‘壹’ 菌落总数的检测
平皿计数法
菌落总数(standardplate-countbacteria):水样在营养琼脂上有氧条件下37℃培养48h后，所得1mL水样所含菌落的总数。
仪器和装置
高压蒸汽灭菌器。
干热灭菌箱。
培养箱(36±1)℃。
电炉。
冰箱。
放大镜或菌落计数器。
pH计或精密pH试剂。
灭菌试管。
平皿直径9cm。
培养基与试剂
营养琼脂成分蛋白胨10g、牛肉膏3g、氯化钠5g、琼脂10～20g、蒸馏水1000mL。
制法将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4～7.6，分装于玻璃容器中(如用含杂质较多的琼脂时，应先过滤)，经103.43kPa(121℃)灭菌20min，贮存于冷暗处备用。
检验步骤
1)水样处理。
a.饮用水。以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，注入来菌平皿中，倾注约15mL已熔化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养充分混匀。每次检验时应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。
待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于(36±1)℃培养箱内培养48h，进行菌落计数，即为1mL水样中的菌落总数。
b.水源水。以无菌操作方法吸取1mL充分混匀的水样，注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中，混匀成1∶10稀释液。
吸取1mL1∶10的稀释液注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中，混匀成1∶100稀释液。按同法依次稀释成1∶1000、1∶10000稀释液等备用。如此递增稀释一次，必须更换一支1mL灭菌吸管。
用灭菌吸管取未稀释的水样和2～3个适宜稀释度的水样各1mL，分别注入灭菌平皿内。以下操作同生活饮用水的检验步骤。
2)菌落计数及报告方法。作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。在求同稀释度的平均数时，若其中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落数。然后再求该稀释度的平均菌落数。
不同稀释度的选择及报告方法:
首先选择平均菌落数在30～300者进行计算，若只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之(见表82.2中实例1)。
若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视二者之比值来决定。若其比值小于2应报告两者的平均数(如表82.2中实例2)。若大于2则报告其中稀释度较小的菌落总数(如表82.2中实例3)。若等于2亦报告其中稀释度较小的菌落数(见表82.2中实例4)。
若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表82.2中实例5)。
若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表82.2中实例6)。
若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300，则应以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表82.2中实例7)。
若所有稀释度的平板上均无菌落生长，则以未检出报告之。
如果所有平板上都菌落密布，不要用“多不可计”报告，而应在稀释度最大的平板上，任意数其中2个平板1cm2中的菌落数，除2求出每平方厘米内平均菌落数，乘以皿度面积63.6cm2，再乘其稀释倍数作报告。
菌落计数的报告:菌落数在100以内时按实有数报告，大于100时，采用两位有效数字;在两位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数也可用10的指数来表示(见表82.2“报告方式”栏)。
表82.2 稀释度选择及菌落总数(CFU)报告方式