Ⅰ RNA提取和定量测定的原理和方法
动物细胞的RNA提取一般使用Trizol,你可以到网上找它的使用说明
测定的方法的话可以有:
紫外分光光度计:通过测定OD260、280和230来检测RNA是否被杂质污染
琼脂糖凝胶电泳:检测RNA是否发生降解
RT-PCR:将其反转录成cDNA,通过荧光定量PCR检测各mRNA的表达量
Ⅱ 对rna的检测除了pcr还有什么方法
PCR并不能检查RNA,只有RT-PCR才可以,另外,还有Northern blot可以检查RNA。
Ⅲ 单细胞的培养方法有哪些
单细胞培养常见模型: ①在培养碟中原位单细胞微吸吮捕获、沉积分选培养模型传统的荧光活化细胞分选方法(FACS)采用流式细胞术用来分选细胞,是分子基础分选中普遍使用的方法。这种方法只能检测具有荧光活性的细胞,不但细胞存活率低、纯度低,而且极易破坏细胞组织。微吸吮单细胞分选培养模型是与倒置显微镜配合使用的,用于细胞筛选、提取、沉积的。 ◇ 可直接从培养皿中进行细胞分选 ◇ 分离粘结活细胞的细胞亚群,分离荧光或者冷光标记 ◇ 无标记的和荧光的细胞都可通过软件进行自动识别 ◇ 可确保细胞分离后活力,并且可培养 ◇ 分选荧光分子探针标记的特定细胞 ◇ 单细胞收集进行进一步培养、克隆,RNA 或者蛋白质制备 ◇ 免疫制备,进行目标细胞分类 ◇ 可对各种粘结细胞进行分类 ◇ 细胞筛选前的细胞培养 ◇ 一般的分选过程只需几分钟就可完成 ◇ 使用安装在显微镜上的荧光滤片可实现多通道监测 ◇ 分选速度为1Cell/秒每一个循环可筛选1~1000个细胞 ②单细胞培养分析跟踪板模型 ③使用把显微镜升级改造为纳米激光镊捕获操纵单细胞模型这种模型很简单,在已有显微镜上加上纳米激光器或芯片就可以了 ④使用活态单细胞激光拉曼光谱无损测定鉴别模型活态单细胞激光拉曼光谱无损测定鉴别模式可在无任何标记情况下对活细胞进行三维扫描测定其分子分布,更具优越性。活态单细胞激光拉曼光谱无损测定鉴别模式为医师,药师和生物学家提供了利用拉曼光谱的便利的方式,不仅可以识别各种基团,还可以对化合物进行高精确度分析,且对活细胞不需要使用生化标记物,荧光标记物或者抗体,对活细胞绝对安全。
Ⅳ 如何确认RNA的质量
1、RNA胶(凝胶成像)检测。例如:原核生物的核糖体所含的rRNA有5S、16S及23S三种。在胶上就有三条明显大小不一的条带。
2、凝胶迁移分析。可以用来研究RNA-蛋白相互作用。基本原理是:结合了蛋白的RNA在凝胶中的迁移速率更慢,因而可以区分出结合蛋白与未结合蛋白的RNA条带。
3、RNA-seq即转录组测序技术,把mRNA,smallRNA等用高通量测序技术把RNA的序列测出来。反映出RNA的表达水平。
(4)单细胞rna检测方法扩展阅读
1、RNA的功能是:
(1)具有肽酰转移酶的活性。
(2)为tRNA提供结合位点。
(3)在蛋白质合成起始时,参与同mRNA选择性的结合,在肽链的延伸中与mRNA结合。
16 S的rRNA3’端有一段核苷酸序列与mRNA的前导序列是互补的,这可能有助于mRNA与核糖体的结合。
2、凝胶成像对DNA或RNA胶 进行切胶、拍照、观察、分析的实验室类仪器,凝胶成像系统可以应用于分子量计算、密度扫描、密度定量、PCR定量等生物工程常规研究。
Ⅳ 细胞内DNA、RNA、蛋白质常用的分子生物学检测方法shi
细胞内DNA用甲基绿检测,而rna用吡罗红检测,蛋白质则用双缩脲试剂检测。
Ⅵ 检测DNA和RNA检测方法有什么区别
您好!检测DNA的方法有:1.光密度测定。2.琼脂糖电泳凝胶检测法。3。二苯胺法。
检测RNA的方法有:1.光密度测定。2.苔黒酚法。
主要的嘧啶和嘌呤具有共轭双键,使碱基,核苷,核苷酸和核酸在240-290nm的紫外波段有一段强烈的吸收峰,因此核酸具有紫外吸收特性,在260nm,处是最大的紫外光吸收值,根据朗波-比尔光吸收定律来计算出核酸含量。
Ⅶ 鉴定RNA的品质通常有几种方法,怎样鉴定
电泳检测吧,28S、18S(真核)或者23S、16S(原核)条带清晰,无明显拖尾就表示RNA无明显降解,品质较好,反之则发生降解。有条件可以用2100生物分析仪检测,本质上还是电泳检测,但速度快,一次可以检测12个样品,峰图与胶图结合容易判断,而且可以定量,比Nanodrop定量准确
Ⅷ RNA质量怎样检测与鉴定
检测RNA溶液的吸光度
280、320、230、260nm下的吸光度分别代表了核酸、背景(溶液浑浊度)、盐浓度和蛋白等有机物的值。一般的,我们只看OD260/OD280(Ratio,R)。1.82.0时,我们认为RNA中蛋白或者时其他有机物的污染是可以容忍的,不过要注意,当你用Tris作为缓冲液检测吸光度时,R值可能会大于2(一般应该是<2.2的)。当R<1.8时,溶液中蛋白或者时其他有机物的污染比较明显,你可以根据自己的需要决定这份RNA的命运。当R>2.2时,说明RNA已经水解成单核酸了。
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Ⅸ RNA的提取及鉴定可以用哪些方法
传统方法,可以用氛氯仿抽提,现在有很多的试剂盒,过柱子即可。鉴定方法,可以电泳检测,测OD值,或是用安捷伦检测,做qPCR也可以
Ⅹ 如何检测RNA提取成功或如何检测RNA的完整性
检测RNA的完整性的方法:
完整的总RNA在进行变性凝胶电泳时会产生清晰的28S和18S rRNA条带(真核样品)。28S rRNA条带的强度应当大致为18S rRNA条带的两倍。这种2:1的比率(28S:18S)是判断RNA完整性的一个很好的指标。
使用变性凝胶电泳来评估RNA完整性的一个缺陷是观察所需的RNA样品量。通常情况下,需要在变性凝胶中上样至少200 ng的RNA才能在EtBr染色下进行观察。而在某些RNA制备实验中,如从穿刺活检样品或激光捕获显微切割样品中提取RNA,得率是非常低的。这种情况下,或许就不可能在进行表达谱分析实验前取出200ng的RNA来评估其完整性。其它的核酸染料,比如Moleculor Probes (Eugene, OR) 的SYBR® Gold及SYBR Green II RNA染料,相比传统的琼脂糖凝胶电泳EtBr染色方法可以显着提高灵敏度。通过使用300nm的透射光源(6 x 15瓦的灯泡)及特殊的滤光片,SYBR Gold RNA凝胶染色可以检测到低至1ng的RNA,而SYBR Green II则可以检测到2ng,从而可以使用更少的样品来进行RNA完整性分析。
目前有一种快速简单的方法可以替代传统的凝胶分析方法,这种方法可以同时对RNA样品进行定量及质量评估。Agilent 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies)是第一款商业化的提供RNA样品状态细节信息的微流体仪器。当与RNA 6000 LabChip®(Caliper Technologies Corporation所拥有的一个注册商标)结合使用时,每次进行分析最低仅需1µl浓度为10 ng/µl 的样品。除了评估RNA完整性,这台自动化系统同样可以提供样品RNA浓度及纯度(如mRNA制备中的rRNA污染)的评估。在过去,检测浓度及纯度需要使用部分RNA样品(通过A260分光光度法),而评估完整性则需要另外使用部分样品。通过使用LabChip®系统,可以仅使用一份5ng的样品来同时对浓度、完整性及纯度进行分析。分析数据可以显示为类凝胶图像、电泳峰图及表格形式等。