全血离心方法如何获得血清

1. 从血液如何获取血清

最简单的方法是 放在那里 第2天去标本分层了，上层为血清下层为细胞。

常用的方法是将标本放在试管里离心，上层是血清。

2. 全血分离获得血清的方法及步骤 谢谢

材料与方法

1.1 血清采集 MG患者全血来自2004～2005年就诊于辽宁中医学院附属医院的门诊患者。根据典型临床表现、新斯的明试验、低频重复电刺激及单纤维肌电图等确诊，无其他自身免疫性疾病，未经其他免疫抑制治疗，并参照1994年版《中医病证诊断疗效标准》辨证为脾肾虚型。正常人血清取自同时期健康志愿者。-70 ℃冰箱冷冻保存备用。

1.2 主要试剂 固相pH梯度干胶条IPG strip（Amersham公司产品， 非线性pH 3～10， 7 cm）。3-〔3-（胆酰胺基丙基）二甲氨基〕丙磺酸盐｛3-〔（3-cholamidopropyl） dimethylamino〕-1-propanesul-fonate， CHAPS｝，二硫苏糖醇（DL-dithiothreitol， DTT），三丁基膦（tributyl phosphine， TBP），尿素，硫脲，碘乙酰胺（iodoacetamide， IAA），丙烯酰胺（acrylamide）、甲双丙烯酰胺（N， N'-methylenebi-sacrylamide），四甲基乙二胺（N， N， N， N-tetram-ethyl-ethylenediamine， TEMED），过硫酰胺（am-monium persulfate， APS），三羟甲基氨基甲烷〔tris （hydroxymethyl） aminomethane〕、甘氨酸（glycine， Gly）和十二烷基磺酸钠（sodium dodecyl sulfate， SDS）均为Bio-Rad公司产品。琼脂糖为华美生物公司产品。其他试剂均使用国产分析纯试剂。所有溶液均用MilliQ水配制。

1.3 主要仪器 高速冷冻离心机，德国Eppendorf公司产品;EttanTMIPGphorⅡ，Amersham Biosci-ences公司产品;P-2000分光光度仪，Hitachi公司产品;SE-600电泳仪，Amersham公司产品;纯水装置，Millipore公司产品;GS-710光密度扫描仪，Bio-Rad公司产品;冷却水循环系统，Cole-Parmer公司产品;Bruker-Daltonics AutoFlex TOF-TOF LIFTMass Spectrometer，美国Bruker-Daltonics公司产品;LCQ Deca XP Plus，美国Thermo Finnigan公司产品。

1.4 双向电泳

1.4.1 血清总蛋白质的提取及定量 血清-70 ℃反复冻融4次后，用Agilent Multiple Affinity Re-moval Column处理去除高丰度蛋白。使用Agilent 5K超滤管进行浓缩除盐，冻干回收的样品，-70 ℃保存。用裂解液（9 mol/L 尿素、4% CHAPS、 65 mmol/L DTT和cocktail酶抑制剂）进行复溶，并采用考马斯亮蓝法进行蛋白质定量。

1.4.2 等电聚焦 自-20 ℃取出的胶条，室温下平衡10 min，以500 μg上样量在每份样本中加入上样缓冲液（8 mol/L尿素、2% CHAPS、1% Bio-lyte和1% TBP）以及标准蛋白质分子，上样于泡胀槽中，加入矿物油覆盖。程序设置如下:30 V 12 h，500 V 1 h，1 000 V 1 h，8 000 V 6 h。恒温20 ℃。等电聚焦电泳后IPG胶条在平衡液1（Tris-base 50 mol/L 、尿素 6 mol/L、甘油 30%、SDS 2%、溴酚蓝0.002%和DTT 100 mg）中于振荡器上振荡 15 min; 然后置入平衡液2（成分同平衡液1，用 400 mg 碘乙酰胺代替100 mg DTT）同样于振荡器上振荡15 min。

1.4.3 SDS-PAGE垂直电泳 采用12.5%的均匀SDS2聚丙烯酰胺凝胶（水23.2 ml，30%丙烯酰胺溶液32.46 ml，1.5 mol/L Tris-HCl缓冲液pH 8.8 20 ml，10% SDS 0.8 ml，10% APS 0.4 ml，TEMED 3.76 μl，胶总体积80 ml）。将平衡后的IPG胶条移至凝胶的上方，胶条一端放入低分子量蛋白质标准，0.5%的琼脂糖封胶。上下槽加入电极缓冲液（Tris 5 mmol/L，Gly 192 mmol/L和SDS 0.1%）。初始电流为每块胶40 mA，电泳20 min，然后以每块胶60 mA电流，直至溴酚蓝前沿。

1.4.4 银染色 电泳结束后，采用硝酸银染色法，通过固定，硝酸银染色，显影，停显及脱色，至背景清晰。

1.5 图像分析 每个样品常规进行3次二维电泳，用GS-710光密度扫描仪对电泳后的胶图分别进行扫描，所得扫描图像输入计算机，采用Image-master软件对图像进行背景消减、蛋白质点检测和校正，获取蛋白质点的位置坐标和表达量等分析。选取 Ratio ≥1.5的蛋白质点认为有差异。所有数据的统计分析均采用SPSS 12.0软件，统计学分析采用 t 检验。

1.6 基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱分析 用手术刀片切下胶上目标条带，进行切胶、胶上胰蛋白酶酶解 20 h ，抽提酶解肽段，Zip Tip脱盐后点样，行基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱（matrix assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry， MALDI-TOF-MS）分析（飞行管长2.7 m，加速电压 20 kV ，反射电压23 kV）。将第1级质谱得到的肽片段质量指纹图谱、肽质量指纹图谱与第2级质谱得到的肽序列信息一起用来检索蛋白质数据库，找出匹配的蛋白质。

1.7 数据库检索 将质谱鉴定所得的肽质量指纹谱（peptide mass fingerprinting， PMF）数据于Bio-Works（Thermo Finnigan， San Jose， CA）软件搜索相应的库。搜索使用的数据库为IPI human蛋白库（SEQUEST结果过滤参数为:当Charge+1，Xcorr≥1.9;当Charge+2，Xcorr≥2.2;当Charge+3，Xcorr≥3.75;其中DelCN≥0.1）以及NCBI上 Homo sapiens的非冗余蛋白库（rendant data-base）。检索参数为胰蛋白酶解;氨基酸固定修饰方式为脲甲基半胱氨酸;模式为单同位素峰;肽片断最大误差控制在100 ppm;肽片断最大分子量误差为±0.5 Da;每个肽允许有1个不完全裂解位点。

2 结果

2.1 脾肾虚型重症肌无力患者血清双向电泳图谱 的建立及分析 经2-DE技术及银染色后，得到了两组血清的双向凝胶电泳图，并于相同的条件下重复实验3次。在正常对照组细胞蛋白质组双向电泳图谱上可观察到1 463±179个蛋白点，而脾肾虚型重症肌无力组可见到1 508±89个蛋白点

3. 如何获取血清问题

serum，血清，详细资料见网络http://ke..com/view/42775.htm?fr=aladdin

先纠错，红细胞是血细胞而非生物大分子。

严格的讲，添加了抗凝剂的血液在高速离心机离心后得到的上清液为血浆而非血清，前者与后者相比含有多种凝血因子比如纤维蛋白原或纤维蛋白。离心的方法可以使血液分层，使血细胞（红细胞、白细胞）、血液中的其他成分（血小板、血浆清蛋白、球蛋白等）沉淀于管底，从而获取新鲜血浆。血清可以用离心新鲜胶冻状血凝块获得。

常用的注射器过滤器一般是0.46um和0.22um两种规格，可以过滤掉部分细菌、液体中的杂质等，理论上可以通过过滤方式得到血浆，但实际上没人这么做——因为红细胞直径为6~9um很快就能堵塞过滤器滤孔，使得过滤没法进行；手术中自体血液回输机的过滤不同于普通的注射器过滤器。

综上所述，用注射器过滤得到的血浆和离心机获得的差异不大，但注射器过滤基本上是不可能实现的。

4. 如何制备血清和血浆

全血不抗凝分离的是血清，抗凝分离的血浆
相对来说抗凝收集血浆量还是比较多一点的，且不易出现溶血现象的发生

收集好的全血分离血清（浆）时一般采用低温低速离心效果比较好，速度太大会使红细胞压积，造成溶血，最终影响测定

如将收集好的全血，静置一些时间（加抗凝剂一般静置半小时左右，不加抗凝剂一般静置一小时左右），然后采用低温低速离心10分钟（人血2000rpm左右、小鼠1000rpm左右、大鼠2500rpm左右），上层黄色液体为收集的血清或血浆，如上层液体出现红色则出现溶血，应弃用

5. 抽的血怎样弄成血清

从人体里出过的全血，然后打入抗凝管里面过以后。然后再震荡机上面正当自然的话。就可以把血清分离出来了。然后的话，就可以进行化验，或者是其他的进行一些项目啦！这个应该说是化验室最常规用的一种办法。

6. 实验室如何制造全血、血清、血浆

全血可以直接采取人的或动物的
血液凝固后最上层的清澈淡黄色的液体为血清
血浆：离开血管的全血经抗凝处理后，通过离心沉淀，所获得的不含细胞成分的液体，即血浆。

7. 如何获取血清问题

serum，血清，详细资料见网络http://ke..com/view/42775.htm?fr=aladdin
先纠错，红细胞是血细胞而非生物大分子。
严格的讲，添加了抗凝剂的血液在高速离心机离心后得到的上清液为血浆而非血清，前者与后者相比含有多种凝血因子比如纤维蛋白原或纤维蛋白。离心的方法可以使血液分层，使血细胞（红细胞、白细胞）、血液中的其他成分（血小板、血浆清蛋白、球蛋白等）沉淀于管底，从而获取新鲜血浆。血清可以用离心新鲜胶冻状血凝块获得。
常用的注射器过滤器一般是0.46um和0.22um两种规格，可以过滤掉部分细菌、液体中的杂质等，理论上可以通过过滤方式得到血浆，但实际上没人这么做——因为红细胞直径为6~9um很快就能堵塞过滤器滤孔，使得过滤没法进行；手术中自体血液回输机的过滤不同于普通的注射器过滤器。
综上所述，用注射器过滤得到的血浆和离心机获得的差异不大，但注射器过滤基本上是不可能实现的。

8. 如何制备血清和血浆

血清和血浆均是不含细胞（包括血小板）等有形成分的血液液体部分，其主要区别是血清不含凝血因子和血小板，血浆则含有凝血因子，它们的制备方法如下：

1、血清的制备：获得的血液不能抗凝，盛于离心管或可以离心的器皿中，静置或置37℃环境中促其凝固，待血液凝固后，将其平衡后离心（一般为3000rpm，离心 5～10min），得到的上清液即为血清，可小心将上清吸出（注意切勿吸出细胞成分），分装备用。

2、血浆制备：在盛血的容器中先加人一定比例的抗凝剂（抗凝剂：血液 = 1：9，将血液加到一定量后颠倒混匀，离心（离心条件同上）后所得的上清液即为血浆。初用者最好将上清移至另一清洁容器，吸出血浆时用毛细吸管贴着液面逐渐往下吸，切忌不能吸起细胞成分。

3、富含血小板血浆制备：将获得的血液经800rpm，离心5min，其上清即为富含血小板血浆。

(8)全血离心方法如何获得血清扩展阅读：

鉴别方法

1、血清

血液凝固析出的淡黄色透明液体。如将血液自血管内抽出，放入试管中，不加抗凝剂，则凝血反应被激活，血液迅速凝固，形成胶冻。凝血块收缩，其周围所析出之淡黄色透明液体即为血清，也可于凝血后经离心取得。在凝血过程中，纤维蛋白原转变成纤维蛋白块，所以血清中无纤维蛋白原，这一点是与血浆最大的区别。

而在凝血反应中，血小板释放出许多物质，各凝血因子也都发生了变化。这些成分都留在血清中并继续发生变化，如凝血酶原变成凝血酶，并随血清存放时间逐渐减少以至消失。这些也都是与血浆区别之处。但大量未参加凝血反应的物质则与血浆基本相同。为避免抗凝剂的干扰，血液中许多化学成分的分析，都以血清为样品。

2、血浆

血浆是血液的液体成分，血细胞悬浊于其中。人体含有2750-3300毫升血浆，约占血液总体积的55%。血浆的绝大部分是水（体积的90%），其中溶解的物质主要是血浆蛋白，还包括葡萄糖、无机盐离子、激素以及二氧化碳。血浆的主要功能是运载血细胞，同时也是运输分泌产物的主要媒介。

将新鲜血液离心，使血细胞沉降，上层淡黄色清液即是血浆。血浆与血清的区别是血清中不含纤维蛋白原等凝血因子。

参考资料来源：网络-血清

9. 如何制备血清和血浆

血清和血浆均是不含细胞（包括血小板）等有形成分的血液液体部分，其主要区别是血清不含凝血因子和血小板，血浆则含有凝血因子，它们的制备方法如下：
（1）血清的制备：获得的血液不能抗凝，盛于离心管或可以离心的器皿中，静置或置37℃环境中促其凝固，待血液凝固后，将其平衡后离心（一般为3000rpm，离心
5～10min），得到的上清液即为血清，可小心将上清吸出（注意切勿吸出细胞成分），分装备用。
（2）血浆制备：在盛血的容器中先加人一定比例的抗凝剂（抗凝剂：血液
=
1：9，将血液加到一定量后颠倒混匀，离心（离心条件同上）后所得的上清液即为血浆。初用者最好将上清移至另一清洁容器，吸出血浆时用毛细吸管贴着液面逐渐往下吸，切忌不能吸起细胞成分。
（3）富含血小板血浆制备：将获得的血液经800rpm，离心5min，其上清即为富含血小板血浆。

10. 在实验室如何制备全血血清和血浆样品

1、区别血液经抗凝处理后的全部血液为全血；离心除去血细胞后所得到的淡黄色液体为血浆。 如血液不经抗凝处理，让其自行凝固，则在抽血后的一段时间内，血液会自动在一系列凝血因子的作用下发生凝集，血液首先凝固成一个整体，再经过一段时间或用离心机离心，血液中凝固的部分会与一些清澈淡黄色的液体分离开，这些液体称为血清。血清与血浆从表面上看似乎没有什么不同，但其内在的主要区别是血清中不含纤维蛋白原，是未经抗凝处理过的血液凝固后得到的。抽血做化验中常遇到某些化验要求用血清测定、用全血测定、用血浆测定，即是指血液标本的三种主要处理方式和要求。2、用途不同血清多用于血液生化、免疫等方面的测定；血浆多用于凝血等方面的测定；全血则多用在血细胞、血常规、血沉等方面的测定。血液的抗凝处理需要抗凝剂，选用什么抗凝剂应根据具体的实验要求进行选择。