‘壹’ 做气相色谱和液相色谱时怎么样选择色谱柱
气相色谱柱选择:慎悉
柱长:增加柱长可提高分离效果。但柱长过长,使分析时间延长。所以在满足一定分离度的条件下,应选用尽可能短的色谱柱。填充柱的柱内径一般为 3~6 mm,毛细管柱的内径0.1~0.5 mm。
固定液的用量选择:担体的表面积较大时,固定液用量可多些,允许的进样量也相应增加。但从速率方程式的传质项中可知,为了减小液相的传质阻力,应使固定液的液膜厚度尽可能薄。但固定液液膜太薄,则允许的进样量也就越少。凯孝蔽因此固定液的用量要根据具体情况决定。
固定液的配比选择:(指固定液与担体的质量比)一般为5:100到25:100。担体的比表面积越大,固定液用量的比例可越高。
担体的性质和粒度选择:若担体的比表面积大,孔径分布均匀,则固定液易分布均匀,从而可加快传质过程,提高柱效。故应该选用颗粒小且均匀的担体,并尽可能填充均匀,以减少涡流扩散,提高柱效。但粒度过小,填充不易均匀,会使柱压降增大,对操作不利。一般对4~6 mm的柱管,选用60 ~80目或80 ~100目的担体较为合适。
SE-30、OV-1、OV-101 二甲基硅氧烷 非极性 DB-l、HP-1、CP-Sil5CB、SPB-1、 007-1、 Rtx-1、BP-1... ... 烃类、胺类、酚类、农药、PCBs、挥发油、硫化物等
SE-54、SE-52 5%苯基,1%乙烯基甲基硅氧烷 非极性 DB-5、HP-5、CPSil 8CB、SPB-5、、Rtx-5、BP-5... ... 药物、芳烃类、酚、酯、生物碱盯州、卤代烃
OV-1701 7%氰甲基,7%苯基甲基硅氧烷 中等极性 DB-1701、HP-1701、BP-10、CPSil 19CB 、 Rtx-1701、SPB-1701... ... 药物、农药、除草剂、TMS、糖
OV-17 50%苯基甲基硅氧烷 中等极 DB-17、 HP-50、SP2250、CP-Sil 19、Rtx-50 、SPB-50... ... 药物、农药、甾类等
PEG-20M 聚乙二醇20M 极性 DB-WAX、HP-Wax、Carbowax SUPELCOWAX10、CPWAX 52CB... ... 醇类、酯、醛类、溶剂、单芳、精油等
FFAP 聚乙二醇20M对苯二甲酸的反应产物 极性 DB-FFAPHP-FFAP Nuk01、SP-1000... ... 醇、酸、酯、醛、腈
XE-60、 25%氰乙基甲基硅氧烷 中极性 酯、硝基化合物
OV-225 25%氰乙基,25%苯基甲基硅氧烷 中极性 DB,225、HP-225、SP-2330、SPB-225、 CP-SIL43CB 脂肪酸酯、PUFA、Aldito]
OV-210 50%三氟丙基硅氧烷 极性 DB210、Rtx200... ... 极性化合物、有机氯化合物
OV-275 50%三氟丙基硅氧烷 强极性 DB210 、SP2401 、Rtx200... ... 极性化合物、
一、固定液
非极性:SE30*,OV101,SE54*
中极性:OV17,XE60*,OV1701*
极 性:PEG20M*,FFAP*,DEGS*
二、柱内经(mm)
0.2~0.25柱效高、负荷量低、流失小
0.3~0.35负荷量大于毛细口径柱60%,柱效低
0.53~0.6大口径毛细柱,负荷量近似填充柱,总柱效远远超过填充柱,分析速度快
三、柱长(m)
短柱10~15米 分离少于10个组份的样品
中长柱20~30米 分离10~15个组份的样品
长柱50米以上分离50个组份以上的样品
四、液膜厚度(μm)
薄液膜0.1~0.2μm 低负荷量、高沸点化合物
标准液膜0.25~0.33μm 一般标准毛细柱分析
厚液膜0.5~1μm 符合量较大,低沸点样品
特厚液膜1~5μm 取代填充柱,分析沸点200℃以下复杂样品
液相色谱:
液相色谱柱的选择比较复杂。我通常根据样品的具体结构和性质都采用C18来实验如果保留时间过晚就要采用C8柱子。基本上通常的反相色谱C8和C18就解决了大部分问题。有时一些特殊结构的样品也要采用胺基,苯基,或腈基柱。当然,因为液相色谱的流动相可以选择极性和非极性(正相和反相),还可以做成梯度洗脱,所以,色谱柱的选择就变的复杂,有时用一种流动相和柱子分离不好,可能不用更换柱子,直接调整流动相就解决问题了,这一点和气相色谱不太一样。
‘贰’ 请教如何选择气相色谱柱
有四个主要的色谱柱参数需要考虑:固定相、内径、柱长和液膜厚度。
1. 选择合适的固定相 — 这一关键的决定主要基于选择性、极性和苯基含量等因素。如果不确定要使用哪种固定相也无任何相关信息,可从 DB-1 或 DB-5 开始。低流失的 ("ms") 色谱柱通常惰性较强,并且温度上限较高。超高惰性 1ms、5ms 和 35ms 色谱柱具有最低的柱流失和最高的柱惰性,可用于分离广泛分析物,包括活性化合物和痕量样品。使用极性最弱的固定相能提供满意的分离度和分析时间。非极性固定相与极性固定相相比具有更长的柱寿命。使用极性与溶质的极性类似的固定相。这一方法很有效,但是,最好的固定相不总是使用此项技术才发现的。如果具有不同偶极作用或氢键力的混合物分离较差,换用具有不同偶极(不一定要更大)或氢键相互作用的固定相。一旦改变固定相,可能会出现其它共流出物,因而新的固定相不一定能提供更好的总分离度。如颂晌果可能,避免使用含有与选择性检测器产生高响应官能团的固定相。DB-1 或 DB-5、DB-1701、DB-17 和 DB-WAX 以最少数量的色谱柱能覆盖最大范围的选择性。PLOT 柱用于在高于室温的柱温下分析气体样品。
2. 了解色谱柱直径如何影响诸如柱效、溶质保留值、柱头压力和载气流速等参数。当需要较高柱效时,使用 0.15、0.18 或 0.25 mm 内径的色谱柱。内径较小的色谱柱具有的柱容量最小,并需要最高的柱头压。
2. 当需要较高的样品容量时,使用 0.32 mm 内径的色谱柱。与 0.25 mm 内径的色谱柱相比,它们对于不分流进样或大体积 (>2 μL) 进样时早流出的溶质有更佳的分离度。只有在仪器配备大口径直接进样器并需要较高的柱效时,才使用 0.45 mm 内径的色谱柱。特别适用于高载气流速的情况,比如吹扫-捕集、顶空进样器和阀进样的应用。只有配备大口径直接进样器时,才使用 0.53 mm 内径的色谱柱。特别适用于高载气流岁森速的条件,比如吹扫-捕集和顶空进样器。0.53 mm 内径色谱柱在恒定的膜厚情况下具有最高的样品容量。
3. 确定多长的柱长会影响溶质保留值、色谱柱柱头压力、色谱柱流失 — 以及成本。如果不知道最佳长度,请先使用 25-30 米长的色谱柱。10-15 米的色谱柱十分适用于分离含有很容易分离的溶质的样品或含溶质较少的样品。内径很小
的色谱柱通常采用较短的长度以降低柱头压。如果通过其它方法(较小内径、不同的固定相、改变柱温)不能达到满意的分离度时,应使用50-60 米长的色谱柱。这种色谱柱适合分离含有很多组分的复杂样品。长的色谱柱的分析时间较长、费用较高。
4. 从柱容量、惰性、流失和温度上限出发,正确评估薄、厚液膜色谱柱的不同。对于 0.18-0.32 mm 内径的色谱柱,其平均或标准(即,不厚也不薄)膜厚为 0.18- 0.25 μm,可用于大多数分析对于 0.45-0.53 mm 内径的色谱柱,其平均或标准(即,不厚也不薄)膜厚为 0.8- 1.5 μm,可用于大多数分析。厚液膜色谱柱野雀锋用于保留和分离挥发性溶质(如轻质溶剂、气体)。厚液膜色谱柱惰性更好,柱容量更大。厚液膜色谱柱表现出较高的柱流失,降低了使用温度上限。薄液膜色谱柱用于降低高沸点、高分子量溶质的保留 (如类固醇、甘油三酯)。薄液膜色谱柱惰性较低,具有较低的柱容量和柱流失
‘叁’ 如何选用色谱柱(气相色谱仪)
当面对一个未知物时,先试用现有GC柱,如果该柱分离不理想,根据你对样品的了解,基本原则是分析物与固定相有
相似化学性质时才会相互作用。这说明对样品越了解,越容易找到合适的固定相。非极性分子——通常仅由C和H组成并且无偶极矩,直联(正烷)是常见的非极性化合物的例子。极性分子——主要由C和H组成同时也有其他原子,如:N、O、P、S或卤素。样品包括有醇类、胺类、硫醇类、酮类、
有机卤化物等。可极化物质——主要由C和H组成同时包含不饱和键。通常有:炔和芳香族化合物。我公司提供的色谱柱品种齐全,能够完全满足你分析的需要。如果你的样品是具有相似的化学性质的非极性组分的混合物,比如大多数石油馏分中的烃,你可以试用SE-30毛细管
色谱柱,它按沸点顺序分离。如果你怀疑有芳族化合物,试着用有苯基的SE-54或OV-35柱。极性或可极化组分样品能够在中极性和/或可极化固定相色谱柱上进行分析,如有苯基或类似基团固定相,比如OV-17或OV-225柱。如果需要更高极性,可以选用聚乙二醇(PEG)固定相,即通常所说的WAX固定相
毛细管色谱柱规格的选择
膜厚
薄膜比厚膜洗脱组分快、峰分离好、温度低。
一般而言,色谱柱的膜厚为0.25到0.5μm。对于流出达300℃的大多数样品(包括蜡、甘油三脂、甾族化合物等)能够很好的分析。对于更高的洗脱温度,可以用0.1μm的液膜。而厚液膜对于低沸点化合物有利,对于流出温度在100℃~200℃之间的物质,用1~1.5μm的液膜效果较好。超厚膜(3~5μm)用于分析气体、溶剂和可吹扫出来的物质,以增加样品组分知冲与固定相的相互作用。另一个选择厚膜的原因是当用大口径柱时保持分离度和保留时间。由于这个原因,大口径柱都只有厚膜。厚膜的流失较大,温度极限必须随膜厚度增加而下降。
长度
一般情况,15m柱用于快速筛选简单混合物或分子量极高的化合物。30m柱是最普遍的柱长。超长柱(50、60或100m、150m)用于非常复杂的样品。
柱搭唯歼长度在柱性能上不是一个重要参数,例如:加倍柱长,恒温分析时间则加倍但峰分辨率仅增大约40%。如果分析只是比较好但不是特别好时,有比增加柱长度更好的办法来改进分析结果,如考虑更薄的膜,优化载气流量或用程序升温等。
分析活性极强的组分是一种特殊情况。如果样品与柱材质接山败触,那么峰会严重拖尾。较厚的膜、相对短的柱可以由于较少的柱材和较厚的固定液体掩盖其表面以屏蔽活性表面从而减少相互作用的机会。
内径
增加直径意味着需要更多的固定相,即使厚度不增加,也有较大的样品容量。同时也意味着降低了分离能力且流失较大。小口径柱为复杂样品提供了所需的分离,但通常因为柱容量低需要分流进样。如果分离度的降低能够接受的话,大口径柱可以避免这一点。当样品容量是主要的考虑因素时,如:气体、强挥发性样品、吹扫和捕集或顶空进样,大内径甚至PLOT柱可能比较合适。
同时色谱柱内径的选择中要考虑仪器的限制和要求。填充柱的进样口可以使用大口径毛细管柱(0.53mm内径),而小口径柱就不一定能够被连接在仪器上使用。毛细管柱的进样口一般可以用于所有内径范围的毛细管柱。(0.1mm、0.25mm、
0.32mm、0.53mm)直接联用的GC/MSD和MSD需要小口径柱,因为真空泵不能处理大口径柱的大流量。查明你的整个系统看看你适合那些柱内径的色谱柱
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‘肆’ 如何有效选择高效液相色谱柱
使用高效液相色谱时,液体待检测物被注入色谱柱,通过压力在固定相中移动,由于被测物种不同物质与固定相的相互作用不同,不同的物质顺序离开色谱柱,通过检测器得到不同的峰信号,最后尺迟槐通过分析比对这些信号来判断待侧物所含有的物质。高效液相色谱作为一种重要的分析方法,广泛的应用于化学和生化分析中。高效液相色谱从原理上与经典的液相色谱没有本质的差别,它的特点是采用了高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相,适于分析高沸点不易挥发、分子量大、不同极性旦蚂的有机化合物。高效液相色谱使用粒径更细的固定相填充色谱柱,提高色谱柱的塔板数,以高压驱动流动相,使得经典液相色谱需要数日乃至数月完成的分离工作得以在几个小时陵友甚至几十分钟内完成。
‘伍’ 对于低沸点极性化合物如何选择色谱柱
序号 色谱柱参数 选择原则 色谱柱选择 1 固定相 相塌厅似相容原理。 非极性固定相具有更好的抗氧化性、更 高的效率和更高的极限操作温度(最高可达360℃),所以,在可以完成所需分离的情况下,尽可 序号 色谱柱参数 选择原则 色谱柱选择 1 固定相 相似相容原理。 非极性固定相具有更好的抗氧化性、更 高的效率和更高的极限操作温度(最高可达360℃),所以,在可以完成所需分离的情况下,尽可能选择固定相 极性弱的色谱柱,这样可以延长色谱柱的寿命。 分析强 极性物质,如:酸、团判隐醛、醇、胺等,为获得较好分离, 需选用极性较强的固定相。 有时为了缩短分析时间,也 选用与被测物极性相反的固定相。 0.53mm内径的色谱柱样品容量很大,可与填充柱相比, 进样理想冲喊方式是直接在高载气流速下注入,从而减少连 接体系的死体积,减少色谱峰的拖尾。 0.53mm内径柱还 可以配合特殊进样口装置,如:柱上进样或冷柱头进样 装置,使用0.47mm外径针头的微量注射器进行柱头或冷 柱头进样。 0.32mm内径柱被认为是最好的全能色谱柱,具有很好的 分离能力、样品容量(取决于膜厚度)。 而且弹性较 0.53mm内径的好,更易安装,是色谱分析中选用最多的 一种规格。 这种色谱柱也可进行柱头进样,但需要特殊 的注射器。 2 内径 0.25mm(早期多为0.22mm)内径柱具有低流失量、高分 辨率的特性,也是很常用的。 气相色谱-质谱联用仪多采 用此规格柱,通常在规格后标有ms字符,如表1中的DB 5 ms。 0.15mm内径是常规气相色谱仪中50m柱的最小内径。
‘陆’ 如何选择色谱柱和色谱分析条件
气相色谱操作条件的选择,常常决定是否能够达到分离的目的,而选择试验条件的主要依据是范氏方程和分离度与各种色谱参数的关系式。气相色谱柱分析条件的选择主要包括柱温、载气种类和流速等的选择。适当的分析条件,可以在较短的时间内完成分析工作,并达到良好的定性定量目的。在日常工作中,如何进行色谱柱分析条件的选择呢?解决方案“柱温的选择
柱温是影响分析时间和分离度的重要因素。选择柱温的依据是样品的沸点范围,固定液的配比,允许使用温度,以及检测器的灵敏度。柱温主要影响分配系数、容量因子以及组分在流动相和固定相中的扩散系数,从而影响分离度和分析时间。选择温柱的原则,一般是在使难分离物质对达到要求的分离度条件下,尽可能采用低温柱,其优点是可以增加固定相的选择性,降低组分在流动相中的纵向扩散,提高柱效,减少固定液的流失、延长柱寿命和降低检测器的本底。提高柱温可以使保留时间减少,加快分析速度,使样品中组分完全流出,但是分离效果不好。降低柱温,样品有较大的分配系数,选择性高,有利于分离。但温度过低,容易引起峰形拖尾或前伸,并且分析时间长。可根据固定液的使用温度极限和样品组分沸点调节柱温。对于高沸点混合物,在保证分离完全的前提下,尽量降低柱温。可在低于分析物沸点180℃~200℃的柱温下进行分析;对沸点不太高(200~300℃)的样品,柱温可选100℃以下;对于气体、气态烃等低沸点混合物,一般选择室温或50℃以下进行分析。对于宽沸程样品,需采用程序升温法进行分离,即柱温按预先设定的程序随时间成线性或非线性增加,从而获得最佳的分离效果。
“载气的选择
一般说来,痕量分析或毛细管色谱的载气纯化程度,要高于常规分析。特别是电子捕获、热导池检测器,载气纯度直接影响灵敏度和稳定性,一定要严格净化。根据分析对象,对于色谱柱的类型,操作仪器的档次和具体检测器,若使用不合要求的低纯度气体,不良影响有以下几种可能:a.样品失真或消失:如H 2 O气使氯硅样品水解;b.色谱柱失效:H 2 O,CO 2使分子筛柱失去活性,H 2 O气使聚脂类固定液分解,O 2使PEG固定液断链;c.有时某些气体杂质和固定液相互作用而产生假峰;d.对柱保留特性的影响:如H 2 O对聚乙二醇等亲水性固定液的保留指数会有所增加,载气中氧含量过高时,无论是极性或是非极性固定液柱的保留特性,都会产生变化,使用时间越长影响越大;e.检测器:TCD:信噪比减小,无法调零,线性变窄,文献中的校正因子不能使用,氧含量过大,使元件在高温时加速老化,减少寿命;FID:特别是在Dt≤1×10-11/S下操作时,CH 4等有机杂质会使基流激增,噪声加大不能进行微量分析;f.在做程序升温操作时,载气中的某些杂质,在低温时保留在色谱柱中,当柱温升高时不但引起基线漂移,还可能在谱图上出现比较宽的“假峰”;g.仪器影响:各类过滤器加速失效;调节阀(稳压阀,稳流阀,针形阀) 被污染,气阻堵塞,调节精度降低或失灵;气路系统被污染,若要恢复仪器在高灵敏度情况下操作,有时要吹洗很长时间(可能一周以上), 污染严重时有时再也无法恢复;对于FID,水蒸气会影响分析结果,直至影响检测器的寿命;对ECD和TCD的寿命最明显,这点应引起用户特别注意。
“载气的压力和流速
载气压力对柱效率有直接的影响。如提高柱内压力,有助于提高柱效率。但只提高入口压力,使流速加大且压降太大时,反而会降低柱效率,因此也必须提高出口压力。一般采用在柱后加装适当气阻的方法来解决这一问题。载气流速主要影响分离效率和分析时间。为获得高柱效,应选用最佳流速,但所需分析时间较长。为缩短分析时间,一般选择载气速度要高于最佳流速,此时柱效虽稍有下降,却节省了很多分析的时间。常用的载气速度流速为20~80mL/min。对于FID 或FPD 检测器,氢气和空气的比例是影响分离度和灵敏度的重要因素,只有反复试验,才能确定最适合的比例。对于填充柱色谱柱,载气流入方向要尽量与色谱柱内固定相装填方向一致,以减小压差,提高效率。
“进样量的选择
进样量的多少直接影响谱带的初始宽度。因此,只要检测器的灵敏度足够高,进样量越少,越有利于得到良好的分离。一般情况下,柱越长,管径越粗,组分的容量因子越大,则允许的进样量越多。一般气体进样量在1~10mL,液体进样量在0.5~10μL 之间,可取得较好的分析效果。此外,进样速度要快,进样时间要短,以减少纵向扩散,有利于提高柱效。
“气化温度的选择
气化温度取决于样品的挥发性、沸点范围及进样量等因素。气化温度选择不当,会使柱效下降。通常气化室的温度选择为样品沸点或高于沸点,以保证样品能瞬间气化;但不要超过沸点50℃以上,以防止样品分解。对于一般的气相色谱分析,气化温度比柱温高10~50℃即可。但对于某些高沸点组分或热稳定性差的组分,在其沸点左右分析会产生分解现象。此时应采取的措施是减少进样量,采用高灵敏度检测器,气化室温度的选择应低于其沸点100~200℃。从以上介绍的选择原则可以看出,各种条件往往同时影响色谱柱的选择性和效率,它们之间既密切联系又互相制约。因此在实际分析中,要作综合考虑,灵活地运用这些原则,既要保证良好的选择性,又要保证分离效率,合理地选择最佳色谱分析条件。
‘柒’ 如何选择高效液相色谱柱
怎么选择色谱柱?首先确定我们需要检测什么样品。在根据样品选择使用的色谱柱,还有品牌型号,然后根据商家的推荐结合自己的样品来挑选。下面为大家介绍哈填充柱和毛细管柱
填充柱比毛细管柱具有更高的样品容量,虽然这一差距由于HP发明了大孔 530mm 毛细管而大大缩小。检测器灵敏度的改进也减少了对大剂量样品的需要。
填充柱可能具有优势的领域是气体样品的分析。
对于几乎所有的其他样品,毛细管柱具有高很多的效率(窄峰),这可以大大改进峰分离。实际上,分离能力很大,以至于许多分析物在很简单的分析中使用非常短的色谱柱就可以完成分离了。节省的时间可以直接转化为循环时间的缩短和样品通量的增加。
对于新的或更新的方法,如果没有非常具有说服力的理由使用填充柱的话,我们推荐使用毛细管柱。
1.色谱柱材料
这种材料必须尽可能是惰性的,尤其是对于痕量分析或容易拖尾的化合物,例如硫醇或类似的活性化合物。对于毛细管柱,熔融石英是可选的材料。
有两种类型的熔融石英毛细管柱:壁涂开管柱 (WCOT) 色谱柱和多孔层开管柱 (PLOT) 色谱柱。WCOT 色谱柱是固定相液膜涂渍在去活的色谱柱壁上。这是气相色谱中最常用的色谱柱。PLOT 色谱柱中固定相是固体物质涂渍到色谱柱壁上。
填充柱可以是玻璃或金属,通常是不锈钢的。金属虽然比较有活性,但其对非极性物质比较稳定。但是如果样品中有极性组分需要分析,请选择玻璃柱。如果玻璃柱还是活性强(引起峰拖尾、样品丢失等),请进行去活处理。
2.固定相
选择毛细管柱时,首先需要确定是否需要 PLOT 色谱柱。下面是 3 种 PLOT 色谱柱的典型应用领域:分子筛 不挥发气体,对水比较敏感二乙烯基苯 (DVB) — HP-PLOT Q C1 到 C3 全部异构体的分离,部分 C4 和更高的(直到 C14)的异构体分离,极性化合物,挥发性溶剂可以允许含水氧化铝 Al2O3 C1 到 C10 异构体的分离, 对水比较敏感.
如果上面提到的应用没有感兴趣的,则您可以选择一个 WCOT 类型色谱柱。
当面对一种未知样品时,首先尝试目前在GC上的色谱柱。如果不能获得满意的结果,请考虑所了解的样品信息。基本原理是分析物与具有相似化学性质的固定相间更容易相互作用。这意味着了解的样品信息越多,越容易找到最佳分离固定相。
3.最重要的步骤是确定分析物的极性特征:
§ 非极性分子 — 通常只包含碳氢原子没有偶极距。
§ 直链碳氢化合物(n-烷烃)是非极性化合物的例子。
§ 极性分子 — 主要包含碳氢,也包含氮、氧、磷、硫或卤原子。例如醇、胺、硫醇、酮、腈、有机卤化物等。
§ 可极化的分子 — 主要包含碳氢,也包含不饱和键。例如烯烃、炔烃和芳香族化合物。
成都摩尔科学仪器有限公司提供赛分科技针对特定分离需要提供正确的固定相:样品是具有相同化学类型的非极性物质的混合物吗?例如大多数石油馏分中的碳氢化合物?请尝试非极性色谱柱,如 HP-1,可以将它们按(近似)沸点顺序分离。如果怀疑有一些芳香族化合物,请尝试 HP-5 或 HP-35 等适用苯基化合物的色谱柱。极性或可极化化合物通常在含有苯基的更强极性和/或可极化基团的固定相上进行分离,其分离度会更好一些。例如 HP-210 或 HP-225 色谱柱。 如果需要更强的极性固定相,则可以选择聚乙二醇 (PEG) 固定相,通常称为 WAX 固定相。
请参见后面几页中的选择图表,这些图表根据应用和分析物的极性特征推荐固定相。
键合可以在固定相和色谱柱管间产生化学键。交联在适当位置聚合固定相以增加分子量。这两个过程是在制备键合/交联色谱柱过程中同时发生的,它可以增加热稳定性并减少色谱柱流失。可以冲洗键合/交联色谱柱以去除可能随时间积累的污染物并允许更大的进样量。如果可以选择,则我们建议在标准涂渍型色谱柱类型中选择键合/交联色谱柱。
4.膜厚
一般规律为薄液膜比厚液膜分离物质的速度快一些,并可以在相对较低温度下得到更高的分离度。这说明它适合于高沸点化合物、接近的化合物或热敏性化合物。“标准”膜厚为 0.25~0.5mm。这些厚度对在高达 300°C 温度下分离的大多数样品(包括石蜡、甘油三酸酯和类固醇)效果很好。对于需要在更高温度下分离的物质,可以使用薄液膜 (0.1mm) 色谱柱。
标准或薄液膜色谱柱用于分离高沸点物质,而厚液膜柱用于分离低沸点物质。1~1.5mm 的膜可以很好的分离沸点为 100~ 200°C 的物质。超厚液膜 (3~5mm) 用于气体、溶剂和吹扫物以提高它们和固定相的相互作用。
使用超厚液膜色谱柱的另一个原因是当更换大孔径色谱柱时,可以保持分离度和保留时间。由于这个原因,大孔径色谱柱都使用厚液膜。
厚液膜意味着色谱柱中有更多物质,因此会有更多的流失。随着膜厚度的增加,能达到的最高温度将降低。
5.柱长
一般而言,15m 色谱柱用于快速分离、简单混合物或大分子量化合物。对于大多数分析,30m 长的色谱柱是最常用的一种。很长的色谱柱(50、60 和 105m)用于非常复杂的样品。
柱长并不是色谱柱性能中一个很重要的参数。例如,柱长加倍,等温分析时间加倍,但峰分离度仅增加 40%。如果分析不是很理想,则有比柱长更有效的途径来改善它。可以选择薄一点的液膜、优化载气通过色谱柱的流速、使用温度程序等。
一种特殊情况是含有非常活性组分的样品分析。如果它们接触色谱柱材料,则它们拖尾会非常严重。相对短一些的色谱柱,使用厚膜可以减少接触的机会,这是由于接触色谱柱材料的时间相对少一些,并可以将分析物用固定相封闭与活化点的接触。
6.内径
增加内径意味着固定相增加,即使厚度不变,可以分析更大量的样品。它也意味着减小分离能力和更大的流失。
细柱用于复杂样品分离,但是通常要求分流进样,这是由于允许的样品量较小。如果可以允许减小分离度,则使用更粗的色谱柱可以避免这种情况。当样品量为主要因素时,比如气体、易挥发样品、吹扫和捕集或顶空进样,大内径或者甚至 PLOT 色谱柱更为合适。
同时也要考虑所使用仪器的限制和需要。一个适合的填充柱进样口可以使用大孔径毛细管柱,但不能用细柱。专门为毛细管柱设计的进样口通常适用于所有内径的色谱柱。GC/MS 和 MSD 直接联合可能要求细色谱柱,这是由于真空泵不能处理粗柱中的高流速。考察整个系统以查明哪些部分限制对色谱柱内径的选择。