细胞增殖检测方法

⑴ EdU 标记 细胞增殖检测原理 是怎么样的

EdU可以在DNA复制的时候掺入到新合成的DNA链中，通过一个“Click”反应，把荧光基团标记到新合成的含有EdU的DNA上面，这样我们就能通过检测荧光而知道细胞的增殖情况了！

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⑵ 怎样检测细胞的生长，存活及增殖

BrdU标记法
1．细胞以1.5×105/ml细胞数接种于直径35ml培养皿中（内放置一盖玻片），培养1天，用含0.4％ FCS培养液同步化3天，使绝大多数细胞处于G0期。
2．终止细胞培养前，加入BrdU（终浓度为30μg/L），37℃，孵育40min。
3．弃培养液，玻片用PBS洗涤3次。
4．甲醇/醋酸固定10min。
5．经固定的玻片空气干燥，0.3％H2O2-甲醇30min灭活内源性氧化酶。
6．5％正常兔血清封闭。
7．甲酰胺100℃，5min变性核酸。
8．冰浴冷却后PBS洗涤，加1抗即抗小鼠BrdU单抗（工作浓度1：50），阴性对照加PBS或血清。
9．按ABC法进行检测，苏木素或伊红衬染，在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及BrdU阳性细胞数，计算标记指数（LI）。
结晶紫法
1．体外细胞培养结束后，去培养液，加入11％的戊二醛固定，置于振荡器上摇20min。
2．固定细胞用去离子水洗涤至戊二醛液洗净。
3．置空气或烘箱37℃彻底干燥。
4．加入0.1％的结晶紫液对细胞染色，振摇30min。
5．用蒸馏水洗涤，至多余的结晶紫液冲洗干净。
6．置空气或37℃烘箱中彻底干燥。
7．加入10％的乙酸对细胞吸收的结晶紫进行提取。
8．1h后在酶标仪上测定光吸收度，波长595nm。
酸性磷酸酶法
1．96孔细胞培养板中培养细胞，去培养液。用0.01mol/L PBS洗涤1次（如为悬浮细胞则用离心洗涤）。
2．去洗涤液后加入磷酸酶底物100μl/孔。
3．37℃，孵育1～4h。
4．加入0.1mol/L氢氧化钠10μl/孔。
5．在多孔酶标仪上405nm处测光吸收度，将细胞培养板其中不含细胞，同样处理过的一孔作为空白对照，所测的每孔光吸收度可间接反应每孔中的细胞数。如在同样条件下作一细胞数的系列标准对照，以细胞数为X轴，光吸收度为Y轴，可作直线回归，可推算出每孔中的细胞。

⑶ 细胞增殖检测有哪些指标可以检测

速率 个数 计数检测

⑷ 如何检测细胞的增殖活性，简要描述实验步骤

细胞增殖检测方法 细胞增殖检测通常是检测分裂中的细胞数量或者细胞群体发生的变化。目前细胞增殖检测主要分为五类：DNA合成检测、代谢活性检测、细胞数量检测、细胞增殖相关抗原检测和ATP 浓度检测。在这些方法中作何选择，主要取决于所研究的细胞类型和研究方案。 1. DNA合成检测 这是目前实验室中检测细胞增殖最准确可靠的方式。该法是将放射性标记的3H-胸腺嘧啶与细胞一同孵育，这样新增殖细胞的DNA中就会掺入放射性标记，经洗脱后可用闪烁计数器检测。该方法耗时长，而且有个明显的弊端就，即使用和处理放射性物质既麻烦又不安全。不过，可以使用5-溴-2-脱氧尿苷BrdU来进行类似实验，因为BrdU也同样可以掺入到新合成的DNA中。但这样就需要进行额外的实验步骤，先孵育特异性BrdU单抗和带标记的二抗，然后再进行比色法、化学发光检测或荧光信号检测等步骤。该方法的优点就是不再需要放射性物质。BrdU标记很适合免疫组化IHC、免疫细胞化学IC、细胞内ELISA、流式细胞分析和高通量筛选。 2. 代谢活性检测 检测细胞群体的代谢活性也可以反映细胞增殖的情况。在细胞增殖过程中脱氢酶的活性会增加，因此其底物四唑盐或Alamar Blue在代谢活跃的细胞环境中会逐渐减少，形成能够改变培养基颜色的甲臜染料。可以通过低配置或高配置的分光光度计和酶标仪来读取含染料培养基的吸光度，从而衡量细胞的代谢活性，检测细胞增殖的情况。 四种最常见的四唑盐是：MTT、XTT、MTS和WST1。MTT在标准的细胞培养基中是不溶的，而且其生成的甲臜晶体需要溶解在DMSO或者异丙醇中。因此，MTT主要作为终点检测方法。其他三种盐与Alamar Blue一样，都是可溶且无毒。它们可以作为连续监控手段来跟踪细胞增殖的动态改变。其中XTT的效率较低，需要添加额外的因子；WST1更灵敏有效，与其他盐相比能够更快显色；Alamar Blue的灵敏度也很高，只要微孔板的孔中有100个细胞就能够检测到。四唑盐和Alamar Blue氧化还原染料能够用于多种仪器和高通量研究，非常方便。它们适用的检测仪器包括：标准分光光度计、荧光分光光度计和酶标仪等。

⑸ BrdU检测细胞增殖的方法有哪些

细胞增殖的检验方法：BrdU标记法

1、细胞以1.5×105 /ml细胞数接种于直径35ml培养皿中（内放置一盖玻片），培养1天，用含0.4％FCS培养液同步化3天，使绝大多数细胞处于G0 期。

2、终止细胞培养前，加入BrdU（终浓度为30μg/L），37℃，孵育40min。

3、弃培养液，玻片用PBS洗涤3次。

4、甲醇/醋酸固定10min。

5、经固定的玻片空气干燥，0.3％H2 O2 -甲醇30min灭活内源性氧化酶。

6、5％正常兔血清封闭。

7、甲酰胺100℃，5min变性核酸。

8、冰浴冷却后PBS洗涤，加1抗即抗小鼠BrdU单抗（工作浓度1：50），阴性对照加PBS或血清。

9、按ABC法进行检测，苏木素或伊红衬染，在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及BrdU阳性细胞数，计算标记指数（LI）。

⑹ 求助对于T细胞增殖的检测方法

懂爱的女人”那默默无悔给予他极大支持和鼓励的原因,我想,那就是爱情了.
完美的爱情是紧密连接两个异性个体情感的纽带.两个人各自的道德修养和传统礼教裁剪成这条纽带的宽度.各自性情和文化修为浸染着这条纽带的颜色.不同的命运和不同的情感经历形成略有分歧地见解,打成了纽带上小小的结,彼此纠纠缠缠的牵伴一生.
爱情初来时,它总是半遮半掩的,带有诡秘的诱惑的色彩和波折性的骚动.它表现得若即若离,如玉生烟,如风剪水.这无疑是这条纽带尚未形象化的最初的雏形了.更为确切地说,那是爱情中最为初始的感受.这样的感

⑺ MTS法测定细胞增殖的原理该方法与MTT法有何不同

MTS法原理：被测物质溶液的颜色或加入显色剂后生成的有色溶液的颜色，颜色深度和物质含量成正比，则根据光被有色溶液吸收的强度，即可测定溶液中物质的含量。

跟MTT法区别如下：

一、指代不同

1、MTT法：利用有色物质对特定波长光的吸收特性来进行定性分析的一种方法。

2、MTS法：是一种检测细胞存活和生长的方法。

二、原理不同

1、MTT法：为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。

2、MTS法：以生成有色化合物的显色反应为基础，比色分析对显色反应的基本要求是：反应应具有较高的灵敏度和选择性，反应生成的有色化合物的组成恒定且较稳定，它和显色剂的颜色差别较大。选择适当的显色反应和控制好适宜的反应条件，是比色分析的关键。

三、用途不同

1、MTT法：方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。

2、MTS法：采用具有分光系统(单色器)及检测器的分光光度计，使测定结果准确、省时，选择性好。

⑻ 检测细胞增殖的实验方法的选择

1、灵敏度高，增殖是DNA才复制增多，检测DNA含量变化最可靠。

⑼ 检测细胞增殖的方法有哪些

一、MTT比色：
MTT比色是一种目前被广泛采用的检测细胞生长和存活的方法，其原理是外源性MTT（四唑盐）可被活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原成难溶的蓝紫色结晶物并沉淀在细胞中，而死细胞无此功能，DMSO（二甲基亚砜）能溶解细胞中的紫色结晶物，用酶联检测仪在490nm波长处检测其光密度值，可间接反映活细胞数量。在一定范围内，MTT结晶物形成的量与细胞数成正比，此方法已广泛用于检测细胞活力、观察细胞生长等方面，具有灵敏度高、重复性好、操作简便、经济、快速、易自动化、无放射性污染等特点，与细胞计数有良好的相关性。
二、rdU标记法
1．细胞以1.5×105/ml细胞数接种于直径35ml培养皿中（内放置一盖玻片），培养1天，用含0.4％ FCS培养液同步化3天，使绝大多数细胞处于G0期。
2．终止细胞培养前，加入BrdU（终浓度为30μg/L），37℃，孵育40min。
3．弃培养液，玻片用PBS洗涤3次。
4．甲醇/醋酸固定10min。
5．经固定的玻片空气干燥，0.3％H2O2-甲醇30min灭活内源性氧化酶。
6．5％正常兔血清封闭。
7．甲酰胺100℃，5min变性核酸。
8．冰浴冷却后PBS洗涤，加1抗即抗小鼠BrdU单抗（工作浓度1：50），阴性对照加PBS或血清。
9．按ABC法进行检测，苏木素或伊红衬染，在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及BrdU阳性细胞数，计算标记指数（LI）。
三、结晶紫法
1．体外细胞培养结束后，去培养液，加入11％的戊二醛固定，置于振荡器上摇20min。
2．固定细胞用去离子水洗涤至戊二醛液洗净。
3．置空气或烘箱37℃彻底干燥。
4．加入0.1％的结晶紫液对细胞染色，振摇30min。
5．用蒸馏水洗涤，至多余的结晶紫液冲洗干净。
6．置空气或37℃烘箱中彻底干燥。
7．加入10％的乙酸对细胞吸收的结晶紫进行提取。
8．1h后在酶标仪上测定光吸收度，波长595nm。
四、酸性磷酸酶法
1．96孔细胞培养板中培养细胞，去培养液。用0.01mol/L PBS洗涤1次（如为悬浮细胞则用离心洗涤）。
2．去洗涤液后加入磷酸酶底物100μl/孔。
3．37℃，孵育1～4h。
4．加入0.1mol/L氢氧化钠10μl/孔。
5．在多孔酶标仪上405nm处测光吸收度，将细胞培养板其中不含细胞，同样处理过的一孔作为空白对照，所测的每孔光吸收度可间接反应每孔中的细胞数。如在同样条件下作一细胞数的系列标准对照，以细胞数为X轴，光吸收度为Y轴，可作直线回归，可推算出每孔中的细胞。

⑽ 检测细胞增殖的种类以及方法步骤

主要有四种，方法步骤如下

一、胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）渗入法
胸腺嘧啶核苷（TdR）是DNA特有的碱基，也是DNA合成的必需物质。用同位素3H标记TdR即3H-TdR作为DNA合成的前体能掺入DAN合成代谢过程，通过测定细胞的放射性强度，可以反映细胞DAN的代谢及细胞增殖情况。但是具有放射性。
二、MTT检测法
MTT检测法主要反映细胞的能量代谢，是检测细胞增殖活力的一种简便准确的方法，其原理是在活细胞生长和增殖过程中，线粒体内的脱氢酶可将黄色的MTT分解成兰紫色的甲（Formazan），生成的甲量的多少与细胞的数量和细胞的活力成正比
三、羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）检测法
羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）是一种可穿透细胞膜的荧光染料，具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团，使C E成为一种良好的细胞标记物。CFSE进入细胞后可以不可逆地与细胞内的氨基结合偶联到细胞蛋白质上。当细胞分裂时，CFsE标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，因此其荧光强度是亲代细胞的一半。这样，在一个增殖的细胞群中，各连续代细胞的荧光强度呈对递减，利用流式细胞仪在488nm激发光和荧光检测通道可对其进行分析。
四、Br检测法
Br中文全名5-溴脱氧尿嘧啶核苷，为胸腺嘧啶的衍生物，可代替胸腺嘧啶在DNA合成期（S期），活体注射或细胞培养加入，而后利用抗Br单克隆抗体，ICC染色，显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物，双重染色，可判断增殖细胞的种类，增殖速度，对研究细胞动力学有重要意义。