细胞周期流式检测方法

Ⅰ 如何用流式检测细胞增殖情况

一般可以用tracing
dye.
也就是一些荧光染料，被细胞摄取后不会被排出。这样，先用染料染色。经过数个细胞周期后，上机检测。如果细胞没有分裂增殖，那细胞的荧光强度最高。每分裂增殖一次，荧光强度衰减一半（分到两个子细胞了）。以此类推。
增殖越多的细胞，会出现几个逐渐减半荧光强度的峰值。峰值和荧光强度减弱的越多，就说明增殖的越多。

Ⅱ 细胞周期检测方法即PI法的操作步骤

1. 细胞培养：取对数生长期的细胞，按1×106cells/ mL以1mL接种24孔板或2mL接种于6孔板内，进行所需的处理（比如加入药物），特定时间后终止培养，进行下一步的实验。

2. 细胞固定： 800rpm离心5min，收集细胞沉淀，弃上清，用预冷PBS洗涤两次，加入预冷75%乙醇，于4℃固定4h以上。

3. 细胞染色：1500rpm离心5min，弃上清，以3mL的PBS洗涤一次，加入400uL溴化乙锭（PI，50ug/mL），100ul RNase A（100ug/mL ），4℃避光孵育30min。

4. 流式分析： 以标准程序用流式细胞仪检测，一般计数2~3万个细胞，结果用细胞周期拟和软件ModFit分析。

Ⅲ 请教流式细胞术PI染色进行细胞周期分析的原理

实验原理：流式细胞仪的工作原理是将待测细胞放入样品管中，在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出，形成细胞柱。通过对流动液体中排列成单列的细胞进行逐个检测，得到该细胞的光散射和荧光指标，分析出其体积、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等物理及化学特征。
细胞内的DNA含量随细胞周期进程发生周期性变化，如G0/G1期的DNA含量为2C，而G2期的DNA含量是4C。利用PI标记的方法，通过流式细胞仪对细胞内DNA的相对含量进行测定，可分析细胞周期各时相的百分比。

Ⅳ 求细胞周期检测方法：PI法操作步骤

1. 细胞培养：取对数生长期的细胞，按1×106cells/ mL以1mL接种24孔板或2mL接种于6孔板内，进行所需的处理（比如加入药物），特定时间后终止培养，进行下一步的实验。

2. 细胞固定： 800rpm离心5min，收集细胞沉淀，弃上清，用预冷PBS洗涤两次，加入预冷75%乙醇，于4℃固定4h以上。

3. 细胞染色：1500rpm离心5min，弃上清，以3mL的PBS洗涤一次，加入400uL溴化乙锭（PI，50ug/mL），100ul RNase A（100ug/mL ），4℃避光孵育30min。

4. 流式分析： 以标准程序用流式细胞仪检测，一般计数2~3万个细胞，结果用细胞周期拟和软件ModFit分析。

Ⅳ 流式细胞仪测定细胞周期各时相的原理和基本步骤（不用说具体使用的量）

在细胞培养液中加入模拟核苷酸EdU （比较老的方法也可以用BrdU）。培养一小时 后，更换为正常的培养液继续培养。模拟核苷酸可以像天然核苷酸一样被细胞摄取并整合入新合成的DNA。

培养一段时间后（一般小于一个细胞周期），固定细胞。根据所使用模拟核苷酸的不同，使用不同的方法。EdU，改变缓冲液的pH值，就会发出荧光。而BrdU则需用荧光抗体识别，需要对细胞膜和核膜进行通透处理。

再加入PI对DNA染色。

在二维坐标图上，横坐标设为线性PI荧光强度，纵坐标设为模拟核苷酸的荧光强度（log）。

典型的图就像下面一样：

G1, G2 和S期就按照图中的划分来做。G1期的细胞没有新合成DNA，所以BrdU信号是阴性，而PI的信号位于1倍体期。S期是正在合成DNA，所以BrdU都是阳性。G2期是已经合成好了2倍的DNA，所以位于2倍体期，信号是G1期的一倍。这个图中，G1 PI信号是300， G2就是600.

Ⅵ 流式细胞周期结果 怎么分析

细胞周期至少有两种做法，最常见的如下图分析：

比如这个图，是DNA染料单染，其中粉色部分是G1期，黄色部分是S期，绿色部分是G2/M期。中间的分布一般是通过FlowJo这样的软件计算自动生成的。

Ⅶ 流式检测细胞周期都有哪些染色方法

从分类上来说，一般有两类：第一类是只染DNA。这类方法比较简单，用酒精固定细胞后，直接加含有RNA酶的荧光染料，比如PI等，然后就可以直接上机。
第二类另外加了一个步骤，在细胞培养液中加入核苷酸的模拟物，比如BrdU或者EdU。细胞新合成的DNA上就会有这些物质。在不同时间点收集细胞，用DNA染料染DNA的同时，还以用抗体或者化学发光法染核苷酸模拟物也发荧光。这个方法的有点就是不仅可以像第一类方法一样，看到处于细胞周期各个期的百分率，另外还可以看到有多少DNA是新合成的。是一个动态的过程。

Ⅷ 求流式细胞仪检测细胞周期的protocol

博凌科为生物科技-为你解答：应用： 通过流式细胞仪分析各时期的细胞百分数，可检测细胞的增殖、凋亡。原理： 通常用PI染细胞核，PI在一定波长的光下发出荧光，其强度与DNA含量成正比。绿色荧光蛋白、红色荧光蛋白及其它发光基团也可作为标记物，分选细胞。方法：1） 将细胞以1106接种于60mm培养板，80％汇合后转染。2） 24小时后在新鲜培养液中加入适当的抗生素（真核表达载体上的抗性标记）进行培养（该步可选）。3） 48－72小时后用胰酶消化收集细胞，PBS洗两遍，弃上清，加入1ml 70％预冷乙醇中，吹打均匀，4℃固定12小时以上。4） PBS洗涤去乙醇，1000rpm, 5min，洗两遍。5） 0.5mlPBS重悬细胞，加入PI和 RNaseA至终浓度50g/ml，37℃ 温浴30 min。6） 用流式细胞仪测定周期。PI：碘化丙啶，以PBS配成1mg/ml，4℃保存。RNaseA：10mg/ml

Ⅸ 细胞周期如何检测

碘化丙啶（propidium iodide, PI）检测凋亡细胞
早期死亡细胞膜通透性状态的不同是区分细胞凋亡和坏死的一个重要指标，凋亡细胞在进入最终溶解阶段前，胞膜通透性无明显改变，相对分子质量大的与DNA结合的荧光染料（如PI）不能时入凋亡细胞内，而相对分子质量小的荧光染料（如Hoechest 3342或33258等）仍能被细胞摄取。应用流式细胞仪或荧光显微镜可区分和坏死细胞，细胞内DNA出现Hoechest 3342标记而不出现PI标记的为凋亡细胞。
主要操作步骤如下：①组织块用0.25%胰酶消化30min~1h。②200~400目筛网过滤细胞，获得单细胞悬液。③75％乙醇（-20℃预冷）固定细胞1h。④加入PI（终浓度50g／mL）和无DNA酶污染的RNA酶（终浓度50g／mL）1mL染色30min~1h。⑤流式细胞仪检测细胞周期和凋亡
细胞凋亡情况观察及凋亡率检测
培养48h后细胞分为两部分，一部分行碘化丙啶( pI )染色，倒置相差显微镜下观察细胞核形态变化。另一部分以胰酶消化后收集， 以1800r／min离心5min，弃培养基，用4℃预冷的PBS洗细胞2次，离心去PBS，加入 4℃预冷的70％的乙醇 4℃固定1h，离心弃去固定液， 用 4℃预冷PBS 3ml 洗细胞2次，加人1ml PI，4℃避光30mi n 。采用流式细胞仪检测凋亡率。
http://www.biomart.cn/article/9/42/47/162/7437.htm 流式检测细胞周期
要点： 最关键的就是减少细胞碎片和单细胞悬液的制备！
1、细胞消化要理想，资料显示最好消化时加EDTA，可使流式做的很漂亮；
2、细胞消化后不可吹打过度，减少细胞破碎；以后的吹打也要注意，尤其是固定后的细胞容易破碎；
3、 细胞用PBS洗涤离心，转速不超过1000r/min，有文献用800r/min；可考虑在此过程中用300目的尼龙网过滤一遍细胞（有人主张用钢网，以 减少细胞与尼龙网粘连的损失，本人认为钢网易损伤细胞，DNA外溢也会造成细胞粘连，所以在细胞数足够的情况下，首选尼龙网）；
4、离心后的固定，标准做法是将细胞悬液加入预冷70％酒精，而不是向细胞中加酒精，这样是为了减少细胞聚集，这一点很重要，很多人都忽视了！ 5、一般选择4℃固定过夜；
6、加染液前的洗涤仍要注意离心转速的问题；
7、 关于PI染液的组成及配方，应主要以文献为主，PI（作用为DNA染色剂）的浓度从0.5μg/ml,20μg/ml，到50μg/ml都见报道，响应的 求助显示都可出良好结果，RNAs酶（由于PI也可染RNA，故要去除RNA）一般浓度为50μg/ml，配方中的Triton-X-100（曲拉通）主 要是通透细胞膜使PI能进入细胞核。 8、检测时细胞要达到1～2×106个细胞（实际检测是1万到2万个细胞），为了既保持初始条件相同，又可搜 集到足够的细胞，应选用多孔培养板，在搜集细胞时，浓度大、抑制强的组可多搜集些孔，以保证检测的细胞数量。如果细胞数量太低，技师为了减少对流式细胞仪 的损伤，就会选择高速流（一般的检测用低速流，误差小），检测的质量就会大大下降，数据的说服力就下降了！