双抗检测方法

㈠ 双抗涂层检测在哪里

我单位可以做涂料检测，有具体的标准吗？

㈡ 核酸检测与双抗检测，这两者之间究竟有何区别

核酸检测与双抗检测，这两者之间究竟有何区别？

想要知道两者之间的区别，首先我们要先从定义方面去区分一下！

核酸检测——具有早期诊断、灵敏度和特异性高等特点，是确诊新冠肺炎的“金标准”，目前使用最广泛的是实时荧光定量RT-PCR技术。一般检测位于病毒ORF1ab和N基因上的两个靶标，同一份标本需满足双靶标阳性或重复检测为单靶标阳性或两种标本同时满足单靶标才能确认SARS-CoV-2病毒核酸阳性。

核酸检测与双抗检测两者相比较，试剂原理与检测样本类型、检测步骤方面都存在一些差别！这里我们就从它们的定义方面简单介绍一下。

㈢ 自身抗体的检测方法有哪些

1、抗核抗体检测

抗核抗体是一组将自身真核细胞的各种细胞核成分作为靶抗原的自身抗体的总称，主要是IgG，其次是IgM和IgA，无器官和种属特异性。ANA在大多数自身免疫性疾病中均可呈阳性，正常老年人也可有低滴度的ANA。ANA检测在临床自身免疫病诊断与鉴别诊断中是一个重要的筛查试验。

2、类风湿因子

类风湿因子是变性lgG刺激机体产生的一种自身抗体，主要存在于类风湿关节炎患者的血清和关节液内。主要为lgM型，也有lgG、lgA、lgD和IgE型。

3、抗中性粒细胞胞浆抗体

抗中性粒细胞胞浆抗体是指与中性粒细胞及单核细胞胞浆成分发生反应的抗体。当中性粒细胞受抗原刺激后，胞浆中的α-颗粒释放蛋白酶-3、髓过氧化物酶等物质，刺激机体而产生ANCA。

(3)双抗检测方法扩展阅读

自身抗体的产生原因：

人体的生长、发育和生存有完整的自身免疫耐受机制的维持，正常的免疫反应有保护性防御作用，即对自身组织、成分不发生反应。—旦自身耐受的完整性遭到破坏，则机体视自身组织、成分为“异物”，而发生自身免疫反应，产生自身抗体。

正常人体血液中可以有低滴度的自身抗体，但不会发生疾病，但如果自身抗体的滴度超过某—水平，就可能对身体产生损伤，诱发疾病。自身免疫性疾病中有许多自身抗体，其中最重要的是抗核抗体。

㈣ 为什么双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法

1）将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。 2） 加受检标本，保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。 洗涤除去其他未结合物质。 3） 加酶标抗体，保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合 的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。 4） 加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过比色，测知标本中抗原的量。 在临床检验中，此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、 AFP、hCG等。只要获得针对受检抗原的异性抗体，就可用于包被固相载体和制备酶结合 物而建立此法。如抗体的来源为抗血清，包被和酶标用的抗体最好分别取自不同种属的动 物。如应用单克隆抗体，一般选择两个针对抗原上不同决定簇的单抗，分别用于包被固相 载体和制备酶结合物。这种双位点夹心法具有很高的特异性，而且可以将受检标本和酶标 抗体一起保温反应，作一步检测。 在一步法测定中，当标本中受检抗原的含量很高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标 抗体结合，而不再形成夹心复合物。类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象，此时反应 后显色的吸光值（位于抗原过剩带上）与标准曲线（位于抗体过剩带上）某一抗原浓度的 吸光值相同（参见1.3.2，图1-4），如按常法测读，所得结果将低于实际的含量，这种现 象被称为钩状效应（hook effect），因为标准曲线到达高峰后呈钩状弯落。钩状效应严重 时，反应甚至可不显色而出现假阴性结果。因此在使用一步法试剂测定标本中含量可异常 增高的物质（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）时，应注意可测范围的最高值。用 高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应。 假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇，例如HBsAg的a决定簇，也可 用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物。但在HBsAg的检测中应注意亚型 问题，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4个亚型，虽然每种亚型均有相同的a决定簇的反应 性，这也是用单抗作夹心法应注意的问题。 双抗体夹心法测抗原的另一注意点是类风湿因子（RF）的干扰。RF是一种自身抗体，多为IgM型，能和多种动物IgG的Fc段结合。用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有RF，它可充当抗原成份，同时与固相抗体和酶标抗体结合，表现出假阳性反应。采用F（ab'）或Fab片段作酶结合物的试剂，由于去除了Fc段，从而消除RF的干扰。 双抗体夹心法ELISA试剂是否受RF的影响，已被列为这类试剂的一项考核指标。 双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心。

㈤ HIV-抗体检测方法的确认实验

免疫印迹试验（WB）、条带免疫试验（LIATEK HIVⅢ）、放射免疫沉淀试验（RIPA）及免疫荧光试验（IFA）。国内常用的确认试验方法是WB。
(一_免疫印迹实验(westernblot，WB)是广泛用于许多传染病诊断的实验方法，就HIV的病原学诊断而言，它是首选的用以确认HIV抗体的确认实验方法，WB的检测结果常常被作为鉴别其他检验方法优劣的“金标准”。
确认试验流程:
有HIV-1/2混合型和单一的HIV-1或HIV-2型。先用HIV-1/2混合型试剂进行检测，如果呈阴性反应，则报告HIV抗体阴性；如果呈阳性反应，则报告HIV-1抗体阳性；如果不满足阳性标准，则判为HIV抗体检测结果不确定。如果出现HIV-2型的特异性指示条带，需用HIV-2型免疫印迹试剂再做HIV-2的抗体确认试验，呈阴性反应，报告HIV-2抗体阴性；呈阳性反应则报告HIV-2抗体血清学阳性,并将样品送国家参比实验室进行核酸序列分析，
WB的敏感性一般不低于初筛实验，但它的特异性很高，这主要是基于HIV不同抗原组分的分离以及浓缩和纯化，能够检测针对不同抗原成分的抗体，因而能够用WB方法鉴别初筛实验的准确性。从WB确认试验结果看出，初筛试验尽管选择质量较好的试剂，如第三代ELISA，仍会有假阳性出现，必须通过确认试验才能得出准确结果。
(二)免疫荧光实验(IFA)
IFA法经济、简便、快速，曾被FDA推荐用于WB不确定样品的诊断。但需要昂贵的荧光显微镜，需要受过良好训练的技术人员、观察和解释结果易受主观因素的影响，结果不宜长期保存，IFA不宜在一般的实验室开展和应用。
HIV抗体确证试验结果报告
HIV抗体确证试验结果用附表3报告。
（1）符合HIV-1抗体阳性判断标准，报告“HIV-1抗体阳性（+）”，并按规定做好检测后咨询、保密和疫情报告工作。符合HIV-2抗体阳性判断标准，报告“HIV-2抗体阳性（+）”，并按规定做好检测后咨询、保密和疫情报告工作。
（2）符合HIV抗体阴性判断标准，报告“HIV抗体阴性（－）”。如疑似“窗口期”感染，建议进一步做HIV核酸检测，尽早明确诊断。
（3）符合HIV抗体不确定判断标准，报告“HIV抗体不确定（±）”，在备注中应注明等待“4周后复检”。

㈥ 我是做ELISA实验的初学者，最近在建立双抗体夹心法的检测方法，不知道如何确定包被浓度和抗原浓度，谢谢！

你是不知道包被的浓度还是不知道怎样配治包被液啊？
我这里有份ELISA的实验过程。不过是除掉前两部的。
1、 加被检抗原（重组蛋白或自然样品）：用稀释液（DS01、AS01、AS02、AS03、AS04）将被检抗原按实验设计稀释，每孔100µl，同时用稀释液作空白对照。封板膜封板，室温放置两小时。

2、 洗涤：到尽板孔中的液体，加满洗涤液（WS03），静止放十秒，洗四次，最后在毛巾或吸水纸上拍干板子：

3、 加检测抗体：将生物素标记的检测抗体稀释适当浓度（稀释液DS01），每孔100 µl封板膜封板，室温放置一小时：

4、 洗涤：到尽板孔中的液体，加满洗涤液（WS03），静止放十秒，洗四次，最后在毛巾或吸水纸上拍干板子：

5、 加亲和素-辣根过氧化酶（HRP）稀释适当浓度（稀释液HD01）每孔100µl，封板膜封板，室温放置30分钟：

6、 加底物：新鲜配制的四甲基联苯胺溶液（TMB），每孔100µl，室温暗处放置30分钟：

7、 加终止液（SS01）：每孔100µl，立即读值：

8、 观察结果：用酶标仪记录450nm读数.

㈦ 双抗检测非阴是什么意思

双抗是一种治疗措施，指的是用两种药物联合抗血小板治疗，相对于双抗治疗还有一种治疗措施，就是单抗，指的是单一用一种药物抗血小板治疗。临床上建议抗血小板药物治疗的选择，以单一的一种药物治疗为主，不建议常规应用两种药物联合抗血小板治疗。

㈧ 为什么双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法

双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心。那么，为什么双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法?
1、将特异性抗体与固相载体联结，形成固相抗体。洗涤除去未结合的抗体及杂质。
2、加受检标本，保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合，形成固相抗原抗体复合物。 洗涤除去其他未结合物质。
3、加酶标抗体，保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合 的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。
4、 加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。

㈨ 抗体效价的检测方法

多采免疫双向扩散法
【基本原理】
*指抗原和抗体在同一凝胶内都扩散，彼此相遇后形成特异性的沉淀线。
-将抗原与抗体分别加入同一凝胶板中两个相隔一定间距的小孔内，使两者进行相互扩散，当抗原抗体浓度之比相适宜时，彼此相遇形成一白色弧状沉淀线。
*优缺点：简便，但敏感性较低，易出现假阴性结果。
免疫双向扩散法的操作步骤
*将玻璃板用水洗净后用75%乙醇冲洗，晾干后放在水平台上备用。
*将1%agar 融化后，置56℃水浴。
*在玻璃板上铺胶，约1.5mm 厚，凝固后打孔(直径 3rnm)，孔间距10mm。
l 抗血清(抗体预先作系列倍比稀释即ml 抗原样品，周围孔内每孔加5m*中心孔加5 1:2、1:4、1:8、1:16、1:32等比例)。
*凝胶板置湿盒内，室温扩散24h。
*观察结果。
凝聚胺法测定孕妇血清IgG抗-A（抗-B）效价的方法待检血清与0.2 mol/L 2?硫基乙醇(2?Me)在试管内等量混合，放入37℃水浴1 h以破坏血清中的IgM抗体，吸取处理后的血清用生理盐水倍比稀释，稀释度分别为2、4、8、16、32、64、128、256、512、1 024，然后每管加入相应的3%～5%红细胞悬液，置37℃水浴30 min，观察是否凝集，不凝集者用生理盐水洗涤3次，然后加入低离子盐水介质(LIM液)，混匀，滴入2滴凝聚胺，混匀后3 000 r/min离心30 s，扣摇肉眼可见明显的凝集(无凝集者须重做)，再加入2滴重悬液，轻摇，观察凝集是否消失，凝集1 min内不消失者表示受检者血清中含有IgG型抗?A(抗?B)。
抗体效价检测的其它方法
*环状沉淀试验，需较多的抗血清，现已很少用；
*对流免疫电泳，比琼脂免疫双扩散法敏感，较简便、实用；
*酶联免疫吸附试验 (ELISA)。
通常抗体效价低于1：128是没有问题的，有些孕妇高达1：256以上，而且抗体效价最好1个月查上一次，有时候会有所变化。

㈩ 疫情期间什么是双抗检测

目的建立一种高特异性、敏感性的ELISA方法检测人布鲁氏菌抗原。方法应用研制的针对羊布鲁氏菌O链M抗原的单克隆抗体2D10和牛布鲁氏菌O链A抗原的单克隆抗体4B8建立了用于检测人布鲁氏菌抗原的双抗夹心ELISA方法。结果经检验该方法不与大肠杆菌O157、小肠结肠炎耶尔森氏菌O9及鼠伤寒沙门氏菌发生交叉反应,具有较好的重复性,对阳性样品的检测ELISA与SAT、分离培养的符合率均为100%。结论建立了高特异性、敏感性的检测人布鲁氏菌抗原的ELISA方法