① 香菇呼吸作用相关的酶有哪些，以及测定酶活的方法有哪些
酶是植物体内普遍存在的、活性较高的一种酶,它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有密切关系,在植物生长发育过程中,它的活性不断发生变化,因此测量这种酶,可以反映某一时期植物体内代谢的变化.
一、原理
在有过氧化氢存在下,过氧化物酶能使愈创木酚氧化,生成茶褐色物质,该物质在 470 nm 处有最大吸收,可用分光光度计测量 470 nm 的吸光度变化测定过氧化物酶活性.
二、实验材料、试剂与仪器设备
（一）实验材料
马铃薯块茎.
（二）试剂
1 ． 100 mmol ／ L 磷酸缓冲液 pH6.0 （见附录）.
2 ．反应混合液：100 mmol ／ L 磷酸缓冲液（ pH6.0 ） 50 mL 于烧杯中,加入愈创木酚 28 μl ,于磁力搅拌器上加热搅拌,直至愈创木酚溶解,待溶液冷却后,加入 30 % 过氧化氢 19 μl ,混合均匀,保存于冰箱中.
（三）仪器设备
分光光度计,研钵,恒温水浴锅,100 mL 容量瓶,吸管,离心机.
三、实验步骤
1 ．称取植物材料 1 g ,剪碎,放入研钵中,加适量的磷酸缓冲液研磨成匀浆,以 4000 r ／ min 离心 15 min ,上清液转入 100 mL 容量瓶中,残渣再用 5 mL 磷酸缓冲液提取一次,上清液并入容量瓶中,定容至刻度,贮于低温下备用.
2 ．取光径 1 cm 比色杯 2 只,于 1 只中加入反应混合液 3 mL 和磷酸缓冲液 1mL ,作为对照,另 1 只中加入反应混合液 3 mL 和上述酶液 1mL （如酶活性过高可稀释之）,立即开启秒表记录时间,于分光光度计上测量波长 470 nm 下吸光度值,每隔 1min 读数一次.
四、结果计算
以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小,即以 ΔA 470 /[min • g （鲜重） ] 表示之.也可以用每 min 内 A 470 变化 0.01 为 1 个过氧化物酶活性单位（ u ）表示.
过氧化物酶活性 [u/ （ g • min ） ]=
式中：Δ A 470 ——反应时间内吸光度的变化.W ——植物鲜重,g .
V T ——提取酶液总体积,mL .
V s ——测定时取用酶液体积 ,mL .
t ——反应时间,min .
② 求教植物叶片POD酶活性的大致范围
求教植物叶片POD酶活性的大致范围
酶活性测定的原理：
超氧物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）
活性的测定 SOD采用氮蓝四唑（nitro-blue tetrazolium，NBT）法（Beauchamp和Fridovich，1971）。反应步骤为：取200μl粗提液，加入3.7 ml NBT反应液50mmol/LpH7.8的磷酸缓冲液（PBS）配制的含77.12μmol/L氮蓝四唑, 100μmol/LEDTA－Na2和13.37mmol/L甲硫氨酸溶液〕，在30℃下保温2分钟后加入100μl核黄素溶液（pH7.8的50mmol/L磷酸缓冲液中含80.2μmol/L 核黄素和100μmol/LEDTA－Na2），在4000Lx日光下反应20min。然后迅速测定A560。以不照光的管做空白。用酶标仪进行测定时按比例调整为总反应体积为400μL。酶活性按以下公式计算：以抑制NBT光化还原的50％为一个SOD活性单位，结果以U/mg蛋白表示。以加缓冲液代替酶液的作为对照。
SOD总活性＝(Ack－AE)×V/(Ack×0.5×W×Vt) 式中， Ack为照光对照管的吸光度；AE为样品管的吸光度；V为样品液总体积（ml）；Vt为测定时样品用量（ml）；W为样品鲜重（g）或蛋白质含量（mg）。
过氧化氢酶（Catalase，CAT）
活性测定 CAT 活性参照Aebi (1984)[7]的方法进行测定。用酶标仪进行测定时按比例调整为总反应体积为400μL 。400 μL反应液含50 mmol/L的PBS (pH 7.0)，30 mmol/L的H2O2和50 µL粗酶液。反应从加入过氧化氢开始计时，连续测定在240 nm吸光度的降低值。酶活性定义为：一个过氧化氢酶单位相当于在规定条件下于温度25℃，pH7.0条件下1分钟分解1μmol过氧化氢所需酶量，结果以U/mg蛋白或U/g鲜重表示。
多酚氧化酶（Polyphenoloxidase，PPO）
活性的测定 PPO活性测定采用邻苯二酚法（Aquino-Bolaños和Mercado-Silva，2004）。用酶标仪进行测定时按比例调整为总反应体积为400μL。350µL反应液（用50mmol/L，pH6.4的PBS配制，内含100µmol/L邻苯二酚）中加入50 µL的粗酶液，平衡1分钟后连续测定398nm吸光度的变化。以1分钟内398nm吸光度上升0.01为一个酶活性单位，结果以U/mg蛋白或U/g鲜重表示。
过氧化物酶（Peroxidase，POD）
活性测定POD活性测定采用愈创木酚法（Lurie等，1997)。用酶标仪进行测定时按比例调整为总反应体积为400μL。反应体系为30μL粗酶液，290 µL 0.3%愈创木酚（用50 mmol/L的PBS配制，pH 6.4）和 80µL0.3%H2O2（用50 mmol/L的PBS配制，pH 6.4）。反应在加入H2O2 后开始准确记时。连续吸光度在470 nm的上升值。酶活性以每分钟上升0.01为一个单位，结果以U/mg蛋白或U/g鲜重表示。
③ SOD酶的活力的测定
SOD酶的活力的测定方法如下：
1.直接法 原理是根据O2 或产生O2 的物质本身的性质测定O2 的歧化量，从而确定SOD的活性。经典的直接法包括：脉冲辐射分解法、电子顺磁共振波法（EPR）、核磁共振法。由于所需的仪器设备价格昂贵，一般较少应用。
2.一般化学法 这些方法的共同特点是要有一个O2 的产生体系和一个被O2 还原或氧化的可检测体系。在SOD存在下，一部分O2 被SOD歧化，因而O2 还原或氧化检测体系的反应受到抑制。根据反应受抑制程度，测定SOD的活性。一般化学法有邻苯三酚自氧化法、细胞色素C还原法、羟胺法、黄嘌呤氧化酶-NBT法、肾上腺素法、没食子酸法、6-羟多巴胺法、亚硝酸盐形成法和碱性二甲亚砜法。
④ sod酶活性测定方法
1、测定方法很多，常见的有化学法、免疫法和等电点聚焦法。其中化学法应用最普遍，化学法的原理主要是利用有些化合物在自氧化过程中会产生有色中间物和O2 -，利用SOD分解而间接推算酶活力。
2、在化学方法中，最常用的有黄嘌呤氧化酶法，邻苯三酚法，化学发光法，肾上腺素法，NBT-还原法，光化学扩增法，Cyte还原法等。
（1）改良的邻苯三酚自氧化法简单易行较为实用。
（2）化学发光法和光化学扩增法不适用于测定Mn-SOD，但对于Cu/Zn-SOD反应极灵敏。（3）Cyte还原法用于Mn-SOD活力测定结果稳定，重复性好。但专一性和灵敏度不够理想，而且需要特殊仪器，实际应用受到限制。
（4）亚硝酸盐形成法与CN—抑制剂或SDS处理相结合，应用于Mn-SOD测定，灵敏度比Cyte还原法提高数倍，而且专一性强，重复性好，操作方便，不需要特殊仪器和设备，易于实际应用和推广，是目前较好的测定方法之一。
⑤ 植物NiR（亚硝酸还原酶）酶活性测定，急急急！！！不胜感激！
可采用“微量扩散比色法测定植物体内硝酸还原酶与亚硝酸还原酶的活性”方法来测定，原理为：植物体内硝酸还原酶(NR) 和亚硝酸还原酶(NiR)活性的测定一般是根据底物的减少来衡量的。本方法则是根据酶促反应的最终产物(氨)的释放来衡量的,能较真实地反映酶活性的大小。测定时,可通过外源基质的选择来衡量硝酸还原酶或亚硝酸还原酶的活性。
⑥ 测植物某种酶活性，得到3分钟内的酶活力变化曲线，如何计算酶活性
你应该先用标准品建立一条标准曲线的。纵坐标是吸光值，横坐标是酶的活力。然后计算出标准曲线的回归方程，再测样品的吸光值，在曲线上查找酶活力。
不管怎么说，都需要先建立一个标准。或者有一个对照。
已知浓度的酯酶，梯度稀释成不同的浓度，分别测OD值。然然后绘制标准曲线。R2控制在0.990-0.999之间。得出标准曲线。
⑦ 过氧化氢酶活性的测定 高锰酸钾滴定法 紫外分光光度法各有什么优缺点
过氧化氢酶活性测定，是根据过氧化氢酶（PHD）能催化过氧化氢生成氧的特性，常用碘量法和电极法。
前者通过测定PHD催化H2O2反应后剩余的H2O2与碘化物作用生成碘量的变化计算PHD活性。该法设备简易，但操作复杂，误差较大。后者的原理是H2O2为有电活性物质，但经PHD催化后其产物为无电活性物质，用铂电极来测量PHD催化前后电流变化引起电压的变化，测出PHD活性大小。还可应用分光光度法、瓦氏呼吸仪检压法、硫酸高铈法等。紫外-可见分光光度法是在190～800nm波长范围内测定物质的吸光度，用于鉴别、杂质检查和定量测定的方法。当光穿过被测物质溶液时，物质对光的吸收程度随光的波长不同而变化。因此，通过测定物质在不同波长处的吸光度，并绘制其吸光度与波长的关系图即得被测物质的吸收光谱。
⑧ 急！请问哪位大神知道测定植物apx酶活时，怎么测定酶液
1. 酶液制备 取1.0g植物叶片剪碎，按1∶3（W/V）加入预冷的50mmol/L K2HPO4-KH2PO4缓冲液进行研磨提取，用2层纱布过滤，滤液离心（4000×g）10min，上清液作酶粗提液供测定。
2. 酶活性测定 3ml反应混合液中含50mmol/L K2HPO4-KH2PO4缓冲液（pH7.0），0.1mmol/L EDTA-Na2，0.3mmol/L AsA，0.06mmol/L H2O2和0.1ml酶液。加入H2O2后立即在20℃下测定10～30秒内的A290变化，计算单位时间内AsA减少量及酶活性。
⑨ 过氧化物酶活性测定的方法有哪些
实验 48 过氧化物酶活性的测定（比色法）
过氧化物酶是植物体内普遍存在的、活性较高的一种酶，它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有密切关系，在植物生长发育过程中，它的活性不断发生变化，因此测量这种酶，可以反映某一时期植物体内代谢的变化。
一、原理
在有过氧化氢存在下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化，生成茶褐色物质，该物质在 470 nm 处有最大吸收，可用分光光度计测量 470 nm 的吸光度变化测定过氧化物酶活性。
二、实验材料、试剂与仪器设备
（一）实验材料
马铃薯块茎。
（二）试剂
1 ． 100 mmol ／ L 磷酸缓冲液 pH6.0 （见附录）。
2 ．反应混合液： 100 mmol ／ L 磷酸缓冲液（ pH6.0 ） 50 mL 于烧杯中，加入愈创木酚 28 μl ，于磁力搅拌器上加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待溶液冷却后，加入 30 % 过氧化氢 19 μl ，混合均匀，保存于冰箱中。
（三）仪器设备
分光光度计，研钵，恒温水浴锅， 100 mL 容量瓶，吸管， 离心机。
三、实验步骤
1 ．称取植物材料 1 g ，剪碎，放入研钵中，加适量的磷酸缓冲液研磨成匀浆，以 4000 r ／ min 离心 15 min ，上清液转入 100 mL 容量瓶中，残渣再用 5 mL 磷酸缓冲液提取一次，上清液并入容量瓶中，定容至刻度，贮于低温下备用。
2 ．取光径 1 cm 比色杯 2 只，于 1 只中加入反应混合液 3 mL 和磷酸缓冲液 1mL ，作为对照，另 1 只中加入反应混合液 3 mL 和上述酶液 1mL （如酶活性过高可稀释之），立即开启秒表记录时间，于分光光度计上测量波长 470 nm 下吸光度值，每隔 1min 读数一次。
四、结果计算
以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小，即以 ΔA 470 /[min • g （鲜重） ] 表示之。也可以用每 min 内 A 470 变化 0.01 为 1 个过氧化物酶活性单位（ u ）表示。
过氧化物酶活性 [u/ （ g • min ） ]=
式中： Δ A 470 ——反应时间内吸光度的变化。 W ——植物鲜重， g 。
V T ——提取酶液总体积， mL 。
V s ——测定时取用酶液体积 , mL 。
t ——反应时间， min 。