微生物如何做检验方法的验证

Ⅰ 山莨菪麝香膏微生物方法验证怎么做检验铜绿假单孢菌和金黄色葡萄球

葡萄球菌属的微生物学检验方法与原理

1.标本采集：根据葡萄球菌感染所致的疾病不同，可采集脓汁、渗出液、伤口分泌物、血液、尿液、粪便、痰液以及脊髓液等。

2.检验方法及鉴定（1）直接镜检：无菌取脓汁、痰、渗出物和脑脊液（离心后取沉渣）涂片，经革兰染色后镜检，如为革兰阳性球菌呈葡萄状排列可初步报告为："找到革兰阳性葡萄状排列球菌，疑为葡萄球菌".（2）分离培养：血液标本（静脉血约5ml）注入50ml葡萄糖肉汤或含硫酸镁肉汤增菌培养，迅速摇匀，以防凝固，置35℃，一般于24h后开始观察有无细菌生长，若均匀混浊，溶血及胶胨状生长，则接种于血琼脂，进一步鉴定，若无细菌生长，于48～72h后自行观察（一般以7天为限），并接种血琼脂，以确定有无细菌生长。血液标本也可注入商品血培养瓶培养。

脓汁、尿道分泌物、脑脊液离心沉淀物，通常可直接接种血琼脂。35℃18～24h培养，可见直径2～3mm，产生不同色素的菌落。金黄色葡萄球菌在菌落周围有透明的溶血环。

尿液标本，必要时作细菌菌落计数。

粪便、呕吐物应接种高盐卵黄或高盐甘露醇琼脂平板，经35℃18～24h培养，可形成细小菌落，48h后形成典型菌落。

（3）鉴定试验1）触酶试验：细菌产生的过氧化氢酶催化双氧水生成水和氧气，产生气泡。方法：取营养琼脂上的菌落置于洁净试管内或洁净玻片上，滴加3％H202溶液数滴，观察结果，如立即（1min内）有大量气泡产生为阳性，不产生或气泡量少为阴性。葡萄球菌属为触酶阳性。

2）血浆凝固酶试验：血浆凝固酶是金黄色葡萄球菌所产生的一种与其致病力有关的侵袭性酶，分游离型和结合型两种。其作用是使血浆中的纤维蛋白在菌体表面沉积和凝固以阻碍吞噬细胞的吞噬。可分别用试管法和玻片法检测。玻片法用于粗筛，若玻片法为可疑或阴性结果，还需用试管法确证。使用的血浆为EDTA抗凝兔血浆。有商品化乳胶凝集试验。

3）甘露醇发酵试验。

4）新生霉素敏感试验：凝固酶阴性的葡萄球菌的鉴别，采用新生霉素敏感试验。一般新生霉素耐药者多为腐生葡萄球菌，敏感者为表皮葡萄球菌。

5）同时进行体外药物敏感试验：对苯唑西林的敏感性测试是必须的，由此可将葡萄球菌分为苯唑西林敏感的葡萄球菌（MSS）和苯唑西林耐药的葡萄球菌（MRS）。同时还有必要测试β-内酰胺酶以及对万古霉素的敏感性。

金黄色葡萄球菌：触酶试验阳性、血浆凝固酶试验阳性、甘露醇发酵试验阳性、对新生霉素敏感。

表皮葡萄球菌：触酶试验阳性、血浆凝固酶试验阴性、对新生霉素敏感。

腐生葡萄球菌：触酶试验阳性、血浆凝固酶试验阴性、对新生霉素耐药。

报告：检出"XXX葡萄球菌"（4）耐药性检测：检测耐甲氧西林的金葡菌（MRSA），耐甲氧西林的表葡菌（MRSE），耐万古霉素的金黄色葡萄球菌（VRSA），耐万古霉素的表皮葡萄球菌（VRSE）。NCCLS／CLSI推荐用头孢西丁纸片法检测mecA基因介导对苯唑西林耐药的葡萄球菌。

（5）临床意义：葡萄球菌感染的特点是感染部位组织的化脓、坏死和脓肿形成。金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌是引起临床感染最常见的葡萄球菌。

1）金黄葡萄球菌常引起疖、痈、外科伤口、创伤的局部化脓性感染，播散人血后可引起深部组织的化脓性感染。此外，其产生的肠毒素可引起食物中毒，表现为急性胃肠炎。主要致病物质有血浆凝固酶、葡萄球菌溶血素、杀白细胞素、肠毒素、表皮溶解毒素和毒性休克综合征毒素等。

2）表皮葡萄球菌是存在于皮肤的正常栖居菌，由于各种导管植入和人造组织的使用，该菌已成为医院感染的重要病原菌，它是导致血培养污染的常见细菌之一。

3）腐生葡萄球菌是导致尿路感染的常见病原菌之一。

（6）治疗原则：由于耐药菌株日益增多，治疗葡萄球菌感染时，应根据体外药敏试验选择抗菌素。如果是危、急、重症感染，应首先经验选药，如万古霉素等，待体外敏感试验结果回报后，再调整用药，针对治疗。

Ⅱ 病原微生物中细菌常见检测方法有哪些

1、快速测试片技术法

快速测试片是指以纸片、纸膜、胶片等作为培养基载体，将特定的培养基和显色物质附着在上面，通过微生物在上面的生长、显色来测定食品中微生物的方法。

细菌总数检测纸片的研制始于 20 世纪 80 年代，其主要优点是简便、实用、经济、操作性强。近年来以滤纸和美国某公司的 Petrifilm 为载体的测试片已开始被广泛应用。

2、生物电化学方法

生物电化学方法是指通过电极测定微生物产生或消耗的电荷，从而提供分析信号的方法。微生物在滋生代谢过程中，培养基的电化学性质如电流、电位、电阻和电导等会发生变化，所以可以通过检测分析这些电化学参量的变化来实现对微生物的快速测定。

常见的有：阻抗分析法、电位分析法、电流分析法等。生物电化学方法具有测量快速、直观、操作简单、测量设备成本低和信号的可控性等特点。

3、微菌落技术

微菌落是指细菌生长繁殖早期在固相载体上所形成的只能借助于显微镜观察的微小菌落。微菌落技术具有快速、经济、实用的特点，其研究始于 20 世纪50年代，定量测定技术从 20 世纪 70 年代开始，国外已有报道将该法应用于水、食品中细菌总数的快速检测。

4、气相色谱法

气相色谱应用到微生物的检测中，主要是依据不同微生物的化学组成或其产生的代谢产物各异，利用上述色谱检测可直接分析各种体液中的细菌代谢产物、细胞中的脂肪酸、蛋白质、氨基酸、多肽、多糖等，以确定病原微生物的特异性化学标志成分，协助病原诊断和检测。

5、高效液相色谱法

利用高效液相色谱检测可分析各种体液中的细菌代谢产物、病原微生物等，以确定病原微生物的特异性化学标志成分，协助病原诊断和检测。

Ⅲ 食品微生物检验内容与检测技术方法

食品微生物检验内容与检测技术方法

近年来，世界各地出现了诸多严重的食品安全事故，由于食品微生物污染而造成的质量事故严重威胁着人们的身体健康，如何做好食品微生物检验，确保食品质量安全，就需要社会各界共同努力。根据国际和国内卫生组织的相关规定和要求，所有的食品生产厂商都要对食品的质量进行严格的检验，对于生产出来食品的菌落种类、细菌数量、大肠菌群、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等进行检测，必须达到要求的合格标准才能进入市场进行出售。下面是我为大家带来的食品微生物检验内容与检测技术方法的知识，欢迎阅读。

需要注意的问题

一是工作人员及活动规定。必须保证参加检测的人员具有相应的资格，并通过相关的考试后，持证上岗才能开展相关活动。同时要求工作人员不仅需要具有高超的专业技术，还应该有良好的职业道德修养，尽可能降低人为问题的制约。检测过程需要按照相关的活动规范和流程进行，使用无菌设备认真地进行抽样活动，采用先进技术获取相关信息。二是存放装置。若想检测过程顺利进行，除了确保实验室有必要的设施外，还应该重点考虑装置存放的条件和要求。三是装置和药品的配置。在各项装置进行安装时应该对气温进行调节，确保其安稳，对装置气温稳定性合乎规定要用的具体时间详细记录。同时在规定的时间内对各种装置进行消毒处理，并通过感应设备对其运作状态进行监测。对于药品的配置，培养基往往在121℃下采用高压湿热灭菌法灭菌15分钟;较为敏感的'培养基一般采用膜过滤法。四是样本的处理。在样本收集过程中，需要确保抽样活动是在无菌环境下展开的，有效避免了样本被污染。在样本输送时，应该防止样本受到光线的影响而出现污染现象，抽样之后就应该及时将其送至测试场地。一般样本输送时间要控制在3h内，如果无法及时送到，要确保在近乎之前的气温时将其完整的存放。

食品微生物检验内容

一是检验食品污染程度指示菌。细菌总数即菌落总数，是食品和生活饮用水检样处理后，在特定培养条件下，所得1g或者1mc检样中所含有的细菌菌落个数，这就是判断食品和生活饮用水污染程度的关键指标。大肠菌群系是在37℃下培养24h的一群发酵乳糖、产气、产配以及需氧或者厌氧的革兰氏染色阴性无芽胞杆菌。这种菌群主要来源于人和牲畜的粪便，因此，可以用粪便的污染指标菌对食品的卫生质量进行评价。二是检测食品中治病菌。在食品微生物相关检验标准中已经明确规定某些微生物的数量，因此在对食品污染程度指示菌检测的同时，还应该对一些治病菌进行测定，如沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等。

食品微生物检测技术方法

很长时间以来，开展的此项检测活动，是按照琼脂平板的措施来进行的，通常要两到三天的时间才可以完成。最近，许多的专家和组织都不断地对工艺以及措施进行深化分析，获取了非常高的成就，对许多措施进行了改进，切实提升了检测的精准性以及安稳性特征，而且获取了许多全新的工艺，具体有如下的措施：

1.采用电阻抗法。具体的讲，它是指细菌繁衍的时候，将会使培养基中的火分电惰性物质如碳水化合物、蛋白质和脂类等，代谢为具有电活性的小分子物质，其能增加培养基的导电性，进而导致阻抗出现改变，因此，可以通过检测培养基的电阻抗变化情况来判定细菌在培养基中的生长繁殖特性，即可检测出相应的细菌。

2.采用快速酶触反应及代谢产物的检测。细菌在生长繁殖过程中可合成和释放某些特异性的酶，所以根据其特性来选用相对应的底物和指示剂，而且合理的记载信息。

3.采用分子生物学技术。它涵盖两项内容：1)核酸探针技术。结合碱基互补相关的概念，使用独特的措施来对物体进行标注。2)聚合酶链式反应(PCR)技术。其原理为通过加热使双链DNA经裂解成两条单链，成为引物和DNA聚合酶的模板;接下来把气温变低，使寡聚核苷酸引物与DNA分子上的互补序列退火。通常状态中，当退火的气温非常高的话，它的扩增特性就十分的优秀。

4.采用免疫学方法检测细菌抗原和抗体的技术。具体有三项措施：1)荧光抗体检测技术(IFA)，它又有两种，分别是直接的以及间接地。其中第一种是直接在样本上滴加已知特异性荧光标记的抗血清，然后对其清洗，进而获取信息。而后一种措施是在检样上滴加已知细菌特异性抗血清，等到发生反映之后再仔细地清洗，再加入荧光标记的抗体后在荧光显微镜下观察结果。2)免疫酶技术(EIA)，其是将抗原、抗体特异性反应和酶的高效催化作用原理结合，此法非常的独特，而且功效非常好。通过共价结合将酶与抗原或抗体结合，形成酶标抗原或抗体，或通过免疫方法使酶与抗酶抗体结合，形成酶抗体复合物。3)免疫磁珠分离法(IMS)，即应用抗体包被的免疫磁珠，用一个磁场装置收集铁珠。

5.采用仪器法。1)微型全自动荧光酶标分析仪(Mini-VIDAS)，其主要采用具有优异的敏感性和特异性的酶联荧光技术(ELFA)，得到的荧光和抗原的比例是一种顺向的关系。2)全自动微生物分析系统(Vietk-AMS)。它能够一次对非常多的样本开展分析，而且检测的时间不需要非常久，通常在两到三个小时即可，此法的效率非常好，同时也将成为检测行业全行的发展趋势。

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Ⅳ 纯化水的微生物验证大家是怎么做的

首先：只做菌落总数和总大肠菌群两项。
其次：当总大肠菌群产酸产气时，根据需要做耐热大肠菌群，和大肠埃希氏菌检测。
在做大肠检测时，有多管发酵法、滤膜法、酶底物法三种方法，可根据实验室实际情况选择具体方法。
标准参照“GB/T 5750.12-2006 生活饮用水标准检验方法 微生物指标”
需要请留邮箱

Ⅳ 无菌检验方法验证

无菌检查 方法 是为了检查药典要求无菌的制剂及其他制品是否无菌而建立的试验方法！至于无菌检查具体有哪些验证方法呢？下面就随我一起来了解下吧！

无菌检验方法验证

无菌检查方法验证一般分为前验证和再验证两种。

前验证，也称预验证，指在无菌分析方法正式使用前，按照预定验证方案进行的验证。如果没有充分的理由，任何检查方法必须进行前验证。

再验证，指某一检查方法经过验证并在使用一段时间后进行的，旨在证实已验证状态没有发生飘移而进行的重新验证及对检查方法进行修订、改变时进行的验证。

通常一个无菌产品的检查流程为：首先基于产品的剂型、溶解度等性质，按照药典的要求确定是否需要进行前处理;然后根据产品的特性是否有抑菌性，确定是否需要增加去除产品抑菌性的方法;最后验证整个检查方法中用到的一切及试验过程中的每一个环节包括样品的预处理方式、检查过程、培养条件等均不影响样品中微生物的生长。

前处理方法直接影响后续步骤的效果和重现性，应是验证的重点。

供试品中抑菌活性的去除是当前验证工作的重点，尤其强调应充分验证供试品本身对微生物生长的影响。

(一)具体的验证方法如下：

1. 菌种的选择

无菌检查方法验证中通常选择以下6种试验中常用的控制菌的标准菌株，它们分别代表不同类型的菌种：枯草芽孢杆菌 [CMCC(B)63 501]代表药品中常见的污染菌——芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌 [CMCC(B)26 003]代表革兰阳性菌、生孢梭菌 [CMCC(B)64 941]代表厌氧菌、大肠埃希菌 [CMCC(B)44 102]代表革兰阴性菌、白色念珠菌 [CMCC(F)98 001]代表酵母菌、黑曲霉菌 [CMCC(F)98 003]代表霉菌。

2. 菌液的制备

接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30~35 ℃培养18~24h;接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中或改良马丁琼脂培养基上，23~28℃培养24~48h，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，23~28 ℃培养5~7天，加入3~5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数小于100cfu的孢子悬液。

3. 样品的前处理

无菌产品中每个成分应该是均匀的，因此只要确定在验证的方法中，按所需的总接种量即可，而不必像样品日常检测中按规定的容器数取样。

如果制备样品时需要使用溶解剂、稀释剂、助溶剂、破乳剂等溶剂，需要确保这些溶剂是有效的，并且其使用对微生物生长无影响;或者制备过程中需要对样品进行加热助溶、离心等操作时，需要确保加热的温度、离心速度和离心时间等对微生物生长或分布无影响。 不需前处理的样品免做。

(二)消除样品抑菌性的方法

无抑菌性样品的验证方法：依据产品溶解性和微生物限度选择合适的中性稀释剂溶解和稀释，用直接接种法验证，常用中性稀释液或淋洗液。

对于具有抑菌性样品的验证方法，首先确定样品的抑菌作用(抑细菌、真菌试验验证)，选择敏感标准菌株对供试品抑菌活性去除效果检查(阳性菌回收试验)。 常用的消除样品抑菌活性的方法如下：

1. 稀释法：利用降低供试品的相对浓度，将样品稀释至最低抑菌浓度下进行。如：取规定量的样品溶液至较大量的培养基中，使单位体积内的样品含量减少，至不含抑菌作用。

2. 薄膜过滤法：利用体积差异分离，通过薄膜过滤，微生物被截于滤膜，培养薄膜观察有无微生物生长。通常薄膜孔径应不大于0.45μm，直径一般为50?mm，若采用其他直径的滤膜，冲洗量应进行相应的调整。滤器和滤膜在使用前采用适宜的方法进行灭菌。使用时应保证滤膜在过滤前后的完整性。水溶性供试液过滤前先将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。油类供试液其滤膜和滤器在使用前应充分干燥。 供试液经过滤膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量为100?ml。总冲洗量不得超过1000ml。

3. 化学中和法：利用化学(生物)专属性灭活，常用中和剂或灭活方法有：对氨基苯甲酸、卵磷脂、聚山梨酯-80等。对化学中和剂不敏感的样品，用酶中和，如β -内酰胺酶。

4. 联合使用：将以上两种或几种方法组合运用，以消除样品的抑菌性。适用于抑菌作用较强的中西药制剂。

5. 其次按照以下要求制备3组样品：

样品组：选择以上适当的方法中和样品，加入少量验证微生物(接种量少于100cfu)。

对照组：0.1%蛋白胨或pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液,加少量微生物(接种量少于100cfu)。

阳性对照组：将试验菌株直接接种于培养基中(接种量少于100cfu)。

6. 最后结果分析如下：

样品组与对照组微生物生长数量相似，表明中和剂的中和方式有效消除了样品的抑菌性(即有效性)，如果对照组与阳性对照组的微生物数量相似，表明样品预处理、消除样品抑菌性的方法、检测程序和培养条件等均不影响微生物生长(即无毒性)。样品如无抑菌性，省去对照组试验，样品组与阳性对照组直接比较。样品组微生物生长数量不及阳性对照组微生物生长数量，表明样品的预处理、试验用器具材料、培养条件等方面存在对微生物生长不利的因素。

(三) 为考查验证方法的稳定性和重现性，验证至少需3个不同批次的同类样品，分别进行3次验证试验。

无菌检查方法验证试验设计

薄膜过滤法：按照药典的要求取每种培养基规定接种的样品总量按薄膜过滤法过滤、冲洗，在最后一次的冲洗液中加入小于100cfu的试验菌，过滤。取出滤膜接种至硫乙醇酸盐流体培养或改良马丁培养基中，或将培养基加至滤桶内。另取一装有同体积培养基的容器，加入等量试验菌，作为对照。按照药典的要求的温度和时间进行培养。

直接接种法：取符合直接接种法培养基用量要求的硫乙醇酸盐流体培养基8管，分别接入小于100cfu的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2管;取符合直接接种法培养基用量要求的改良马丁培养基4管，分别接入小于100?cfu的白色念珠菌、黑曲霉各2管。其中1管接入每支培养基规定的供试品接种量，另1管作为对照，按照药典的要求的温度和时间进行培养。

结果判断

同对照管比较，如含供试品各容器中的试验菌均生长良好，则说明验证通过;如含供试品的任一容器中的试验菌生长微弱、缓慢或不生长，验证失败，应采用增加冲洗量、增加培养基的用量、使用中和剂和灭活剂、更换滤膜等方法，消除供试品的抑菌作用，重新进行验证。

无菌检查的常见方法

首先要检查方法验证方案设计的科学性和完整性，是否有与药典方法相悖的地方，尤其是产品本身的抑菌性，检查方法的选择，是直接接种法还是薄膜过滤法等。

无菌检查方法验证的硬件是否具备及是否已经进行了相关的确认。如使用黑曲霉菌是否具有生物安全柜并进行确认，无菌室的确认及日常监测，培养箱的型号及数量和进行确认的情况等，智能集菌器、全封闭无菌试验过滤培养器的型号、性能，滤膜是否符合规定等。

验证中各个环节有关数据的真实性，如产品本身抑菌性试验数据，菌种回收率和培养基适用性和灵敏度检查数据，菌种的传代、销毁和使用记录，无菌检查操作记录、培养记录等。

无菌检查中偏差的处理是否真的找到了根本原因，是否在没有确切的原因前就对样品重新检查并依据新的检查结果放行产品。

验证的方法与无菌检查操作规程和无菌检查记录是否完全一致，如操作步骤、检查方法、检查环境、试验耗材均需与实际检查操作规程及验证过程完全相符。

为了考查验证方法的稳定性和重现性，验证时是否至少采用了3个不同批次的同类样品，分别进行了3次验证试验。

使用新的滤膜或过滤器(不同厂家或批号、型号)是否重新进行样品试验组、蛋白胨对照组和阳性对照组的验证确认。

除非样品不能采用过滤的方法(难溶解)，企业是否采用全封闭的薄膜过滤法。

菌液的保存条件和保存期限是否符合药典的要求，对于黑曲霉孢子悬液是否有验证的资料。

无菌检查的注意事项

培养基的适用性检查包括培养基的无菌性检查和培养基的灵敏度检查。

中国药典附录中规定的检验数量不包括阳性对照用样品量，虽然附录另处有专门说明，仍然容易忽略。

无菌检查时应强调“检验数量”，主要是保证试验结果的代表性，而阳性对照试验和验证时仅须满足“检验量”总量要求即可，以保证试验结果的可靠性，验证试验可以由此减少大量的样品;工作菌株的传代次数不得超过5代，以防止过度的传代增加菌种变异的风险。这里“代”的定义是指，活的培养物接种到微生物生长的新鲜培养基中培养，任何亚培养的形式均被认为是转种或传代一次。

菌液加入，按规定应在最后一次冲洗液中加入阳性菌液，主要是考虑过滤器的有效性。过滤器的有效性应由提供企业控制，用户可采用适当方法抽查(如检查阳性菌液通过滤筒的流出液)。

实验室菌种的处理和保存的程序应标准化，以尽可能减少菌种污染和变异。

试验时菌悬液并不是只要活的菌体就行，而是要保持旺盛的生命力，所以菌悬液存放时间不能太长。

菌液制备后若在室温下放置，应在2?h内使用，若保存在2～8℃，可在24?h内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃，在验证过的贮存期内使用。

薄膜过滤法采用大样品量集菌的方法，具有代表性，不易漏检，仪器操作相对简单。该系统是全封闭过滤系统，避免了操作过程中外源性微生物的污染，对试验结果的可信性影响较小。因此无菌试验采用薄膜过滤法还是直接接种法并不依赖于验证结果，而是取决于样品的特性，如能采用过滤的方法均应采用薄膜过滤法检查。

若样品含有抑菌成分，当采用薄膜过滤法时，应先将供试液稀释后在过滤，这样可以减少滤膜对样品的吸附，减少冲洗量，进而减少微生物的损失或伤害。

无菌检查应作为稳定性考察的项目进行，以便对产品有效期的制定和合理的确定储存条件提供重要的依据。

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Ⅵ 微生物生长的几种检测方法

一、生长量测定法

1.1体积测量法：又称测菌丝浓度法。

通过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。方法是，取一定量的待测培养液（如10毫升）放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间（如5分钟）和转速（如5000rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。

1.2称干重法：

可用离心或过滤法测定。一般干重为湿重的10-20%。在离心法中，将一定体积待测培养液倒入离心管中，设定一定的离心时间和转速，进行离心，并用清水离心洗涤1-5次，进行干燥。干燥可用烘箱在105℃或100℃下烘干，或采用红外线烘干，也可在80℃或40℃下真空干燥，干燥后称重。如用过滤法，丝状真菌可用滤纸过滤，细菌可用醋酸纤维膜等滤膜过滤，过滤后用少量水洗涤，在40℃下进行真空干燥。称干重发法较为烦琐，通常获取的微生物产品为菌体时，常采用这种方法，如活性干酵母（activitydryyeast,ADY）,一些以微生物菌体为活性物质的饲料和肥料。

1.3比浊法：

微生物的生长引起培养物混浊度的增高。通过紫外分光光度计测定一定波长下的吸光值，判断微生物的生长状况。对某一培养物内的菌体生长作定时跟踪时，可采用一种特制的有侧臂的三角烧瓶。将侧臂插入光电比色计的比色座孔中，即可随时测定其生长情况，而不必取菌液。该法主要用于发酵工业菌体生长监测。如我所使用UNICO公司的紫外-可见分光光度计，在波长600nm处用比色管定时测定发酵液的吸光光度值OD600，以此监控E.Coli的生长及诱导时间。

1.4菌丝长度测量法：

对于丝状真菌和一些放线菌，可以在培养基上测定一定时间内菌丝生长的长度，或是利用一只一端开口并带有刻度的细玻璃管，到入合适的培养基，卧放，在开口的一端接种微生物，一段时间后记录其菌丝生长长度，借此衡量丝状微生物的生长

二、微生物计数法

2.1血球计数板法:

血球计数板是一种有特别结构刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四条沟和两条嵴，中央有一短横沟和两个平台，两嵴的表比两平台的表面高0.1mm，每个平台上刻有不同规格的格网，中央0.1mm2面积上刻有400个小方格。通过油镜观察，统计一定大格内微生物的数量，即可算出1毫升菌液中所含的菌体数。这种方法简便，直观，快捷，但只适宜于单细胞状态的微生物或丝状微生物所产生的孢子进行计数，并且所得结果是包括死细胞在内的总菌数。

2.2染色计数法：

为了弥补一些微生物在油镜下不易观察计数，而直接用血球计数板法又无法区分死细胞和活细胞的不足，人们发明了染色计数法。借助不同的染料对菌体进行适当的染色，可以更方便的在显微镜下进行活菌计数。如酵母活细胞计数可用美蓝染色液，染色后在显微镜下观察，活细胞为无色，而死细胞为蓝色。

2.3比例计数法：

将已知颗粒（如霉菌孢子或红细胞）浓度的液体与一待测细胞浓度的菌液按一定比例均匀混合，在显微镜视野中数出各自的数目，即可得未知菌液的细胞浓度。这种计数方法比较粗放。并且需要配制已知颗粒浓度的悬液做标准。

2.4液体稀释法：

对未知菌样做连续十倍系列稀释，根据估计数，从最适宜的三个连续的10倍稀释液中各取5毫升试样，接种1毫升到3组共15只装培养液的试管中，经培养后记录每个稀释度出现生长的试管数，然后查最大或然数表MPN（mostprobablynumber）得出菌样的含菌数，根据样品稀释倍数计算出活菌含量。该法常用于食品中微生物的检测，例如饮用水和牛奶的微生物限量检查。

2.5平板菌落计数法：

这是一种最常用的活菌计数法。将待测菌液进行梯度稀释，取一定

体积的稀释菌液与合适的固体培养基在凝固前均匀混合，或将菌液涂布于已凝固的固体培养基平板上。保温培养后，用平板上出现的菌落数乘以菌液稀释度，即可算出原菌液的含菌数。一般以直径9cm的平板上出现50-500个菌落为宜。但方法比较麻烦，操作者需有熟练的技术。平板菌落计数法不仅可以得出菌液中活菌的含菌数，而且同时将菌液中的细菌进行了一次分离培养，获得了单克隆。

2.6试剂纸法：

在平板计数法的基础上，发展了小型商品化产品以供快速计数用。形式有小型厚滤纸片，琼脂片等。在滤纸和琼脂片中吸有合适的培养基，其中加入活性指示剂2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC，无色）待蘸取测试菌液后置密封包装袋中培养。短期培养后在滤纸上出现一定密度的玫瑰色微小菌落与标准纸色板上图谱比较即可估算出样品的含菌量。试剂纸法计数快捷准确，相比而言避免了平板计数法的人为操作误差。

2.7膜过滤法：

用特殊的滤膜过滤一定体积的含菌样品，经丫叮橙染色，在紫外显微镜下观察细胞的荧光，活细胞会发橙色荧光，而死细胞则发绿色荧光。

2.8生理指标法：

微生物的生长伴随着一系列生理指标发生变化，例如酸碱度，发酵液中的含氮量，含糖量，产气量等，与生长量相平行的'生理指标很多，它们可作为生长测定的相对值。

2.9测定含氮量：

大多数细菌的含氮量为干重的12.5%，酵母为7.5%，霉菌为6.0%。根据含氮量×6.25，即可测定粗蛋白的含量。含氮量的测定方法有很多，如用硫酸，过氯酸，碘酸，磷酸等消化法和Dumas测N2气法。Dumas测N2气法是将样品与CuO混合，在CO2气流中加热后产生氮气，收集在呼吸计中，用KOH吸去CO2后即可测出N2的量。

2.10测定含碳量：

将少量（干重0.2-2.0mg）生物材料混入1毫升水或无机缓冲液中，用2毫升2%的K2Cr2O7溶液在1000C下加热30分钟后冷却。加水稀释至5毫升，在580nm的波长下读取吸光光度值，即可推算出生长量。需用试剂做空白对照，用标准样品做标准曲线。

2.11还原糖测定法：

还原糖通常是指单糖或寡糖，可以被微生(转载于:mHg）的条件下才能生长，他们有完整的呼吸链，以分子氧为最终氢受体，具有超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶。

兼性厌氧菌:它是以在有氧条件下的生长为主也可兼在厌氧条件下生长的微生物，有时也称“兼性好氧菌”。

微好氧菌:只能在娇滴滴额氧分压（1.33~3.Pa，正常大气中的氧分压为0.2bar）下才能正常生长的微生物。

耐氧菌:耐氧性厌氧菌的简称，是一类可在分子氧存在下进行发酵性厌氧生活的厌氧菌。

厌氧菌:有一般厌氧菌与严格厌氧菌（专性厌氧菌）之分。

超氧阴离子自由基:活性氧的形式之一，因有奇数电子，故带负电荷；它既有分子性质，又有离子性质；其性质极不稳定，化学反应力极强，在细胞内可破坏各种重要生物大分子和膜结构，还可形成其他活性氧化物，故对生物体极其有害。

超氧化物歧化酶(SOD):保护好氧菌免受超氧化物阴离子自由基的毒害的酶。按SOD分子中所含金属辅基的不同分三类：1、含Cu、Zn的SOD，存在于几乎所有真核生物的细胞质中；2、含Fe的SOD，主要存在原核生物中；3、含Mn的SOD，主要存在于真核生物的线粒体中。SOD除可清除超氧阴离子自由基外，还发现在防治人体衰老、治疗自身免疫性疾病、抗癌、防白内障、治疗放射病和肺气肿以及解除苯中毒等方面有一系列疗效。

PRAS培养基:用严格厌氧方法配置、分装、灭菌后的厌氧菌培养基，称为预还原无氧灭菌培养基，即PRAS培养基。

厌氧罐:培养厌氧菌的装置。

亨盖特滚管技术:一种集制备高纯氮、以氮驱氧和全过程实现无氧操作、无氧培养、无氧检测于一体，用于研究严格厌氧菌的技术和装置。

厌氧手套箱:一种用于无氧操作和培养严格厌氧菌的箱形密闭装置。

摇瓶培养:一般将三角瓶内培养液的瓶口用8层纱布包扎，以利通气和防止杂菌污染，同时减少瓶内装液量，把它放在往复式或旋转式摇床上作有节奏的震荡，以达到提高溶氧量的目的。

曲:是一类用麸皮、米糠等疏松的固体营养料接种、培养微生物而制成的含氧活菌产品。

曲法培养:将麸皮、碎麦或豆饼等固态基质经蒸煮和自然接种后，薄薄地铺在培养容器表面，使微生物即可获得充足的氧气，又有利于散发热量，对真菌来说，还有利于产生大量孢子。

通风曲:一种机械化程度和生产效率都较高的现代大规模制曲技术，在我国酱油酿造业中广泛应用。

污染:有害微生物通过气流、水流、接触和人工接种等方式，传播到合适的基质或生物对象上而造成种种危害。

巴氏消毒法:有发过微生物学家巴斯德用于果酒消毒，故名。这是一种专用于牛奶、啤酒、果酒或酱油等不宜进行高温灭菌的也太风味食品或调料的低温消毒方法（一般在60-85度下处理30min至15s）。有两种方法：1、低温维持法；2、高温瞬时法。

间歇灭菌法:适用于不耐热的培养基灭菌。方法是：讲带灭菌的培养基放在80-100度下蒸煮15-60min，以杀灭其中所有的微生物营养体，然后放至室温37度下保温过

夜，诱使其中残存的芽孢发芽，第二天再以同样方法蒸煮和保温过夜，如此重复3天即可在较低的灭菌温度下同样达到彻底灭菌的效果。

连续加压蒸气灭菌法:让培养基在管道的流动过程中快速升温、维持和冷却，然后流进发酵罐。

梅拉特反应:高温灭菌时，培养基中得氨基化合物（氨基酸、肽、蛋白质）的游离氨基与羧基化合物（糖类）的羰基间发生复杂的化学反应，导致培养基褐变同时，还降低了有关营养物成分，故应设法避免。

石炭酸系数:一定时期内，被试药剂能杀死全部供试菌的最高稀释度与达到同效果的石炭酸的最高稀释度之比。

抗生素:一类有微生物或其他生物生命活动过程中合成的此生代谢产物或其人工衍生物，他们在很低浓度时就能一直或干扰他种生物的生命活力，因而可用作有两的化学治疗剂。

抗代谢药物:一类在化学结构上与细胞内必要代谢物的结构相似，并可干扰正常代谢活动的化学物质。3种作用：1、与正常代谢物一起共同竞争酶的活性中心，从而使微生物正常代谢所需要的重要物质无法正常合成，例如磺胺类；2、“假冒”正常代谢物，使微生物合成出无法正常生理活动的假产物，如8-重氮鸟嘌呤取代鸟嘌呤而合成的核苷酸就会产生无正常功能的RNA；3、某些抗代谢药物与某一生化合成途径的终产物结构类似，可通过反馈调节破坏正常代谢调节机制，例如，6-巯基腺嘌呤可抑制腺嘌呤核苷酸的合成。

选择毒力:大于病原菌具高度毒力而对其宿主基本无毒的化学物质来抑制宿主体内病源微生物的生长繁殖，借以达到治疗该宿主传染病的一种措施。