组胺检测方法

㈠ 组织或细胞中组胺量如何检测除了ELISA外的方法

荧光分析法 气相色谱法

㈡ 组胺检测中为什么加入三氯乙酸

水产品中组胺用正戊醇提取，遇偶氮试剂显橙色，与标准系列比较定量。组胺是水产品中游离的组氨酸在组氨酸脱羧酶作用下，发生脱羧反应而形成的一种胺类物质。脱羧酶来自一些含有组氨酸脱羧酶的微生物，如某些肠杆菌、弧菌属等，其中最重要的是摩根变形杆菌和组胺无色杆菌。当水产品受到这些细菌污染后，会产生大量组胺，从而反映出水产品受微生物污染的程度。

㈢ 组胺的检测方法除分光光度法之外还有哪些，试述其检测原理

测定鱼粉中的组胺含量通常有两种方法。一是AOAC的偶氮试剂比色法，用正戊醇提取鱼粉中的组胺，遇偶氮试剂（对硝基苯胺的盐酸溶液）呈橙色，使用分光光度计，定量分析。二是荧光分光光度计或荧光检测器法测定。这两种方法均不同程度受鱼粉中杂质的干扰，定量不准确，而采用高效液相色谱柱后衍生法，能准确定量检测鱼粉或肉骨粉的组胺含量。

㈣ 求鱼粉中组胺的检测方法

组胺检测方法原理本测试盒的原理是是竞争性直接酶联免疫吸附剂测定法(CD-ELISA), 可准确检测出样品中ppm级的组胺。样品和标准对照液中游离的组胺与酶结合物中的组胺竞争抗体结合位置。清洗后，加入底物，底物与酶结合物反应出现兰色，兰色越深表明组胺越少。将其置于微型孔阅读器中可读出透光度，以对照标准液的透光度作标准曲线，将样品的透光度与标准曲线比较计算出样品中组胺的准确浓度。 已提供的材料1. 48个包被了抗体的孔。2. 48个红色标记的混合孔。3. 6瓶黄色标记的组胺标准对照溶液：0、2.5、5、10、20、50ppm六个浓度，每瓶1 ml。4. 1瓶兰色标志的组胺—HRP酶结合物溶液。5. 1包内含10mM PBS（丁苯橡胶）干粉的稀释试样提取液的浓缩缓冲液。6. 1瓶 40ml冲洗缓冲浓缩液，内含10mM丁苯橡胶—Tween。7. 1瓶绿色标志的K—兰色底物溶液。8. 1瓶红色标志的终止液。未提供的必需材料1. 提取材料（Neogen公司的产品号为9510）a. 去离子水或蒸馏水b. 125ml的瓶子c. 1号Whatman滤纸，Neogen公司过滤注射器或其他相当品d. 样品收集试管2. 100ml量筒。

㈤ 如何用药理实验鉴别组织胺和毛果云香碱

动物实验研究
1.研究M3受体激动剂毛果芸香碱对离体大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用.方法： 采用Langendorff灌注系统,建立离体大鼠心肌缺血再灌注损伤模型.观察毛果芸香碱5μmol·L-1对复灌后冠脉流量、心肌丙二醛(MDA)含量、心肌超氧化物歧化酶(SOD)活性和心肌梗死面积的影响.结果 毛果芸香碱改善缺血再灌注后的冠脉流量,其中5 min(P<0.01)和10min(P<0.05)的冠脉流量增加显着;降低心肌MDA含量(P<0.05)并提高心肌SOD活性(P<0.05);缩小心肌梗死面积(P<0.05).上述作用可被选择性M3受体阻断剂4-diphenylacetoxy-N-methylpiperidine-methiodide(4-DAMP)3 nmol·L-1所逆转.结论： M3受体激动剂毛果芸香碱通过激动心肌M3受体而对离体大鼠心肌缺血再灌注损伤起保护作用. 2.探讨长期应用毛果芸香碱对兔眼角膜内皮细胞有无影响及影响方式。方法： 用2%的毛果芸香碱给兔滴眼1个月和3个月后，取下兔眼球迅速固定，分离角膜内皮组织，用蛋白印迹（Western?blot）法检测兔眼角膜内皮细胞中抗凋亡基因bcl?2蛋白及凋亡基因bax蛋白的表达，流式细胞仪检测角膜内皮细胞的凋亡率，透射电镜下观察各组角膜内皮细胞的超微结构变化。结果： 应用毛果芸香碱1个月及3个月后，均呈现兔眼角膜内皮细胞凋亡基因bax蛋白表达增多，抗凋亡基因bcl?2蛋白表达减少，3个月组兔眼角膜内皮细胞凋亡率高于对照组（P<0.05），透射电镜下观察可见，1个月及3个月组细胞内空泡形成，线粒体肿胀，内质网扩张，细胞核固缩，染色质固缩周边化等典型凋亡改变。结论： 长期应用2%的毛果芸香碱可以诱导兔眼角膜内皮细胞发生凋亡。 3.对比研究1%毛果芸香碱脂质体滴眼液与1%毛果芸香碱滴眼液对兔眼的缩瞳作用。方法; 家兔18只,随机分为实验组、阳性对照组、阴性对照组。实验组应用1%毛果芸香碱脂质体滴眼液，阳性对照组应用1%毛果芸香碱滴眼液，阴性对照组应用空白脂质体滴眼液。各组家兔左眼滴人滴眼液，右眼滴人生理盐水作为空白对照，分别在给药前。给药后0．25、0．5、1、2、3、4、5、7h测量瞳孔直径。结果 :3组滴药前瞳孔直径左右眼比较，差异无显着性(P>0．05)。滴药后0．25h，阳性对照组缩瞳作用最大(P<0．01)，滴药1h瞳孔开始散大，滴药后5h差异无显着性(P>0．05)；实验组滴眼后0．5h瞳孔最小(P<0．01)，3h瞳孔开始散大，7h差异无显着性(P>0．05)；阴性对照组在观察的7h内无差异(P>0．05)。结论： 1%毛果芸香碱脂质体滴眼液具有缓慢释药，延长作用时间的优点。 4.对2%毛果芸香碱微乳滴眼剂与2%毛果芸香碱滴眼液在兔房水中的药代动力学进行对比研究。方法：健康白兔60只，随机分成20组，10个实验组，10个对照组，每组3只兔（6只眼）。对各实验组双眼结膜囊内准确滴入2%毛果芸香碱微乳滴眼剂50 μl，对各对照组双眼同法滴入2%毛果芸香碱滴眼液50 μl，分别于给药后5、10、30、40、60、90、120、180、240及360 min时抽取房水。用二氯甲烷提取房水中的药物，采用反相高压液相色谱（high pressure liquid chromatography, HPLC）法测定房水中的药物浓度。结果：用反相HPLC法可以将毛果芸香碱与其它杂质分离，最低检测浓度为0.01 mg/L。2%毛果芸香碱微乳滴眼剂或滴眼液50 μl滴眼后，除5 min时间点外，其余各时间点毛果芸香碱微乳滴眼剂治疗组的房水药物浓度较毛果芸香碱滴眼液治疗组明显增高（P=0.000 3～0.042)。微乳滴眼剂的药-时曲线下面积是滴眼液的3倍，微乳滴眼剂的生物利用度比滴眼液高2倍。用微乳滴眼剂后6 h，房水中仍可测出毛果芸香碱的浓度，而用滴眼液后3 h，房水中已测不出毛果芸香碱的浓度。结论：将毛果芸香碱滴眼液的剂型改为微乳滴眼剂可明显提高毛果芸香碱的生物利用度，增强疗效，减少用药频率，提高青光眼的治疗指数，具有较好的应用前景。
编辑本段应用
在动物医学上，本品适用于大动物的不全栓塞性肠便秘、前胃弛缓、瘤胃不全麻痹、猪食道梗塞等。用1%~3%溶液滴眼，与扩瞳药交替应用治疗虹膜炎。 在人医上，其吸收作用除用作抗胆碱药阿托品等中毒的抢救外，其它应用价值不大。临床上主要局部用于治疗青光眼。滴眼后易透过角膜进入眼房，作用迅速，10分钟后出现作用，半小时达高峰。与毒扁豆碱比较，毛果芸香碱作用温和而短暂，故用药间隔时间宜短，水溶液比较稳定。吸收后的不良反应主要由其M胆碱作用所致，可用阿托品对抗。 1，青光眼眼内压增高是青光眼的主要特征，可引起头痛、视力减退等症状，严重时可致失明。闭角型青光眼（急性或慢性充血性青光眼）患者前房角狭窄，眼内压增高。毛果芸香碱能使眼内压迅速降低，从而缓解或消除青光眼症状。 毛果芸香碱也适用于开角青光眼（慢性单纯性青光眼）的治疗。这种青光眼无前房角狭窄和闭塞情况，而是由于小梁网本身及巩膜静脉窦发生变性或硬化，阻碍了房水循环，引起眼内压升高。毛果芸香碱可能的通过扩张巩膜静脉窦周围的小血管以及收缩睫状肌后，小梁网结构发生改变而使眼内压下降。本药口服可用于颈部放射后的口腔干燥，但在增加唾液分泌的同时，汗液分泌也明显增加。
编辑本段临床研究
1.了解国产毛果芸香碱治疗精神药物所致口干的疗效和不良反应。 方法： 精神药物所致口干75例， 前60例病人分为两组， 每组男女病人各15例， 采用随机双盲对照方法分别给予毛果芸香碱(2.5 mg/片)或外形相同的安慰剂(淀粉)2片， 口服tid， 连用28 d。 另15例病人同样方法予毛果芸香碱开放治疗。 结果： 毛果芸香碱总有效率为77.8%， 安慰剂组自然有效率为26.7%； 组间比较， P<0.01。 不良反应有窦缓， 出汗， 流泪和视物模糊。 结论： 本药对精神药物所致口干安全有效。 2.研究1%毛果芸香碱脂质体滴眼液对原发性闭角型青光眼的疗效和不良反应. 方法:原发性闭角型青光眼60例60只眼,其中对照组30例,30只眼;试验组30例,30只眼.用药前后,测量眼压及瞳孔直径,检查房角以及视力、结膜、角膜、前房、虹膜、瞳孔、晶体、眼底,A型超声测量前房深度、晶体厚度、眼轴,同时记录患者的自觉症状.1%毛果芸香碱滴眼液(对照组):每次滴眼1滴,约50μL,1d 4次;1%毛果芸香碱脂质体滴眼液(试验组):每次滴眼1滴,约50μL,1d2次.结果 2组患者性别、年龄、用药前眼压、瞳孔直径经统计学检验P>0.05,差异无显着性.2组患者滴药后各时间段的眼压均下降与用药前相比,差异有显着性(配对t检验,P<0.05);滴药后各时间段2组患者眼压相比,试验组眼压下降明显,差异有显着性(独立样本t检验,P<0.05).2组患者滴药后各时间段的瞳孔值与用药前相比,瞳孔均有缩小,差异有显着性(配对t检验,P<0.05)；滴药后各时间段2组瞳孔值相比,试验组瞳孔值小,差异有显着性(独立样本t检验,P<0.05).每组用药前后以及2组患者用药前后前房深度、晶体厚度及眼轴长度,经统计学检验,无差异.脂质体组有7例发生滴药后短暂的表面刺痛感,2组未发现其他眼部和全身的不良反应.结论: 毛果芸香碱脂质体滴眼液应用于原发性闭角型青光眼的治疗,能减少滴眼次数,有效地控制眼压.

㈥ 组氨酸的测定方法

方法名称： 组胺酸的测定—电位滴定法
应用范围： 本方法采用滴定法测定组胺酸的含量。
本方法适用于组胺酸。
方法原理： 供试品加无水甲酸溶解，再加冰醋酸，照电位滴定法，用高氯酸滴定液滴定。读出高氯酸滴定液使用量，计算组胺酸的量。
试剂： 1. 水（新沸放置至室温）
2.高氯酸滴定液（0.1mol/L）
3. 无水甲酸
4. 冰醋酸
5. 醋酐
6.结晶紫指示液
7.基准邻苯二甲酸氢钾
仪器设备：
试样制备： 1.高氯酸滴定液（0.1mol/L）
配制：取无水冰醋酸（按含水量计算，每1g水加醋酐5.22mL)750mL，加入高氯酸（70%-72%）8.5mL，摇匀，在室温下缓缓滴加醋酐23mL，边加边摇，加完后再振摇均匀，放冷，加无水冰醋酸适量使成1000mL，摇匀，放置24小时。若所测供试品易乙酰化，则须用水份测定法测定本页的含水量，再用水和醋酐调节至本液的含水量为0.01%-0.2%。
标定：取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约0.16g，精密称定，加无水冰醋酸20mL使溶解，加结晶紫指示液1滴，用本液缓缓滴定至蓝色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1mL高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于20.42mg的邻苯二甲酸氢钾。根据本液的消耗量与邻苯二甲酸氢钾的取用量，算出本液的浓度，即可。
贮藏：置棕色玻璃瓶中，密闭保存。
2.结晶紫指示液
取结晶紫0.5g，加冰醋酸100mL使溶解，即得。
操作步骤： 精密称取供试品0.15g，加无水甲酸1002mL使溶解，加冰醋酸50mL，照电位滴定法用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。记录消耗氢氧化钠滴定液的体积数（mL），每1mL高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于15.52mg的组胺酸（C6H9N3O2）。
注1：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一,“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。
参考文献： 中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005年版，二部，p.370。

㈦ 组胺的组胺检测

大量食物易残留组胺类药物，对人体有一定危害。目前对于普通政府质检机构、兽药监察所、商检局等，以及食品企业：农畜产品加工出口企业、水产企业、蜂蜜企业等大众基层实验室，应用最多的是酶连免疫吸附试剂盒方法，即ELISA方法。
ELISA方法相比较于仪器检测具有灵敏度高、检测成本低、快速方便，可同时大批量筛选，操作简单等优点，因此举例： 1.1 仪器
(a)色谱管——200×7mm（内径）聚丙烯管，配有Kontes No.K-422,372Kel-F卡套和约45cm聚四氟乙烯管，以调节与柱相连的出口管高度，控制流速大于3ml/min。或用二通阀 （生物实验室产品）代替管子。
(b)荧光计——Perkin-Elmer型203或204,带中压汞灯。或带有在350nm激发光和在444nm测量发射光的仪器。
(c)重换移液管——1和5ml。
1.2 试剂
(a)离子交换树脂——Bio-Rad AG/-X8 50—100目。或Dowex 1-X8 50—100目，以约15ml 2M NaOH/g树脂加入烧杯，使其转变为—OH形式，旋摇混合，静置30min。倒出液体并加碱重复操作。用水洗透树脂，糊状物倒进折叠滤纸，再用水洗。每周制备新树脂并浸在水中保存。
在管(a)底塞上玻璃棉，填入足以形成8cm树脂床层的糊状物，无论何时，都须使树脂层上保留水层。再生树脂，不在填充柱内进行，需要时，可在烧杯里分批再生，每次提取前，用约10ml水洗柱。
(b)磷酸——1.19M。稀释121.8ml、85%的H3PO4至1L。如用其他浓度磷酸，配1L 1.19M的H3PO4所需体积V=17493/（密度H3PO4×%H3PO4)。标定；吸取5ml H3PO4,以酚酞为指示剂用1.00M NaOH滴定至终点。如需要，可调整浓度。
(c)邻苯二甲酸二碳基乙醛(OPT)溶液——0.1%。100mg OPT溶于100ml、经玻璃容器蒸馏过的甲醇中，装在棕色瓶中，于冰箱内贮存，每周新配。
(d)组胺标准溶液——冰箱里贮存。
⑴ 贮备液——1mg/ml。无碱性。准确称取约169.1mg组胺·2HCl(98%）于100ml容量瓶中，用0.1M HCl溶解并稀释到刻度，每周新配。
⑵ 中间溶液——10μg/ml。吸取1ml贮备液放进100ml容量瓶，用0.1M HCl稀释到刻度，每周新配。
⑶ 工作溶液——0.5,1.0和1.5μg/5m1。吸取1,2和3ml中间溶液，分别于100ml容量瓶中，各用0.1M HCl稀释至刻度，每天新配。 （使用前，以HCl(1 3)和水洗涤全部塑料及玻璃容器）
2.1.标准曲线的绘制
吸取平行的各标准工作液5ml于50ml的玻璃或聚丙烯锥形瓶中，各瓶加10ml 0.1M的HCl并混匀。加入3ml 1M NaOH并混匀；在5min内，加入1ml OPT溶液并立即混合；准确于4min后，加入3ml 1.19M H3PO4并立即混匀。每次加液后，至少在OPT反应期间（顺序加入试剂到一组锥型瓶里，可同时进行6—10个OPT反应），充分混匀是很重要。用5ml 0.1M HCl代替组胺溶液作为空白，在1.5h内，以水为参比记录工作标准液的荧光强度(I)，用350nm吸收波长，和444nm发射波长，以(I)（经空白校正）对μg组胺/5ml试样作图。
2.2.测定
用甲醇萃取按17-28C,第一节中制得的样品。用4—5ml水洗柱，(a)，弃流出液。吸1ml萃取液加进柱内并加4—5ml水。立即使柱流出液进入50ml、内含5.00ml 1.00M HCl的容量瓶中，当液面在树脂上方约2mm处时，加入约5ml水洗脱，接着用大量水洗脱，直到约有35ml洗脱液为止。停止柱流，用水稀释到瓶的刻度，塞上瓶盖混匀，冷藏洗脱液。
吸5ml洗脱液于50ml锥型瓶中，吸取10ml 0.1M HC1加入，按C,自吸加3ml 1M NaOH开始进行。
如样品含量大于15mg组胺/100g鱼，吸取1ml样品-OPT混合液于10ml、盛有准确2ml空白-OPT混合液的烧杯中，充分混匀。读出新溶液的荧光强度，如想得到可测的读数，就用空白-OPT的混合液稀释试样。这个近似值表明，为准确地定量样品，进行第二次OPT反应前，要将洗脱液作适当稀释。此外，调节荧光计的灵敏度范围（如仪器有此装置）来估计稀释倍数。利用这些近似值，用0.1M HCl制备洗脱液的适当稀释试样。按C进行。
2.3.计算
绘制I对μg组胺/5ml溶液（用绕度（偏转）计或记录仪响应测量并经空白校正过的图应是一条过原点的直线，斜率=m=[(Ia/1.5)十Ib十2Ic]/3mg组胺/100g鱼=⑽(F)(1/m)(Is)
式中：Is、Ia、Ib、Ic分别为样品、1.5、1.0和0.5mg组胺标准的荧光强度。F=稀释倍数=ml洗脱液十ml 0.1M HCl/ml洗脱液，未稀释的洗脱液F=1
如果校正图形呈非线性，直接用标准曲线定量。横坐标上每一分度应≤0.1μg组胺/5ml溶液，从曲线最靠近0.05μg组胺/5ml溶液处，读出所有值。
mg组胺/100g鱼=⑽(F)(W)
式中：W=μg组胺/100e鱼（用标准曲线测得）

㈧ 怎么检查组胺和乙酰胆碱值,

抽血。

㈨ 怎么检查组胺和乙酰胆碱值;.

观察急性DIC时血液学检查结果的改变。...组胺加氨茶碱、组胺加阿托品、乙酰胆碱加阿托品、乙酰胆碱加氨茶碱对气管片张...根据讲义提供的实验数据和计算方法,计算CCh的pD2值和atropine的pA2值;并画出CCh的浓度-收缩效应曲线和Schild plot曲线...

㈩ 被动皮肤过敏反应是检测什么的方法

被动皮肤过敏反应亦称RCA反应，是利用与同种或异种动物组织有结合性的抗体所引起的局部过敏反应，来检验抗体或抗原的高敏感度的方法。Prau－nitz－Kuestner反应就是利用人的抗体在正常人的皮内进行试验的PCA反应的例子，但多数情况都是采用向豚鼠皮内注射其他动物或人的血清的方法。PCA的操作方法，一般是将血清注射于豚鼠皮内，经3～5小时后，有结合性的抗体便与组织的肥大细胞结合，而其他抗体则扩散掉。然后，向抗原液内混入伊文氏蓝（Evans）等色素再注射到静脉内，其抗原则在抗血清注射部位与附着在肥大细胞上的抗体起反应，于是组胺或其他药物因子则游离出来而出现局部过敏反应。在该局部，由于血管透性升高，故含色素的血浆便渗漏到组织内，使皮肤出现蓝斑。测定蓝斑的直径，可作为反应强度的指标，或者进行抗体稀释试验，用呈现阳性的最高稀释度的倒数来作为抗体价。抗体一定时，用种种浓度的抗原液进行试验，亦可进行抗原的定性和定量的测试。