏的荧光标记与检测系统; 高效：可以在同一个细胞内同时检测两种或更多种细胞因子，也可根据细胞免疫表型区分分泌细胞因子的细胞的亚型，进行多参数相关分析; 安全：减少样本处理与生物源性污染 接近生物体的分析条件：全血检测保留细胞及生化微环境更准确反映了体内状况。 生物帮上面有这方面的详细内容，SDS提取法 http://www.bio1000.com/experiment/hesuan/241857.html
❼ 常用的细胞因子检测方法有哪些
（1）生物学检测法：又称生物活性检测，是根据细胞因子特定的生物活性而设计的检测法。生物活性检测法又可分为： 1、细胞增殖法； 2、靶细胞杀伤法； 3、细胞因子诱导的产物分析法； 4、细胞病变抑制法。
（2）免疫学检测法：细胞因子均为蛋白或多肽，具有较强的抗原性，可利用抗原抗体特异性反应的特性，用免疫学技术定量检测细胞因子，常用的方法包括ELlSA、RlA及免疫印迹法
（3）分子生物学方法：目前公认的细胞因子的基因均已克隆化，较容易地得到某一细胞因子cDNA探针或根据已知的核苷酸序列人工合成寡聚核苷酸探针。常使用斑点杂交、Northernblot、逆转录PCR，细胞或组织原位杂交等。具有灵敏、快速等优点，甚至从l～10个细胞中就可检出其中的特异mRNA
❽ 请教通过何种方法检测细胞因子，如何知道细胞
细胞因子主要是指由内分泌细胞分泌的一类可以参与免疫应答的蛋白多肽。对于细胞因子的检测方法主要有三种：细胞生物学检测、免疫学检测和分子生物学检测。
细胞因子的发现依赖于其生物学活性，因此，建立了生物分析法用于细胞因子的检测。随后，用于检测实验溶液(如组织培养上清液)中细胞因子的免疫分析法被建立，并不断用于实验室研究。但准确地、可重复地测定细胞因子具有一定困难，主要原因是众所周知的细胞因子的含量极低(大部分都是以pmol/L计)，同时存在着源于异嗜性抗体，类风湿因子以及特异的和非特异的细胞因子结合蛋白等[1，2] 的显着干扰。
❾ 如何检测组织中炎症细胞因子
检测细胞因子的方法主要有生物学检测法、免疫学检测法和分子生物学检测法。
1、生物学检测法
2、免疫学检测法
3、分子生物学方法