抗生素检测方法固相萃取法

‘壹’ 抗生素检测的主要方法

由于抗生素在废水中的浓度相对较低，所以抗生素的检测一般都是微量或是痕量分析，常采用具有高灵敏度的仪器进行检测。各研究机构对畜禽废水中抗生素的检测技术主要有色谱法和其联用技术、酶免疫分析法、毛细管电泳法等。 液相色谱法（LC）在废水抗生素的检测中是最常见的，LC具有分离效能好，检测速度快且重现性好的特点。LC法所用的检测器有紫外检测器(UV)，荧光检测器，以及二级管阵列检测器。
高效液相色谱-紫外检测器
高效液相色谱-紫外检测器联用检测技术是最早用于环境中抗生素的分离检测，由于其操作简便以及成本低，被用于畜禽废水中抗生素的检测。
液相色谱-荧光检测器
液相色谱-荧光检测器因为其检测限低所以也被用于畜禽废水中抗生素的检测，通常对本身具有荧光性的抗生素液相色谱-荧光检测器可以直接检测出，但是对于本身不具有荧光性或荧光性差的抗生素，需要对其衍生化来提高目标物的荧光特性以便检测。
液相色谱串联质谱技术
色谱可以用于多组分混合物的分离和分析，可以对有机化合物进行定量分析，但是定性较困难，质谱仪能够对单一组分提供高灵敏度和特征的质谱图，但对复杂化合物无分析能力。所以将色谱与质谱进行联用（或是串联质谱），对复杂化合物中微量和痕量组分的定性和定量分析具有重要的意义。
由于畜禽废水中有多种类的抗生素同时存在，利用色谱和质谱的联用技术可以提高抗生素的定性、定量分析的可靠性、准确性、灵敏度。 酶免疫分析方法具有操作简单，前处理简化，分析成本低、灵敏、特异性强、检测快速，不需要昂贵的仪器等，而且可以同时测定几个样品，但是酶免疫分析方法对试剂的选择性高，很难同时分析多种成分，对结构类似的化合物有一定程度的交叉，分析分子量很小的化合物和不稳定的化合物有一定的困难。
用酶免疫分析方法试剂盒检测地表水、地下水中的四环素和泰勒菌素，检测分别为0.05μg/L,0.1μg/L。其结果表明，该方法成本低、检测快，可用于水中的四环素、氯四环素、泰勒菌素的初筛检测。 经典的放射免疫测定基本原理和酶免疫分析是相同的，但所不同的是反应的放大指示系统不是酶和底物，而是放射性同位素。用于抗原或抗体标记的同位素通常是放射性较小的β放射原，最常用的是同位素是3H和14C，放射性不强、用量也极微小，比较安全。

‘贰’ 如何检测牛奶中的抗生素

如果饮用含有抗生素的牛奶，可能会引起饮奶者出现过敏反应，长期饮用，还可能引起细菌的耐药性，造成人体肠道内菌群失调，抑制一些有益菌的生长。此外，含有抗生素残留的牛奶，可以抑制乳酸菌的生长繁殖，这样的牛奶就不能加工发酵乳制品。测定奶中残留抗生素常用TTC法，其原理和方法如下。
（1）原理 指示剂2，3，5-氯化三苯基四氯唑加入接种菌群的奶中进行培养，有抗生素，则奶不显色，因为细菌不繁殖，TTC指示剂不被还原；反之，则TTC还原显红色，说明奶中无抗生素存在。
（2）方法 取奶样9毫升注入试管内，于80℃水浴5分钟，冷却至37℃以下，加菌液1毫升，于37℃水浴中保温培养2小时。加TTC 0.3毫升（浓度为4%左右），于37℃水浴中继续培养30分钟，观察其颜色变化，如奶变红色，则为阴性；若奶仍为原色，则继续培养30分钟，进行第二次观察，仍为原色者，则为阳性；由淡红色→桃红色→红色为阴性。用此法检测各种抗生素的敏感度（指最低检测量）如下：青霉素0.004国际单位/毫升奶；链霉素0.5国际单位/毫升奶；庆大霉素0.4国际单位/毫升奶。
现在，已经开发出了抗生素快速测定仪，检测牛奶中的抗生素。

‘叁’ 肉类抗生素检测方法有哪些

一种基于冰箱的肉类抗生素检测方法,将紫外激发光源和光谱相机安置于冰箱内部上壁,将肉类放置在冰箱内,开启光谱相机,连续采集n帧数据,每帧数据为八通道光谱图像,将每个通道取平均来降低紫外激发光源波动及光谱相机偏置噪声,获得八通道背景光谱数.

‘肆’ 求用高效液相色谱法测河流中抗生素的步骤

就是首先用现成药品确定一个合适的分离条件，如溶剂，进样量等等，测好保留值用于定性。测好工作曲线用于定量。
然后取水样，用上面的条件测定，如果感觉浓度不够可以用固相萃取法富集一下。
测出大致浓度后，用标准样配制与自然水样浓度相近的溶液，进行测回收率的实验。
测出回收率之后才能计算真正的天然水样抗生素浓度。
至于具体步骤很复杂，没有3个月做不完，没有10页纸恐怕也没办法写详细。楼主自己找一本色谱方面的教材来看吧，或者上网找安捷伦的培训ppt也可以。

‘伍’ 抗生素效价测定的方法有哪两类它们各有什么特点

抗生素的效价常采用微生物学方法测定，它是利用抗生素对特定的微生物具有抗菌活性的原理来测定抗生素效价的方法，如管碟法（cylinder
plate
method）。管碟法是根据抗生素在琼脂平板培养基中的扩散渗透作用，比较标准品和检品两者对试验菌的抑菌圈大小来测定供试品的效价。管碟法的基本原理是在含有高度敏感性试验菌的琼脂平板上放置小钢管（内径6.0±0.lmm，外径8.0±0.lmm，高10±0.lmm），管内放入标准品和检品的溶液，经16~18小时恒温培养，抗生素扩散的有效范围内则产生透明的无菌生长的区域，常呈圆形，称为抑菌圈（图实验-18）。抑菌圈直径大小与抗生素浓度相关，比较抗生素标准品与检品的抑菌圈大小，可计算出抗生素的效价。抗生素效价常采用二剂量法。将抗生素标准品和供试品各稀释成一定浓度比例（2:1或4:1）的两种溶液，在同一平板上比较其抗药活性，再根据抗生素浓度对数和抑菌圈直径成直线关系的原理来计算供试品效价。取含菌层的双层平板培养基，每个平板表面放置4个小钢管，管内分别放入检品高、低剂量和标准品高、低剂量溶液。先测量出四点的抑菌圈直径，按下列公式计算出检品的效价。
(1)
求出w和v：
(2)
w=（sh+uh）-（sl+ul）
(3)
v=（uh+ul）-（sh+sl）
式中：
uh：供试品高剂量之抑菌圈直径
ul：供试品低剂量之抑菌圈直径
sh：标准品高剂量之抑菌圈直径
sl：标准品低剂量之抑菌圈直径
求出θ：（2）
θ=d·antilog（iv/w）式中：
θ：供试品和标准品的效价比
d：标准品高剂量与供试品高剂量之比，一般为1
i：高低剂量之比的对数，即log2或log4。
求出pr
：
(5)
pr
=
ar×θ
式中：
pr：供试品实际单位数
ar：供试品标示量或估计单位
（1）细菌：短小芽胞杆菌[cmcc（b）63202]的芽胞悬液。
（2）培养基：效价检定用培养基（上层、底层）。
（3）抗生素：抗生素检品及标准品（高剂量、低剂量，高剂量与低剂量之比为2:1）。
（4）试剂与器材：灭菌生理盐水，无菌平皿，牛津杯，无菌吸管，镊子，滴管，直尺。
（1）取无菌平皿，加入20ml底层培养基，凝固后作为底层。
（2）用灭菌生理盐水将短小芽胞杆菌的芽胞悬液稀释至一定浓度以能得到清晰的抑菌圈，且标准品高浓度所得抑菌圈直径在18~22mm为基准。用无菌吸管吸取1ml芽胞悬液，加入到200ml恒温于50℃的上层培养基中摇匀，迅速以无菌吸管吸取5ml，注入到底层培养基上，铺平待凝。
（3）在平板底部四边，分别对角注明“sh”、“sl”
和“uh”、“ul”标记。
（4）镊子火焰灭菌3次，然后夹取4个牛津杯垂直放置在平板中标志附近（注：勿使钢管陷入培养基内，各小杯之间尽量等距）。
（5）以无菌滴管分别在每个牛津杯内加入相应的抗生素溶液至满但不溢出管外，且四杯内液面高度相同，盖上平皿盖，静置30分钟。
（6）将平皿置于37℃恒温培养箱培养16~18
h，量取各抑菌圈直径（sh、sl、uh、ul），以毫米为单位，误差不超过0.1mm。
（7）计算抗生素效价
（8）查放线图计算抗生素效价

‘陆’ 固相萃取-高效液相色谱测定土壤中抗生素含量，怎么确定土壤中是否含有这类抗生素，

首先得有标样，标样就是指样品中含有一定已知含量的某种抗生素，先用高效液相色谱分析这个标样得出相应色谱图，然后土壤样品经固相萃取后用高效液相色谱分析得出来的谱图跟标样色谱图比较，就可以知道是否有这种抗生素以及这种抗生素的含量

‘柒’ 根据检测原理不同,食品中抗生素残留的检测方法可分为哪几种

分为四种：酶抑制率法 分光光度法 胶体金法 滴定分析法

酶抑制率法

在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物（乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，在412nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以判断出样品中是否有高剂量的有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。

分光光度法

不同的物质由于其分子结构不同，对不同波长光的吸收能力也不同，因此具有其特有的吸收光谱。即使是相同的物质由于其含量不同，对光的吸收程度也不同。标准曲线法就是利用这一特性来测定物质含量，先配制一系列浓度由小到大的标准溶液，分别测定出它们的A值，以A值为横坐标，浓度为纵坐标，作标准曲线。在测定待测溶液时，操作条件应与制作标准曲线时相同，以待测液的A值从标准曲线上查出该样品的相应浓度。

胶体金法

将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂（抗体或单克隆抗体）吸附在结合垫上，当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，再移动至固定的抗原或抗体的区域时，待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，产生显色反应。当光源照射到检测带，反射光被收集并转化为电信号，根据信号的强弱即可判断被测物质的阴阳性。

滴定分析法

滴定分析法是将一种已知准确浓度的试剂溶液，滴加到被测物质的溶液中，直到所加的试剂与被测物质按化学计量定量反应为止，根据试剂溶液的浓度和消耗的体积，计算被测物质的含量。

‘捌’ 测定抗生素效价的生物学定量方法是什么

琼脂扩散法又称圆筒平板法。用于测定抗生素效价的生物学定量方法之一。标准的方法是以20毫升的琼胶培养基放入陪替氏培养皿内做成平面，上面加上预先培养的试验标准菌种，例如掺入了葡萄球菌的琼胶4毫升，而使之凝固，上面再放上一个外径8毫米的不锈钢圆筒，筒内倒满青霉素稀释液之后，在35～37℃培养12～16小时。由于圆筒周围产生浓度梯度，葡萄球菌的繁殖被阻止于有效浓度范围之内而形成圆形的透明带。其直径d与青霉素浓度c之间的关系如下式所示：

d=klog10c+a（k、a为常数）

与标准青霉素液相比较，可求得青霉素浓度。测定链霉素时用枯草菌，氯霉素用大肠菌，四环素用八连球菌作繁殖试验。此外还有用圆形滤纸代替圆筒，使被检液渗入的滤纸法。

‘玖’ 固相萃取高效液相色谱测定土壤中四环素类抗生素的方法

1）将适量的土壤碾成粉末，溶于适量水。充分搅拌，静置一段时间，再搅拌。过滤除去不溶杂质。
2）水相用二氯甲烷萃取三次以上。合并后的萃取液用无水硫酸镁干燥。过滤，浓缩。
3）浓缩液用HPLC检测。

‘拾’ 6.抗生素微生物检定包括哪两种方法并分别介绍概念、分类以及其作用原理。

医学微生物，有细菌，真菌，病毒，衣原体，支原体，螺旋体，立克次体，放线菌。

最重要的就是按照这几个条目来学，最重要的是细菌病毒四体和真菌

然后记住每一条目的分类以及分类的依据，然后记住相应分类下的微生物，就可以记住相应的微生物了。

一些特殊的微生物的特点单独记忆学习，比如溶血链球菌导致蜂窝织炎，葡萄球菌导致化脓性炎。
就是微观的世界。我们医生，大多是检验科医生以后都会用到，用显微镜观察常人看不到的细菌。

学习微生物，一定要根据书本来，学好书本知识，然后自己归纳总结。比如说，某个标本里面常见的致病菌有哪些，比如大肠杆菌，你就要记住，菌落形态、革兰阳性还是阴性，革兰染色镜下会是什么样，还有有哪些生化反应。什么条件下它会治病:如大肠杆菌大便中最常见，如果在尿液或者痰液中培养出来那就属于致病菌。这些都是需要熟记的