多肽检测方法

㈠ 常用于蛋白质多肽链N端.C端测定的方法有几种基本原理是什么

(1)N-末端测定 A.二硝基氟苯法(FDNB，DNFB)：1945年Sanger提出此方法，是他的重要贡献之一。DNP-氨基酸用有机溶剂抽提后，通过层析位置可鉴定它是何种氨基酸。Sanger用此方法测定了胰岛素的N末端分别为甘氨酸及苯丙氨酸。B.氰酸盐法：1963年Stank及Smyth介绍了一种测定N末端的新方法，步骤如下：由于乙内酰脲氨基酸不带电荷，因此可用离子交换层析法将它与游离氨基酸分开，分离所得的乙内酰脲氨基酸再被盐酸水解，重新生成游离的氨基酸，鉴别此氨基酸即可了解N-末端是何种氨基酸。C.二甲基氨基萘磺酰氯法：1956年Hartley等报告了一种测定N-末端的灵敏方法，采用1-二甲基氨基萘-5-磺酰氯，简称丹磺酰氯。它与游离氨基末端作用，方法类似于Sanger的DNFB法，产物是磺酰胺衍生物。丹磺酰链酸具有强烈的黄色荧光。此法优点为灵敏性较高(比FDNB法提高100倍，样品量小于1毫微克分子)及丹磺酰氨基酸稳定性较高(对酸水解稳定性较DNP氨基酸高)，可用纸电泳或聚酰胺薄膜层析鉴定。(2)C-末端分析A.肼解法：这是测定C-末端最常用的方法。将多肽溶于无水肼中，100℃下进行反应，结果羧基末端氨基酸以游离氨基酸状释放，而其余肽链部分与肼生成氨基酸肼。这样羧基末端氨基酸可以采用抽提或离子交换层析的方法将其分出而进行分析。如果羧基末端氨基酸侧链是带有酰胺如天冬酰胺和谷氨酰胺，则肼解时不能产生游离的羧基末端氨基酸。此外肼解时注意避免任何少量的水解，以免释出的氨基酸混淆末端分析。B.羧肽酶水解法：羧肽酶可以专一性地水解羧基末端氨基酸。根据酶解的专一性不同，可区分为羧肽酶A、B和C。应用羧肽酶测定末端时，需要事先进行酶的动力学实验，以便选择合适的酶浓度及反应时间，使释放出的氨基酸主要是C末端氨基酸。

㈡ 常用于蛋白质多肽链N端.C端测定的方法有几种

常用于蛋白质多肽链N端测定的方法：

1、二硝基氟苯法（FDNB法）

2、二甲基氨基萘磺酰氯法（DNS－Cl法）

3、异硫氰酸笨酯法（Edman法）

常用于蛋白质多肽链C端测定的方法

1、肼解法

2、还原法

3、羧肽酶法

(2)多肽检测方法扩展阅读：

多肽合成是一个固相合成顺序，一般从N端即氨基端向C端即羧基端合成。过去的多肽合成是在溶液中进行的称为液相合成法。

液相合成基于将单个N-α保护氨基酸反复加到生长的氨基成份上，合成一步步地进行， 通常从合成链的C端氨基酸开始，接着的单个氨基酸的连接通过用DCC，混合炭酐， 或N-carboxy酐方法实现。

㈢ 蛋白质多肽链N端测定的方法及基本原理

1 多肽链的拆分。由多条多肽链组成的蛋白质分子，必须先进行拆分。几条多肽链借助非共价键连接在一起，称为寡聚蛋白质，如，血红蛋白为四聚体，烯醇化酶为二聚体；可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍处理，即可分开多肽链(亚基).
2 测定蛋白质分子中多肽链的数目。通过测定末端氨基酸残基的摩尔数与蛋白质分子量之间的关系，即可确定多肽链的数目。
3 二硫键的断裂。几条多肽链通过二硫键交联在一起，可在8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍存在下，用过量的-巯基乙醇处理，使二硫键还原为巯基，然后用烷基化试剂保护生成的巯基，以防止它重新被氧化。
二硫键的切割与保护（元素后数字为下标）
a 过甲酸〔performic acid〕 不可逆
－CH2SO3H
b、还原＋氧化 不可逆
[ 巯基乙醇，DTT ] ＋ 碘乙酸等
－S-CH2-COOH
c、亚硫酸分解〔Sulfitolysis〕 可逆
－R1-S-S-R2 ＋ HSO3-
R1-S- + R2-S-SOH3
可以通过加入盐酸胍的方法解离多肽链之间的非共价力；应用过甲酸氧化法或巯基还原法拆分多肽链间的二硫键。
巯基（-SH）的保护4 测定每条多肽链的氨基酸组成，并计算出氨基酸成分的分子比（如右图）
5 分析多肽链的N-末端和C-末端
多肽链端基氨基酸分为两类：N-端氨基酸(amino-terminal)和C-端氨基酸(Carboxyl-terminal) 。在肽链氨基酸顺序分析中，最重要的是N-端氨基酸分析法。N末端分析法（Sanger法；Edman法；DNS-Cl；酶降解法），C末端分析法（肼解法；酶降解法；硼氢化锂法）。
6 多肽链断裂成多个肽段。可采用两种或多种不同的断裂方法将多肽样品断裂成两套或多套肽段或肽碎片，并将其分离开来。
7 测定每个肽段的氨基酸顺序
8 确定肽段在多肽链中的次序。
利用两套或多套肽段的氨基酸顺序彼此间的交错重叠，拼凑出整条多肽链的氨基酸顺序。
9 确定原多肽链中二硫键的位置
一般采用胃蛋白酶处理没有断开二硫键的多肽链，再利用双向电泳技术分离出各个肽段，用过甲酸处理后，将可能含有二硫键的肽段进行组成及顺序分析，然后同其它方法分析的肽段进行比较，确定二硫键的位置。

㈣ 多肽含量的测定有哪些方法

多肽含量的测定方法与有些蛋白质含量的测定方法相同,但并非所有蛋白质含量的测定方法都适用于多肽的含量测定,本文介绍了几种常见的多肽含量测定的方法:①双缩脲法;②Folin—酚试剂法;③OPA法(邻苯二甲醛法);④紫外吸收法,并且进行了比较。

㈤ 蛋白分中多肽含量测定方法有哪些不甚感激！

总分子量除平均分子质量.能估计个大概.
精确的测定方法:
1\测定初质量
2\蛋白酶,肽酶水解
3\提纯氨基酸
4\测质量差量
5\除水的相对分子质量
6\乘以阿伏加德罗常数
(怎么最后两句好象废话....)

㈥ 检测多肽浓度有什么方法

检测多肽浓度有什么方法
多肽的分离纯化，一般有固定的思路。比如固相合成的多肽一般采用，XD7HP树脂脱酸（THF）,然后SKP-10-1300层析填料层析纯化，纯度99%以上，然后脱酸脱盐冻干就行了,如果纯化不到想要的纯度在想其他办法,不过一般没有问题。比如胸腺法新，奥曲肽，卢伐必定等。 如果是细菌产的多肽如胰岛素 生长抑素等，那就得进行前处理，将产品进行粗提，得到粗品后。一般采用，破菌，离心沉淀，包涵体溶解,等电沉淀, 超滤 ,上XD7HP树脂，除掉小分子多糖，缓冲盐，,然后SKP-10-1300层析填料层析纯化，纯度99%以上，然后脱酸脱盐冻干就行了。当然有的要用到到离子交换填料。

㈦ 测定多肽氨基酸的最好方法

是测氨基酸的序列吧…
1.先测一下有几条链。根据N-末端/C-末端的数目和蛋白质的相对分子质量确定。
2.把多肽链拆开。
3.如果有二硫键就断开二硫键。
4.把每条肽链的序列测出来。

你所说的最好方法应该具体到每一步吧，对不同的氨基酸
要具体情况具体分析啊

㈧ 多肽最好的检测方法

抗原抗体杂交技术
将待检测多肽视为抗原，选用特定的抗体，根据抗体的特异性结合，可检测目的多肽是否存在。

㈨ 请教多肽结构确证的方法问题

化学的方法是埃德曼降解法,这种方法是瑞典科学家埃德曼创立的连续测定蛋白质或肽链N端氨基酸残基序列的经典方法.用异硫氰酸苯酯(PTH)等与多肽反应,逐个水解N端氨基酸残基,依次生成各种PTH-氨基酸,层析鉴定PTH-氨基酸就可从N端逐个确定被测肽段的氨基酸残基排列顺序. 对于含有氨基酸残基较多的蛋白质,一般采用质谱的方法.质谱轰击蛋白质是指称为碎片,根据碎片在电场中的运动情况确定质荷比,在根据计算机分析和数据库确定蛋白质的氨基酸序列.

㈩ 多肽分子量分布测定

一般检测多肽的分子量可以用SDS-PAGE凝胶电泳或者色谱法.电泳比较简单,便宜,但是范围有限,而且对疏水,过大过小的肽段测不出.色谱可以测分子量还能测序,范围更广.