1. 基因克隆和序列分析相关问题
首先高质量的测序结果需要好的样品来进行是测序成功前提。一个反应成功一个取消，可能存在为非特异扩增。或者单引物扩增现象存在。还有就是引物问题，一般兼并引物、随机引物及标记性引物、不纯的引物及长片段引物等不适合测序。测序必须为特异性引物。还有就是可能存在结构.具体的原因结合峰图才能够确定.建议您克隆载体实验.
你测序所得峰图是否单一.如果不是单一峰图你比对有所差异很正常.
如果为单一峰图存在差异原因：一是，PCR扩增过程中产生错误，其次，测序准确率的问题。由于测序仪准确率的限制，在一个较长的序列中发生碱基错误是难以避免的。在确认克隆准确无误的情况下，通过双向测序可以最大限度的减少测序的错误。只进行单向测序无法保证完全准确，这是仪器ide精确度来决定的。而您的只有部分能够比对，在峰图单一的情况下可以设计引物获得全序列。再与文献序列进行比对.排除测序造成.其次如若为套峰，那就是扩增问题.具体的你可以还可以咨询当时的测序公司技术。
2. DNA测序结果常见问题及其解决方法哪位能介绍一下，生物科技的杂志在网上有没有
测序结果怎么看？ PCR测序时出现重叠峰、PCR产物不纯、测序引物有碱基缺失、克隆测序时峰形重叠、杂合型突变、PolyA/T导致的套峰和测序信号衰减等问题出现的原因和对策。对于一些生物测序公司（ 如Invitrogen等），我们的菌液或质粒经过PCR和酶切鉴定都没问题，但几天后的测序结果却无法另人满意。想了解原因可以去生物帮上了解一下啊，我在那里看到过相关的文档，介绍的比较详细，对我的帮助挺大的，你可以去查找一下。 楼主可以去（ CEXUWT.www.bio1000.com/ ）找到，看一下，应该可以解决你的问题
3. 请问【求助/交流】测序套峰 本身杂合子是怎么回事
全是双向测通。tongyanna(站内联系TA)学习学习xp198766(站内联系TA)你用那种有抗性的平板做克隆如何呢？做了克隆了，如果是单克隆，应该不会出现杂合子啊……多送几个试试，测不出来是不收费的吧:D:tiger32:mxg-2005(站内联系TA)挺深奥，学习一下阳光金鱼唐(站内联系TA)Originally posted by xp198766 at 2010-07-25 18:17:26:
关于第二个问题，可能是你的测 ... 都是T载体，别人测序用的是通用引物M13F和M13R,我的目的片段的引物是自己设计的兼并引物sunyongle1(站内联系TA)其实也不用刻意找，如果你的用的是通用引物，就换一下试试吧。现在的载体一般都不只一套测序的通用引物，比如M13F/R, M13F-47/48,T7 ter等。如果用的是特异性引物的话，就自己再合一条呗。sunyongle1(站内联系TA)Originally posted by 阳光金鱼唐 at 2010-07-25 19:58:14:
一般杂合子是收费的。哈 克隆的话操作注意一点的话，一般不会出现多克隆，再PCR检验后，可以得到 目的条带的，所有没事啊……一般不会出现杂合的情况……
4. 菌液测序结果有套峰 结果正确 可以用吗
有套峰的话你要看这个套封是不是一个杂合突变，一般看是不是整体测序结构都有相同高度的套封，如果是的话可能是测序背景颜色可以忽略，如果这个套封是突然起来的就要考虑是杂合子了
5. 测序结果出现套峰是什么原因
感叹下，好久没看到峰图了^_^
套峰的情况有很多，像非单一模板、或者是碱基缺失、序列中存在结构、引物降解呀等等都有可能引发套峰
从你的峰图上来看，在200多bp出现套峰，应该不会是引物的问题，如果是引物的问题应该一出来就是套峰，这个有可能是模板的问题，例如在200bp之前存在结构、碱基缺失呀等一些原因，建议你可以先从反向测下看看是不是还有套峰。
6. 测序时出现套峰的原因是什么
在测序反应中，模板或
引物
的原因都可能造成套峰的形成，归结其形成原因有以下几点：
·
测序引物在模板上有两个结合位点；
·
模板不纯，如果是
质粒
或是菌液，原因是非单克隆，如果是PCR原因为非特异性条带；
·
模板序列的特殊结构，如poly结构、发卡结构等；
·
引物降解，或引物不纯。
----转自三博远志网站测序FAQ
7. 测序中峰图会出现拥挤的情况,该怎么解决
什么叫做拥挤？？是双峰还是多套峰或者是夹峰。每种情况的处理方式是不一样的。
8. 请问测序图谱中自始至终都是套峰，且峰图不乱一高峰里套一矮峰是怎么回事谢谢
产生套峰原因：假若为菌或者质粒为双位（引物结合位点不单一）建议换引物测序实验，另外一个是由于存在污染重新挑单克隆进行测序实验即可。
若为PCR一个是由于存在非特异扩增。一个是引物特异性不好。另外一个原因是引物为兼并引物。'
假若套峰小峰为前或后的主峰说明是由于移码造成既引物合成存在问题。可以把测序结果发给合成公司重新合成。
以上供参考！具体原因请发峰图参考！
9. 测序重叠
pcr产物是否电泳检测过，如果有多条片段，切胶纯化或者从新设计引物
还不行的话blast一下引物，看看有无长度相近的产物
另外如果扩增片段中有碱基插入或缺失多态情况也会重叠，可能会前半部分正常，从多态位点开始重叠，可以双向测拼接一下
10. 在测序前如何进行pcr产物的酶切纯化，注意我想知道的是用于测序的pcr产物酶切纯化，不是用于克隆的酶切。
这种方法有比较大的局限性，要求pcr产物条带要单一，如果有杂带的话测序结果肯定就是一堆的套峰了。
这种方法是采用虾碱酶（SAP，Shrimp Alkaline Phosphatase）和外切酶I的混合溶液，来消化pcr扩增体系中多余的dNTPs和引物，以便后面的测序。一般使用的终浓度为1ul混合溶液中，含有虾碱酶0.6单位，外切酶I1.2个单位，这个比例也可以自己通过试验来调整。
一般是1ulpcr产物加2ul溶液。37度孵育15分钟，即可除去多余的引物以及dNTPs，然后80度，15分钟就可以使虾碱酶失活。
这个方法的优点是简单、快速、省钱、不损失样品，缺点是对样品要求高，如果一次纯化测序结果不好还要重来，费时费力。所以现在测序公司一般都是使用胶回收试剂盒来纯化，这样虽然工作量比较大，费钱，但基本可以保证一次成功，总体看来还是省时省力的。