❶ 乳酸、丙酮酸和乙酸如何鉴定
丙酮酸检测试剂盒可测各种动物血清(浆)、组织以及培养细胞、细胞培养上清液等样本中丙酮酸含量。丙酮酸与显色剂反应,反应产物在碱性溶液中显红棕色,颜色深浅与丙酮酸含量成正比,通过比色可以测定出丙酮酸的含量。
原理:丙酮酸盐检测试剂盒提供了一种简单、直接和可自动化操作的程序来测量不同生物学标本中丙酮酸的含量。适用标本类型包括:食物、细胞、培养基和发酵培养基。丙酮酸盐检测试剂盒基本原理如下:丙酮酸盐被丙酮酸酶氧化,在酶反应过程中产生颜色(λ=570 nm)或者荧光(Ex/Em=535/587 nm),可使用酶标仪或荧光计检测到。光的强度与丙酮酸含量是成正比的,因此通过检测光的强度即可精确的得到丙酮酸的含量。试剂盒检测范围为1-10 uM丙酮酸。
丙酮酸检测试剂盒
丙酮酸分子式CH3COCOOH,原称焦性葡萄酸(德Brenztr-aubensure),是参与整个生物体基本代谢的中间产物之一。丙酮酸可通过乙酰CoA和三羧酸循环实现体内糖、脂肪和氨基酸间的互相转化,因此,丙酮酸在三大营养物质的代谢联系中起着重要的枢纽作用。
丙酮酸是糖无氧代谢的产物,研究工作者将丙酮酸和乳酸一同测定,并用二者的比值推测循环衰竭的严重程度;此外,它还对维生素B1缺乏有一定的研究意义,同时作为一种重要的精细化工中间体,广泛应用于医药、农药、食品等领域,尤其是作为医药中间体,具有良好的发展前景。
应用[4][5]
用于大肠杆菌丙酮酸代谢途径改造及丙酮酸高产菌株培育
丙酮酸作为最重要有机酸之一,在医药、食品、化工等领域以及科学研究中都具有广泛的用途。目前高质量的丙酮酸在国内市场缺口较大,丙酮酸工业化生产的前景十分广阔。
从野生型大肠杆菌K-12 MG1655菌株出发,利用CRISPR/Cas9技术敲除了乳酸脱氢酶基因(ldh A),截断了乳酸合成途径;敲除了丙酮酸氧化酶基因(pox B)、磷酸转乙酰基酶基因(pta)和乙酸激酶基因(ack A),截断了乙酸合成途径;敲除了丙酮酸-甲酸裂解酶基因(pfl B),截断了甲酸合成途径;敲除了磷酸烯醇丙酮酸合成酶基因(pps A),减少了丙酮酸生成磷酸烯醇式丙酮酸;敲除了磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因(ppc),减少了磷酸烯醇式丙酮酸的消耗;通过敲除延胡索酸还原酶复合体基因(frd BC),削弱了三羧酸循环途径。最后得到了一株可以初步积累丙酮酸的基因工程改造菌株MG1655-GP7(E.coli K-12 MG1655Δldh AΔpfl BΔack AΔptaΔpox BΔppcΔfrd BCΔpps A),这株菌在使用5 L发酵罐发酵68小时后丙酮酸产量达到32.07 g/L。
这表明只利用基因工程的手段是可以使大肠杆菌积累丙酮酸的。大肠杆菌利用葡萄糖作为碳源时,葡萄糖经糖酵解途径会产生过量的ATP与NADH从而抑制丙酮酸的积累,使用氧化程度较高的葡萄糖酸作为碳源可解决此问题;当葡萄糖进入细胞后不经EMP途径而是进入Entner-Doudoroff(ED)途径,产生的ATP与NADH的量只有前者的一半,会相应的促进丙酮酸的积累。为了进一步提高产量,作者又敲除磷酸葡萄糖异构酶基因(pgi)以抑制糖酵解途径;同时敲除6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶基因(gnd)以抑制磷酸戊糖途径,并减少6-磷酸-葡萄糖酸的消耗;还在敲除磷酸葡萄糖转移酶基因(pts G)和磷酸烯醇丙酮酸葡萄糖转移酶基因(pts I)的基础上敲入运动发酵单胞菌中葡萄糖转运蛋白基因(glf)来改良葡萄糖转运系统,减少大肠杆菌细胞转运葡萄糖时磷酸烯醇式丙酮酸的消耗。
并计划上调葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因(zwf)、葡萄糖酸-6-磷酸脱水酶基因(edd)和2-酮-3-脱氧葡萄糖酸-6-磷酸醛缩酶基因(eda)的表达以强化ED途径,平衡ATP和NADH的水平,引导碳流更多的流向丙酮酸合成方向。
目前通过基因编辑的方法得到了一株生产丙酮酸能力理论上较MG1655-GP7菌株有所提高的MG1655-GP12(E.coli K-12 MG1655Δldh AΔpfl BΔack AΔptaΔpox BΔppcΔfrd BCΔpps AΔgndΔpgiΔpts GΔpts I::glf)菌株,该菌株的生产能力正在评估中。但经多次基因改造后,基因工程菌株MG1655-GP12出现了较野生型菌株生长缓慢的现象,本实验对该菌株进行了实验室适应性进化,经多次传代后筛选到一株生长速度恢复到野生型菌株75%的MG1655-GP12-1菌株。
❷ 如何区分甲酸,乙酸,乳酸,和乙酰乙酸乙脂
发生银镜反应的是甲酸
与三氯化铁显色的是乙酰乙酸乙酯
剩下两个加入氯化钙,生成沉淀的是乳酸
❸ 如何鉴定乳酸、乙酰乙酸乙酯、环己醇、乙酸、丙酮、乙醛和石油醚
加入三氯化铁,有颜色改变的是乙酰乙酸乙酯,其他无变化;加入银氨溶液水浴加热,有金属银析出的是乙醛;其他无变化;加入2,4-二硝基苯肼,有黄色沉淀生成的是丙酮,其他无变化;加入金属钠,没有气体生成的是石油醚,其他都有其他生成;加入碳酸钠加热,没有气体生成的是环己醇,乳酸和乙酸有气体生成;加入高锰酸钾溶液,紫红色颜色消失的是乳酸,不反应的是乙酸。
❹ 乙酸,甘氨酸,乳酸的鉴别
pH测试和嗅觉测试。
1、pH测试:乙酸是一种弱酸,其溶液呈酸性,pH值约为3-4,甘氨酸是一种氨基酸,其溶液呈碱性,pH值约为9-10,乳酸是一种弱酸,其溶液呈酸性,pH值约为2.5-3.5。
2、嗅觉测试:乙酸具有醋酸的味道和气味,甘氨酸无明显气味,乳酸具有微酸的味道,且有酸酐味。